Pengeluaran Lipase Oleh Yarrowia Lipolytica dalam Penapaian Keadaan Pepejal Menggunakan Produk Sampingan Buah-buahan Amazon Dan Makanan Kacang Soya Sebagai Substrat Bahagian 1

Abstrak: Penghasilan asid lemak tak tepu daripada minyak ikan, yang berkaitan dengan pelbagai manfaat kesihatan termasuk kesan terhadap penyakit kardiovaskular, antihipertensi, antikanser, antioksidan, antidepresi, anti-penuaan dan kesan anti-artritis, antara lain, boleh dilakukan secara berfaedah melalui penggunaan lipase. Walau bagaimanapun, kos tinggi yang berkaitan dengan pengeluaran enzim boleh menyebabkan proses tidak dapat dilaksanakan, dan oleh itu substrat alternatif harus disiasat untuk menyelesaikan masalah ini. Penyelidikan ini bertujuan untuk menghasilkan lipase oleh Yarrowia lipolytica IMUFRJ50682 dalam penapaian keadaan pepejal menggunakan produk sampingan industri pemprosesan makanan (kek minyak andiroba dan tepung soya) dan mengesahkan potensi aplikasi dalam hidrolisis awal minyak ikan untuk terus menghasilkan asid lemak tak tepu dalam proses yang sesuai. Saringan telah dijalankan untuk analisis gabungan kek minyak andiroba dan hidangan kacang soya dalam perkadaran yang berbeza (0:1{{20}}0 hingga 100:0, masing-masing) pada 48 jam proses penapaian. Selepas itu, matriks pepejal yang terdiri daripada tepung kacang soya dan kek minyak andiroba ditambah dengan minyak soya dan Tween 80 untuk meningkatkan aktiviti lipase. Ekstrak enzimatik dicirikan oleh profil protein oleh elektroforesis. Akhirnya, ekstrak enzimatik dan biomangkin pepejal yang dihasilkan digunakan untuk menilai potensi hidrolisis minyak ikan dalam kajian awal. Aktiviti lipolitik maksimum (63.7 U·g −1 ) dicapai menggunakan kek minyak andiroba dan tepung kacang soya (50:50) selepas 24 jam penapaian. Minyak kacang soya 1.5 peratus dan Tween 80 (0.001 peratus ) dalam emulsi memberikan peningkatan sebanyak 1.5-kali ganda (82.52 U·g −1 ) dalam aktiviti enzim. Analisis elektroforesis menunjukkan jalur antara 37 dan 40 kDa yang mungkin berkaitan dengan lipase dan jalur 75 kDa merujuk kepada subunit -conglycinin yang terdapat dalam makanan kacang soya. Selepas 48 jam, biomangkin pepejal menunjukkan tahap hidrolisis (DH) (71.0 peratus ) yang lebih tinggi daripada ekstrak enzimatik (61.5 peratus ). Biomangkin pepejal adalah stabil semasa penyimpanan pada suhu bilik selama 7 bulan. Pengeluaran lipase menggunakan produk sampingan buah Amazon dan tepung soya dalam penapaian keadaan pepejal adalah berdaya maju serta penggunaan ekstrak dan biomangkin pepejal dalam aplikasi awal untuk hidrolisis minyak ikan untuk menghasilkan lagi asid lemak tak tepu dalam industri. proses yang sesuai.

