Pengasingan Dan Pemurnian Glikosida Phenylethanoid Daripada Cistanche Deserticola Dengan Kromatografi arus balas berkelajuan tinggi

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Li a,b, Rong Tsao b,*, Raymond Yang b, Chunming Liu a, J. Christopher Young b, Honghui Zhu b

Abstrak

Lima phenylethanoid glycosides (PhGs), echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside dan 20-acetylacteoside, telah diasingkan dan ditulenkan daripadaCistanche deserticolabuat pertama kalinya dengan kromatografi arus balas berkelajuan tinggi (HSCCC) menggunakan dua sistem dwifasa, satu terdiri daripada etil asetat–etanol-air (5:0.5:4.5, v/v/v) dan satu lagi daripada etil asetat–n-butanol–etanol-air ({{10}}}.5:0.5:0.1:1, v/v/v/v). Sebanyak 28.5 mg echinacoside, 18.4 mg cistanoside A, 14.6 mg acteoside, 30.1 mg isoacteoside dan 25.2 mg 20-acetylacteoside telah disucikan daripada 1412 mg ekstrak n-butanol, setiap satu daripada C. deserticola. pada ketulenan lebih 92.5 peratus seperti yang ditentukan oleh HPLC. Struktur telah dikenal pasti dengan masa pengekalan mereka, UV, LC-ESI-MS dalam mod ion negatif, dan disahkan oleh eksperimen NMR. Ciri corak pemecahan LC-ESI-MSn bagi lima sebatian dibincangkan, dan didapati sebagai alat yang sangat spesifik dan berguna untuk pengecaman struktur PhG daripada tumbuhan ubatan yang penting ini.

Kata kunci:Cistanche deserticola; Phenylethanoid; Echinacoside; Cistanoside A; Acteoside; Isoacteoside; 20-Acetylacteoside; HSCCC; LC–ESI-MS; NMR

1. Pengenalan

Cistanche deserticola YC Maadalah ubat herba Cina yang terkenal dan telah digunakan secara meluas dalam penyediaan tradisional yang serupa dengan bahan makanan berfungsi atau suplemen makanan hari ini (Wong, Li, Cheng, & Chen, 2006). Konstituen bioaktif utama dalam C. deserticola ialah phenylethanoid glycosides (PhGs), termasuk echinacoside, acteoside, isoacteoside, 20-acetylacteoside, dan cistanoside A (Kobayashi, Karasawa, & Miyase, 1984; Kobayashi et al., 1987). PhGs diedarkan secara meluas dalam kerajaan tumbuhan, dan telah dikaji secara meluas untuk pelbagai fungsi biologi mereka seperti hepatoprotektif (Xiong et al., 1998), anti-radang, aktiviti antinociceptive (Schapoval et al., 1998), dan aktiviti antioksidan ( Cheng, Wei, Guo, Ni, & Liu, 2005; He, Lau, Xu, Li, & But, 2000; Li, Wang, & Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu, & Jia, 1993; Wang, Jiang, Wu, & Wang, 2001; Xiong, Kadota, Tani, & Namba, 1996), meningkatkan fungsi seksual (Xie & Wu, 1993; Zong, He, Wu, & Chen, 1996), dan kesan sedatif (Lu, 1998). ).

