Penyelidikan Mengenai Penilaian Kualiti Komprehensif Multi-Indeks Terhadap Cistanches Herba Berdasarkan Kaedah Berat KRITIK

WEI Wei, QI Yuning, CHEN Weiying, ZHU Shunjuan, HOU Jianzhong
(Pusat Pemeriksaan dan Pengujian Kualiti Jiuquan di Wilayah Gansu, Jiuquan, Gansu 735000, China)

Abstrak:Objektifnya adalah untuk mewujudkan kaedah penilaian komprehensif berbilang indeks untuk menilai kualiti Cistanche deserticola, dan untuk menilai secara saintifik perbezaan kualiti antara Cistanches Herba daripada sumber yang berbeza (Cistanche deserticola dan Cistanche tubulosa) dan kawasan pengeluaran yang berbeza. Kandungan lima glikosida phenylethanoid (echinacoside, verbascoside, tubuloside A, isoacteoside, dan 2'-acetylacteoside) ditentukan menggunakan kromatografi cecair berprestasi tinggi (HPLC). Kaedah pemberat CRITIC digunakan untuk mengira berat setiap komponen, dan skor komprehensif sampel telah dikira. Analisis kluster digunakan untuk menganalisis corak perbezaan kualiti antara sampel. Keputusan menunjukkan bahawa perbezaan kualiti diperhatikan antara Cistanche deserticola dan Cistanche tubulosa. Markah penilaian Cistanche tubulosa biasanya lebih tinggi daripada skor Cistanche deserticola. Analisis kluster mengumpulkan Cistanche deserticola dan Cistanche tubulosa ke dalam kategori yang berbeza. Kualiti Cistanche deserticola menunjukkan variasi yang minimum, manakala kualiti Cistanche tubulosa berbeza-beza merentasi kawasan pengeluaran yang berbeza. Model yang diwujudkan dalam kajian ini boleh mengukur secara objektif perbezaan kualiti antara Cistanches Herba dari kawasan asal dan pengeluaran yang berbeza, menyediakan asas saintifik untuk penilaian kualiti Cistanche.

Kata kunci: Cistanches Herba;Kaedah berat KRITIK; analisis kelompok;penilaian kualiti

Ekstrak herba cistanche untuk dijual

 

 

 

 

 

Cistanches Herba terdiri daripada batang berair yang kering dan bersisik dari Cistanche deserticola YC Ma atau Cistanche tubulosa (Schenk) Wight, bekas yang biasa dikenali sebagai desert cistanche. Cistanches Herba bersifat hangat dan rasa manis dan masin. Ia menguatkan buah pinggang, memberi manfaat kepada pati dan darah, dan melembapkan usus untuk melegakan sembelit. Ia digunakan untuk kekurangan buah pinggang yang, kekurangan intipati dan darah, mati pucuk dan kemandulan, sakit dan kelemahan pinggang dan lutut, kelemahan otot dan tulang, dan kekeringan usus dengan sembelit. Komponen aktif secara farmakologinya-seperti glikosida phenylethanoid, polisakarida, dan iridoid-telah disahkan mempunyai aktiviti antioksidan, anti-penuaan, imunomodulator dan neuroprotektif. Sebagai bahan perubatan tradisional Cina yang terkenal, ia disenaraikan sebagai herba gred teratas dalam Shennong's Classic of Materia Medica dan dikenali sebagai "ginseng of the desert." Ia diedarkan terutamanya di wilayah barat laut Mongolia Dalam, Gansu, Xinjiang, dan Ningxia.