Glikosida cistanche juga boleh meningkatkan aktiviti SOD dalam tisu jantung dan hati, dan dengan ketara mengurangkan kandungan lipofuscin dan MDA dalam setiap tisu, dengan berkesan menghilangkan pelbagai radikal oksigen reaktif (OH-, H₂O₂, dll.) dan melindungi daripada kerosakan DNA yang disebabkan oleh OH-radikal. Glikosida phenylethanoid cistanche mempunyai keupayaan penghapusan radikal bebas yang kuat, keupayaan pengurangan yang lebih tinggi daripada vitamin C, meningkatkan aktiviti SOD dalam penggantungan sperma, mengurangkan kandungan MDA, dan mempunyai kesan perlindungan tertentu pada fungsi membran sperma. Polisakarida cistanche boleh meningkatkan aktiviti SOD dan GSH-Px dalam eritrosit dan tisu paru-paru tikus senescent eksperimen yang disebabkan oleh D-galaktosa, serta mengurangkan kandungan MDA dan kolagen dalam paru-paru dan plasma, dan meningkatkan kandungan elastin, mempunyai kesan penghapusan yang baik pada DPPH, memanjangkan masa hipoksia pada tikus senescent, meningkatkan aktiviti SOD dalam serum, dan melambatkan degenerasi fisiologi paru-paru dalam tikus senescent secara eksperimen Dengan degenerasi morfologi selular, eksperimen telah menunjukkan bahawa Cistanche mempunyai keupayaan antioksidan yang baik. dan berpotensi menjadi ubat untuk mencegah dan merawat penyakit penuaan kulit. Pada masa yang sama, echinacoside dalam Cistanche mempunyai keupayaan yang ketara untuk menghilangkan radikal bebas DPPH dan boleh menghilangkan spesies oksigen reaktif, menghalang degradasi kolagen yang disebabkan oleh radikal bebas, dan juga mempunyai kesan pembaikan yang baik pada kerosakan anion radikal bebas timin.

Klik pada Suplemen Cistanche Tubulosa

【Untuk maklumat lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Kata kunci: Carapa guianensis Aublet; pengeluaran lipase; penapaian keadaan pepejal; kelestarian; Yarrowia lipolytica

1. Pengenalan

Buah-buahan Amazon mempunyai potensi bioteknologi yang tinggi untuk penyelidikan dan aplikasi dalam pelbagai sektor ekonomi seperti industri farmaseutikal dan makanan kerana kehadiran makro dan mikronutrien termasuk protein, karbohidrat, serat, karotenoid, asid lemak tak tepu, dan vitamin, antara lain. [1].

Andiroba (Carapa guianensis Aublet) ialah tumbuhan Amazon yang menghasilkan buah biji minyak dengan potensi komersial untuk pengekstrakan minyak dengan sifat perubatan sebagai kesan analgesik, anti-edematogenik, dan anti-radang [2,3]. Selain itu, ia memberikan ciri-ciri teknologi yang menarik untuk industri kosmetik kerana ia kaya dengan sebatian emolien, yang dibekalkan sebagai input untuk industri kosmetik di seluruh dunia [4]. Buah andiroba ialah kapsul yang mempunyai berat antara 90 dan 540 g dan terdiri daripada 1 hingga 16 biji coklat, dengan berat antara 1 dan 70 g. Untuk mendapatkan minyak, benih dipecahkan kepada kepingan kecil dan dikeringkan di dalam ketuhar sehingga mencapai kelembapan 8 peratus. Kemudian, ia dimampatkan dalam mesin penekan jenis pengusir logam [5], menghasilkan minyak andiroba yang memberikan minat industri yang besar dan nilai komersial yang tinggi kerana produk ini boleh melebihi 50 dolar seliter, bergantung pada ciri-cirinya [6].

Pengeluaran tahunan andiroba adalah kira-kira 122.16 tan [7] dan pengeluaran minyak tidak melebihi 30 peratus daripada berat buah [8]. Angka-angka ini bermakna kira-kira 36,648 tan minyak dan 85,512 tan kek dijana setiap tahun. Hasil sampingan yang diperoleh selepas penerokaan buah-buahan ini masih boleh mengandungi lipid (20 peratus ), abu (4.2 peratus), protein (7.3 peratus), dan karbohidrat (17 peratus), dan kerana komposisi ini, penggunaannya dalam proses bioteknologi. adalah menarik [9]. Satu cara untuk menggunakan produk sampingan ini adalah melalui penapaian keadaan pepejal (SSF) untuk menghasilkan sebatian nilai tambah tinggi seperti enzim.

Penapaian keadaan pepejal dilakukan menggunakan matriks pepejal tanpa air bebas, tetapi pepejal mesti mempunyai kelembapan yang mencukupi untuk pertumbuhan mikrob [10]. Penggunaan SSF telah dilaporkan menghasilkan sebatian aroma [11], antibiotik [12], asid organik [13], biopestisid [14], biosurfaktan [15], enzim [16], dan sebatian lain. Pengeluaran enzim dalam SSF memerlukan penggunaan mikroorganisma seperti kulat dan bakteria yang tumbuh dalam keadaan yang biasa digunakan dalam SSF. Antara mikroorganisma yang digunakan secara bioteknologi, yis menonjol, terutamanya Yarrowia lipolytica, kerana potensinya untuk menghasilkan lipase [10].

Yarrowia lipolytica ialah yis bukan konvensional yang mempunyai suhu pertumbuhan maksimum 32–34 ◦C dan tidak dapat bertahan dalam keadaan anaerobik. Y. lipolytica diklasifikasikan sebagai diiktiraf secara amnya sebagai selamat (GRAS) oleh Pentadbiran Makanan dan Ubat (FDA) dan ini membolehkan penggunaannya yang selamat dalam proses/produk makanan dan farmaseutikal [9]. Yis ini diiktiraf sebagai menghasilkan lipase intrasel, ekstraselular dan dinding sel yang berkaitan. Yarrowia lipolytica boleh menghasilkan lipase menggunakan pelbagai sumber karbon termasuk minyak, metil ester, dan asid lemak [17]. Ciri-ciri yang disebutkan menjadikan Y. lipolitik serba boleh untuk aplikasi bioteknologi, terutamanya dalam pengeluaran lipase.

Lipase (triacylglycerol acyl hydrolases EC 3.1.1.3) ialah enzim yang memangkinkan hidrolisis trigliserida kepada asid lemak bebas dan gliserol dengan kehadiran air [18]. Lipase boleh digunakan dalam banyak sektor termasuk industri makanan, antara lain. Penggunaan lipase telah dilaporkan dalam hidrolisis susu, lemak, dan pematangan keju, dalam pengubahsuaian lemak mentega, dalam peningkatan aroma minuman dan roti, dalam pembalut makanan, dan dalam perkembangan rasa daging dan ikan. [19]. Di samping itu, lipase telah digunakan untuk hidrolisis minyak kepada kepekatan asid lemak tak tepu yang boleh digunakan dalam industri makanan sebagai tambahan yang diperkaya [20].

Beberapa kajian telah melaporkan penggunaan sisa dan produk sampingan dalam penghasilan lipase, antaranya kulit kacang soya, kulit tembikai, tepung biji kapas, tepung kacang soya, dan kek minyak andiroba [9,21-26]. Walau bagaimanapun, gabungan kek minyak andiroba dan tepung kacang soya dalam perkadaran yang berbeza untuk pengeluaran lipase oleh Yarrowia lipolytica masih belum dilaporkan. Penyelidikan ini bertujuan untuk menghasilkan Yarrowia lipolytica lipase secara fermentasi keadaan pepejal (SSF) menggunakan produk sampingan industri pemprosesan makanan (kek minyak andiroba dan tepung soya) untuk digunakan dalam hidrolisis minyak ikan untuk menghasilkan lagi asid lemak tak tepu.

2. Keputusan dan Perbincangan

Strategi yang digunakan untuk menghasilkan lipase oleh Yarrowia lipolytica dalam SSF menggunakan gabungan kek minyak andiroba dan tepung soya dalam perkadaran yang berbeza adalah berdasarkan carta alir yang ditunjukkan dalam Rajah 1.

2.1. Pencirian Produk Sampingan Agro-Industri

Komposisi fizikal-kimia bagi kek minyak andiroba ditunjukkan dalam Jadual 1. Kek minyak andiroba mempersembahkan 13.7 peratus protein, 26.9 peratus ekstrak eter, 0.4 peratus karbohidrat, dan 45.6 peratus gentian tidak larut. Sebaliknya, makanan kacang soya memberikan 48.3 peratus protein, 2.4 peratus ekstrak eter, 14.0 peratus karbohidrat dan 18.0 peratus gentian tidak larut. Setiap nutrien yang terdapat dalam kek mempunyai peranan dalam metabolisme mikrob. Kandungan nitrogen adalah penting untuk sintesis protein, nukleotida, dan metabolit sekunder untuk pertumbuhan dan metabolisme mikroorganisma serta untuk biosintesis enzim [25]. Kandungan sisa minyak (ekstrak eter) yang terdapat dalam kek minyak andiroba bertindak sebagai sumber karbon, mengambil bahagian dalam pembentukan biojisim dan pengeluaran tenaga untuk prestasi fungsi selular [26]. Selain itu, minyak yang terdapat dalam kek andiroba adalah substrat hidrofobik dan boleh bertindak sebagai inducer dalam pengeluaran lipase, seperti yang dilaporkan oleh Brígida et al. [17]. Pada mulanya, lipase yang terikat pada sel mikroorganisma menghidrolisis lipid yang terdapat dalam medium dan memulakan pertumbuhan sel. Sepanjang proses, ketersediaan substrat berkurangan, jadi organisma merembeskan lipase ekstraselular [27].

Abu yang dikira dalam kek minyak andiroba (4.5 peratus ) dan tepung kacang soya (6.3 peratus ) mewakili kandungan beberapa mineral dan boleh digunakan dalam metabolisme mikroorganisma; bagaimanapun, sesetengah mineral seperti ion natrium dan mangan boleh menghalang pertumbuhan Yarrowia lipolytica [17], dan oleh itu adalah perlu untuk menilai dengan betul produk sampingan.

Kandungan karbohidrat dan serat dalam bahan mentah boleh digunakan dalam pemakanan mikrob dengan cara yang terhad kerana Yarrowia lipolytica tidak menghasilkan amilase atau selulase dan hemicellulase [28,29], menjadikannya sukar untuk memecahkan polisakarida ini dan melepaskan sebatian kaya karbon kepada digunakan dalam metabolisme yis. Oleh itu, adalah dicadangkan bahawa pertumbuhan yis adalah terutamanya disebabkan oleh kehadiran substrat hidrofobik dalam kek.

Nilai keliangan kek minyak andiroba dan tepung kacang soya ditunjukkan dalam Jadual 1. Menurut Jadual 1, keliangan kek andiroba dan tepung kacang soya ialah 0.425 dan 0.412 m3 katil udara m−3, masing-masing. Nilai keliangan yang lebih tinggi dikaitkan dengan peningkatan jisim dan pemindahan haba semasa penapaian, yang membawa kepada peningkatan pengeluaran enzim. Di samping itu, keliangan adalah parameter penting untuk memahami kelembapan medium: nilai kelembapan yang tinggi mungkin dikaitkan dengan nilai keliangan yang rendah, dan ini menjejaskan pengudaraan medium, dan seterusnya penghasilan lipase [22].

2.2. Pengeluaran Lipase oleh SSF

Penggunaan produk sampingan untuk pengeluaran lipase melalui penapaian keadaan pepejal dan penghasilan biomangkin pepejal yang stabil membolehkan penggunaan enzim secara langsung dalam medium tindak balas, mengurangkan kos yang berkaitan dengan pengekstrakan enzim dan penulenan untuk aplikasi seterusnya. Tambahan pula, penggunaan produk sampingan menyediakan nutrien untuk pertumbuhan dan perkembangan mikrob, bertindak sebagai sokongan fizikal untuk mikroorganisma, dan mengurangkan kos medium kultur untuk proses tersebut. Di samping itu, penapaian keadaan pepejal membolehkan penggunaan sisa dan produk sampingan agroindustri, menjadi alternatif untuk mengurangkan masalah alam sekitar yang berkaitan dengan pelupusan sisa yang tidak sesuai [30].

Selepas pencirian, produk sampingan digunakan sebagai substrat matriks pepejal dalam penghasilan lipase menggunakan SSF, dipantau untuk aktiviti lipolitik dan proteolitik, kelembapan, dan pH semasa proses penapaian. Rajah 2 menunjukkan profil pembolehubah tindak balas yang diukur sepanjang 48 jam penapaian menggunakan Y. lipolytica dan gabungan kek minyak andiroba dan tepung soya dalam perkadaran yang berbeza sebagai substrat.

Berkenaan dengan penggunaan substrat secara individu, aktiviti lipolitik maksimum 4.36 U·g −1 didapati untuk hidangan kacang soya (0:100; Rajah 2A) dan 13.48 U·g −1 untuk kek minyak andiroba (100:0; Rajah 2B), selepas 12 dan 24 jam, masing-masing. Selepas mencapai tahap aktiviti lipase terbesar, pengurangan dalam nilainya diperhatikan, yang mungkin berkaitan dengan peningkatan aktiviti protease. Enzim ini mempunyai pertalian untuk struktur protein, dan disebabkan ini, boleh bertindak merendahkan struktur lipase, mengurangkan aktivitinya [24,31,32].

Kek Andiroba dan hidangan kacang soya yang digunakan dalam perkadaran berbeza (25:75), (50:50), dan (75:25) menghasilkan nilai maksimum aktiviti lipase sebanyak 57.21 U·g −1 selepas 12 jam (Rajah 2C), 63.70 U·g −1 (Rajah 2D) dan 40.13 U·g −1 (Rajah 2E) selepas 24 jam penapaian, masing-masing, menunjukkan bahawa campuran matriks boleh meningkatkan aktiviti lipase. Peningkatan aktiviti enzimatik selepas gabungan kek minyak andiroba dan tepung soya boleh dijelaskan dengan memerhatikan komposisi fizikokimia kedua-dua bahan mentah, seperti ditunjukkan dalam Jadual 1. Hidangan kacang soya mempunyai kandungan protein yang tinggi manakala kek minyak andiroba mempunyai kandungan minyak yang lebih tinggi. . Oleh itu, campuran kek minyak andiroba dan tepung soya untuk pengeluaran lipase terbukti lebih menarik daripada menggunakan setiap satu secara berasingan, dan ini memihak kepada ketidakbergantungan substrat tunggal serta penggunaan lebih daripada satu produk sampingan.

pH awal matriks adalah berasid kerana kehadiran asid lemak bebas dalam matriks oleaginous, dan keadaan ini menyokong pertumbuhan Yarrowia lipolytica kerana yis ini memerlukan medium asid ringan untuk pertumbuhan yang baik [33], mengelakkan langkah penimbal sederhana. Terdapat juga peningkatan beransur-ansur dalam pH sepanjang proses dalam matriks antara 6.39 hingga 7.32 (Rajah 2A), 5.69 hingga 6.82 (Rajah 2C), 5.64 hingga 7.68 (Rajah 2D), dan 5.21 hingga 6.03 (Rajah 2E). Dalam matriks yang hanya mengandungi kek minyak andiroba, penurunan beransur-ansur dalam pH (4.8 hingga 4.26, Rajah 2B) diperhatikan disebabkan oleh kandungan sisa minyak dalam medium pepejal kerana minyak pada mulanya dihidrolisiskan oleh lipase, tidak dimakan oleh yis dalam jam awal, dengan itu mengekalkan pH sedikit berasid.

Mengenai kandungan lembapan, tiada variasi diperhatikan sepanjang penapaian, menunjukkan bahawa sistem pengeraman dengan lembapan tepu dan matriks berkesan untuk mengekalkan lembapan. Medium penapaian yang mampu mengekalkan kandungan lembapan optimum adalah penting untuk penghasilan lipase oleh Yarrowia lipolytica [24] kerana parameter ini boleh menjejaskan pengudaraan sistem. Tambahan pula, kandungan lembapan yang ideal diperlukan untuk menyediakan air yang diperlukan untuk metabolisme mikroorganisma dan untuk melarutkan nutrien. Apabila kandungan lembapan melebihi ideal, resapan oksigen yang lemah mungkin berlaku dalam sistem, berada di luar julat ideal untuk mikroorganisma [34].

Beberapa kajian telah melaporkan penggunaan produk sampingan sebagai substrat dalam penapaian keadaan pepejal. Walau bagaimanapun, dalam kajian ini, terdapat penggabungan sumber karbon tulen dan/atau nitrogen seperti glukosa, ekstrak yis, pepton, dan urea [35–37] dalam kuantiti yang boleh meningkatkan kos proses. Matriks yang ideal mesti menunjukkan beberapa ciri untuk aplikasi yang termasuk bertindak sebagai sokongan, menyediakan nutrien yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroorganisma, dan rembesan produk bioteknologi yang diminati. Mencari semua ciri ini dalam produk sampingan boleh menjadi sukar, yang menjadikannya sukar untuk mencari sistem yang mencukupi untuk proses penapaian; oleh itu, pencarian bahan mentah baharu dan gabungannya mestilah berterusan [16].

Oleh itu, perkadaran 50:50 antara kek andiroba dan makanan kacang soya telah dipilih untuk ujian lanjut. Pilihan keadaan ini dikaitkan dengan memperkayakan sisa yang belum diterokai dari rantau Amazon.

2.3. Penapaian Matriks Tambahan

Dalam bahagian kedua kerja ini, kek minyak andiroba dan tepung kacang soya dalam perkadaran 50:50 telah ditambah dengan 1.5 peratus minyak kacang soya, seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3. Penambahan telah dijalankan untuk mengesahkan sama ada ketersediaan daripada sumber karbon yang lebih mudah diasimilasikan (minyak kacang soya) meningkatkan pengeluaran lipase tentang kandungan sisa minyak yang terdapat dalam kek minyak andiroba. Aktiviti lipase maksimum sebanyak 56.32 U·g −1 diperolehi selepas 28 jam penapaian dan aktiviti protease adalah antara 2.71 hingga 7.60 U·g −1. pH berjulat dari 5.63 hingga 7.63 dan kelembapan kekal tanpa turun naik besar sepanjang tempoh (53 hingga 58 peratus). Seperti yang dibentangkan sebelum ini, aktiviti lipolitik yang diperoleh selepas suplemen adalah lebih rendah daripada nilai yang didapati tanpa suplemen. Suplemen matriks untuk pengeluaran lipase telah dikaji oleh Farias et al. [38] dan Souza et al. [24]. Penulis mendapati aktiviti lipase sebanyak 139 U·g −1 dan 93.9 U·g −1 masing-masing menggunakan enap cemar dan minyak kacang soya. Walau bagaimanapun, apabila Souza et al. [24] melakukan penapaian hanya menggunakan tepung kacang soya (tanpa suplemen), penulis mendapati 9.4 ± 0.3 U·g −1 aktiviti lipase selepas 10 jam penapaian, menunjukkan bahawa suplemen meningkatkan aktiviti lipase dalam matriks penapaian yang dikaji.

Komponen lain yang biasa dilaporkan untuk suplemen sederhana ialah Tween 80. Ini sentiasa dilaporkan dalam literatur, kerana komponen ini boleh meningkatkan aktiviti lipase apabila digunakan dalam penapaian terendam [39], tetapi tidak ada laporan menggunakan Tween 80 dalam penapaian keadaan pepejal. Tween 80 boleh meningkatkan pengeluaran lipase ekstrasel semasa proses penapaian disebabkan oleh kapasiti pengemulsi substrat, dan oleh itu meningkatkan kebolehcapaian substrat untuk mikroorganisma serta mengubah kebolehtelapan sel [40]. Oleh itu, kajian telah dilakukan dengan menggabungkan minyak kacang soya 1.5 ( peratus b/v) dan Tween 80 0.001 peratus (b/v) dalam emulsi untuk menambah medium pepejal penapaian, seperti ditunjukkan dalam Rajah 4.

Mengenai suplemen dengan Tween 80, ia telah disahkan bahawa selepas 14 jam penapaian, aktiviti lipolitik ialah 57.6 U·g −1. Nilai yang sama sebelum ini diperoleh hanya dengan suplemen minyak kacang soya pada 28 jam penapaian, yang memanjangkan proses penapaian dan memberi kesan kepada daya maju. Aktiviti lipolitik maksimum selepas 20 jam penapaian ialah 82.52 U·g −1, peningkatan 1.46-kali ganda berbanding pengeluaran lipase menggunakan minyak kacang soya sahaja dan pengurangan 8-h dalam proses masa.

