Kesan Perencatan Fraksi Elaeagnus Umbellata Pada Melanogenesis dalam Sel Melanoma B16-F10 yang Dirangsang -MSH

Abstrak:

Apabila kulit terdedah kepada sinaran UV, melanosit menghasilkan melanin. Pengeluaran melanin yang berlebihan membawa kepada pigmentasi kulit, yang menyebabkan pelbagai masalah kosmetik dan kesihatan. Oleh itu, pembangunan terapeutik yang selamat dan semulajadi yang menghalang pengeluaran melanin adalah perlu. Elaeagnus umbellata (EU) telah lama digunakan secara meluas sebagai tumbuhan ubatan rakyat kerana sifat farmakologi yang merangkumi sifat anti-ulser, antioksidan dan anti-radang.

Dalam kajian ini, kami menyiasat aktiviti antioksidan dan kesan perencatan melanogenesis pecahan EU dalam sel melanoma B16-F10. Pecahan EU menunjukkan peningkatan yang bergantung kepada dos dalam aktiviti antioksidan dalam aktiviti penghapusan radikal. Selain itu, kami menilai kesan pecahan EU terhadap aktiviti tyrosinase dan melanogenesis dalam sel melanoma B16-F10 yang disebabkan oleh hormon perangsang-melanosit. EU adalah bukan sitotoksik pada 12.5–50 µg/mL. Fraksi EU secara berkesan menghalang aktiviti tyrosinase dan melanogenesis, menindas fosforilasi CREB dan ERK yang terlibat dalam laluan melanogenesis, dan ekspresi terkawal turun protein berkaitan melanogenesis. Menariknya, kesan anti-melanogenesis adalah paling berkesan pada kepekatan 50 µg/mL EU, dan kesan pecahan adalah lebih baik daripada kesan ekstrak. Oleh itu, kajian kami mencadangkan bahawa EU mempunyai potensi sebagai rawatan yang selamat untuk pigmentasi berlebihan atau sebagai bahan semula jadi dalam kosmetik.

Kadar pertumbuhan kulit manusia dan sel-sel baru dalam badan kita menjadi perlahan, metabolisme kulit menjadi perlahan, sel-sel penuaan tidak dapat dimetabolismekan dalam masa dan lancar, dan melanin sukar untuk hilang. Ditambah dengan kehilangan secara beransur-ansur faktor pelembap semula jadi pada permukaan kulit, stratum korneum menebal dan terkumpul, melanin meningkat, dan bintik-bintik gelap yang kusam secara beransur-ansur muncul pada kulit. Tidak kira berapa banyak produk penjagaan kulit pemutih digunakan, ia sukar untuk diserap oleh kulit. Oleh itu, semasa penyelidikan kami, kami mendapati bahawa jumlah glikosida Cistanche deserticola, bahan berfungsi dalam Cistanche tubulosa, berkesan boleh membuang pelbagai radikal bebas oksigen aktif (O2·-, OH·, H2O2, 1O2), dan melindungi daripada kerosakan DNA yang disebabkan oleh Radikal bebas OH dan polisakarida Cistanche deserticola boleh melambatkan kemerosotan fisiologi organ dan transformasi morfologi sel. Bahan-bahan di atas semuanya boleh memainkan kesan anti-oksidatif dan anti-penuaan. Pada masa yang sama, Cistanche deserticola juga boleh menghalang aktiviti tyrosinase untuk mencapai kesan pemutihan.

Klik produk serbuk ekstrak cistanche tubulosa

Kata kunci:

Elaeagnus umbellata; pemutihan kulit; antioksidan; melanogenesis; -MSH.

1. Pengenalan

Warna kulit pada manusia bergantung pada jumlah melanosom yang ada secara genetik, dan sejauh mana melanosom ini tersebar dalam kulit dan juga dipengaruhi oleh tahap pendedahan cahaya matahari dan pencemaran alam sekitar [1]. Melanin ialah sebatian berat molekul tinggi yang terdapat dalam haiwan dan tumbuhan dan merupakan pigmen penting yang menentukan warna mata, kulit dan rambut manusia. Melanogenesis merujuk kepada proses penghasilan melanin, penyebab utama pigmentasi pada kulit manusia. Melanin boleh melindungi kulit daripada sinaran UV yang berbahaya, tetapi pengeluaran melanin yang berlebihan boleh menyebabkan masalah estetik, termasuk melasma dan bintik-bintik, serta masalah kesihatan, termasuk hiperpigmentasi selepas keradangan [2].

Melanin memainkan peranan penting dalam melindungi kulit daripada pelbagai rangsangan, seperti UV, spesies oksigen reaktif (ROS), dan -melanocyte stimulating hormone (-MSH) [3]. Apabila kulit terdedah kepada sinaran UV, ROS terhasil, dan sel-sel kulit menjana lebihan melanin. ROS yang dihasilkan ini memusnahkan DNA untai tunggal dan berganda serta menyerang molekul protein dan lipid [4]. Enzim melanin dan antioksidan, seperti peroksidase, glutathione, dan katalase, meneutralkan ROS yang dihasilkan untuk mengekalkan tahap tertentu [5,6]. Walau bagaimanapun, pengeluaran ROS berlebihan yang tidak terkawal membawa kepada pelbagai masalah, seperti kanser [7]. Melanosit terletak di lapisan basal epidermis dan dimodulasi oleh tyrosinase. Sel-sel ini menghasilkan melanin melalui melanogenesis, dan faktor seperti faktor transkripsi berkaitan mikroftalmia (MITF) dan protein berkaitan tyrosinase (TRP-1) terlibat dalam proses ini [8]. Tyrosinase terlibat dalam laluan L-tirosin menjadi 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA), yang kemudiannya ditukar kepada dopaquinone daripada mana melanin disintesis. Oleh itu, tyrosinase adalah faktor penting yang mengawal melanogenesis dalam sel kulit.

Baru-baru ini, untuk menyelesaikan masalah estetik yang disebabkan oleh pigmentasi dan gangguan pigmentasi yang disebabkan oleh melanogenesis yang berlebihan, banyak industri perubatan dan kosmetik telah memberi tumpuan kepada perencat aktiviti tyrosinase [9]. Pelbagai bahan kimia seperti arbutin, asid kojik, hidrokuinon, dan asid askorbik, yang merupakan perencat sintesis melanin, digunakan sebagai agen pemutih kulit [10]. Walau bagaimanapun, bahan-bahan ini tidak menembusi kulit dengan baik dan dalam tempoh penggunaan yang lama boleh memberi kesan sampingan seperti kerengsaan kulit, keradangan, kegatalan, dan pigmentasi [11]. Oleh itu, terdapat keperluan untuk membangunkan agen pemutih yang berkesan yang boleh merawat dan mencegah hiperpigmentasi kulit manusia dengan selamat tanpa kerengsaan.

Elaeagnus umbellata (EU) ialah tumbuhan yang diedarkan secara meluas di seluruh Asia dan telah lama digunakan sebagai tumbuhan ubatan rakyat kerana kesan farmakologinya yang berkaitan. Secara tradisinya, bunga dan benih EU telah digunakan untuk rawatan penyakit pernafasan, termasuk yang menjejaskan jantung dan paru-paru, manakala daun telah digunakan sebagai tonik dan untuk merawat penyakit usus [12,13]. Di samping itu, EU digunakan sebagai agen relaxant otot, analgesik, anti-ulser, anti-diabetes, dan antipiretik [14]. Bahan-bahan EU mempunyai kesan anti-kanser [15], antioksidan, dan anti-radang [16], dan ekstrak EU memberi kesan kepada pemutihan kulit dan peningkatan kedutan [17]. Walau bagaimanapun, kajian mengenai kesan pemutihan kulit oleh dahan dan daun dalam pecahan EU masih belum dijalankan. Oleh itu, tujuan kajian ini adalah untuk memerhati aktiviti antioksidan in vitro dan perencatan melanogenesis bagi pecahan EU terbitan cawangan dan daun pada sel melanoma murine B16-F10 penghasil melanin dan untuk mengesahkan potensi cawangan dan daun- diperolehi EU sebagai agen pemutih kulit kosmetik.

2. Bahan-bahan dan cara-cara

2.1. Bahan dan Reagen

2.2. Penyediaan Ekstrak dan Pecahan EU serta Penyediaan Sampel

Cawangan dan daun (1:1) EU telah disediakan oleh Institut Jeonbuk untuk Bioindustri Makanan (Jeonju, Jeonbuk, Korea). EU (50} g) dikisar menggunakan pengisar dan serbuk EU diekstrak dengan 70 peratus etanol selama 24 jam pada suhu bilik. Pelarut itu steril ditapis melalui penapis standard (Advantec MFS, Taipei, Taiwan) dan disejat di bawah tekanan yang dikurangkan menggunakan penyejat berputar (EYELA, N-1110, Tokyo, Jepun). Ekstrak telah diliofilkan menggunakan pengering beku (OPERON, FDU-8606, Gimpo, Korea) untuk mengeluarkan sisa etanol dan mendapatkan 2.4 g (hasil, 4.8 peratus ) serbuk ekstrak etanol (EUEE) 70 peratus EU. EUEE (2.4 g) digantung dalam air suling dan dipisahkan dengan pecahan etil asetat (EUEA, 0.19 g) atau butanol (EUBu, 0.91 g). Semua ekstrak dan pecahan disimpan pada suhu 4 ◦C sehingga digunakan.

2.3. Analisis Kromatografi Cecair Berprestasi Tinggi (HPLC).

Analisis kromatografi telah dijalankan menggunakan sistem Elite Lachrom HPLC-DAD yang dilengkapi dengan pengesan UV (Hitachi HighTechnologies Co., Tokyo, Jepun). Pengesan UV pada 26{16}} nm dan lajur YMC ODS-AM (5 mM, 4.6 × 25{19}} mM) analitik (Kyoto, Jepun) telah digunakan untuk kuantifikasi berdasarkan kaedah standard dalaman. Suhu lajur ialah 35 ◦C, dan kadar aliran fasa mudah alih ialah 1 mL/min. Eluen ialah kecerunan pelarut (A)=0.1 peratus asid asetik dalam air dan pelarut (B)=0.1 peratus asid asetik dalam asetonitril. Masa larian ialah 35 minit dan kecerunan adalah seperti berikut: (A)/(B)=88/12 (0 min) → (A)/(B)=78/22 (0– 18 min) → (A)/(B)=72/28 (18–28 min) → (A)/(B)=62/38 (28–35 min). Analisis HPLC ditunjukkan dalam Rajah 1.

2.4. Kultur sel

Murine melanoma B16-F10 cell line (CRL-6475) telah dibeli daripada American Type Culture Collection (ATCC, VA, USA). Sel telah dibiakkan dalam DMEM ditambah dengan 10 peratus FBS diaktifkan haba dan 1 peratus streptomycin (100 µg/mL)/penisilin (100 unit/mL). B16-Sel F10 telah diinkubasi dalam CO2 5 peratus yang dilembapkan pada suhu 37 ◦C.

2.5. Ujian Daya Tahan Sel

Sitotoksisiti sampel dinilai menggunakan ujian MTT. B16-Sel melanoma F10 (1 × 104 sel/telaga) dibiakkan dalam 96-plat perigi dan diinkubasi dengan pelbagai kepekatan ekstrak dan pecahan (12.5, 25, 50 dan 100 µg/mL) atau arbutin (100 µg/mL) selama 24 jam pada suhu 37 ◦C. Selepas pengeraman, 500 µg/mL larutan MTT telah ditambah ke dalam telaga, dan plat diinkubasi lagi selama 4 jam pada suhu 37 ◦C. Kemudian, media setiap telaga dikeluarkan, dan 200 µL dimetil sulfoksida (DMSO) ditambah untuk melarutkan kristal formazan. Penyerapan plat dikesan pada 570 nm pada pembaca plat mikro (Synergy HTX Multi-Mode Reader, BioTek, Winooski, VT, USA).

2.6. Aktiviti Pemusnahan Radikal DPPH

Aktiviti penghapusan radikal DPPH ekstrak dan pecahan EU telah disahkan dengan mengukur kuasa pengurangan radikal DPPH dalam setiap sampel. Pelbagai kepekatan (12.5, 25, dan 50 µg/mL) ekstrak dan pecahan EU atau 20 µg/mL asid askorbik (kawalan positif) pada 500 µL telah ditambah kepada 2 mL larutan DPPH 0.15 mM. Larutan dipusingkan selama 10 saat untuk memastikan pencampuran menyeluruh dan diinkubasi selama 30 minit pada suhu bilik dalam gelap. Penyerapan campuran kemudiannya diukur pada 517 nm menggunakan pembaca plat mikro (Biotek, Winooski, VT, USA).

2.7. ABTS Radical Scavenging Assay

Larutan penghapus radikal ABTS disediakan dengan mencampurkan 7.4 mM larutan ABTS dan 2.6 mM kalium persulfat pada nisbah 1:1 (pH 7.4) dan bertindak balas larutan pada suhu bilik selama 24 jam. Penyelesaian ABTS kemudiannya dilaraskan kepada penyerapan 0.70 ± 0.03 pada 732 nm. Setiap sampel 10 µL telah bertindak balas dengan 190 µL larutan ABTS selama 10 minit pada suhu bilik, dan penyerapan diukur pada 732 nm menggunakan pembaca plat mikro (Biotek, Winooski, VT, USA).

2.8. Aktiviti Perencatan Tirosinase Cendawan

Untuk menganalisis aktiviti perencatan tyrosinase, yang memainkan peranan penting dalam melanogenesis, tirosinase cendawan, dan substrat L-DOPA telah digunakan. Pertama, 150 µL penimbal fosfat 0.1 M (pH 6.8), 20 µL larutan 5 mM L-DOPA dan 20 µL pelbagai kepekatan ekstrak dan pecahan EU telah ditambah secara berjujukan, dan 100 µL 250 U/mL cendawan tyrosinase telah ditambah untuk memulakan tindak balas. Campuran diinkubasi pada 37 ◦C selama 10 minit dan penyerapan diukur pada 475 nm menggunakan pembaca mikroplat (Biotek, Winooski, VT, USA). Aktiviti perencatan tyrosinase dikira menggunakan formula berikut:

2.9. Penentuan Aktiviti Tirosinase Selular

B16-Sel melanoma F10 telah disemai pada ketumpatan 1 × 105 sel/telaga dalam plat enam telaga yang mengandungi 2 mL DMEM. Enam kumpulan telah ditubuhkan: kumpulan kawalan, tidak dirawat; -Kumpulan MSH, 100 nM -MSH sahaja; kumpulan arbutin, -MSH dan arbutin (10 mM); Kumpulan EUEE, -MSH dan ekstrak EUEE (12.5, 25, dan 50 µg/mL); Kumpulan EUEA, -MSH dan pecahan EUEA (12.5, 25, dan 50 µg/mL); dan kumpulan EUBu, -MSH dan pecahan EUBu (12.5, 25, dan 50 µg/mL). Plat enam perigi diinkubasi semalaman pada suhu 37 ◦C dalam inkubator CO2 5 peratus. Kemudian, sel telah terdedah kepada -MSH (100 nM) selama 48 jam dan dirawat dengan pelbagai kepekatan EUEE, EUEA, dan EUBu atau arbutin (10 mM) selama 24 jam. Sel-sel telah dibasuh dengan garam penampan fosfat (PBS) tiga kali dan dilisekan. Lisat telah disentrifugasi pada 16,000x g selama 20 minit.

Seterusnya, kandungan protein setiap lysate ditentukan menggunakan Kit Assay Protein BCA (Thermo Scientific, Vantaa, Finland). Tahap protein kemudiannya dilaraskan kepada 20 µg dalam semua sampel. Lysates (100 µL) yang mengandungi 2.5 mM L-DOPA dalam penimbal fosfat 0.1 M dipindahkan ke telaga dalam 96-plat perigi dan diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37 ◦C. Penyerapan lisat diukur pada 475 nm menggunakan pembaca plat mikro (Biotek, Winooski, VT, Amerika Syarikat). Aktiviti tyrosinase antara sel dikira menggunakan formula berikut:

OD mewakili penyerapan sampel dan ODb mewakili penyerapan kawalan. Arbutin digunakan sebagai standard.

2.10. Pengukuran Kandungan Melanin

Untuk menentukan jumlah melanin dalam sel B16-F10, ini telah disemai dalam 24-plat perigi pada ketumpatan 2 × 104 sel/telaga dan diinkubasi selama 24 jam dalam DMEM dengan 10 peratus FBS. B16-Sel F10 telah diprarawat dengan pelbagai kepekatan EUEE, EUEA dan EUBu (12.5, 25, dan 50 µg/mL) dan arbutin kawalan positif (10 mM) selama 1 jam, kemudian bertindak balas dengan 100 nM - MSH selama 72 jam tambahan. Selepas itu, sel dituai selepas dibasuh dengan PBS. Pelet yang diperoleh melalui sentrifugasi (12,000}× g, 10 min) telah dilisekan dalam 1N NaOH yang mengandungi 10 peratus DMSO pada 90 ◦C selama 30 minit. Kandungan melanin setiap telaga diukur pada 405 nm menggunakan pembaca plat mikro (Biotek, Winooski, VT, Amerika Syarikat). Untuk menentukan jumlah melanin, jumlah amaun yang dihasilkan semasa eksperimen dianggap sebagai piawai (100 peratus ), dan kadar perencatan setiap ekstrak dan kumpulan rawatan pecahan ditentukan mengikut perkadaran piawaian ini.

2.11. Analisis Western Blot

Sel-sel melanoma murine B{{{0}}}F10 (1 × 106 sel/telaga) dibiakkan dalam hidangan 6 cm dan diinkubasi semalaman pada suhu 37 ◦C, dan sel telah dirawat terlebih dahulu dengan -MSH (10 µM) selama 24 h. Kemudian, sel telah dirawat dengan pelbagai kepekatan (12.5, 25, dan 50 µg/mL) ekstrak dan pecahan EU atau 100 µg/mL arbutin selama 24 jam. Sel dituai dengan PBS dan kemudian disentrifugasi pada 12,000 × g selama 15 minit pada 4 ◦C. Selepas mengeluarkan supernatan, sel-sel telah dilisiskan menggunakan penimbal lisis protein Pro-prep ais sejuk dengan penambahan 1 peratus perencat protease dan fosfatase dan disimpan di atas ais selama 40 minit. Protein yang difraksinasi dikira menggunakan ujian protein Bradford. Jumlah protein yang sama (25 µg) telah dimuatkan dan diasingkan sebanyak 8 peratus atau 10 peratus elektroforesis gel natrium dodesil sulfat-poliakrilamida dan dipindahkan ke membran polivinilidena fluorida (PVDF). Membran PVDF telah disekat dengan 5 peratus susu skim dalam Tris-buffered saline (TBS) dengan 0.1 peratus Tween 20 (TBS-T) penimbal selama 1 jam pada suhu bilik, dan diinkubasi dengan antibodi primer khusus terhadap p-CREB, CREB, p -ERK, ERK, MITF, TRP-1, TRP-2, tyrosinase dan -actin semalaman pada suhu 4 ◦C.

Selepas itu, membran dibilas dengan penimbal TBS-T tiga kali selama 10 minit dan bertindak balas selama 2 jam dengan antibodi sekunder terkonjugasi peroksidase lobak pada suhu bilik. Membran dibilas dengan penimbal TBS-T lima kali dan protein dikesan dengan larutan chemiluminescence yang dipertingkatkan. Imej band diperoleh menggunakan sistem pengimejan Davinch-In vivo dan barat (Davinch-K, Seoul, Korea).

2.12. Analisis statistik

Semua nilai dibentangkan sebagai min ± SEM (ralat standard min) bagi sekurang-kurangnya tiga percubaan bebas dan perisian GraphPad Prism 5.0 (GraphPad, San Diego, CA, USA) telah digunakan untuk analisis statistik. Analisis varians sehala diikuti oleh analisis post hoc Bonferroni digunakan untuk membandingkan perbezaan statistik antara kumpulan. Nilai-p kurang daripada 0.05 (p < 0.05) dianggap signifikan secara statistik.

3. Keputusan

3.1. Analisis HPLC EU

Hasil akhir ( peratus ) EUEE, EUEA dan EUBu ialah 4.8 peratus , 0.18 peratus dan 1.82 peratus, masing-masing berdasarkan berat segar. HPLC digunakan untuk menganalisis kandungan luteolin, sebatian penunjuk ekstrak dan pecahan EU. Berbanding dengan puncak komponen standard, puncak luteolin dalam ekstrak dan pecahan EU telah disahkan. Kepekatan luteolin dalam EUEE, EUEA dan EUBu ialah 499.03, 1948.05 dan 994.00 mg/mL, masing-masing (Rajah 1).

3.2. Kesan EU terhadap Aktiviti Antioksidan dan Aktiviti Perencatan Tirosinase

Aktiviti antioksidan pelbagai kepekatan EUEE, EUEA, dan EUBu diukur menggunakan ujian DPPH/ABTS. Aktiviti pemusnahan radikal DPPH dan ABTS EUEE, EUEA, dan EUBu meningkat dalam cara yang bergantung kepada dos (Rajah 2A, B), dengan asid askorbik sebagai kawalan positif. Aktiviti penghapusan radikal DPPH dan ABTS pada 50 ug/mL ekstrak dan pecahan EU kedua-duanya lebih tinggi, menunjukkan keputusan yang serupa dengan kawalan positif, asid askorbik. Untuk mengukur kesan perencatan enzim pengantaraan melanogenesis dalam ekstrak dan pecahan EU, ujian perencatan tyrosinase cendawan telah dilakukan (Rajah 2C) dengan L-DOPA sebagai substrat di bawah keadaan bebas sel. Keputusan menunjukkan bahawa aktiviti tyrosinase telah dihalang oleh ekstrak EU dan pecahan dalam cara yang bergantung kepada dos. Khususnya, aktiviti perencatan tyrosinase sebanyak 50 ug/mL EUekstrak dan pecahan menunjukkan keputusan yang serupa dengan arbutin,

Oleh itu, kesan perencat tyrosinase EU adalah berkaitan dengan pengoksidaan L-DOPA kepada DOPA kuinon dalam melanogenesis Secara keseluruhannya, pecahan EU mempunyai kesan perencatan antioksidan dan tyrosinase yang lebih besar daripada ekstrak. Di samping itu, pecahan EU, terutamanya EUBu, mula menunjukkan kesan yang sama kepada kumpulan kawalan positif pada dos 25 ug/mL.

Rajah 2. Aktiviti antioksidan dan aktiviti perencatan tyrosinase cendawan EU. Aktiviti penghapusan radikal DPPH (A) dan ABTS (B) ekstrak dan pecahan EU. Asid askorbik (20 µg/mL) digunakan sebagai kawalan positif. Kesan perencatan tyrosinase menggunakan L-DOPA ekstrak dan pecahan EU (C). Arbutin (10 mM) telah digunakan sebagai kawalan positif. Semua graf menunjukkan peratusan kawalan dan data dinyatakan sebagai min ± SEM (n=3). Kepentingan statistik ditetapkan pada * p < 0.05, ** p < 0.01, dan *** p < 0.001 jika dibandingkan dengan kumpulan asid askorbik atau arbutin.

3.3. Kesan EU pada Kebolehdayaan Sel B16-F10

Untuk menilai sitotoksisiti sel EU, sel melanoma B16-F10 telah dirawat dengan pelbagai kepekatan (12.5, 25, 50, dan 100 ug/mL) ekstrak dan pecahan EU selama 24 jam, dan daya maju sel dianalisis oleh ujian MTT. Keputusan ditunjukkan sebagai peratusan daya maju sel berbanding kawalan. Ekstrak dan pecahan EU tidak sitotoksik dalam julat kepekatan yang diuji 12.5 50 ug/mL hingga B16-sel F10. Walau bagaimanapun, sitotoksisiti telah disahkan dalam sel B16-F10 pada kepekatan 100 ug/mL pecahan EU (EUEA danEUBu) (Rajah 3). Oleh itu, eksperimen seterusnya telah dijalankan menggunakan kepekatan 12.5, 25, dan 50 ug/mL ekstrak dan pecahan EU.

3.4. Kesan EU terhadap Sintesis Melanin

Untuk menentukan kesan anti-melanogenik EU, kesan perencatan ekstrak dan pecahan EU pada sintesis melanin telah diperiksa dalam sel B16-F10. Sel B16-F10 dirawat dengan ekstrak dan pecahan EU pada 12.5, 25 dan 50 µg/mL atau dengan arbutin pada 10 mM selama 1 jam dan kemudian dirangsang dengan -MSH (100 mM) selama 72 jam . Kandungan melanin meningkat sebanyak 305.44 peratus apabila dirangsang dengan -MSH berbanding dengan kawalan (Rajah 4A). Walau bagaimanapun, kumpulan yang dirawat EU pada kepekatan 50 µg/mL telah mengurangkan kandungan melanin dengan ketara berbanding kumpulan yang dirangsang -MSH sahaja, dan keputusannya adalah serupa dengan kumpulan kawalan. Di samping itu, berbanding dengan kawalan arbutin-positif, pecahan EU pada kepekatan 50 µg/mL menunjukkan tahap pengeluaran melanin yang lebih rendah. Selaras dengan keputusan ini, apabila kepekatan ekstrak dan pecahan EU meningkat, kadar perencatan sintesis melanin dalam sel B16-F10 meningkat (Rajah 4B).

Khususnya, kadar perencatan sintesis melanin dalam pecahan EU pada kepekatan 50 µg/mL adalah jauh lebih tinggi daripada arbutin. Oleh itu, pecahan EU mempunyai kesan perencatan bergantung dos yang ketara pada sintesis melanin dalam sel melanoma B16-F10.

3.5. Kesan EU terhadap Sintesis Melanin dan Aktiviti Tirosinase Selular

Kami mengesahkan kesan ekstrak dan pecahan EU pada aktiviti tyrosinase intraselular yang terlibat dalam mekanisme melanogenesis dalam sel melanoma B16-F10. Semua kumpulan, kecuali kawalan, telah dirangsang dengan a-MSH (100 nM) selama 48 jam dan kemudian dirawat dengan pelbagai kepekatan ekstrak dan pecahan EU (12.5, 25 dan 50 ug/mL) atau arbutin ( 10 mM) selama 24 jam. Akibatnya, ekstrak dan pecahan EU dengan ketara menghalang aktiviti tyrosinase yang disebabkan oleh MSH dalam sel B16-F10 dengan cara yang bergantung kepada dos (Rajah 4C). Aktiviti tyrosinase intraselular meningkat sebanyak 251.00 peratus apabila dirangsang dengan a-MSH berbanding dengan kawalan. Walau bagaimanapun, kumpulan yang dirawat EU pada kepekatan 50 ug/mL telah menurunkan aktiviti tyrosinase dengan ketara berbanding kumpulan yang dirangsang a-MSHonly.

Oleh itu, aktiviti tyrosinase telah dihalang dalam cara yang bergantung kepada dos oleh rawatan EU dalam sel B16-F10, dan kesannya sangat kuat pada kontra. pemusatan 50 ug/mL. Perencatan aktiviti tyrosinase oleh EUEE pada kepekatan 50 ug/mL adalah lebih rendah daripada arbutin (85.13 peratus ), manakala perencatan aktiviti tyrosinase pecahan EU (EUEA dan EUBu) adalah lebih tinggi daripada arbutin (121.99 dan 128.11 peratus). , masing-masing). Selaras dengan keputusan ini, apabila kepekatan ekstrak dan pecahan EU meningkat, kadar perencatan aktiviti tyrosinase intraselular dalam sel B16-F10 meningkat (Rajah 4D).

Rajah 4. Sintesis melanin dan aktiviti tyrosinase selular EU. Kandungan melanin ekstrak dan pecahan EU dalam sel melanoma B16-F10 (A). Kadar perencatan sintesis melanin ekstrak dan pecahan EU dalam sel melanoma B16-F10 (B). Aktiviti tyrosinase intraselular ekstrak EU dan pecahan dalam sel melanoma B16-F10 (C). Kadar perencatan aktiviti tyrosinase intraselular ekstrak dan pecahan EU dalam sel melanoma B16-F10 (D). Keputusan (A, C) dibentangkan sebagai peratusan berdasarkan kumpulan -MSH. Keputusan (B, D) dibentangkan sebagai peratusan berdasarkan kumpulan kawalan. Data dinyatakan sebagai min ± SEM (n=3). Kepentingan statistik ditetapkan pada *** p < 0.001 jika dibandingkan dengan sel B16-F10 yang dirangsang -MSH, dan # p < 0.05, ## p < 0.01, dan ### p < 0.001 berbanding dengan kumpulan arbutin.

3.6. Kesan EU terhadap Ekspresi CREB dan ERK Berkaitan Melanogenesis

Melanogenesis melindungi kulit manusia daripada pelbagai rangsangan luar, dan pelbagai mekanisme terlibat dalam proses ini. -MSH, hormon yang terlibat dalam peringkat pertama melanogenesis, merangsang melanosit untuk memfosforilasi CREB dan ERK, mendorong sintesis protein isyarat turun yang dikaitkan dengan melanogenesis [18]. Dalam kajian ini, kami menyiasat protein terkawal melanogenesis, termasuk CREB dan ERK, untuk menentukan mekanisme perencatan melanogenesis EU pada sintesis melanin yang disebabkan oleh -MSH dalam sel melanoma B16-F10. Hasilnya, kami mengesahkan bahawa fosforilasi CREB dan ERK meningkat dengan ketara apabila sel B16-F10 dirangsang dengan -MSH. Walau bagaimanapun, apabila sel dirawat dengan ekstrak dan pecahan EU, fosforilasi yang disebabkan oleh -MSH telah ditindas dalam cara yang bergantung kepada dos. Khususnya, dapat dilihat bahawa ekstrak EU dan pecahan kepekatan 50 µg/mL adalah yang paling berkesan di antara pelbagai kepekatan rawatan (Rajah 5A–D).

3.7. Kesan EU pada MITF, TRP-1, TRP-2 dan Ungkapan Protein Tyrosinase Berkaitan Melanogenesis

Untuk menyiasat sama ada ekstrak dan pecahan EU mempengaruhi ekspresi protein berkaitan melanogenesis yang disebabkan oleh -MSH, western blotting telah dilakukan untuk menilai ekspresi MITF, TRP-1, TRP-2 dan protein tyrosinase. Tahap semua protein berkaitan melanogenesis telah meningkat dengan ketara oleh rangsangan -MSH, tetapi ekstrak EU dan pecahan berkesan menekan ekspresi MITF, TRP-1, TRP-2 dan protein tyrosinase dalam -MSH-stimulated. B16-Sel F10 (Rajah 6). Selaras dengan keputusan sebelumnya, terutamanya dengan kebanyakan ekstrak dan pecahan EU pada 50 µg/mL, ekspresi protein ini lebih terhalang daripada yang didapati selepas rawatan dengan arbutin kawalan positif. Di samping itu, rawatan dengan pecahan EU menyebabkan kesan yang lebih besar pada kepekatan yang sama berbanding dengan ekstrak EU.

Rajah 6. Kesan perencatan EU pada ekspresi protein MITF, TRP-1, TRP-2 dan tyrosinase berkaitan melanogenesis. Imej jalur pemadaman barat yang mewakili MITF, TRP-1, TRP-2 dan tyrosinase EUEE (A), EUEA (B) dan EUBu (C). Menggunakan program GelQuantNET, keamatan relatif jalur blotting barat ditunjukkan seperti graf bar berikut; MITF/ -aktin, TRP-1/ -aktin, TRP-2/ -aktin dan tirosinase/ -aktin. -aktin digunakan sebagai kawalan dalaman bagi western blotting. Data dinyatakan sebagai min ± SEM (n=3). Kepentingan statistik ditetapkan pada * p < 0.05, **p < 0.01 dan *** p < 0.001 jika dibandingkan dengan B yang dirangsang -MSH{ {22}}Sel F10.

4. Perbincangan

Melanosit terletak di lapisan dasar kulit, dan tahap sintesis melanin dalam melanosit menentukan warna kulit manusia [19]. Melanin ialah pigmen kulit yang melindungi kulit dengan mengurangkan jumlah ROS yang dihasilkan oleh sinaran ultraungu yang berbahaya. Apabila kulit terdedah kepada sinaran UV, a-MSH, yang merangsang melanosit, diaktifkan, dan melanosit menghasilkan melanin (20). Walau bagaimanapun, pengeluaran melanin yang berlebihan boleh menyebabkan pigmentasi pada kulit, menyebabkan masalah estetik.

Pengikatan a-MSH kepada reseptor melanocyte melanocyte-specific melanocortin-1 receptor (MC1R) mengaktifkan isyarat protein adenilate cyclase dan meningkatkan tahap intrasel cAMP 121]. Apabila tahap cAMP dalam melanosit meningkat, laluan isyarat CREB dan ERK yang menggalakkan pengeluaran protein yang terlibat dalam melanogenesis diaktifkan. 18,22]. Laluan isyarat CREB dan ERK yang diaktifkan ini mengawal selia ekspresi MITF dan seterusnya menggalakkan ekspresi TRP-1, TRP-2 dan tyrosinase (23MITF ialah faktor transkripsi untuk pengawalan tyrosinase dan memainkan peranan utama dalam mengawal selia sintesis melanin, termasuk mengawal selia percambahan, pembezaan dan kemandirian melanosit (24). Protein ini bukan sahaja mengawal melanogenesis dengan mengawal subprotein. termasuk TRP-1, TRP-2 dan tyrosinase, tetapi juga terlibat dalam mengawal perkembangan kitaran sel (25). Diambil bersama, pengikatan a-MSH-MC1R yang disebabkan oleh rangsangan luar, seperti sinaran UV, terutamanya mengaktifkan laluan isyarat CREB dan ERK dalam melanosit, dengan itu meningkatkan ekspresi MITF, TRP -1, TRP-2, dan protein tyrosinase untuk mendorong pengeluaran melanin. Oleh itu, perencatan proses ini boleh mengakibatkan perencatan sintesis melanin dalam melanosit.

Pada masa ini, pelbagai agen pemutih kulit termasuk hidrokuinon dan hidrokortison yang digunakan kebanyakannya adalah bahan kimia berbahaya, dan penggunaan jangka panjang boleh menyebabkan kesan sampingan, termasuk kerengsaan kulit, dan kegatalan [1,26-28]. Oleh itu, adalah perlu untuk memberi tumpuan kepada pembangunan agen pemutihan kulit semulajadi yang selamat dan berkesan dengan kesan sampingan yang minimum seperti EU [29].

Dalam kajian ini, kami menyiasat cara pecahan EU menghalang proses sintesis melanin dan mengurangkan pengeluaran melanin, menghasilkan kesan pemutihan kulit dalam sel melanoma B16-F10.

Oleh kerana tekanan oksidatif yang disebabkan oleh sinaran UV mendorong pemendapan pigmen melanin, aktiviti penghapusan radikal dan perencatan aktiviti ROS adalah berkesan dalam menekan melanogenesis, dan produk semula jadi dengan aktiviti antioksidan sedemikian boleh mempunyai kesan pemutihan yang sangat baik [30,31]. Oleh itu, kami mula-mula menyiasat aktiviti antioksidan ekstrak EU dan pecahan dalam sel melanoma B16/F10 menggunakan ujian DPPH dan ABTS, yang merupakan kaedah biasa dan mudah untuk menganalisis aktiviti antioksidan tumbuhan secara in vitro. DPPH ialah radikal bebas yang stabil dan digunakan untuk menganalisis aktiviti penghapusan radikal sebatian hidrofobik menggunakan agen pengurangan, seperti asid askorbik dan tokoferol. Ujian ABTS boleh mengukur aktiviti penghapusan radikal untuk sebatian hidrofobik dan hidrofilik, antioksidan pemecah rantai, dan antioksidan penderma hidrogen [24]. Kami mengesahkan aktiviti penghapusan radikal DPPH dan ABTS yang tinggi bagi ekstrak dan pecahan EU. Khususnya, kesannya adalah paling kuat pada kepekatan 50 µg/mL, dan pecahan EU mempunyai aktiviti antioksidan yang unggul berbanding dengan ekstrak.

Tirosinase adalah enzim utama yang terlibat dalam melanogenesis, dan banyak agen pemutih kulit terutamanya perencat tyrosinase. Oleh itu, kami mengkaji kesan pecahan EU pada aktiviti tyrosinase, yang menggalakkan melanogenesis. Kami mengesahkan kesan perencatan L-DOPA pada aktiviti tyrosinase selular untuk menentukan sama ada ex-trak dan pecahan EU secara langsung menghalang aktiviti tyrosinase. Akibatnya, ekstrak dan pecahan EU mengalami peningkatan dalam kesan perencatan tyrosinase dalam cara yang bergantung kepada dos. Di samping itu, selaras dengan keputusan di atas, EU adalah paling berkesan pada kepekatan 50 µg/mL, dan pecahan EU mempunyai kesan yang lebih besar daripada ekstrak. Khususnya, kepekatan EUBu (50 µg/mL) mempunyai lebih kesan daripada arbutin, kawalan positif.

Seterusnya, kami menyiasat kesan pemutihan kulit ekstrak dan pecahan EU pada melanogenesis dalam sel melanoma B16-F10 yang disebabkan oleh -MSH. Kami mula-mula menggunakan ujian MTT untuk mewujudkan julat kepekatan di mana ekstrak dan pecahan EU bukan sitotoksik kepada sel B16-F10. Keputusan kami mengesahkan bahawa tiada sitotoksisiti dalam julat kepekatan 12.5 hingga 50 μg/mL.

Selepas merangsang sel B16-F10 dengan -MSH untuk mendorong sintesis melanin, kesan pemutihan kulit ekstrak EU dan pecahan pada kandungan melanin dan aktiviti tyrosinase intraselular dikenal pasti. Corak ekstrak EU dan pecahan pada kandungan melanin dan aktiviti tyrosinase intraselular menunjukkan keputusan yang sama. Rawatan dengan semua ekstrak dan pecahan EU menunjukkan bahawa kandungan melanin dan aktiviti tyrosinase intraselular ditindas bergantung kepada dos. Khususnya, pada kepekatan 50 µg/mL pecahan EU, lebih daripada 50 peratus kehilangan kandungan melanin dan aktiviti tyrosinase intraselular diperhatikan berbanding dengan kumpulan yang dirangsang -MSH sahaja (Rajah 4A, C).

Laluan isyarat CREB dan ERK adalah laluan isyarat utama yang diaktifkan oleh rangsangan -MSH dalam melanogenesis. Oleh itu, CREB dan ERK, yang terlibat dalam pelbagai mekanisme, memainkan peranan penting dalam proses sintesis melanin. Rangsangan -MSH dalam sel melanoma B16-F10 meningkatkan ekspresi MITF dan keluarga gen tyrosinase berkaitan melanogenesis (TRP-1, TRP-2 dan tyrosinase) melalui pengaktifan CREB dan ERK. Dalam kajian ini, kami menyediakan bukti bahawa ekstrak dan pecahan EU menghalang sintesis melanin serta laluan isyarat huluan yang terlibat, CREB dan ERK.

Apabila tahap TRP-1 dan TRP-2 dinaikkan oleh ekspresi terkawal MITF, ekspresi tirosinase digalakkan dan enzim berkaitan melanogenesis menghasilkan melanin [18,32]. Ekspresi protein pengantara melanogenesis diperhatikan menggunakan western blotting untuk menentukan kesan anti-melanogenik ekstrak EU dan pecahan dalam sel melanoma B16-F10. Keputusan kami mengesahkan bahawa ekspresi protein MITF, TRP-1, TRP-2 dan tyrosinase meningkat dengan ketara dalam kumpulan yang dirangsang -MSH.

Walau bagaimanapun, rawatan dengan ekstrak EU dan pecahan terkawal rendah bagi protein berkaitan melanogenesis ini dalam cara yang bergantung kepada dos. Khususnya, penurunan ketara dalam ekspresi diperhatikan pada kepekatan 50 µg/mL pecahan EU. Keputusan kami menunjukkan bahawa 50 µg/mL pecahan EU menghalang ekspresi MITF, faktor transkripsi penting, dengan ketara menghalang ekspresi tyrosinase, dan dengan itu menghalang pengeluaran melanin.

Berdasarkan keputusan ini, kami mendapati bahawa 50 µg/mL pecahan EU menghalang pengeluaran pengeluaran melanin yang dirangsang -MSH dalam sel melanoma B16-F10 dengan menurunkan kawal selia isyarat yang berkaitan dengan melanogenesis berdasarkan kesan antioksidan yang sangat baik. Oleh itu, keputusan kami menunjukkan bahawa pecahan EU mungkin calon berpotensi untuk rawatan pemutihan yang berkesan mengawal melanogenesis.5. Kesimpulan

Dalam kajian ini, kami menilai kesan antioksidan dan anti-melanogenik pada -MSHinduced melanogenesis dalam sel melanoma B16-F10 untuk mengesahkan fungsi pecahan EU sebagai agen pemutihan kulit. Kesimpulannya, kami mendapati bahawa pecahan EU mempunyai kesan antioksidan yang kuat dan menghalang protein berkaitan melanogenesis, seperti TRP-1, TRP-2, dan tyrosinase, dengan mengawal MITF dan oleh itu merupakan perencat semula jadi yang berharga bagi melanogenesis.

Terutamanya, kepekatan (50 µg/mL) ekstrak dan pecahan EU diperlukan untuk menghalang sintesis melanin dalam sel B16F10 yang dirangsang -MSH. Di samping itu, kami mengesahkan bahawa pecahan EU mempunyai kesan antioksidan dan perencatan yang unggul terhadap pengeluaran melanin. Akibatnya, EU boleh berguna untuk agen terapeutik berasaskan semula jadi untuk merawat penyakit kulit dan sebagai agen pemutihan kulit dalam industri kosmetik.

Sumbangan Pengarang:

Pengkonsepan, J.-HL, dan D.-KK; Kurasi data, BL; Analisis formal, J.-HL; Pemerolehan pembiayaan, Y.-ML; Penyiasatan, J.-HL, dan Y.-DJ; Metodologi, BL, H.-WS, dan B.-JS; Pentadbiran projek, Y.-ML, dan D.-KK; Perisian, D.-KK; Penyeliaan, Y.-ML, dan D.-KK; Visualisasi, J.-HL; Penulisan—draf asal, J.-HL; Penulisan—semakan & penyuntingan, J.-HL, dan Y.-DJ Semua pengarang telah membaca dan bersetuju menerima versi manuskrip yang diterbitkan.

Pembiayaan:

Penyelidikan ini disokong oleh Kementerian Perdagangan, Industri dan Tenaga (MOTIE), Korea Institute for Advancement of Technology (KIAT) melalui Program Galakan bagi Industri Wilayah Kerjasama Ekonomi (P0004749).

Konflik Kepentingan:

Penulis mengisytiharkan bahawa mereka tidak mempunyai kepentingan bersaing.

Ketersediaan Sampel:

Sampel sebatian tidak tersedia daripada pengarang.

Singkatan

-MSH -hormon perangsang melanosit

Protein pengikat unsur tindak balas kem CREB

DOPA 3,4-dihydroxyphenylalanine

EU Elaeagnus umbellata

EUEE EU 70 peratus ekstrak etanol

pecahan etil asetat EUEA EU

pecahan butanol EUBu EU

Reseptor melanocortin-1 MC1R khusus melanosit

Faktor transkripsi yang berkaitan dengan MITF Microphthalmia

Spesies oksigen reaktif ROS

Protein berkaitan TRP Tyrosinase

Rujukan

1. Desmedt, B.; Courselle, P.; De Beer, JO; Rogers, V.; Grosber, M.; Deconinck, E.; De Paepe, K. Gambaran keseluruhan ejen pemutih kulit dengan pandangan tentang pasaran kosmetik haram di Eropah. J. Eur. Acad. Dermatol. Venereol. 2016, 30, 943–950. [CrossRef] [PubMed]

2. Costan, GE; Pendengaran, VJ Pigmentasi kulit manusia: Melanosit memodulasi warna kulit sebagai tindak balas kepada tekanan. Faseb J. 2007, 21, 976–994. [CrossRef]

3. Lin, YS; Wu, tandas; Lin, SY; Hou, WC Glycine hydroxamate menghalang aktiviti tyrosinase dan kandungan melanin melalui merendahkan laluan isyarat cAMP/PKA. Asid Amino 2015, 47, 617–625. [CrossRef]

4. Fernandez-Garcia, E. Perlindungan kulit terhadap cahaya UV oleh antioksidan pemakanan. Makanan. Fungsi. 2014, 5, 1994–2003. [CrossRef]

5. Kowalska, J.; Banach, K.; Rok, J.; Beberok, A.; Rzepka, Z.; Wrze´sniok, D. Asas Molekul dan Biokimia FluoroquinolonesInduced Phototoxicity—Kajian Sistem Antioksidan dalam Melanosit Manusia Terdedah kepada Sinaran UV-A. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 9714. [CrossRef] [PubMed]

6. MatÉs, JM; Pérez-Gómez, C.; Castro, IND Enzim antioksidan dan penyakit manusia. Clin. Biokim. 1999, 32, 595–603. [CrossRef]

7. Bickers, DR; Athar, M. Tekanan Oksidatif dalam Patogenesis Penyakit Kulit. J. Menyiasat. Dermatol. 2006, 126, 2565–2575. [CrossRef]

8. Kim, YJ; Uyama, H. Tyrosinase inhibitors daripada sumber semula jadi dan sintetik: Struktur, mekanisme perencatan dan perspektif untuk masa depan. sel. Mol. Life Sci. 2005, 62, 1707–1723. [CrossRef]

9. Pillaiyar, T.; Manickam, M.; Namasivayam, V. Agen pemutih kulit: Perspektif kimia perubatan perencat tyrosinase. J. Enzim Inhib. Med. Kimia. 2017, 32, 403–425. [CrossRef]

10. Smit, N.; Vilanova, J.; Pavel, S. Memburu agen pemutih kulit semulajadi. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, 5326–5349. [CrossRef]

11. Draelos, ZD Persediaan pencerahan kulit dan kontroversi hidrokuinon. Dermatol. Di sana. 2007, 20, 308–313. [CrossRef]

12. Anna, MI; Chiara, G.; Marinella, DL; Deborah, P.; Fabiano, C.; Nunziatina, DT; Claudia, M.; Maria, LT; Alessandra, B. Aktiviti antioksidan sebatian yang diasingkan daripada Elaeagnus umbellata menggalakkan kesejahteraan fibroblast gingiva manusia. J. Nat. Prod. 2020, 83, 626–637.

13. Sabir, SM; Dilnawaz, S.; Imtiaz, A.; Hussain, M.; Kaleem, MT Aktiviti antibakteria Elaeagnus umbellata (Thunb.) tumbuhan ubatan dari Pakistan. Saudi. Med. J. 2007, 28, 259–263.

14. Nazir, N.; Zahoor, M.; Nisar, M.; Khan, I.; Karim, N.; Abdel-Halim, H.; Ali, A. Analisis fitokimia dan potensi antidiabetik Elaeagnus umbellata (Thunb.) dalam tikus diabetes yang disebabkan oleh streptozotocin: Pendekatan farmakologi dan pengiraan. Pelengkap BMC. Altern. Med. 2018, 18, 332. [CrossRef]

15. Wang, SY; Bowman, L.; Ding, M. Variasi dalam Kapasiti Penghapusan Radikal Bebas dan Aktiviti Antiproliferatif Antara Genotip Berbeza Zaitun Musim Luruh (Elaeagnus umbellate). Planta. Med. 2007, 73, 468–477. [CrossRef] [PubMed]

16. Nazir, N.; Zahoor, M.; Nisar, M.; Karim, N.; Latif, A.; Ahmad, S.; Uddin, Z. Penilaian kesan neuroprotective dan anamnestic Elaeagnus umbellate Thunb. Mengenai kemerosotan ingatan yang disebabkan oleh skopolamin pada tikus. Pelengkap BMC. Altern. Med. 2020, 20, 143.