Dengan permintaan pasaran yang meningkat, sumber liar hampir habis dan penanaman buatan telah menjadi arus perdana. Edisi 2005 Pharmacopoeia Republik Rakyat China mengembangkan Cistanche tubulosa sebagai sumber botani sah Cistanches Herba. Kedua-dua sumber mempunyai had ujian yang berasingan, tetapi hanya untuk ekstraktif dan kandungan echinacoside dan verbascoside, yang tidak dapat mencerminkan secara menyeluruh ciri berbilang komponen, berbilang sasaran perubatan tradisional Cina. Komposisi kimia Cistanches Herba berbeza-beza disebabkan oleh kawasan pengeluaran, masa penuaian, dan kaedah pemprosesan. Oleh itu, mewujudkan sistem penilaian kualiti yang saintifik dan sistematik adalah sangat penting untuk memastikan keselamatan dan keberkesanan bahan ubatan dan menggalakkan pembangunan industri yang mampan. Dalam kajian ini, 20 kelompok Cistanches Herba dari kawasan pengeluaran berbeza di Jiuquan telah dianalisis. HPLC digunakan untuk menentukan secara serentak lima glikosida phenylethanoid-echinacoside, tubuloside A, verbascoside, isoacteoside, dan 2'-acetylacteoside. Kaedah pemberat CRITIC digunakan untuk menetapkan pemberat kepada setiap penunjuk untuk penilaian kualiti yang komprehensif bagi dua sumber botani, dan analisis kelompok (CA) digunakan untuk mentafsir perbezaan mengikut asal botani dan kawasan pengeluaran, bertujuan untuk menyediakan asas saintifik untuk penilaian kualiti Cistanches Herba.

1 Instrumen dan Bahan cistanche

1.1 Instrumen dan peralatan

Sistem HPLC Infiniti Agilent 1260 [termasuk pam kuaternari, autosampler, ketuhar lajur dan pengesan DAD; Agilent Technologies (China) Co., Ltd.]; Imbangan analisis elektronik XP205DR (Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd.); KQ-500DE pembersih ultrasonik (Kunshan Ultrasonic Instruments Co., Ltd.).

 

1.2 Reagen

Piawaian rujukan: verbascoside (No kumpulan. 111530-201914, ketulenan 95.2%) dan echinacoside (No kumpulan. 111670-201706, ketulenan 89.7%) telah dibeli daripada Institut Kawalan Makanan dan Dadah Kebangsaan; tubuloside A (No. kelompok B20471, ketulenan Lebih besar daripada atau sama dengan 98%), isoacteoside (No. kelompok B21535, ketulenan Lebih daripada atau sama dengan 98%), dan 2'-asetilakteosida (No. kumpulan B21779, ketulenan Lebih besar daripada atau sama dengan pembelian Ltd Bioteknologi YuanY 98%) Metanol ialah gred HPLC (Merck). Air ultratulen disediakan secara dalaman. Reagen lain adalah gred analitik.

 

1.3 Sampel

Sepuluh kelompok Cistanche deserticola dan sepuluh kelompok Cistanche tubulosa dikumpulkan dari pangkalan penanaman dan farmasi Cistanches Herba di kawasan Jiuquan, berlabel R1–R20 (lihat Jadual 1). Mereka dikenal pasti oleh Timbalan Pengarah dan Ahli Farmasi TCM Hou Jianzhong dari Pusat Pemeriksaan dan Pengujian Kualiti Jiuquan sebagai batang berair Cistanche deserticola YC Ma atau Cistanche tubulosa (Schenk) Wight yang kering dan bersisik. Spesimen baucar disimpan di Institut Pengujian Dadah dan Kosmetik Pusat Pemeriksaan dan Pengujian Kualiti Jiuquan.