Masa penapaian yang panjang meningkatkan kos proses, jadi pencarian untuk mikroorganisma binomial yang ideal—medium yang menghasilkan lipase dalam masa yang lebih singkat (produktiviti tinggi) dan yang menggunakan produk sampingan sebagai matriks adalah menarik. Beberapa kajian dalam literatur telah melaporkan pengeluaran lipase melalui SSF untuk mencapai keadaan yang mencukupi dan menjadikannya layak untuk mendapatkan lipase. Penggunaan bahan mentah yang berbeza termasuk tepung kacang soya, kanola, kulit tembikai, dan kek minyak isirong sawit diperhatikan, dengan aktiviti antara 9 hingga 127 U·g −1[9,22,24].

Sales, Castro, Ribeiro, dan Coelho [22] mengkaji pengeluaran lipase oleh Y. lipolytica dalam penapaian keadaan pepejal menggunakan tepung kacang soya yang ditambah dengan kulit tembikai (5 peratus) memperoleh peningkatan dalam aktiviti lipase sebanyak 31 peratus, nilai yang sepadan dengan 75.22 U. ·g −1. Souza et al. [41] menghasilkan lipase daripada Y. lipolytica melalui penapaian keadaan pepejal untuk aplikasi dalam sintesis ester komersial dengan nilai untuk industri makanan, dan keputusan menunjukkan bahawa keadaan penapaian terbaik untuk menghasilkan biomangkin adalah menggunakan tepung kacang soya dan minyak kacang soya ( 3 peratus b/b). Enzim yang dihasilkan di bawah keadaan ini membenarkan penukaran sehingga 92.9 untuk mensintesis ester nilai tambah tinggi yang berguna yang digunakan dalam industri makanan.

Sebagai tambahan kepada aktiviti enzimatik tinggi yang diperolehi dalam kerja ini, kami boleh menyerlahkan kelebihan tambahan: (i) kemungkinan menggunakan produk sampingan dengan eksploitasi rendah, dengan daya tarikan kemampanan untuk rantau Amazon; (ii) kemungkinan gabungan produk sampingan yang berbeza, yang membolehkan pelengkap nutrisi untuk metabolisme mikrob; (iii) pengurangan tekanan ke atas komponen yang telah digunakan secara meluas dalam industri bioproses seperti tepung kacang soya; (iv) pengukuhan ekonomi kawasan pengeluar produk sampingan; (v) pengembangan pilihan substrat untuk pengeluaran lipase, dan (vi) pengurangan dalam kos operasi, antara kelebihan lain.

2.4. SDS-PAGE

Ekstrak enzimatik kasar yang diperolehi selepas penapaian menggunakan matriks yang terdiri daripada kek minyak andiroba dan tepung kacang soya (50:50) tanpa tambahan telah dianalisis dalam SDS-PAGE. Analisis elektroforetik menunjukkan jalur protein yang terkandung dalam ekstrak enzimatik, seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 5.

Lorong 1 merujuk kepada penanda protein standard dan Lorong 2 ialah sampel yang diperoleh daripada gabungan kek minyak andiroba dan tepung soya dalam perkadaran yang lebih baik yang dikaji (50:50). Adalah mungkin untuk menggambarkan jalur sekitar 37–40 kDa dalam ekstrak enzimatik mentah yang mungkin berkaitan dengan lipase dan/atau esterase yang dihasilkan oleh Yarrowia lipolytica, seperti yang diperhatikan oleh Souza et al. [41], yang mungkin juga merupakan lipase ekstraselular utama Y. lipolytica (Lip2), yang dihasilkan secara meluas dalam semua kajian kami. Tambahan pula, dilaporkan bahawa walaupun untuk enzim yang dikaitkan terutamanya dengan dinding sel (Lip7 dan Lip8) Y. lipolytica, jisim molekul yang sama telah diperhatikan (37-41 kDa) [42].

Selain itu, menurut keputusan yang diterbitkan sebelum ini oleh kumpulan penyelidikan kami, jalur yang sama yang dibentangkan di sini adalah berkaitan dengan aktiviti esterase dan lipase daripada zymogram yang didedahkan oleh -naphthyl acetate sebagai substrat [41], yang membolehkan kami mengaitkannya. Jalur 75 kDa merujuk kepada subunit -conglycinin yang terdapat dalam tepung kacang soya seperti yang ditemui oleh Sales et al. [22] dan Cheng et al. [43] dalam penapaian tepung kacang soya.

【Untuk maklumat lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】