Disebabkan oleh bioaktiviti yang ketara di atas, kuantiti besar sebatian tulen diperlukan segera sebagai piawai rujukan dan untuk pelbagai kajian in vitro dan in vivo yang berkaitan dengan penggunaan ubat-ubatan tradisional Cina. Oleh itu, kaedah yang berkesan untuk pengasingan, penulenan dan pencirian struktur PhGs menjadi perlu. Walau bagaimanapun, kerja sedemikian biasanya memerlukan penggunaan pelbagai langkah kromatografi untuk pembersihan dan pengasingan sampel (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten, & Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin, & Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara, & Li, 1990; Shoyama, Matsumoto, & Nishioka, 1987), yang biasanya menghasilkan kadar pemulihan yang rendah disebabkan oleh penjerapan PhG yang tidak dapat dipulihkan pada sokongan padu semasa pemisahan (Lei et al., 2001). Sebaliknya, kromatografi lawan arus berkelajuan tinggi (HSCCC) telah menjadi alternatif yang berkesan kepada teknik kromatografi konvensional untuk pengasingan beberapa PhG daripada ekstrak tumbuhan (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Lei et al. berjaya mengasingkan acteoside dan 20-asetilakteosida daripadasalsa cistanches(CA Mey.) G. Beck dengan menggunakan HSCCC (Lei et al., 2001). Penulis kertas ini sebelum ini telah melaporkan pemisahan acteoside dan isoacteoside daripada Plantago psyllium L. oleh HSCCC (Li et al., 2005). Walau bagaimanapun, tiada laporan telah diterbitkan mengenai pemisahan dan penulenan berbilang PhG daripada C. deserticola menggunakan HSCCC. Disebabkan kekurangan piawaian, kaedah LC-MS telah dibangunkan dan digunakan sebagai alat analisis yang berkuasa untuk pencirian pantas dan pengenalpastian beberapa PhG dalam ekstrak tumbuhan (Li et al., 2005; Wang et al., 2000).

Dalam kertas ini, kami melaporkan kaedah HSCCC yang dibangunkan untuk penyediaan echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside dan 20-acetylacteoside daripada C. deserticola. Pencirian dan analisis bagi lima PhG yang dipisahkan telah dicapai dengan penggunaan LC ditambah dengan spektrometri jisim ESI sebaris dan eksperimen NMR. Masa pengekalan, berat molekul, dan ion serpihan ciri lima PhG dibentangkan dan dibincangkan dalam kertas ini. Struktur lima PhG yang dikenal pasti dalam penyiasatan ini ditunjukkan dalam Rajah 1.

Bahan-bahan berkesan Cistanche deserticola

2. Eksperimen

2.1. Bahan kimia dan reagen

Acteoside dibeli daripada Sigma–Aldrich (Oak- Ville, ON), echinacoside dibeli daripada ChromaDex (Santa Ana, CA). Isoacteoside telah diasingkan daripada P. psyllium L. (Li et al., 2005). C. deserticola dibeli dari Kedai Ubat TongRenTang Beijing (China). Semua pelarut adalah gred HPLC dan dibeli daripada Caledon Laboratories Ltd. (Georgetown, ON).

2.2. Penyediaan sampel

C. deserticola (20 g) telah diekstrak lima kali pada suhu bilik selama 12 jam setiap satu dengan 100 mL etanol akueus 80 peratus. Setiap kali campuran pengekstrakan ditapis melalui kertas penapis Whatman No.1 (Whatman International Ltd., Maidstone, England). Turasan gabungan telah ditumpukan kepada 100 mL dalam vakuo pada <40 darjah.="" larutan="" akueus="" yang="" terhasil="" dinyahlemak="" dua="" kali,="" setiap="" satu="" dengan="" 100="" ml="" heksana,="" dan="" kemudian="" diekstrak="" berturut-turut="" selama="" lima="" kali,="" setiap="" satu="" dengan="" 100="" ml="" n-butanol.="" lapisan="" n-butanol="" telah="" digabungkan="" dan="" tertumpu="" kepada="" kekeringan="" dalam="" vakuo="" pada=""><40 darjah,="" yang="" menghasilkan="" 2.2="" g="" ekstrak="" n-butanol.="" ekstrak="" telah="" disimpan="" pada="" -20="" darjah="" sebelum="" pemisahan="">

2.3. Prosedur pemisahan HSCCC

HSCCC persediaan telah dijalankan dalam model CCC{{0}} kromatografi arus balas berkelajuan tinggi (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland USA). Radas ini mempunyai tiga gegelung persediaan, disambung secara bersiri (jumlah isipadu, 325 mL). Kelajuan revolusi radas boleh dikawal antara 0 dan 2000 rpm. Sistem HSCCC dilengkapi dengan pam HPLC (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, USA), pengesan UV Model 450 (Alltech, USA), perakam katil rata Model L 120 E (Linseis Inc., Princeton Jct, USA), pengumpul pecahan (Advantec MFS Inc., USA) dan injap suntikan sampel dengan 10-gelung sampel mL.