Jadual 1 Maklumat sumber sampel Cistanches Herba

R1|Cistanche deserticola|Bandar Dazhuangzi, Daerah Jinta, Bandar Jiuquan

R2|Cistanche deserticola|Bandar Baru Jiashan, Daerah Suzhou, Bandar Jiuquan

R3|Cistanche deserticola|Pekan Xiqu, Daerah Jinta, Bandar Jiuquan

R4|Cistanche deserticola|Bandar Zhonghe, Daerah Jinta, Bandar Jiuquan

R5|Cistanche deserticola|Bandar Shuanglong, Daerah Suzhou, Bandar Jiuquan

R6|Cistanche deserticola|Pekan Hongliu, Kaunti Guazhou, Bandar Jiuquan

R7|Cistanche deserticola|Pekan Hongshagang, Bandar Dunhuang, Jiuquan

R8|Cistanche deserticola|Bandar Yumen, Jiuquan

R9|Cistanche deserticola|Bandar Tashi, Kaunti Guazhou, Bandar Jiuquan

R10|Cistanche deserticola|Perbandaran Zongtai, Bandar Yumen, Jiuquan

R11|Cistanche tubulosa|Bandar Dazhuangzi, Daerah Jinta, Bandar Jiuquan

R12|Cistanche tubulosa|Daerah Suzhou, Bandar Jiuquan

R13|Cistanche tubulosa|Daerah Suzhou, Bandar Jiuquan

R14|Cistanche tubulosa|Daerah Suzhou, Bandar Jiuquan

R15|Cistanche tubulosa|Daerah Suzhou, Bandar Jiuquan

R16|Cistanche tubulosa|Pekan Hongshagang, Bandar Dunhuang, Jiuquan

R17|Cistanche tubulosa|Pekan Hongshagang, Bandar Dunhuang, Jiuquan

R18|Cistanche tubulosa|Pekan Hongshagang, Bandar Dunhuang, Jiuquan

R19|Cistanche tubulosa|Perbandaran Liangzhong, Bandar Yumen, Jiuquan

R20|Cistanche tubulosa|Perbandaran Liugou, Kaunti Anxi, Jiuquan

 

2 Kaedah dan Keputusan

2.1 Penyediaan larutan rujukan campuran

Timbang dengan tepat verbascoside 10.45 mg, echinacoside 11.56 mg, tubuloside A 10.59 mg, isoacteoside 19.63 mg, dan 2'-acetylacteoside 9.03 mg ke dalam kelalang volumetrik 50 mL yang berasingan, larutkan dengan 50% metanol. Gaul rata untuk mendapatkan penyelesaian rujukan saham. Kemudian pipet dengan tepat 1.00 mL setiap larutan stok ke dalam kelalang volumetrik 10 mL, cairkan kepada isipadu dengan metanol 50%, dan campurkan untuk mendapatkan larutan rujukan campuran.

Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-Untuk butiran lanjut tentang kerjasama
E-mel:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950

 

2.2 Penyediaan penyelesaian ujian

Lulus serbuk sampel melalui ayak No. 3; timbang kira-kira 1 g dengan tepat ke dalam kelalang isipadu coklat 100 mL. Tambah 80 mL metanol 50%, penyumbat, goncang, timbang, rendam selama 30 minit, dan sonikasi selama 40 minit (250 W, 35 kHz). Sejukkan pada suhu bilik, timbang semula, tambah 50% metanol untuk mengimbangi penurunan berat badan, goncang dengan baik, biarkan berdiri, dekan supernatan dan penapis. Kumpulkan turasan seterusnya sebagai larutan ujian.

 

2.3 Keadaan kromatografi

Gunakan lajur InertSustain C18 (4.6 mm × 250.0 mm, 5 μm). Fasa mudah alih: metanol (A) dan larutan asid fosforik 0.1% (B). Kecerunan untuk fasa A: 0–6 min, 20%; 6–18 min, 20%→30%; 18–35 min, 30%→45%. Kadar aliran: 1.0 mL/min; suhu lajur: 35 darjah; panjang gelombang pengesanan: 330 nm; isipadu suntikan: 10 μL. Plat teori bagi setiap komponen tidak kurang daripada 5,000. Kromatogram bagi larutan rujukan campuran dan larutan ujian ditunjukkan dalam Rajah 1.

 

2.4 Pengesahan metodologi untuk penentuan kandungan

2.4.1 Ujian ketepatan

Suntikan larutan rujukan campuran dari bahagian 2.1 enam kali berturut-turut di bawah syarat dalam bahagian 2.3. RSD kawasan puncak untuk semua analit adalah Kurang daripada atau sama dengan 0.86%, menunjukkan ketepatan instrumen yang baik.

 

2.4.2 Ujian kebolehulangan

Timbang dengan tepat enam bahagian sampel R2 (kira-kira 1.0 g setiap satu) dan sediakan enam penyelesaian ujian bagi setiap bahagian 2.2. Analisis di bawah syarat dalam bahagian 2.3. RSD kawasan puncak adalah Kurang daripada atau sama dengan 1.12%, menunjukkan kebolehulangan kaedah yang baik.

 

2.4.3 Ujian kestabilan

Sediakan larutan ujian daripada sampel R1 seperti dalam bahagian 2.2. Suntikan pada 0, 2, 4, 8, 12, dan 24 jam di bawah syarat dalam bahagian 2.3. RSD kawasan puncak adalah Kurang daripada atau sama dengan 1.20%, menunjukkan kestabilan penyelesaian yang baik dalam masa 24 jam.

