Sel Stem Mesenchymal Amniotik Manusia Mengurangkan AGVHD Selepas Allo‑HSCT Dengan Mengawal Interaksi Antara Mikrobiota Usus Dan Imuniti Usus

Abstrak

Penyakit graft-versus-host akut (aGVHD) selepas pemindahan sel stem hematopoietik alogenik menimbulkan salah satu cabaran yang paling menjengkelkan. Disbiosis mikrobiota usus boleh diteruskan dengan aGVHD dan sel stem mesenchymal (MSC) mempunyai potensi terapeutik yang menjanjikan untuk aGVHD. Walau bagaimanapun, sama ada hAMSC menjejaskan mikrobiota usus semasa mitigasi aGVHD masih tidak diketahui. Sehubungan itu, kami berusaha untuk menentukan kesan dan mekanisme asas MSC yang berasal dari membran amniotik manusia (hAMSCs) yang mengawal mikrobiota usus dan imuniti usus dalam aGVHD. Dengan mewujudkan model tetikus aGVHD yang dimanusiakan dan rawatan hAMSCs, kami mendapati bahawa hAMSCs meningkatkan gejala aGVHD dengan ketara, membalikkan ketidakseimbangan imun subset sel T dan sitokin, dan memulihkan halangan usus. Selain itu, kepelbagaian dan komposisi mikrobiota usus telah diperbaiki apabila rawatan dengan hAMSCs. Analisis korelasi Spearman menunjukkan bahawa terdapat korelasi antara mikrobiota usus dan protein simpang ketat, sel imun serta sitokin. Penyelidikan kami mencadangkan bahawa hAMSCs mengurangkan aGVHD dengan mempromosikan normalisasi mikrobiota usus dan mengawal selia interaksi antara mikrobiota usus dan penghalang usus, imuniti.

manfaat cistanche untuk lelaki-menguatkan sistem imun

Kata kunci

Penyakit graft-versus-host akut · Sel stem mesenchymal amniotic · Mikrobiota usus · Penghalang usus · Imuniti usus

pengenalan

Kelebihan utama pemindahan sel stem hematopoietik alogenik (allo-HSCT) ialah tindak balas anti-tumor yang kuat akibat kesan rasuah-berbanding-leukemia (GVL) yang dicetuskan oleh pengiktirafan peptida yang timbul daripada perbezaan polimorfisme genom antara pesakit dan penderma. Walau bagaimanapun, penyakit graft-versus-host akut (aGVHD) berkisar pada perkembangan kerosakan tisu penerima akibat serangan sel T penderma allo-reaktif dan mewakili komplikasi utama yang mengancam nyawa dalam alloHSCT [1, 2]. Gangguan mikrob usus telah dilaporkan menyebabkan tindak balas keradangan dan dikaitkan dengan penyakit yang berkaitan dengan keradangan [3, 4]. Banyak kajian telah menunjukkan bahawa gangguan dalam mikrobiota usus adalah faktor penting yang mencetuskan aGVHD selepas allo-HSCT, dan menjadi sasaran baru untuk rawatan [5, 6]. Khususnya, dysbiosis mikrobiota usus dalam aGVHD biasanya dicirikan oleh kehilangan kepelbagaian bakteria usus dan pertumbuhan patogen oportunistik [6]. Dalam GVHD gastrousus, halangan mukosa yang terjejas memulakan pengaktifan sel pembentang antigen perumah dan sel T penderma yang memuncak dalam pembezaan sel T di sepanjang paradigma jenis-1 dan jenis-17 patogenik dengan mengorbankan T- kawal selia tolerogenik. corak sel [7]. Terutamanya berdasarkan penjujukan RNA ribosom 16S (16S rRNA) menunjukkan bahawa pelbagai spesies mikrobiota usus telah dikaitkan dengan GVHD, dan sebagai contoh, clostridia penghasil butirat dikaitkan dengan penyelenggaraan fungsi penghalang epitelium dan pengecilan GVHD akut [8 ]. Sel stem mesenchymal (MSCs) telah mendapat perhatian yang luas dalam dekad yang lalu disebabkan oleh pembaharuan diri dan potensi pembezaan multilineage, serta sifat imunomodulator [9]. MSC dianggap membolehkan tisu yang rosak daripada persekitaran mikro radang dan regeneratif yang seimbang dengan kehadiran keradangan yang kuat dan telah digunakan secara meluas untuk merawat gangguan berasaskan imun, di mana aplikasi klinikal yang paling berjaya terlibat dalam rawatan GVHD [10]. Sel stem mesenchymal amniotic manusia (hAMSCs) ialah sel stem perinatal yang mempunyai keupayaan pembezaan seperti sel stem embrio dan sifat imunomodulator seperti sel stem dewasa. Berkongsi fenotip yang serupa dengan MSC biasa, hAMSC telah menjadi sumber sel stem yang menjanjikan kerana kemudahan, tidak invasif, dan keselamatan pemerolehan tisu, hasil sel yang banyak, dan pertikaian etika dan moral yang sangat rendah berbanding dengan sel stem dari sumber lain. AMSC manusia mempunyai kelebihan imunogenisitas rendah dan tiada tumorigenisiti, menjadikannya sumber sel yang ideal untuk terapi sel [11, 12]. Eksperimen in vitro telah mengesahkan bahawa hAMSC menunjukkan kapasiti proliferatif yang lebih tinggi dan keupayaan pertumbuhan jangka panjang yang lebih besar daripada MSC yang berasal dari sumsum tulang [13, 14]. Banyak kajian telah menunjukkan bahawa hAMSC mempunyai potensi untuk memperbaiki banyak penyakit radang, termasuk penyakit radang usus, osteoarthritis, dan penyakit autoimun [11]. Kajian terbaru kami telah menunjukkan bahawa hAMSCs memperbaiki aGVHD dengan mengawal keseimbangan T effector dan sel Treg [15]. Walau bagaimanapun, kesan dan mekanisme hAMSC pada gangguan mikrob usus dalam GVHD tidak diketahui. Di sini, kami berhasrat untuk menyiasat potensi kesan hAMSC pada aGVHD serta mikroekosistem usus. Ia akan menjadi kajian pertama untuk mendedahkan mikrobiota usus dan kaitannya dengan imuniti usus berikutan rawatan hAMSCs aGVHD.

Bahan dan Kaedah

Pengasingan, Budaya, dan Pengenalpastian hAMSC

hAMSC telah diekstrak seperti yang diterangkan sebelum ini [15]. Sel laluan ketiga (P3) dituai daripada pengenalpastian fenotip melalui pewarnaan dengan antibodi terhadap CD34 (581, BD Pharmingen, Amerika Syarikat), CD45 (HI30, BD Pharmingen, Amerika Syarikat), HLA-DR (G46-6, BD Pharmingen , Amerika Syarikat), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, Amerika Syarikat), CD90 (5E10, BD Pharmingen, Amerika Syarikat), CD73 (AD2, BD Pharmingen, Amerika Syarikat) dan CD105 (SN6, biosains, Amerika Syarikat), dan kemudian dianalisis dengan sitometer aliran ( BD FACS Canto II). Sel-sel telah diperiksa untuk pembezaan multilineage mereka menggunakan medium induksi tertentu (BGscience, China), dan masing-masing diwarnai dengan Oil Red-O dan Alizarin Red untuk adipogenesis dan pembezaan osteogenik. hAMSC dalam petikan 3 hingga 6 digunakan untuk eksperimen.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

Koleksi PBMCs Manusia

Sampel plasma diperoleh daripada sukarelawan yang sihat dengan kebenaran bertulis secara bertulis. Sel mononuklear darah periferal manusia (PBMC) telah diasingkan daripada darah periferi oleh sentrifugasi ketumpatan Ficoll-Hypaque (Tianjin Haoyang, China), dibasuh dengan PBS, digantung dalam penimbal lisis darah merah (Solarbio, China) pada 4 darjah selama 15 minit. Basuh sekali lagi dan kemudian gantung dalam PBS untuk suntikan urat ekor ke dalam tikus NPG.

tikus

Berusia 8–10 minggu dan 25–30 g tikus NPG jantan dan betina telah dibeli daripada Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd. dan dibesarkan di bawah keadaan SPF pada kitaran terang-gelap 12 jam dengan suhu dan kelembapan malar. Semua prosedur haiwan telah diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Institusi Universiti Perubatan Selatan (No. L2019132) selaras dengan Garis Panduan Majlis Penyelidikan Kesihatan dan Perubatan China mengenai Eksperimen Haiwan.