Campuran etil asetat–etanol-air (5:0.5:4.5, v/v/v) digoncang dengan kuat dalam corong pemisah dan biarkan berdiri dan diasingkan pada suhu bilik. Kedua-dua fasa digunakan dalam HSCCC selepas ia mencapai keseimbangan. Seluruh lajur bergelung pertama kali diisi dengan lapisan atas, yang berfungsi sebagai fasa pegun. Lapisan bawah (fasa mudah alih) kemudiannya dipam ke hujung kepala lajur pada kadar aliran 1.5 mL/min. Kelajuan putaran ditetapkan pada 1050 rpm. Satu sampel (kira-kira 230 mg setiap kali) dilarutkan dalam 8 ml campuran etil asetat–etanol-air (5:0.5:4.5, v/v/v) telah dimuatkan ke dalam injap suntikan selepas sistem mencapai hidrodinamik. keseimbangan. Sistem pelarut dwifasa ini dipilih berdasarkan pekali sekatan (K), iaitu 0.87, 1.11, dan 1.32 untuk acteoside, isoacteoside, dan 20 acetylacteoside, masing-masing. Nilai K ialah nisbah kepekatan dalam lapisan atas dan bawah sebatian yang sama seperti yang ditentukan oleh HPLC (Rajah 2). Efluen dari alur keluar lajur dipantau secara berterusan oleh pengesan UV pada 254 nm dan dikumpulkan ke dalam tabung uji dengan pengumpul pecahan ditetapkan pada 4 minit untuk setiap tiub.

2.4. syarat LC

pensampel auto statik dan pengesan tatasusunan fotodiod (DAD) digunakan untuk analisis PhG dalam ekstrak n-butanol C. deserticola dan pecahan yang dikumpul daripada pemisahan HSCCC. Pemisahan dilakukan dalam lajur Phenomenex ODS-C18 (250 × 4.6 mm, 5 lm) dengan lajur pengawal C18. Fasa bergerak binari terdiri daripada asetonitril (pelarut A) dan air yang mengandungi 2 peratus asid asetik (pelarut B). Semua pelarut telah ditapis melalui a

{{0}}.45 lm tapis sebelum digunakan. Kadar alir dikekalkan malar pada 1.0 mL/min untuk jumlah masa larian selama 25 minit. Sistem ini dijalankan dengan atur cara kecerunan: 0–20 min: 90 peratus B hingga 60 peratus B; 20–22 min: 60 peratus B hingga 0 peratus B; dan 22– 25 min, 0 peratus B hingga 90 peratus B. Isipadu suntikan sampel ialah 10 lL. Puncak minat dipantau pada 320 nm oleh pengesan DAD.

2.5. Eksperimen LC-ESI-MS

Eksperimen LC-MS telah dijalankan menggunakan spektrometer jisim perangkap ion Finnigan LCQ DECA (Thermo Finnigan, San Jose, CA, Amerika Syarikat) yang dilengkapi dengan sumber pengionan elektrospray (ESI). Sampel dianalisis dalam keadaan kromatografi yang sama. Model negatif digunakan untuk pengumpulan data. Gas sarung dan kadar aliran tambahan ditetapkan masing-masing pada 96 dan 7 (unit arbitrari). Voltan kapilari ditetapkan pada 29 V dan suhunya dikawal pada 350 darjah. Voltan kanta masuk telah ditetapkan pada 40 V dan amplitud RF berbilang kutub ditetapkan pada 540 V. Voltan jarum ESI dikawal pada 4.5 kV. Ofset kanta tiub ialah 16 V, ofset kanta berbilang kutub 1 ialah 8.20 V dan ofset kanta berbilang kutub 2 ialah 10.5 V. Voltan pengganda elektron ditetapkan pada 980 V untuk pengesanan ion.

2.6. NMR untuk Pengenalpastian

Spektrum NMR telah direkodkan pada spektrometer Bruker Avance-600 (Bruker BioSpin Ltd., Milton, Kanada). Hanya sebatian 2 dan 5 (tiada piawaian tersedia) tertakluk kepada eksperimen NMR. Sampel telah dibubarkan dalam CD3OD.

Bahan aktif cistanche: echinacoside dan acteoside

3. Keputusan dan perbincangan

Pemisahan HSCCC yang berjaya bergantung sebahagian besarnya pada sistem pelarut dua fasa yang sesuai yang menyediakan pekali sekatan (K) ideal sekitar 1 untuk sebatian yang dikehendaki. Sistem dwifasa sedemikian juga harus menghasilkan masa penyelesaian yang agak singkat (Chen, Games, & Jones, 2003; Foucault & Chevolot, 1998; Oka, Oka, & Ito, 1991). Dalam eksperimen kami, kami memilih empat siri sistem pelarut mengikut keterlarutan sebatian sasaran dalam C. deserticola. HPLC digunakan untuk mengukur kepekatan dalam setiap fasa, dari mana nilai K sebatian sasaran dikira. Dua sistem, etil asetat– n-butanol–etanol-air (4:0.6:0.6:5, v/v/v/v) dan etil asetat–air (1:1, v/v), telah digunakan sebelum ini dalam HSCCC untuk mengasingkan acteoside dan 20-acetylacteoside daripada

C. salsa, dan acteoside dan isoacteoside daripada P. Psyllium,

masing-masing (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Walaupun sistem pertama mempunyai masa mendap yang agak singkat, ia mempunyai prestasi yang lemah dalam mengasingkan PhGs C. deserticola, disebabkan oleh nilai K yang rendah untuk sebatian 1 dan 2, dan nilai K yang tinggi untuk sebatian 3–5. Nilai K adalah sangat rendah untuk sebatian 1–4 dalam sistem kedua, tetapi sangat tinggi untuk sebatian 5 (Jadual 1). Sistem yang diubah suai yang mengandungi etil asetat–etanol-air (5:0.5:4.5, v/v/v), memberikan nilai K ideal untuk sebatian 3–5 pada 0.87, 1.11, dan 1.32, masing-masing, dan menghasilkan pemisahan yang baik. daripada ketiga-tiga sebatian ini (Rajah 3A dan B). Sistem ini, bagaimanapun, dihasilkan

nilai K yang terlalu kecil untuk sebatian 1 dan 2, menyebabkan kedua-dua sebatian itu mencair bersama berhampiran hadapan pelarut (pecahan 1 dalam Rajah 3A). Pengubahsuaian selanjutnya kepada sistem (etil asetat–n-butanol–etanol-air (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/ v) menaikkan nilai K untuk kompaun 1 dan 2 kepada 0.52 dan 0.92, masing-masing, dan membawa kepada pengasingan lengkap (Rajah 3C). Rajah 3A menunjukkan pemisahan HSCCC bagi suatu sampel yang mengandungi 230 mg ekstrak n-butanol C. deserticola menggunakan etil asetat–etanol-air (5:0.5:4.5, v/v/v). Pecahan yang telah disahkan oleh HPLC untuk mengandungi hanya sebatian 3, 4, atau 5 digabungkan secara berasingan, dan sebatian yang mengandungi sebatian 3 dan 4 dikumpulkan, dikeringkan beku, dan tertakluk semula kepada HSCCC untuk pengasingan selanjutnya (Rajah 3B). Pengasingan HSCCC yang diterangkan di atas menghasilkan sejumlah 14.6 mg, 30.1 mg dan 25.2 mg sebatian 3–5 daripada 1412 mg ekstrak n-butanol. Rajah 3C menunjukkan pemisahan HSCCC bagi sampel yang mengandungi sebatian 1 dan 2 (pecahan 1 dalam pemisahan pertama) menggunakan etil asetat–n-butanol–etanol-air (0.5:0.5:0.1:1, v/v/ v/v). Sebanyak 28.5 dan 1 8.4 mg sebatian 1 dan 2 diperolehi. Ketulenan kromatografi bagi sebatian beku-kering 1-5 adalah melebihi 92.5 peratus, yang digunakan secara langsung untuk analisis LC-ESI-MS dan NMR.