 

2.4.4 Kelinearan

Sediakan satu siri larutan rujukan campuran dengan mepipit 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, dan 2.0 mL setiap larutan stok dengan tepat ke dalam 10 mL kelalang volumetrik dan mencairkan kepada isipadu dengan metanol 50%. Suntikan di bawah syarat di bahagian 2.3. Plot kepekatan berbanding kawasan puncak untuk mendapatkan persamaan penentukuran dan julat linear (Jadual 2). Keputusan menunjukkan kelinearan yang baik untuk echinacoside, tubuloside A, verbascoside, isoacteoside, dan 2'-acetylacteoside dalam julat masing-masing.

Jadual 2 Keputusan kajian lineariti

Echinacoside|y=2397.4x − 15.363|r=0.9987|julat linear: 0.0046–0.0462 mg·L−1

Tubuloside A|y=9428.7x − 7.104|r=0.9984|julat linear: 0.0024–0.0242 mg·L−1

Verbascoside|y=12609.5x − 8.507|r=0.9986|julat linear: 0.0024–0.0418 mg·L−1

Isoacteoside|y=11600.3x − 11.359|r=0.9985|julat linear: 0.0079–0.0786 mg·L−1

2′-Acetylacteoside|y=10901.8x − 5.216|r=0.9985|julat linear: 0.0036–0.0362 mg·L−1

2.4.5 Pemulihan
Sediakan sembilan bahagian sampel kandungan yang diketahui (R1), kira-kira 0.5 g setiap satu. Lonjakan pada 50%, 100%, dan 150% daripada kandungan nominal dengan jumlah verbascoside, echinacoside, tubuloside A, isoacteoside dan 2'-acetylacteoside yang sesuai. Sediakan penyelesaian ujian setiap bahagian 2.2 dan analisis setiap bahagian 2.3. Purata pemulihan ialah 99.58%, 99.24%, 100.26%, 99.84%, dan 100.46%, dengan RSD masing-masing sebanyak 1.26%, 1.67%, 1.03%, 1.39% dan 1.71%, menunjukkan ketepatan yang baik.

 

2.4.6 Penentuan kandungan

Timbang dengan tepat kira-kira 1 g serbuk Cistanche deserticola dan Cistanche tubulosa, sediakan larutan ujian bagi setiap bahagian 2.2, analisis setiap bahagian 2.3, dan kira kandungan verbascoside, echinacoside, tubuloside A, isoacteoside, dan 2′-acetylacteoside. Keputusan ditunjukkan dalam Jadual 3.

Jadual 3 Keputusan penentuan kandungan lima komponen dalam Cistanches Herba (mg·g−1)

R1: Echinacoside 4.81|Tubuloside A 0.16|Verbascoside 0.58|Isoacteoside 0.26|2'-Acetylacteoside 0.49

R2: 5.02 | 0.13 | 0.70 | 0.30 | 0.61

R3: 6.62 | 0.24 | 0.67 | 0.21 | 0.43

R4: 5.25 | 0.18 | 0.82 | 0.34 | 0.67

R5: 5.63 | 0.17 | 0.75 | 0.21 | 0.39

R6: 6.85 | 0.24 | 0.91 | 0.29 | 0.44

R7: 6.08 | 0.23 | 0.63 | 0.20 | 0.54

R8: 5.17 | - | 0.49 | 0.18 | 0.24

R9: 6.78 | 0.28 | 0.73 | 0.27 | 0.37

R10: 5.44 | 0.19 | 0.68 | 0.24 | 0.26

R11: 16.77 | 0.97 | 1.20 | 1.19 | -

R12: 13.80 | 1.22 | 2.07 | 1.98 | 0.08

R13: 17.06 | 2.09 | 4.82 | 2.08 | 0.14

R14: 18.56 | 2.86 | 4.76 | 2.89 | 0.16

R15: 20.47 | 3.62 | 5.17 | 1.84 | 0.21

R16: 15.38 | 3.16 | 3.86 | 1.09 | 0.18

R17: 16.23 | 2.97 | 4.43 | 1.44 | 0.17

R18: 15.02 | 2.40 | 3.59 | 1.38 | 0.18

R19: 17.56 | 3.06 | 4.91 | 1.52 | 0.19

R20: 14.87 | 2.64 | 4.05 | 1.26 | 0.20

 

2.5 Penilaian kualiti menggunakan kaedah pemberat KRITIK

2.5.1 Penyeragaman data

Oleh kerana kandungan penunjuk yang diukur berbeza dengan ketara, setiap penunjuk dianggap sebagai penunjuk jenis faedah dan diseragamkan kepada julat [0, 1] menggunakan formula (1).

