Penipisan Makrofaj Mengurangkan Patologi Penyakit dalam Glomerulonefritis Bergantung Kompleks Imun Bergantungan Faktor H

Faktor pelengkapH (FH) ialah pengawal selia utama bagi laluan alternatif pelengkap, pada manusia dan tetikus. Terdahulu, kajian kami mendedahkan bahawa ketiadaan FH menyebabkan tetikus C57BL6 menjadi terdedah kepadapenyakit serum kronik(CSS) bersama-sama dengan peningkatan dalambuah pinggang masukFiltrasi makrofajberbanding dengan kawalan. Untuk memahami sama ada peningkatan pengambilan makrofaj (Mϕs) ke buah pinggang sedang memandu masukFlammation dan merambat kecederaan, kami memeriksa effdll Mϕ pengurangan dengan clodronate dalam tikus kalah mati FH dengan CSS. Tikus FHKO berusia lapan minggu telah dirawat dengan apoferritin (4 mg/tikus) selama 5 minggu dan dengan sama ada kenderaan (PBS) atau clodronate (50 mg/kg ip, 3 kali/minggu selama 3 minggu terakhir). Pentadbiranclodronate mengurangkan monosit dan Mϕs dalam buah pinggangoleh>80%. 

Fungsi buah pinggangyang dinilai oleh BUN dan albumin kekal lebih hampir kepada normal apabila kehabisan Mϕs. Rawatan clodronate menghalang perubahan dalam sitokin, TNF dan IL-6, dan peningkatan dalam ekspresi gen faktor pertumbuhan tisu penghubung (CTGF), TGF -1, matriks metalloproteinase-9 (MMP9),Fibronectin, laminin dan kolagen dalam tikus FHKO dengan CSS (P < 0:05). Rawatan clodronate membawa kepada perlindungan relatif daripadakompleks imun- (IC-) patologi penyakit pengantara semasa CSS seperti yang dinilai olehsigniFipatologi glomerular yang dikurangkan secara cantly(GN) dan matriks ekstraselular. Keputusan kami menunjukkan bahawa pengaktifan pelengkap adalah salah satu mekanisme yang mengawal landskap makrofaj dan dengan ituFibrosis. Mekanisme yang tepat masih perlu dihuraikan. Secara ringkas, data kami menunjukkan bahawa Mϕs memainkan peranan penting dalam ICGN dan M yang bergantung kepada FHϕ kehabisanmengurangkan perkembangan penyakit.

KLIK DI SINI UNTUK MENDAPATKAN EKSTRAK CISTANCHE ORGANIK SEMULAJADI DENGAN 25% ECHINACOSIDE DAN 9% ACTEOSIDE UNTUK FUNGSI BUAH PINGGANG

1. Pengenalan

Penyakit buah pinggang yang kronik(CKD) ialah masalah kesihatan global; 10% daripadanya adalah kompleks imun- (IC-) yang dimediasi dan berlaku dalam penyakit serum, jangkitan, dan penyakit autoimun. [1]. Laporan Tahunan Sistem Data Renal Amerika Syarikat menyatakan bahawaindividu dengan CKD"jelas berisiko tinggi kematian" dengan 10-kejadian meningkat kali ganda dalam tempoh tiga dekad di mana pesakit yang terjejas kehilangan 70% daripada jangka hayat mereka. Menurut NIDDK, kira-kira 14% daripada populasi dewasa telah didiagnosis dengan penyakit buah pinggang, menjadikannya penyebab utama kematian ke-9 [2]. Buah pinggang sangat terdedah kepada kerosakan pengantara pelengkap terutamanya dalam tetapan autoimun dan keradangan [3, 4].