Pengenalpastian tentatif bagi sebatian 1, 3, dan 4 dicapai dengan masa pengekalan kongruen dan data spektrum UV dengan echinacoside, acteoside dan isoacteoside tulen (Rajah 2). Sebatian 2 dan 5 tidak diketahui, walau bagaimanapun, spektrum UV bagi semua lima sebatian adalah sangat serupa, menunjukkan ciri struktur yang serupa.

Untuk menyiasat lebih lanjut struktur lima sebatian ini, eksperimen LC-ESI-MSn telah dicuba dan hasilnya ditunjukkan dalam Rajah 4 dan Jadual 2. Sebatian yang berkaitan dengan puncak (1-5) dalam Rajah 2 menunjukkan ion molekul terdeprotonasi yang sengit [MH]— pada m/z 785, 799, 623, 623, dan 665, masing-masing, dalam mod negatif. Ion dimerik [2M H]— juga diperhatikan untuk puncak 1–4 dalam Rajah 2. Ini mengesahkan berat molekul puncak 1–5 menjadi 786, 800, 624, 624, dan 666, masing-masing. Data LC-MSN (Jadual 2) memberikan maklumat struktur yang sangat berguna untuk lima PhG, seperti kehilangan neutral prosedur Eksperimen: kira-kira 1 mg setiap sampel telah ditimbang dalam tabung uji 10 mL di mana 1 mL setiap fasa daripada sistem pelarut dua fasa yang telah diseimbangkan telah ditambah. Tabung uji ditutup dan digoncang kuat selama 1 minit, dan dibiarkan berdiri sehingga ia terpisah sepenuhnya. Aliquot 100 lL setiap lapisan telah dikeluarkan dan disejat secara berasingan sehingga kering dalam vakuo pada<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">

LC–ESI-MS puncak 1 ditunjukkan dalam Rajah 4A. Ion molekul terdeprotonasi [MH]— pada m/z 785 dengan kelimpahan tinggi dan molekul terdeprotonasi dimerik.ion [2M H]— pada m/z 1571 diperhatikan dalam mod negatif, menunjukkan berat molekul 786, yang sama dengan echinacoside. Penyiasatan lanjut dalam eksperimen LC–MS2 bagi ion m/z 785 menghasilkan satu ion anak perempuan utama pada m/z 623 (Rajah 4B) yang dihasilkan terus daripada m/z 785 dengan kehilangan bahagian kafeil atau bahagian heksosa sebagai [M 162 H]—. Spektrum LC–MS3 m/z 623 mempamerkan dua ion utama pada m/z 477 dan 461, dan dua ion kecil pada m/z 315 dan 179 (Rajah 3C, Jadual 2). Perbezaan jisim antara m/z 623 dan ion serpihan m/z 477 dan 461 masing-masing ialah 146 dan 162, sepadan dengan kehilangan unit rhamnose dan bahagian glukosa atau bahagian caffeoyl [M 162 H]—. Ion m/z 623 juga kehilangan bahagian caffeoyl dan bahagian rhamnose untuk menghasilkan ion m/z 315. Ion pada m/z 179 terhasil daripada belahan bahagian caffeoyl, dengan cas negatif kekal pada bahagian caffeoyl. Eksperimen LC-ESI-MSN pada echinacoside tulen menunjukkan corak pemecahan yang sama. Puncak 1 oleh itu disahkan sebagai echinacoside.

Untuk puncak 2, LC–ESI-MS menunjukkan m/z 799 sebagai ion molekul terdeprotonasi [MH]— dan m/z 1599 sebagai ion dimeriknya, menunjukkan jisim molekul 800. Semasa eksperimen MS2, m/z 799 ion membentuk tiga anak perempuan pada m/z 637, 623, dan 475 (Jadual 1). Ion pada m/z 637 terhasil terus daripada ion induk m/z 799 sekali lagi disebabkan oleh kehilangan neutral caffeoyl [M—162—H]— atau bahagian glukosa [M—162—H]—. Ion pada m/z 623 terhasil daripada kehilangan radikal CH2. Ion pada m/z 475 telah terbentuk daripada kehilangan neutral kedua-dua bahagian caféoyl [M 162 H]— dan bahagian glukosa daripada ion induk. Eksperimen MS3 pada m/z 637 menghasilkan tiga ion pada m/z 619, 491, dan 475, sepadan dengan kehilangan satu air, unit rhamnose, dan bahagian glukosa, masing-masing. Ion anak m/z 623 menghasilkan m/z 461 dan 315 dalam kajian MS3, yang mengikuti laluan pemecahan yang sama seperti echinacoside seperti yang dibincangkan di atas. Data LC– ESI-MSN menyokong pengenalpastian tentatif untuk puncak 2 sebagai cistanoside A. Kedua-dua puncak menunjukkan ion [MH]— yang sama pada m/z 623 dan dimer pada m/z 1247 dalam mod negatif (Jadual 1), menunjukkan mereka mungkin isomer dengan berat molekul yang sama

624, sama seperti acteoside dan isoacteoside. Spektrum MS2 ion [MH]— juga menunjukkan satu ion anak perempuan yang sama bagi m/z 461, yang menunjukkan kehilangan bahagian caffeoyl daripada ion induk m/z 623 (Jadual 1). Spektrum MS3 yang serupa diperolehi untuk kedua-dua sebatian. Untuk puncak 3, spektrum MS3 ion pada m/z 461 membentuk tiga ion pada m/z 315, 161, dan 135. M/z 315 terbentuk selepas kehilangan rhamnose seperti yang dibincangkan sebelum ini. Ion m/z 161 terhasil daripada belahan bahagian caffeoyl, diikuti dengan kehilangan lagi satu air; cas kekal pada bahagian caffeoyl moiety. Ion pada m/z 135 [aglikon 18 H]— timbul daripada belahan ikatan glikosidik pada kedudukan C1 dengan kehilangan tambahan satu air, meninggalkan cas berada pada bahagian bahagian aglikon. Spektrum MS3 puncak 4 mengikuti laluan pemecahan yang sama seperti puncak 3 kecuali ion yang hilang pada m/z 135. Ion molekul dan corak pemecahan kedua-dua sebatian ini adalah konsisten dengan data literatur mengenai acteoside dan isoacteoside (Wang et al ., 2000), walaupun ion tambahan m/z 153 ditemui dan data Proton NMR cistanoside A dan 20-asetilakteosida telah ditetapkan sebagai [aglycone H]— oleh Wang et al. (Wang et al., 2000). Ion ini mungkin tidak stabil dan kehilangan air untuk memberikan m/z 135 dalam eksperimen kami. Berdasarkan data MS dan masa pengekalan kongruen bagi puncak 3 dan 4 dengan piawaian, ia dikenal pasti sebagai acteoside dan isoacteoside, masing-masing.

Data LC–ESI-MS puncak 5 ditunjukkan dalam Jadual 2. Ion molekul terdeprotonasi [MH]— (m/z 665) ialah satu-satunya ion yang ditemui dalam mod negatif, membayangkan jisim molekul 666. Tiga ion anak perempuan telah diperhatikan pada m/z 623, 503, dan 461 dalam eksperimen MS2 (Jadual 2). Ion anak perempuan pada m/z 623 dan 503 terbentuk terus daripada ion induk dengan kehilangan kumpulan COCH2 dan gugusan kafeil, masing-masing. Ion pada m/z 461 datang daripada kehilangan kedua-dua caffeoyl dan bahagian COCH2 [M 162 42 H]— daripada ion induk. Dalam eksperimen MS, m/z 623 menghasilkan m/z 461, dan m/z 503 menghasilkan tiga ion pada m/z 485, 461, dan 315. Spektrum MS3 bagi ion anak m/z 461 memberikan dua ion pada 443 dan 315. Dengan membandingkan corak pemecahan LC– MSN puncak 5 dengan sebatian lain yang dilaporkan dalam kajian ini dan dengan lain-lain yang dilaporkan (Li et al., 2005; Wang et al., 2000), kami menyimpulkan bahawa puncak 5 secara struktur sangat berkaitan. untuk acteoside dengan satu-satunya perbezaan ialah unit COCH3 pada kedudukan R3. Oleh itu identiti tentatif diberikan kepada puncak 5 sebagai 20-asetillakteosida (Rajah 1).

Struktur dua sebatian yang dikenal pasti secara tentatif, puncak 2 (sebagai cistanoside A) dan puncak 5 (sebagai 20-acetyl-acteoside) telah disahkan strukturnya oleh 1H NMR. Anjakan kimia dan pemalar gandingan semua proton dalam sebatian 2 dan 5, seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 3., dipadankan dengan data NMR yang dilaporkan untuk cistanoside A dan 20-asetilakteosida, masing-masing (Kobayashi et al., 1984, 1987) . Eksperimen NMR 2D (korelasi COSY, ROESY, dan CH jarak jauh) juga telah dijalankan dalam kajian ini dan mereka mengesahkan lagi pengenalpastian (data tidak ditunjukkan).

Acteoside dari Cistanche deserticola

4. Kesimpulan

Dalam kertas kerja ini, HSCCC telah berjaya digunakan untuk pengasingan dan penulenan echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside, dan 20-acetylacteoside daripada ekstrak n-butanol C. deserticola. Oleh itu, ia adalah cara yang terbukti untuk pemisahan separuh persediaan bioaktif. Sementara itu, struktur lima PhG dalam C. deserticola telah disiasat melalui LC–ESI-MSN; beberapa ciri ciri PhG ditemui, yang membolehkan kami menentukan kumpulan berfungsi dalam struktur. Oleh itu, kaedah LC-ESI-MSN adalah alat yang berkuasa untuk mengenal pasti feniletanoid dan glikosidanya dalam ekstrak C. deserticola, terutamanya apabila dibuktikan oleh data NMR.

Pengakuan

Penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada Jun Gu dari Pusat Resonans Magnet Nuklear, Universiti Guelph, Ontario, Kanada atas bantuannya dalam eksperimen NMR. Projek ini sebahagiannya disokong oleh pembiayaan daripada Wilayah Jilin, China (No. 20060904).

Rujukan

Chen, LJ, Games, DE, & Jones, J. (2003). Pengasingan dan pengenalpastian empat juzuk flavonoid daripada biji Oroxylum Indicum dengan kromatografi arus balas berkelajuan tinggi. Jurnal Kromatografi A, 988, 95–105.

Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., Ni, W., & Liu, CZ (2005). Kultur penggantungan sel cistanche deserticola: Glikosida phenylethanoid bio-sintesis dan aktiviti antioksidan. Biokimia Proses, 40, 3119– 3124.

Foucault, AP, & Chevolot, L. (1998). Kromatografi arus balas: instrumentasi, pemilihan pelarut, dan beberapa aplikasi terkini untuk penulenan produk semula jadi. Jurnal Kromatografi A, 808, 3–22.

Gross, G.-A., Lahloub, MF, Anklin, C., Schulten, H.-R., & Sticher, O. (1988). Teucrioside, glikosida fenilpropanoid daripada Teucrium Chamaedrys. Fitokimia, 27, 1459–1463.

He, ZD, Lau, KM, Xu, HX, Li, PC, & But, PPH (2000). Aktiviti antioksidan glikosida phenylethanoid daripada peluang Brandisia. Jurnal Etnofarmakologi, 71, 483–486.

Kobayashi, H., Karasawa, H., & Miyase, T. (1984). Kajian tentang juzuk Cistanchis Herba. III. Pengasingan dan struktur glikosida fenilpropanoid baharu, Cistanoside A dan B. Buletin Kimia & Farmaseutikal, 32, 3009–3014.

Kobayashi, H., Oguchi, H., Takizawa, N., Miyase, T., Ueno, A., Usmanghani, K., et al. (1987). Glikosida phenylethanoid baharu daripada Cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. FI. Buletin Kimia & Farmaseutikal, 35, 3309–3314.

Lei, L., Yang, FQ, Zhang, TY, Tu, PF, Wu, LJ, & Ito, Y. (2001). Pengasingan persediaan dan penulenan acteoside dan 2'-acetyl acteoside daripada Cistanches salsa (CA Mey) G. Beck dengan kromatografi arus balas. Jurnal Kromatografi A, 912, 181–185.

Li, L., Tsao, R., Liu, ZQ, Liu, SY, Yang, R., Young, JC, et al. (2005). Pengasingan dan penulenan acteoside dan isoacteoside daripada Plantago psyllium L. oleh kromatografi arus balas berkelajuan tinggi. Jurnal Kromatografi A, 1063, 161–169.

Li, LL, Wang, XW, & Wang, XF (1997). Peroksidasi antilipid dan tindakan antiradikal glikosida dalam herba Cistanches. China Journal of Chinese Materia Medica, 22, 364–367.

Li, J., Wang, PF, Zheng, RL, Liu, ZM, & Jia, ZJ (1993). Perlindungan glikosida fenilpropanoid daripada Pedicularis terhadap hemolisis oksidatif secara in vitro. Planta Medica, 59, 315–317.

Lu, MC (1998). Kajian tentang kesan sedatif Cistanche deserticola. Jurnal Etnofarmakologi, 59, 161–165.

Nishimura, H., Sasaki, H., Inagaki, N., Chin, M., & Mitsuhashi, H. (1991). Sembilan phenethyl alcohol glycosides daripada Stachys szeboldzz. Fitokimia, 30, 965–969.

Oka, F., Oka, H., & Ito, Y. (1991). Pencarian sistematik untuk sistem pelarut dua fasa yang sesuai untuk kromatografi arus balas berkelajuan tinggi. Jurnal Kromatografi, 538, 99–108.

Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M., & Li, X. (1990). Sebatian fenolik daripada Plantago Asiatica. Fitokimia, 29, 3627–3631.

Schapoval, EES, Winter de Vargas, MR, Chaves, CG, Bridi, R., Zuanazzi, JA, & Henriques, AT (1998). Aktiviti anti-radang dan antinociceptive ekstrak dan sebatian terpencil daripada Stachytarpheta cayennesis. Jurnal Etnofarmakologi, 60, 53–59.

Shoyama, Y., Matsumoto, M., & Nishioka, I. (1987). Glikosida fenolik daripada akar Rehmannia glutinosa Var yang berpenyakit. Purpurea. Phyto Chemistry, 26, 983–986.

Wang, XW, Jiang, XY, Wu, LY, & Wang, XF (2001). Kesan penghapusan glikosida Cistanche deserticola pada radikal bebas dan perlindungannya terhadap kerosakan DNA akibat OH secara in vitro. Jurnal Farmakologi Cina, 36, 29–31.