 

2.5.2 Penentuan berat

Keputusan piawai bagi 20 kelompok telah diimport ke dalam platform pemprosesan data dalam talian SPSSPRO, dan kaedah CRITIC digunakan untuk mengira pemberat (Jadual 4). Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 4, kandungan maklumat (1.936) 2'-asetilakteosida adalah jauh lebih tinggi daripada penunjuk lain (0.683-0.758), terutamanya disebabkan oleh ukuran konfliknya yang sangat tinggi (6.786), menunjukkan korelasi yang sangat rendah dengan penunjuk lain. Oleh itu, ia memberikan maklumat unik dalam sistem penilaian dan menyumbang 40.112% daripada jumlah berat, menjadi penunjuk dominan. Berat bagi empat penunjuk lain (echinacoside, tubuloside A, verbascoside, dan isoacteoside) adalah agak seimbang.

Jadual 4 Keputusan pengiraan faktor pemberat

Penunjuk: Echinacoside|Kebolehubahan 0.367|Konflik 2.064|Maklumat 0.758|Berat 15.705%

Penunjuk: Tubuloside A|0.352|1.940|0.683|14.150%

Penunjuk: Verbascoside|0.392|1.881|0.737|15.275%

Penunjuk: Isoacteoside|0.330|2.157|0.713|14.759%

Penunjuk: 2′-Acetylacteoside|0.285|6.786|1.936|40.112%

 

2.5.3 Penilaian menyeluruh

Berdasarkan pemberat yang ditentukan, markah penilaian menyeluruh bagi 20 kelompok telah dikira menggunakan formula (2). Keputusan ditunjukkan dalam Jadual 5. Perbezaan markah yang ditanda didapati antara kedua-dua sumber botani. Cistanche tubulosa umumnya mempunyai kandungan echinacoside dan verbascoside yang lebih tinggi, yang membawa kepada skor komprehensif yang lebih tinggi daripada Cistanche deserticola.

Jadual 5 skor penilaian komprehensif KRITIC untuk Cistanches Herba

R1: 0.307 (kedudukan 14)

R2: 0.386 (kedudukan 10)

R3: 0.292 (kedudukan 15)

R4: 0.432 (kedudukan 8)

R5: 0.258 (kedudukan 17)

R6: 0.313 (kedudukan 13)

R7: 0.351 (kedudukan 12)

R8: 0.147 (kedudukan 20)

R9: 0.265 (kedudukan 16)

R10: 0.179 (kedudukan 19)

R11: 0.236 (kedudukan 18)

R12: 0.335 (kedudukan 12)

R13: 0.533 (kedudukan 4)

R14: 0.632 (kedudukan 2)

R15: 0.667 (kedudukan 1)

R16: 0.497 (kedudukan 6)

R17: 0.530 (kedudukan 5)

R18: 0.469 (kedudukan 7)

R19: 0.565 (kedudukan 3)

R20: 0.425 (kedudukan 9)
 

 

2.6 Analisis kelompok

Kandungan terukur 20 kelompok telah diimport ke dalam SPSS 20.0. Kaedah jiran terjauh dan jarak Euclidean kuasa dua digunakan sebagai metrik, dan hubungan antara kumpulan digunakan untuk pengelompokan (lihat Rajah 2). Hasilnya menunjukkan perbezaan kualiti antara dua sumber botani: Cistanche deserticola dan Cistanche tubulosa dikelompokkan ke dalam kumpulan berasingan. Cistanche deserticola menunjukkan variasi intrakumpulan yang kecil, manakala Cistanche tubulosa memaparkan perbezaan kualiti antara kawasan pengeluaran dan boleh dibahagikan lagi kepada tiga subkumpulan, yang secara amnya konsisten dengan penilaian komprehensif berasaskan CRITIC.