Sistem pelengkap mengambil bahagian dalam tindak balas imun semula jadi dan adaptif dan menyediakan barisan pertahanan pertama terhadap mikroorganisma [5, 6]. Ia terdiri daripada tiga laluan pengaktifan, yang dimulakan dengan cara yang unik, dan terdiri daripada lebih daripada 30 plasma dan protein yang berkaitan dengan sel [7]. Laluan alternatif sentiasa berjaga-jaga dan dikawal oleh protein seperti faktor pelengkap H (FH). FH adalah protein beredar yang kebanyakannya disintesis oleh hati [8]. Tikus kekurangan FH (fh-/-) yang dirawat dengan apoferritin mengalami penyakit serum kronik (CSS) yang membawa kepada glomerulonefritis proliferatif (GN) meresap dalam tempoh 5 minggu rawatan, manakala tikus C57BL/6 yang mempunyai faktor H (FH) yang mencukupi mempunyai sedikit keradangan glomerular [9]. F4/80+ penyusupan makrofaj berlaku dalam buah pinggang dan diperhatikan di sekitar mendapan IC dalam fh-/- tikus. Pengaktifan pelengkap menjana anafilatoksin, C3a dan C5a, yang mengambil bahagian dalam pemerdagangan Mϕs ke tapak keradangan. Perencatan isyarat C5a/ C5aR1 mengurangkan Mϕs dalam buah pinggang [10]. Dalam tetapan ini,kecederaan buah pinggangdikaitkan dengan penyusupan buah pinggang tetapi mekanisme yang mungkin terlibat dalam menyebabkankecederaan buah pinggangtetap tidak diketahui.

Rajah 1: FH mengubah gen penanda makrofaj dalam buah pinggang tikus dengan ICGN yang bergantung kepada FH. PCR kuantitatif masa nyata untuk CD204 dan CD206 menggunakan mRNA yang diasingkan daripada buah pinggang selepas 5 minggu salin atau apoferritin. Ungkapan dinormalkan kepada GAPDH (n=6/kumpulan). ∗P < 0:01. Graf menggambarkan perubahan lipatan gen dalam tikus fh-/- yang dirawat apoferritin (n=6) berbanding tikus fh-/- yang dirawat dengan garam (n=6).

Monosit (Mo) yang dijana oleh sel hematopoietik [11] berhijrah melalui endothelium ke dalam tisu, di mana ia membezakan kepada Mϕs. Penanda seperti reseptor F4/80, CD11b, CD68 dan Fc boleh mengenal pasti Mϕs. Mϕs terlibat secara kritikal dalam kecederaan buah pinggang, pembaikan, dan fibrosis dalam model eksperimen penyakit buah pinggang yang berbeza [12, 13]. Baru-baru ini, kajian kami menunjukkan bahawa kecederaan buah pinggang dalam ICGN yang bergantung kepada FH dikaitkan dengan penyusupan buah pinggang Mϕs. Selain itu, kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa perencatan penyusupan Mϕ buah pinggang mengurangkan tekanan arteri dan menghalang kecederaan glomerular dan fibrosis dalam pelbagai model haiwan nefropati [14, 15]. Walau bagaimanapun, untuk pengetahuan kami, kesan pengurangan Mϕ semasa kecederaan buah pinggang yang dikaitkan dengan ICGN yang bergantung kepada FH belum ditangani. Oleh itu, kajian ini mengkaji peranan Mϕs pada kecederaan buah pinggang yang berkaitan dengan ICGN yang bergantung kepada FH menggunakan liposom clodro nate. Clodronate (asid clodronic) ialah bifosfonat yang dimetabolismekan kepada analog ATP yang tidak boleh dihidrolisis [16]. Eksperimen kami menunjukkan bahawa Mϕs memainkan peranan penting dalam kehilangan fungsi buah pinggang dalam tetapan pengaktifan pelengkap yang tidak terkawal. Oleh itu, mengurangkan Mϕs atau mengarahkan Mϕs untuk menganggap fenotip pembaikan boleh mengurangkan patologi penyakit dan boleh dieksploitasi secara terapeutik.

2. Bahan-bahan dan cara-cara

2.1. Haiwan Eksperimen.

Ketegangan fh−/− tetikus dijana dan disediakan oleh Dr. Matthew Pickering dan Marina Botto (Imperial College of London) dan terus menyilang kembali ke strain C57BL/6 di makmal kami selama lebih 10 generasi. Tikus yang cukup FH Littermate berfungsi sebagai kawalan (n=8/kumpulan) Genotaip dilakukan menggunakan pendekatan berasaskan PCR. Tikus dikekalkan pada suhu 20-22 darjah C dalam 12 jam kitaran pencahayaan gelap terang-12 jam, dalam sangkar steril, berventilasi dengan makanan dan air ad lib. Universiti Chicago dan Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Institusi Universiti Buffalo meluluskan semua kajian.