17. Park, SH; Jhee, KH; Yang, SA Kesan perlindungan ekstrak etanol daun Elaeagnus umbellata pada pengeluaran melanin yang disebabkan oleh MSH dalam Sel B16-F0 dan kerosakan akibat UVB dalam Sel CCD-986sk. J. Life Sci. 2019, 29, 555–563.

18. Qian, W.; Liu, W.; Zhu, D.; Cao, Y.; Tang, A.; Gong, G.; Su, H. Sebatian pemutihan kulit semulajadi untuk rawatan melanogenesis (Ulasan). Exp. Di sana. Med. 2020, 20, 173–185. [CrossRef]

19. Gillbro, JM; Olsson, MJ Melanogenesis dan mekanisme agen pencerah kulit–pendekatan sedia ada dan baharu. Int. J. Kosmet. Sci. 2011, 33, 210–221. [CrossRef]

20. Saba, E.; Kim, SH; Lee, YY; Park, CK; Oh, JW; Kim, TH; Kim, HK; Roh, SS; Rhee, MH Ekstrak Ginseng Merah Korea memperbaiki melanogenesis pada manusia dan mendorong kesan antifotopenuaan pada tikus tidak berbulu sinaran ultraviolet. J. Ginseng. Res. 2020, 44, 496–505. [CrossRef] [PubMed]

21. Bertolotto, C.; Abbe, P.; Hemesath, TJ; Bille, K.; Fisher, DE; Ortonne, JP; Ballotti, R. Produk gen Microphthalmia sebagai transduser isyarat dalam pembezaan melanosit yang disebabkan oleh cAMP. J. Sel. biol. 1998, 142, 827–835. [CrossRef]

22. Lee, HJ; Lee, WJ; Chang, SE; Lee, GY Hesperidin, antioksidan yang popular menghalang melanogenesis melalui degradasi MITF yang dimediasi erk1/2. Int. J. Mol. Sci. 2015, 16, 18384–18395. [CrossRef]

23. Harga, ER; Horstmann, MA; Wells, AG; Weilbaecher, KN; Takemoto, CM; Landis, MW; Fisher, DE alpha-Melanocytestimulating hormone signaling mengawal ekspresi mikroftalmia, kekurangan gen dalam sindrom Waardenburg. J. Biol. Kimia. 1998, 273, 33042–33047. [CrossRef]

24. Vance, KW; Goding, CR Rangkaian transkripsi yang mengawal perkembangan melanosit dan melanoma. Pigmen. sel. Res. 2004, 17, 318–325. [CrossRef]

25. Bondurand, N.; Pingault, V.; Goerich, DE; Lemort, N.; Sock, E.; Le Caignec, C.; Wegner, M.; Goossens, M. Interaksi antara SOX10, PAX3 dan MITF, tiga gen diubah dalam sindrom Waardenburg. Hum. Mol. Genet. 2000, 9, 1907–1917. [CrossRef]

26. McGregor, D. Hydroquinone: Penilaian Risiko Manusia daripada Sifat Karsinogenik dan Mutagennya. Crit. Rev. Toxicol. 2007, 37, 887–914. [CrossRef]

27. Kolbe, L.; Kligman, AM; Schreiner, V.; Stoudemayer, T. Corticosteroid-induced atrophy, dan kemerosotan halangan yang diukur dengan kaedah bukan invasif dalam kulit manusia. kulit. Res. Technol. 2001, 7, 73–77. [CrossRef] [PubMed]

28. Huang, HC; Chang, SJ; Wu, CY; Ke, HJ; Chang, TM [6]-Shogaol menghalang melanogenesis yang disebabkan oleh MSH melalui pecutan ERK dan PI3K/Akt-mediated MITF degradasi. Berbiomed. Res. Int. 2014, 2014, 842569. [CrossRef]

29. Ozen, T.; Yenigun, S.; Altun, M.; Demirtas, I. Konstituen Fitokimia, ChEs dan Perencatan Urease, Sifat Antiproliferatif dan Antioksidan Elaeagnus umbellata Thunb. Sikat. Kimia. tinggi. Throughput. Skrin. 2017, 20, 559–578. [CrossRef]

30. Floegel, A.; Kim, DO; Chung, SJ; Koo, SI; Chun, OK Perbandingan ujian ABTS/DPPH untuk mengukur kapasiti antioksidan dalam makanan AS kaya antioksidan yang popular. J. Kompos Makanan. dubur. 2011, 24, 1043–1048. [CrossRef]

31. Hseu, YC; Chen, XZ; Gowrisankar, YV; Yen, HR; Chuang, JY; Yang, HL Kesan Pemutihan Kulit Ectoine melalui Penindasan Melanogenesis yang Dirangsang -MSH dan Pengaktifan Laluan Nrf2 Antioksidan dalam Keratinosit yang Disinari UVA. Antioksidan 2020, 9, 63. [CrossRef] [PubMed]

32. Jang, EJ; Shin, Y.; Park, HJ; Kim, D.; Jung, C.; Hong, JY; Kim, S.; Lee, SK Aktiviti anti-melanogenik phytosphingosine melalui modulasi laluan isyarat faktor transkripsi yang berkaitan dengan microphthalmia. J. Dermatol. Sci. 2017, 87, 19–28. [CrossRef] [PubMed]

Ji-Hyun Lee 1,†, Bori Lee 2,†, Yong-Deok Jeon 3 , Hyun-Woo Song 2 , Young-Mi Lee 2 , Bong-Joon Song 4 dan Dae-Ki Kim 1,*

1 Department of Immunology and Institute of Medical Science, Jeonbuk National University Medical School, 20, Geonji-ro, Deokjin-gu, Jeonju-si 54907, Jeollabuk-do, Korea; jihyunsh1211@naver.com

2 Jabatan Farmasi Oriental, Kolej Farmasi dan Institut Penyelidikan Ubat-ubatan Wonkwang-Oriental, Universiti Wonkwang, Iksan 54538, Jeonbuk, Korea; leebori1004@naver.com (BL); cristblack@naver.com (H.-WS); ymlee@wku.ac.kr (Y.-ML)

3 Jabatan Farmasi Korea, Universiti Woosuk, 443 Samnye-ro, Samnye-up, Wanju-Gun 55338, Jeollabuk-do, Korea; ydjeon1211jh@woosuk.ac.kr

4 Department of Food Science and Biotechnology, Wonkwang University, Iksan 54538, Jeonbuk, Korea; twinf1@hanmail.net

Surat-menyurat: daekim@jbnu.ac.kr; Tel.: tambah 82-63-2703080

Pengarang-pengarang ini memberi sumbangan yang sama kepada karya ini.

For more information:1950477648nn@gmail.com