Model dan Rawatan Haiwan GVHD Akut

Model tetikus aGVHD telah ditubuhkan seperti yang diterangkan sebelum ini [15]. Untuk rawatan, 5 × 105 hAMSC setiap tetikus (di sini kumpulan hAMSC) dan PBS (di sini kumpulan aGVHD) disuntik melalui urat ekor ke dalam setiap tetikus pada hari ketiga selepas pemindahan. Dalam semua model tetikus, tikus diperiksa setiap dua hari untuk morbiditi dan perubahan berat. Setiap tetikus dijaringkan untuk ciri-ciri patologi termasuk penurunan berat badan, postur bongkok, bulu kusut, lesi kulit, mobiliti berkurangan, dan cirit-birit dan kemudian digredkan mengikut sistem pemarkahan klinikal aGVHD yang diadaptasi daripada yang asalnya diterangkan oleh Cooke [16]. Dalam sesetengah kes, tikus dalam kumpulan aGVHD mengalami aGVHD yang teruk, dan tikus dalam kumpulan hAMSCs pada hari ketiga selepas rawatan telah dikorbankan untuk menuai darah periferi dan organ sasaran termasuk hati, limpa, paru-paru dan usus. Najis tikus ini dikumpul sebelum dikorbankan.

hAMSC berlabel GFP dan Pengesanan in vivo

hAMSC berlabel GFP telah ditubuhkan dan dikenal pasti seperti yang diterangkan sebelum ini [15]. Secara ringkas, kami mengalihkan gen protein pendarfluor hijau (GFP) ke dalam hAMSC dengan lentivirus sebagai vektor. 5 × 105 hAMSC berlabel GFP yang digantung dalam 500 μL PBS telah disuntik ke dalam tikus aGVHD melalui urat ekor. Selepas 24 jam dan 72 jam, tikus dimatikan untuk menuai usus dan kemudian menghasilkan bahagian beku. Pewarnaan balas DAPI digunakan untuk membezakan sel penerima.

Penilaian Histopatologi

Organ sasaran aGVHD dikumpul pada masa nekropsi dan kemudian diproses kepada blok tertanam parafin untuk menghasilkan bahagian setebal 5-μm untuk pewarnaan hematoksilin dan eosin (H&E). Skor histologi dinilai berdasarkan pemusnahan struktur tisu dan penyusupan limfosit [17]. Untuk imunohistokimia, bahagian telah dinyahparafin, dihidrat semula, dan dirawat dengan 3% H2O2 dalam metanol selama 20 minit untuk menyahaktifkan aktiviti peroksidase endogen. Kemudian bahagian tertakluk kepada pengambilan antigen dan dirawat dengan albumin serum selama 1 jam. Selepas itu, bahagian tersebut diinkubasi dengan antibodi CD45 anti-manusia arnab (EP322Y, Abcam, England) atau antibodi ZO-1 ((EPR19945-296, Abcam, England) selama 1 jam pada 37 darjah. antibodi dikesan dengan antibodi sekunder konjugasi HRP (Genentech, USA) dan divisualisasikan dengan DAB. Kawasan positif dianalisis oleh Image J.

sistem imun yang meningkatkan tumbuhan cistanche

Penjujukan 16S rRNA Mikrobiota Najis

DNA genomik tahi telah diekstrak daripada 0.1 g sampel tahi beku menggunakan Kit DNA najis EZNA® (Omega BioTek, Norcross, GA, AS) mengikut protokol pengeluar. Menggunakan DNA genomik sebagai templat, primer khusus (338F: 5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′ dan 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′) dengan kod bar dan PremixTaq (TaKaRa, China) telah digunakan untuk menguatkan kawasan hipervariable V3-V4 gen 16S rRNA bakteria. Selepas amplifikasi dan penulenan, keseluruhan genom sampel telah disusun pada platform penjujukan pemprosesan tinggi Illumina Hiseq atau Miseq oleh Magigene Technology Co., Ltd. (Guangzhou, China) untuk mendapatkan data mentah dalam format FASTQ. Analisis data jujukan dilakukan terutamanya menggunakan platform Magichand.

Analisis Sitometri Aliran

Organ sasaran aGVHD dan darah periferal tikus diperoleh dan disediakan ke dalam penggantungan sel tunggal. Sel telah diwarnai dengan antibodi monoklonal terhadap CD3 (UCHT1, Biolegend, Amerika Syarikat), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, Amerika Syarikat), CD8 (RPA-T8, Biolegend, Amerika Syarikat), CD25 (BC96, Biolegend, Amerika Syarikat) atau dipadankan dengan isotype mengawal IgG (eBioscience, USA) selama 30 minit pada suhu bilik dalam gelap. Kemudian sel diproses dengan Lysing Buffer (BD Pharm Lyse™) pada 4 darjah dalam gelap selama 15 minit. Pewarnaan Foxp3 Intraselular (236A/E7, Invitrogen, Amerika Syarikat) dilakukan mengikut pengesyoran pengeluar (Kit Penyelesaian Penetapan/Permeabilisasi; eBiosains). Kemudian analisis sitometri aliran polikromatik dilakukan pada Sitometer Aliran.

Kuantiti Sitokin

Tahap sitokin dalam serum dan supernatan tisu tikus ditentukan menggunakan kit sitokin Th1/Th2/Th17 Manusia Cytometric Bead Array (CBA) (BD Pharmingen, Amerika Syarikat) mengikut arahan pengeluar. Secara ringkas, 50 μL setiap sampel supernatan diinkubasi dengan 50 μL manik tangkapan sitokin Th1/Th2/Th17 manusia bercampur dan 50 μL reagen pengesanan Th1/Th2/Th17 PE manusia pada suhu bilik dalam gelap, kemudian digantung untuk analisis sitometri aliran 3 jam kemudian.

PCR Masa Nyata Kuantitatif

Jumlah RNA diekstrak daripada tisu kolon tetikus selepas pengasingan menggunakan Reagen Trizol (TaKaRa, China). Jumlah RNA digunakan sebagai templat untuk membalikkan transkripsi cDNA. -aktin digunakan sebagai rujukan dalaman. Ekspresi mRNA diukur dengan qPCR dengan menggunakan primer berikut: ZO-1-F, 5'-ACCACCAACCCGAGAC-3' dan ZO- 1-R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3 '; Occludin-F, 5'-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3' dan OccludinR, 5'-CCGGATAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -actin-F, 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3' dan -actin-R, 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3'. Kaedah 2-ct telah digunakan untuk mengukur tahap ekspresi RNA.

Ujian Imunosorben Berkaitan Enzim (ELISA)

Tahap D-LA dan DAO dalam plasma diukur menggunakan kit ELISA (Jingmei, China) mengikut arahan pengilang. Secara ringkas, supernatan plasma yang dikumpul telah dimasukkan ke dalam 96-plat bersalut antibodi yang khusus, masing-masing. Penyerapan direkodkan pada 450 nm menggunakan pembaca plat mikro (Multiskan MK3, Thermo Fisher Scientific).

Analisis statistik

Data dibentangkan sebagai min ± SD. Ujian-t sampel bebas telah dilakukan dan digambarkan menggunakan GraphPad Prism8.0. Analisis data penjujukan rRNA 16S dilakukan menggunakan platform Magichand (http://cloud.magigenecom/). Analisis korelasi antara mikrobiota usus dan imuniti telah dijalankan oleh pakej R (v3.6.3) untuk memaparkan matriks korelasi. nilai P<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.

Keputusan

Pengenalpastian hAMSC

hAMSC mempamerkan morfologi seperti poligon atau fibroblast dalam budaya (Rajah 1A) dan sangat positif untuk ekspresi permukaan penanda khusus MSC CD90, CD105, dan CD73, tetapi negatif untuk CD34, CD45, HLA-DR, dan CD11b (Rajah). 1C). Bagi pembezaan multilineage, keputusan kami menunjukkan bahawa hAMSCs menunjukkan pembezaan adiposit dan osteoblastik (Rajah 1B).

hAMSCs Mengurangkan Gejala aGVHD dengan ketara dalam Tikus

Kami mula-mula menilai kesan terapeutik hAMSC pada aGVHD. Berbanding dengan kumpulan aGVHD, hAMSCs meningkatkan aGVHD dengan ketara, seperti yang dibuktikan oleh penurunan berat badan yang ketara (Rajah 2B) dan penurunan skor klinikal aGVHD (Rajah 2C). Tambahan pula, kumpulan hAMSCs mempunyai kadar kelangsungan hidup yang jauh lebih tinggi jika dibandingkan dengan tikus aGVHD (Rajah 2D). Analisis histologi patologi menunjukkan bahawa aGVHD menyebabkan kerosakan tisu yang teruk dan penyusupan leukosit. hAMSC, seperti yang ditunjukkan oleh H&E, gangguan tisu dilemahkan dan penyusupan sel T eksogen dalam organ sasaran aGVHD (Rajah 2E). Secara konsisten, keputusan IHC juga mengesahkan bahawa hAMSCs meningkatkan manifestasi patologi yang tidak normal (Rajah 2F). Keputusan ini mencadangkan bahawa hAMSC mempunyai potensi untuk memperbaiki gejala aGVHD dalam tikus aGVHD.

hAMSCs Menjejaskan Kekebalan Hos dalam Tikus aGVHD

Untuk memahami mekanisme imunomodulator asas yang mana hAMSC mengurangkan aGVHD, kami mengukur pengaktifan dan pengembangan sel T dalam darah periferal dan organ sasaran. Ujian sitometri aliran mendedahkan bahawa hAMSC sangat menghalang bilangan CD3+CD4+T dan CD3+CD8+sel T dalam darah dan organ sasaran (Rajah 3A, B). Selain itu, perkadaran CD4+CD25+Foxp3+Tregs dalam darah dan organ sasaran tikus dalam kumpulan hAMSCs adalah jauh lebih tinggi daripada kumpulan aGVHD (Rajah 3C) . Kami seterusnya menyiasat kesan hAMSC pada profil sitokin (Rajah 4). Pentadbiran hAMSC menyebabkan penurunan ketara dalam paras IL-17A, IFN- , TNF, IL-6 dan IL-2 dalam organ sasaran dan darah berbanding kumpulan aGVHD, kecuali tahap TNF dalam limpa. Sementara itu, sebagai tambahan kepada tahap IL-10 dalam hati, tikus rawatan hAMSCs menunjukkan tahap IL-10 dan IL-4 yang meningkat dengan ketara dalam organ sasaran dan darah. Diambil bersama, hAMSC memainkan peranan perlindungan dalam aGVHD dengan membalikkan ketidakseimbangan imun subset sel T dan ribut sitokin.

Kebaikan cistanche tubulosa-menguatkan sistem imun

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Enhance Immunity

【Minta lebih lanjut】 E-mel:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

hAMSCs Memperbaiki Kerosakan Halangan Usus dalam Tikus aGVHD

Untuk menyiasat sama ada hAMSC boleh membaiki halangan usus dalam aGVHD, kami mula-mula memerhatikan sama ada hAMSC boleh berhijrah ke usus. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 5A, hAMSC berlabel GFP telah dikesan dalam usus selepas suntikan ke dalam hAMSC dan boleh mencakar dan menyusup ke dalam usus. Kemudian kami mereka bentuk penilaian histopatologi tisu usus kecil. Dalam kumpulan aGVHD, usus terhakis dan nekrotik, vili usus jelas dimusnahkan, vili dipecahkan dan leukosit besar menyusup ke mukosa usus, submukosa, dan lamina propria. Villi usus tersusun secara teratur, dan tiada kerosakan vilus usus atau detasmen epitelium vili selepas rawatan hAMSCs (Rajah 5B). Penyusupan limfosit manusia juga diperhatikan oleh imunohistokimia dalam usus dalam kumpulan aGVHD, manakala rawatan hAMSC boleh mengurangkan penyusupan mereka (Rajah 5C). Untuk menilai kesan perlindungan hAMSC pada integriti mukosa usus, kami melakukan imunohistokimia untuk mengesan kesan pada ZO-1. Dalam kumpulan rawatan hAMSC, tahap ekspresi protein simpang ketat ZO-1 telah meningkat dengan ketara berbanding dengan kumpulan aGVHD (Rajah 5D). Kami juga mengkaji tahap ekspresi mRNA protein simpang ketat usus (TJs) dan tahap plasma asid D-laktik (D-LA) dan diamine oxidase (DAO) untuk menentukan fungsi penghalang usus dan kebolehtelapan usus. Apabila ditadbir secara intravena, hMASC boleh meningkatkan tahap ekspresi mRNA ZO-1 dan Occludin dengan ketara, iaitu protein utama TJ (Rajah 5E, F), sambil mengurangkan tahap D-LA dan DAO (Rajah 5G, H). Oleh itu, apabila aGVHD berlaku, halangan usus telah rosak dengan pengurangan protein simpang ketat usus dan peningkatan kebolehtelapan usus. Sementara itu, hAMCS boleh membalikkan dengan ketara gangguan halangan usus.

Rajah 1 Pencirian fenotip dan fungsian hAMSC. (A) Mikrograf perwakilan hAMSC daripada laluan 0 hingga 3 (tiada pewarnaan, 100×). (B) Keupayaan pembezaan multilineage hAM SC. Pembezaan adipogenik hAMSCs (kiri) telah diwarnai dengan Oil Red-O, dan pembezaan osteoblastik hAMSCs (kanan) telah diwarnai dengan Alizarin Red (pewarnaan, 100 ×). (C) Analisis sitometri aliran yang menunjukkan hAMSC positif untuk CD90, CD105 dan CD73 manakala negatif untuk CD34, CD45, CD11b dan HLA-DR

Rajah 2 hAMSC mengurangkan aGVHD dalam tikus NPG. (A) Gambar rajah skema yang menggambarkan jadual pentadbiran hAMSC dalam model tetikus aGVHD. (B) Perubahan berat badan dalam kumpulan yang berbeza (n=10). (C) skor klinikal aGVHD (berdasarkan penurunan berat badan, postur bongkok, bulu kusut, luka kulit, mobiliti berkurangan dan cirit-birit) dalam kumpulan yang berbeza (n=10). (D) Kemandirian dalam kalangan kumpulan yang berbeza (n=10). (E) Gambar mikroskopik mewakili pewarnaan H&E (400×) dan skor histologi (berdasarkan pemusnahan struktur tisu dan inflrasi limfosit) (n=4). (F) Gambar mikroskopik perwakilan imunohistokimia (400×) dan perkadaran kawasan positif CD45 (n=4). Nilai dibentangkan sebagai min ± SD

Rajah 3 hAMSC menghalang pengembangan sel T penderma manakala penjanaan atau pengembangan Tregs dipertingkatkan dalam vivo. (A) Analisis sitometri aliran CD3+CD4+sel T(n=6), (B) Analisis sitometri aliran CD3+CD8+ Sel T(n=6), (C) Analisis sitometri aliran CD4+CD25+Foxp3+Tregs (n=6). Nilai dibentangkan sebagai min ± SD

Rajah 4 hAMSC menurunkan kawal selia sitokin pro-radang IL-17A, IFN-, TNF, IL-6, IL-2 dan sitokin anti-radang terkawal IL-10 dan IL -4 dalam vivo (n=5). Nilai dibentangkan sebagai min ± SD

Penggantian Mikrobiota Usus Selepas Rawatan hAMSCs dalam Tikus aGVHD

Penjujukan rRNA 16S dilakukan dalam DNA bakteria tahi yang diasingkan daripada kumpulan tikus yang berbeza. Indeks kepelbagaian, termasuk indeks OUT, Chao1 dan Shannon, menunjukkan kecenderungan yang sama, dan tikus rawatan hAMSCs mempunyai mikrobiota dengan kepelbagaian yang jauh lebih tinggi berbanding kumpulan aGVHD (Rajah 6A). Analisis koordinat utama (PCoA) berdasarkan jarak Un weighted-unifrac, jarak Manhattan dan jarak metrik Bray-Curtis, menghasilkan titik data tersebar pada plot kedua-dua kumpulan, walaupun perbezaannya tidak ketara (Rajah 6B). Selepas itu, kami menilai landskap mikrobiota usus untuk menyiasat lagi potensi perbezaan komposisi antara kedua-dua kumpulan. Sebanyak 773 OTU telah dikira, dan kumpulan hAMSC mempunyai OTU yang lebih tinggi berbanding dengan kumpulan aGVHD (Rajah 6C). Dari segi komposisi bakteria pada peringkat filum, Firmicutes dan Bacteroidetes ialah dua filum yang paling dominan (Rajah 6D). Kami juga menganjurkan peta haba perbandingan untuk analisis mikrobiota usus antara kedua-dua kumpulan (Rajah 6E). Genus Odoribacter dan Ruminococcus{11}} memaparkan kelimpahan yang agak tinggi dalam kumpulan hAMSC, yang merupakan mikrob penting untuk mengekalkan homeostasis usus (Rajah 6F, G). Untuk mengesahkan bakteria mana yang telah diubah oleh rawatan hAMSCs dan seterusnya menjejaskan perkembangan penyakit terhadap aGVHD, kami melakukan perbandingan kelas dimensi tinggi menggunakan analisis diskriminan linear (LDA) saiz kesan (LEfSe) yang mengesan perbezaan ketara dalam dominasi komuniti bakteria antara kedua-dua kumpulan itu. Seperti yang ditunjukkan dalam (Rajah 6H, I), Streptococcaceae (keluarga dan genus Streptococcus), Paludibacteraceae, F0058, dan Delftia adalah jenis utama bakteria yang menyumbang kepada dysbiosis mikrobiota usus dalam kumpulan aGVHD. Walau bagaimanapun, bakteria berfaedah Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, dan Clostridia (kelas dan urutan Clostridiales) menunjukkan pengayaan relatif dalam kumpulan hAMSC, yang mungkin dikaitkan dengan pengurangan aGVHD yang dimediasi oleh hAMSC. Secara kolektif, kepelbagaian dan komposisi mikrobiota usus telah diperbaiki selepas pentadbiran hAMSCs dan bergerak dalam trend keseluruhan yang bermanfaat kepada badan.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

hAMSCs Mengawal Interaksi antara Mikrobiota Usus dan Kekebalan Usus

Untuk memahami potensi hubungan antara mikrobiota usus dan penghalang mukosa usus, korelasi antara TJ dan mikrobiota usus pada peringkat genus telah dianalisis oleh analisis korelasi Spearman. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 7, terdapat hubungan positif antara ZO-1 dan bakteria berfaedah, Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1 dan Ruminiclostridium_9. Kelimpahan relatif bakteria bermanfaat, Roseburia, Odoribacter, Ruminococcus_1 dan Ruminococcaceae_UCG.014 menunjukkan korelasi positif secara dramatik dengan Occludin. Kami seterusnya menjalankan analisis korelasi antara mikrobiota usus dan penghalang imun usus dengan kaedah korelasi pangkat Spearman (Rajah 7). Kami mendapati bahawa peningkatan Roseburia, Muribaculum dan Ruminococcus _1, berkorelasi negatif dengan peratusan CD3 +CD4+sel T. Selain itu, peningkatan bakteria berfaedah, Ruminococcus_1 dan Ruminiclostridium _9, berkorelasi positif dengan peratusan Treg manakala berkorelasi negatif dengan IL-17. Kelimpahan Lactobacillus dan Candidatus{16}}Arthromitus dikaitkan secara negatif dengan IFN- . Terdapat korelasi negatif antara kelimpahan Muribaculum dan IL-2. Peningkatan jumlah Candidatus_Saccharimonas dan penurunan dalam Escherichia. Kelimpahan Shigella dikaitkan secara positif dengan tahap IL-10 (Rajah 7). Keputusan analisis korelasi menunjukkan bahawa hAMSCs meningkatkan persekitaran keradangan hos dan mengawal homeostasis usus yang mungkin dikaitkan dengan modulasi mikrobiota usus, dan seterusnya menghalang aGVHD.

Rajah 5 hAMSCs memperbaiki disfungsi penghalang usus dalam tikus aGVHD. (A) hAMSC berlabel GFP menyusup ke dalam usus. (B) Gambar mikroskopik mewakili pewarnaan H&E usus (400×) dan skor histologi (berdasarkan pemusnahan struktur tisu dan penyusupan limfosit) (n=4). (C) Mewakili gambar mikroskopik imunohistokimia (400×) usus dan perkadaran kawasan positif CD45 (n=4). (D) Mewakili gambar mikroskopik imunohistokimia (400×) usus dan perkadaran kawasan positif ZO-1 (n=4). (E) tahap ekspresi mRNA ZO-1 dan Occludin (n=3). (F) Tahap plasma D-LA dan DAO (n=4).Nilai dibentangkan sebagai min ± SD

Perbincangan

Analisis mikrob lanjutan telah memberikan pandangan baharu tentang interaksi kompleks antara hos dan mikrobiota usus [18]. Mikrobiota usus boleh diubah selepas allo-HSCT dan berkait rapat dengan aGVHD, menunjukkan bahawa mikrobiota usus mungkin menjadi sasaran baru untuk rawatan aGVHD [5]. Banyak kajian termasuk kajian terbaru kami telah meneroka dan mengesahkan kesan terapeutik MSC pada aGVHD [15, 19, 20]. Walau bagaimanapun, kesan ke atas mikrobiota usus dalam tempoh ini masih tidak jelas. Dalam kajian ini, kami menyiasat kesan hAMSC pada aGVHD dan potensi mekanisme di dalamnya dalam vivo. Selaras dengan kajian terdahulu [15, 21-23], keputusan kami menunjukkan bahawa hAMSC mempunyai kesan perlindungan yang menggalakkan pada aGVHD pada tikus, seperti yang dibuktikan oleh gejala aGVHD yang dilemahkan dan kelangsungan hidup yang berpanjangan. Kami juga menunjukkan bahawa hAMSCs menunjukkan kesan imunosupresif melalui mengurangkan pengembangan sel T penderma sambil meningkatkan penjanaan Tregs dalam aGVHD. Sementara itu, hAMSC boleh mengecilkan sitokin pro-radang dan mengimbangi sitokin anti-radang dalam vivo, untuk menghalang tindak balas keradangan. Penghalang usus, struktur padat yang terdiri daripada monolayer sel epitelium usus, mengekalkan integritinya dan menghalang pemindahan mikrobiota luminal dalam keadaan yang sihat [24]. Semasa allo-HSCT, rejimen penyaman merosakkan penghalang usus, yang merupakan langkah awal dalam pembangunan aGVHD, kerana ia membenarkan pemindahan bakteria merentasi halangan dan membawa kepada mengganggu homeostasis imun usus [24, 25]. Bukti terkumpul menunjukkan bahawa MSC mempunyai keupayaan untuk pembaikan tisu, yang terbukti dapat membaiki integriti penghalang usus dalam tikus kolitis [26]. Protein simpang ketat, termasuk ZO-1 dan Occludin, mempunyai peranan penting dalam fungsi penghalang usus dan translokasi mikrobiota usus ke atas halangan usus yang terjejas mencetuskan keradangan [27]. D-LA berasal daripada bakteria usus, dan DAO terutamanya tertumpu pada mukosa usus. Oleh itu, kepekatan tinggi plasma D-LA dan DAO mungkin sebahagiannya mencerminkan perubahan dalam kebolehtelapan usus dan fungsi penghalang usus [28]. Pada masa ini, kami mendapati bahawa tahap ekspresi TJ meningkat secara mendadak selepas pentadbiran hAMSCs, manakala tahap plasma D-LA dan DAO menurun dengan ketara, menunjukkan bahawa hAMSCs dapat memperbaiki disfungsi penghalang usus dan kebolehtelapan usus pemulihan. Usus adalah salah satu organ yang paling teruk terjejas oleh aGVHD dan penyelidikan telah menyerlahkan bahawa bakteria, terutamanya mikrobiota usus memainkan peranan penting dalam patogenesis dan pembangunan aGVHD [5, 6]. Seperti yang dilaporkan dalam kajian terdahulu, kehilangan kepelbagaian bakteria pesakit allo HSCT dikaitkan dengan peningkatan kematian daripada aGVHD [29, 30]. Penguasaan najis oleh patogen oportunistik Enterococcus dan Proteobacteria juga telah dikaitkan dengan peningkatan GVHD [6, 31]. Selama beberapa dekad yang lalu, peningkatan perhatian telah diberikan kepada korelasi antara mikrobiota usus dan rawatan MSC dalam penyakit keradangan. MSC telah terbukti dapat memperbaiki dysbiosis mikrobiota usus untuk arthritis rheumatoid, sepsis, dan penyakit radang usus [32-34]. Untuk meneroka lebih lanjut mekanisme yang mana hAMSC memperbaiki aGVHD, kami menyiasat kesan hAMSC pada mikrobiota usus. Dalam kajian semasa, pentadbiran hAMSC menunjukkan kesan yang besar terhadap kepelbagaian komuniti mikrob berbanding tanpa pemindahan, menunjukkan bahawa banyak mikrobiota usus boleh diubah selepas rawatan hAMSCs. Walau bagaimanapun, tidak terdapat perbezaan yang ketara dalam pengukuran kepelbagaian, mungkin kerana saiz sampel yang kecil bagi kedua-dua kumpulan atau kitaran rawatan hAMSC yang tidak mencukupi. Analisis menggunakan peta haba perbandingan dalam tahap genus menunjukkan bahawa pentadbiran hAMSC meningkatkan banyak bakteria bermanfaat, Odoribacter dan Ruminococcus_1 dalam flora usus, yang merupakan pengeluar asid lemak rantai pendek (SCFA) dengan sifat anti-radang [35 , 36]. Untuk mengenal pasti bakteria dominan yang dimediasi melalui pemindahan hAMSCs, analisis LEfSe telah dijalankan antara kedua-dua kumpulan. Berbanding dengan kumpulan aGVHD, rawatan hAMSCs dengan ketara meningkatkan kelimpahan beberapa mikrob berfaedah yang berkaitan dengan kesan anti-radang, seperti Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia, yang semuanya digambarkan bermanfaat untuk pengeluaran SCFA metabolit mikrobiota usus [ 37–42]. Oleh itu, pemerhatian kami menunjukkan bahawa selepas pentadbiran hAMSC, dysbiosis mikrobiota usus telah diperbaiki, yang ditunjukkan oleh kepelbagaian yang lebih baik dan peningkatan kelimpahan relatif bakteria berfaedah.

Rajah 6 Selang-seli mikrobiota usus dalam tikus aGVHD. (A) perbandingan -kepelbagaian. (B) perbandingan -kepelbagaian. (C) Gambar rajah Venn bagi OTU. (D) Kelimpahan bakteria relatif pada peringkat filum. (E) Peta haba kelimpahan spesies pada peringkat genus. (F) Kelimpahan relatif Odoribacter pada peringkat genus. (G) Kelimpahan relatif Ruminococcus_1 pada peringkat genus. (H) Kladogram berdasarkan analisis LEfSe. (I) Skor LDA dikira daripada ciri-ciri yang berbeza-beza antara kumpulan aGVHD dan hAMSCs. (AI) n=3 tikus setiap kumpulan. Nilai dibentangkan sebagai min ± SD

aGVHD ialah proses keradangan yang rumit yang dimulakan oleh pemusnahan integriti penghalang usus diikuti dengan pemindahan mikrobiota usus dan komponennya. Pengiktirafan corak molekul berkaitan kerosakan dan corak molekul berkaitan patogen oleh sel pembentangan antigen mendorong tindak balas pro-radang termasuk pengaktifan sel T dan ribut sitokin untuk memburukkan lagi kerosakan halangan usus dan menggalakkan perkembangan aGVHD [24, 43]. Sebaliknya, mikrobiota usus dan metabolit yang berasal dari mikrobiota seperti SCFA memainkan peranan penting dalam mengekalkan integriti penghalang usus dan homeostasis usus serta membentuk sistem imun mukosa, dan mengimbangi pertahanan perumah dengan komponen mikrob dan metabolit [24, 44] . Interkomunikasi antara tuan rumah dan mikrobiota usus pada penghalang usus mengawal tindak balas imun mukosa dan sistemik dan, dalam keadaan patologi, boleh mengakibatkan GVHD [6, 45, 46]. Ia mencadangkan bahawa mikrobiota usus berkait rapat dengan ekspresi protein simpang ketat [47]. Kajian ini menunjukkan bahawa ekspresi mRNA TJs ZO-1 dan Occludin berkorelasi negatif dengan kelimpahan relatif bakteria berbahaya manakala mempunyai korelasi positif dengan bakteria berfaedah, menunjukkan bahawa mikrobiota usus adalah penting untuk mengekalkan integriti penghalang usus. Selain itu, mikrobiota usus juga sangat penting dalam mengekalkan penghalang imun usus [47]. Kami mendapati bahawa beberapa bakteria berfaedah berkorelasi negatif dengan peratusan CD3+CD4+sel T, tetapi berkorelasi positif dengan peratusan Treg. Di sini, kami mendedahkan bahawa bakteria berfaedah, kebanyakannya pengeluar SCFA, berkorelasi negatif dengan sitokin pro-radang tetapi berkorelasi positif dengan sitokin anti-radang, manakala bakteria berbahaya berkorelasi sebaliknya. Ringkasnya, perbezaan ketara dalam mikrobiota usus antara rawatan mencadangkan gambaran penuh tentang interaksi antara mikrobiota usus dan penghalang usus, imuniti. Masih terdapat beberapa batasan yang patut dibincangkan dalam eksperimen kami. Pertama, walaupun kajian kami meneroka kesan hAMSC pada imuniti, halangan usus, dan mikrobiota usus dalam aGVHD, mekanisme asas masih perlu disahkan dalam kajian lanjut. Kedua, pengurangan mikrobiota usus dan pemindahan mikrobiota tahi diperlukan untuk menangani korelasi penyebab antara mikrobiota usus, penghalang usus, dan imuniti. Ketiga, penyelidikan lanjut yang menyiasat kesan hAMSC pada SCFA yang berasal dari mikrobiota dan metabolit lain adalah wajar. Kesimpulannya, penyelidikan kami mencadangkan bahawa hAMSCs mengurangkan aGVHD dengan mempromosikan normalisasi mikrobiota usus dan mengawal selia interaksi antara mikrobiota usus dan penghalang usus, imuniti. Kajian kami adalah yang pertama secara sistematik untuk menentukan kesan dan mekanisme asas hAMSC yang mengawal mikrobiota usus dan imuniti usus dalam aGVHD.

Rajah 7 Analisis korelasi antara mikrobiota usus dan imuniti usus. Analisis korelasi Spearman dijalankan antara kelimpahan relatif 15 mikrobiota usus yang berbeza (pada peringkat genus) dan tahap ekspresi mRNA TJ, peratusan sel imun serta kepekatan sitokin dalam usus di kalangan kedua-dua kumpulan. Nilai Spearman r berjulat daripada -0.5 (biru) hingga 0.5 (merah)

Rujukan

1. Schmid, C. (2021). Selangkah lebih dekat dengan GVL tanpa GVHD. Darah, 137(19), 2565–2566. https://doi.org/10.1182/blood.2020010132

2. Chang, Y., Zhao, X., & Huang, X. (2018). Strategi untuk meningkatkan dan memelihara kesan anti-leukemia tanpa memburukkan penyakit rasuah berbanding perumah. Frontiers in Immunology, 9, 3041. https:// doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041

3. Zhu, W., Winter, MG, Byndloss, MX, Spiga, L., Duerkop, BA, Hughes, ER, Büttner, L., de Lima Romão, E., Behrendt, CL, Lopez, CA, Sifuentes- Dominguez, L., Huf-Hardy, K., Wilson, RP, Gillis, CC, Tükel, Ç., Koh, AY, Burstein, E., Hooper, LV, Bäumler, AJ, & Winter, SE (2018). Penyuntingan ketepatan mikrobiota usus memperbaiki kolitis. Alam, 553(7687), 208–211. https://doi.org/10.1038/nature25172

4. Zhao, L., Zhang, F., Ding, X., Wu, G., Lam, YY, Wang, X., Fu, H., Xue, X., Lu, C., Ma, J. , Yu, L., Xu, C., Ren, Z., Xu, Y., Xu, S., Shen, H., Zhu, X., Shi, Y., Shen, Q., … Zhang, C (2018). Bakteria usus yang dipromosikan secara selektif oleh serat pemakanan mengurangkan diabetes jenis 2. Sains (New York, NY), 359(6380), 1151–1156. https:// doi.org/10.1126/science.aao5774

5. Shono, Y., & van den Brink, MRM (2018). Kecederaan mikrobiota usus dalam pemindahan sel stem hematopoietik alogenik. Ulasan alam semula jadi. Kanser, 18(5), 283–295. https://doi.org/10.1038/ nrc.2018.10

6. Stafas, A., Burgos da Silva, M., & van den Brink, MRM (2017). Mikrobiota usus dalam pemindahan sel hematopoietik alogenik dan penyakit graft-versus-host. Darah, 129(8), 927–933. https://doi.org/10.1182/blood-2016-09-691394

7. Wu, K., Yuan, Y., Yu, H., Dai, X., Wang, S., Sun, Z., Wang, F., Fei, H., Lin, Q., Jiang, H ., & Chen, T. (2020). Metabolit mikrob usus trimethylamine N-oksida memburukkan GVHD dengan mendorong polarisasi makrofaj M1 pada tikus. Darah, 136(4), 501–515. https://doi.org/10.1182/blood.2019003990

8. Mathewson, ND, Jenq, R., Mathew, AV, Koenigsknecht, M., Hanash, A., Toubai, T., Oravecz-Wilson, K., Wu, S., Sun, Y., Rossi, C ., Fujiwara, H., Byun, J., Shono, Y., Lindemans, C., Calafore, M., Schmidt, TM, Honda, K., Young, VB, Pennathur, S., … Reddy, P. (2016). Metabolit yang berasal dari mikrobiom usus memodulasi kerosakan sel epitelium usus dan mengurangkan penyakit graft-versus-host. Imunologi Alam, 17(5), 505–513. https://doi.org/10.1038/ni.3400

9. Dave, JR, Chandekar, SS, Behera, S., Desai, KU, Salve, PM, Sapkal, NB, Mhaske, ST, Dewle, AM, Pokare, PS, Page, M., Jog, A., Chivte , PA, Srivastava, RK, & Tomar, GB (2022). Sel stem mesenchymal gingival manusia mengekalkan pertumbuhan dan ciri-ciri imunomodulatornya bebas daripada umur penderma. Kemajuan Sains, 8(25), m6504. https://doi.org/10. 1126/sciadv.abm6504

10. Zhao, K., & Liu, Q. (2016). Aplikasi klinikal sel stromal mesenchymal dalam pemindahan sel stem hematopoietik. Jurnal Hematologi & Onkologi, 9(1), 46. https://doi.org/ 10.1186/s13045-016-0276-z

11. Liu, Q., Huang, Q., Wu, H., Zuo, G., Gu, H., Deng, K., & Xin, H. (2021). Ciri-ciri dan potensi terapeutik sel stem yang berasal dari amnion manusia. Jurnal Antarabangsa Sains Molekul, 22(2), 970. https://doi.org/10.3390/ijms22020970

12. Li, J., Zhou, Z., Wen, J., Jiang, F., & Xia, Y. (2020). Sel stem mesenchymal amniotik manusia menggalakkan pertumbuhan semula tulang endogen. Sempadan dalam Endokrinologi, 11, 543623. https:// doi.org/10.3389/fendo.2020.543623

13. Díaz-Prado, S., Muiños-López, E., Hermida-Gómez, T., Cicione, C., Rendal-Vázquez, ME, Fuentes-Boquete, I., de Toro, FJ, Blanco, FJ ( 2011). Membran amniotik manusia sebagai sumber alternatif sel stem untuk perubatan regeneratif. Pembezaan; Penyelidikan dalam Kepelbagaian Biologi, 81(3), 162–171. https:// doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005

14. Hong, J., Gao, Y., Song, J., Zhuo, W., Sun, H., & Ping, B. (2016). Perbandingan ciri biologi dan aktiviti imunosupresif antara sel stem mesenchymal amniotik manusia dan sel stem mesenchymal sumsum tulang manusia. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 24(3), 858–864. https:// doi.org/10.7534/j.issn.1009-2137.2016.03.041

15. Gao, Y., Li, W., Bu, X., Xu, Y., Cai, S., Zhong, J., Du, M., Sun, H., Huang, L., He, Y ., Hu, X., Liu, Q., Jin, H., Wang, Q., & Ping, B. (2021). Sel stem mesenchymal amniotik manusia menghalang aGVHD dengan mengawal keseimbangan sel Treg dan T effector. Jurnal Penyelidikan Radang, 14, 3985-3999. https://doi.org/10.2147/ JIR.S323054

16. Cooke, KR, Kobzik, L., Martin, TR, Brewer, J., Delmonte, JJ, Crawford, JM, & Ferrara, JL (1996). Model eksperimen sindrom pneumonia idiopatik selepas pemindahan sumsum tulang: I. Peranan antigen H kecil dan endotoksin. Darah, 88(8), 3230–3239.

17. Yañez, R., Lamana, ML, García-Castro, J., Colmenero, I., Ramírez, M., & Bueren, JA (2006). Sel stem mesenchymal yang berasal dari tisu adipos mempunyai sifat imunosupresif in vivo yang boleh digunakan untuk mengawal penyakit rasuah lawan perumah. Sel Stem (Dayton, Ohio), 24(11), 2582–2591.

18 Hooper, LV, Littman, DR, & Macpherson, AJ (2012). Interaksi antara mikrobiota dan sistem imun. Sains (New York, NY), 336(6086), 1268–1273. https://doi.org/10.1126/ sains.1223490

19. Kelly, K., & Rasko, JEJ (2021). Sel stromal mesenchymal untuk rawatan penyakit rasuah berbanding perumah. Sempadan dalam Imunologi, 12, 761616. https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616

20. Macías-Sánchez, MDM, Morata-Tarifa, C., Cuende, N., Cardesa-Gil, A., Cuesta-Casas, M. Á., Pascual-Cascon, MJ, Pascual, A., Martín-Calvo , C., Jurado, M., Perez-Simón, JA, Espigado, I., Garzón López, S., Carmona Sánchez, G., Mata-Alcázar-Caballero, R., & Sánchez-Pernaute, R. (2022 ). Sel stromal mesenchymal untuk merawat cantuman akut dan kronik yang tahan steroid berbanding penyakit perumah: Pengalaman penggunaan belas kasihan berbilang pusat. Perubatan Translasi Sel Stem, 11(4), 343–355. https://doi.org/10.1093/ stcltm/szac003

21. Tago, Y., Kobayashi, C., Ogura, M., Wada, J., Yamaguchi, S., Yamaguchi, T., Hayashi, M., Nakaishi, T., Kubo, H., & Ueda, Y. (2021). Sel stem mesenchymal yang berasal dari amnion manusia melemahkan penyakit graft-versus-host xenogeneic dengan menghalang pengaktifan dan percambahan sel T. Scientifc Reports, 11(1), 2406. https://doi. org/10.1038/s41598-021-81916-y

22. Yamahara, K., Harada, K., Ohshima, M., Ishikane, S., Ohnishi, S., Tsuda, H., Otani, K., Taguchi, A., Soma, T., Ogawa, H ., Katsuragi, S., Yoshimatsu, J., Harada-Shiba, M., Kangawa, K., & Ikeda, T. (2014). Perbandingan sifat angiogenik, sitoprotektif dan imunosupresif bagi sel stem mesenchymal yang berasal dari amnion dan chorion manusia. PLoS One, 9(2), e88319. https:// doi.org/10.1371/journal.pone.0088319

23. Yamahara, K., Hamada, A., Soma, T., Okamoto, R., Okada, M., Yoshihara, S., Yoshihara, K., Ikegame, K., Tamaki, H., Kaida, K ., Inoue, T., Ohsugi, Y., Nishikawa, H., Hayashi, H., Ito, YM, Iijima, H., Ohnishi, S., Hashimoto, D., Isoe, T., … Fujimori, Y (2019). Keselamatan dan keberkesanan sel stem mesenchymal (AM01) yang berasal dari amnion pada pesakit dengan penyakit graft-versus-host akut refraktori steroid selepas pemindahan sel stem hematopoietik alogenik: protokol kajian untuk percubaan Jepun fasa I/II. BMJ Open, 9(7), e26403. https://doi.org/10.1136/bmjop en-2018-026403

24. Lin, D., Hu, B., Li, P., Zhao, Y., Xu, Y., & Wu, D. (2021). Peranan mikrobiota usus dan metabolit mikrob dalam GVHD akut. Hematologi & Onkologi Eksperimen, 10(1), 49. https:// doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3

25. Ghimire, S., Weber, D., Mavin, E., Wang, XN, Dickinson, AM, & Holler, E. (2017). Patofisiologi GvHD dan komplikasi utama yang berkaitan dengan HSCT yang lain. Frontiers in Immunology, 8, 79. https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079

26. Xu, J., Wang, X., Chen, J., Chen, S., Li, Z., Liu, H., Bai, Y., & Zhi, F. (2020). Sel stem mesenchymal yang berasal dari sel stem embrionik menggalakkan integriti dan penjanaan semula epitelium kolon dengan meningkatkan IGF yang beredar-1 dalam tikus kolitis. Theranostics, 10(26), 12204– 12222. https://doi.org/10.7150/thno.47683

27. Zhao, Y., Huang, J., Li, T., Zhang, S., Wen, C., & Wang, L. (2022). Berberine memperbaiki aGVHD dengan pembentukan semula mikrobiota usus, penindasan isyarat TLR4, dan pembaikan halangan kolon untuk perencatan keradangan NLRP3. Jurnal Perubatan Selular dan Molekul, 26(4), 1060–1070. https://doi.org/10. 1111/jcmm.17158

28. Yuan, M., Lin, L., Cao, H., Zheng, W., Wu, L., Zuo, H., Tian, ​​X., & Song, H. (2022). Mikrobiota usus mengambil bahagian dalam kesan perlindungan HO-1/BMMSCs pada pemindahan hati dengan cantuman hati steatotik dalam tikus. Sempadan dalam Mikrobiologi, 13, 905567. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567

29. Taur, Y., Jenq, RR, Perales, M., Littmann, ER, Morjaria, S., Ling, L., No, D., Gobourne, A., Viale, A., Dahi, PB, Ponce , DM, Barker, JN, Giralt, S., van den Brink, M., & Pamer, EG (2014). Kesan kepelbagaian bakteria saluran usus terhadap kematian berikutan pemindahan sel stem hematopoietik alogenik. Darah, 124(7), 1174–1182. https://doi.org/10.1182/ darah-2014-02-554725

30. Jenq, RR, Taur, Y., Devlin, SM, Ponce, DM, Goldberg, JD, Ahr, KF, Littmann, ER, Ling, L., Gobourne, AC, Miller, LC, Docampo, MD, Peled, JU, Arpaia, N., Cross, JR, Peets, TK, Lumish, MA, Shono, Y., Dudakov, JA, Poeck, H., … van den Brink, MRM (2015). Blautia usus dikaitkan dengan pengurangan kematian akibat penyakit rasuah lawan perumah. Biologi Pemindahan Darah dan Sumsum: Journal of the American Society for Blood and Marrow Transplantation, 21(8), 1373–1383. https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016

31. Le Bastard, Q., Chevallier, P., & Montassier, E. (2021). Mikrobiom usus dalam pemindahan sel stem hematopoietik alogenik dan perubahan khusus yang berkaitan dengan penyakit rasuah vs perumah akut. Jurnal Dunia Gastroenterologi, 27(45), 7792–7800. https:// doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792

32. Li, X., Lu, C., Fan, D., Lu, X., Xia, Y., Zhao, H., Xu, H., Zhu, Y., Li, J., Liu, H ., & Xiao, C. (2020). Sel stem mesenchymal umbilical manusia memaparkan potensi terapeutik dalam arthritis rheumatoid dengan mengawal selia interaksi antara imuniti dan mikrobiota usus melalui reseptor hidrokarbon Aryl. Sempadan dalam biologi sel dan perkembangan, 8, 131. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131

33. Sun, J., Ding, X., Liu, S., Duan, X., Liang, H., & Sun, T. (2020). Sel stem mesenchymal yang berasal dari adiposa melemahkan kecederaan paru-paru akut dan meningkatkan mikrobiota usus dalam tikus septik. Penyelidikan & Terapi Sel Stem, 11(1), 384. https://doi.org/10.1186/ s13287-020-01902-5

34. Soontarararak, S., Chow, L., Johnson, V., Coy, J., Wheat, W., Regan, D., & Dow, S. (2018). Sel Stem Mesenchymal (MSC) yang diperoleh daripada Sel Stem Pluripotent Teraruh (iPSC) bersamaan dengan MSC terbitan adiposa dalam menggalakkan penyembuhan usus dan normalisasi mikrobiom dalam model penyakit usus radang tikus. Perubatan Translasi Sel Stem, 7(6), 456–467. https://doi.org/ 10.1002/sctm.17-0305

35. Li, J., Zou, C., & Liu, Y. (2022). Memperbaiki alahan makanan yang disebabkan oleh ovalbumin pada tikus dengan penghantaran rektum dan kolon yang disasarkan Cyanidin-3-O-Glucoside. Makanan (Basel, Switzerland), 11(11), 1542. https://doi.org/10.3390/foods11111542

36. Maruyama, S., Matsuoka, T., Hosomi, K., Park, J., Nishimura, M., Murakami, H., Konishi, K., Miyachi, M., Kawashima, H., Mizuguchi, K ., Kobayashi, T., Ooka, T., Yamagata, Z., & Kunisawa, J. (2022). Klasifikasi kejadian dislipidemia berdasarkan bakteria usus yang berkaitan dengan pengambilan barli. Frontiers dalam Pemakanan, 9, 812469. https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469

37. Lee, SH, Park, H., Kang, CD, Choi, DH, Park, SC, Park, JM, Nam, S., Chae, GB, Lee, KY, Cho, H., & Lee, SJ ( 2022). Suplemen vitamin D3 intramuskular dos tinggi memberi kesan kepada mikrobiota usus pesakit dengan jangkitan clostridioides difcile. Sempadan dalam Mikrobiologi Selular dan Jangkitan, 12, 904987. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987

38. Meyer, RK, Lane, AI, Weninger, SN, Martinez, TM, Kangath, A., Laubitz, D., & Duca, FA (2022). Oligofruktosa memulihkan paras asid lemak rantai pendek selepas makan semasa penyusuan tinggi lemak. Obesiti (Silver Spring, Md.), 30(7), 1442–1452. https://doi.org/ 10.1002/oby.23456

39. Sang, J, Zhuang, D, Zhang, T, Wu, Q, Yu, J, Zhang, Z (2022) Corak umur menumpu dan mencapah kepelbagaian mikrobiota usus dalam manusia dan primata bukan manusia. M-Sistem: e151221. https:// doi.org/10.1128/msystems.01512-21

40. Ge, X., He, X., Liu, J., Zeng, F., Chen, L., Xu, W., Shao, R., Huang, Y., Farag, MA, Capanoglu, E. , El-Seedi, HR, Zhao, C., & Liu, B. (2022). Ameliorasi diabetes jenis 2 oleh novel 6, 8-guanidyl luteolin quinone-chromium coordination melalui mekanisme biokimia dan interaksi mikrobiota usus. Jurnal Penyelidikan Lanjutan, S2090–1232(22), 121–129. https://doi.org/ 10.1016/j.jare.2022.06.003

41. Ding, Q., Cao, F., Lai, S., Zhuge, H., Chang, K., Valencak, TG, Liu, J., Li, S., & Ren, D. (2022). Lactobacillus plantarum ZY08 melegakan steatosis hepatik akibat alkohol kronik dan kecederaan hati pada tikus melalui memulihkan homeostasis fora usus. Food Research International (Ottawa, Ont.), 157, 111259. https://doi.org/10. 1016/j.foodres.2022.111259

42. Rees, NP, Shaheen, W., Quince, C., Tselepis, C., Horniblow, RD, Sharma, N., Beggs, AD, Iqbal, TH, & Quraishi, MN (2022). Kajian sistematik mengenai biomarker ramalan penderma dan penerima tindak balas terhadap pemindahan mikrobiota tahi pada pesakit dengan kolitis ulseratif. EBioMedicine, 81, 104088. https:// doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088

43. Li, A., Abraham, C., Wang, Y., & Zhang, Y. (2020). Pandangan baharu tentang biologi asas penyakit rasuah-berbanding-perumah-akut. Haematologica, 105(11), 2540–2549. https://doi.org/10.3324/haematol. 2019.240291 44. Kayama, H., Okumura, R., & Takeda, K. (2020). Interaksi antara mikrobiota, epithelia, dan sel imun dalam usus. Kajian Tahunan Imunologi, 38, 23–48. https://doi.org/ 10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104

45. Schluter, J., Peled, JU, Taylor, BP, Markey, KA, Smith, M., Taur, Y., Niehus, R., Stafas, A., Dai, A., Fontana, E., Amoretti , LA, Wright, RJ, Morjaria, S., Fenelus, M., Pessin, MS, Chao, NJ, Lew, M., Bohannon, L., Bush, A., … Xavier, JB (2020). Mikrobiota usus dikaitkan dengan dinamik sel imun pada manusia. Alam, 588(7837), 303–307. https://doi.org/10.1038/ s41586-020-2971-8

46. ​​Yang, J, Yang, H, Li, Y (2022) Interaksi tiga kali ganda antara mikrobiota usus, mycobiota dan imuniti perumah. Ulasan Kritikal dalam Sains Makanan dan Pemakanan: 1–21. https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888

47. An, J., Liu, Y., Wang, Y., Fan, R., Hu, X., Zhang, F., Yang, J., & Chen, J. (2022). Peranan penghalang mukosa usus dalam penyakit autoimun: Sasaran yang berpotensi. Sempadan dalam Imunologi, 13, 871713. https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713