2.2. Protokol Penyakit Serum Kronik.

CSS diinduksi dalam 6-8 minggu fH−/− atau tikus jenis liar dengan pentadbiran intraperitoneal harian 4 mg apoferritin limpa kuda (Calzyme Laboratories) tanpa adjuvant [10, 17, 18] selama 5 minggu. Kawalan Littermate menerima suntikan intraperitoneal kenderaan masin secara serentak

2.3. Penilaian Fungsi Buah Pinggang.

Kepekatan nitrogen urea darah (BUN) ditentukan dengan Autoanalyzer Beckman (Beckman Coulter, Fullerton, CA). Kepekatan albumin urin diukur dengan kit ELISA albumin tetikus (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX) dan dinormalkan kepada kreatinin kencing yang diukur secara kolorimetrik (Stanbio Laboratory, Boerne, TX) seperti yang diterangkan sebelum ini [19].

Rajah 2: Clodronate semakin mengurangkan makrofaj buah pinggang pada tikus dengan ICGN yang bergantung kepada FH. Diberikan ialah profil sitometri aliran F4/80+ monosit/Mϕs pada hari 0, 2, 4, dan 7, secara perwakilan. Ekspresi sel F4/80+ ditentukan oleh sitometri aliran. Data dianalisis menggunakan perisian FlowJo V10. Sel F4/80+ berkurangan dengan ketara pada setiap titik masa mencapai kurang daripada 10% pada hari ke-7. Setiap titik masa n=6.

2.4. Histologi.

Buah pinggang dibenamkan dalam parafin dan untuk malin-fixed, dan bahagian empat mikrometer telah dihasilkan. Bahagian tersebut telah diwarnai dengan Asid-Schiff Berkala dan diperiksa oleh pakar patologi buah pinggang (AC) secara buta. Bagi setiap slaid, glomerulonephritis proliferatif dan glomerulo-sklerosis digredkan daripada 0 kepada 4 seperti yang diterangkan sebelum ini [20]. Untuk mikroskopi imunofluoresensi, tisu buah pinggang dibekukan dalam 2-metilbutana yang disejukkan terlebih dahulu dalam ais kering. Bahagian cryostat empat mikron telah diproses untuk pewarnaan immuno-fluorescence (IF). Bahagian telah dibetulkan dalam 4% paraformaldehid dan diwarnai dengan Alexa{12}}anti tetikus C3 (Cappel) terkonjugasi dan Alexa 555 anti-tikus IgG. Skor separa kuantitatif keamatan pewarnaan dan pengedaran dari 0 hingga 4 disediakan dengan cara buta seperti yang diterangkan sebelum ini [19].

2.5. qRT-PCR.

Buah pinggang telah dituai, dan jumlah RNA telah diekstrak daripada tisu menggunakan reagen TRIzol mengikut arahan pengilang (Invitrogen, USA). cDNA telah disintesis menggunakan SuperScript III Reverse Transcriptase (Invitrogen). qRT-PCR dilakukan menggunakan campuran Master PCR Hijau Power SYBR pada pengesan jujukan ABI 7700 (Applied Biosystems). Penguatan PCR dilakukan dalam jumlah isipadu 25 ul yang mengandungi 12.5 ul 2x TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems), 6.25 ul air bebas nuklease, 5 ul cDNA, dan 1.25 ul primer yang sesuai (IDT). Semua primer qPCR (Jadual 1) direka menggunakan perisian Primer3 (Institut Whitehead untuk Penyelidikan Bioperubatan) untuk memastikan kekhususan dan kepekaan. Untuk mengukur tahap mRNA, kami menormalkan ekspresi gen sasaran kepada gliseraldehid{14}} fosfat dehidrogenase. Tahap ekspresi mRNA relatif dikira menggunakan kaedah 2 - ΔΔCt dan telah dinormalisasi kepada tahap ekspresi GAPDH.

2.6. Perangkaan.

Semua keputusan adalah min ± SD daripada sekurang-kurangnya {{0}} tetikus dalam setiap kumpulan. Sama ada ujian dua hujung yang tidak berpasangan (data dengan taburan normal) atau ujian Mann–Whitney U (data tanpa taburan normal) telah digunakan untuk membandingkan 2 kumpulan oleh GraphPad Prism 5.0. Kepentingan statistik dinyatakan seperti berikut: ∗P < 0:05; ∗∗P < 0:01; dan ns: tidak ketara.

Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-Pengeksport cistanche terbesar di China:

E-mel:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Beli Untuk Butiran Spesifikasi Lebih Lanjut:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop