Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Klik di sini untuk maklumat mengenai Bahagian II(Pengenalan, bahan, dan kaedah) artikel ini.

Bagaimanakah ubat-ubatan Cina yang tonify buah pinggang menghalang apoptosis neuron dopaminergik?

Shaogang Lin,1 Shuifen Ye,2 Jinmu Huang,1 Yun Tian,3 Yihui Xu,2 Mengqi Wu,2 Jingxia Wang,2 Songying Wu,4 dan Jing Cai, MD, Ph.D.2

Abstrak

Tikus Wistar secara intragastrik dengan ubat-ubatan Cina yang digunakan untuk tonifyingBuah pinggang. Ini termasuk 0.180 g/mL Herba Epimedii (Epimedium), Semen Cuscutae (Benih Dodder), atau Herba Cistanches (Desertliving Cistanche), 0.04 mg/mL monoamine oxidase-B perencat selegiline, atau air suling selama 14 hari berturut-turut untuk menyediakan serum yang mengandungi dadah atau serum kosong. Sel MES23.5 dalam fasa logaritma dikulturkan dalam media ditambah dengan 15% serum yang mengandungi ubat selama 24 jam, diikuti dengan inkubasi dalam larutan kultur yang mengandungi 100 μmol / L H2O2 selama 3 jam. 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) dan hasil tonometri aliran menunjukkan bahawa semua serum yang mengandungi ubat meningkatkan kadar survival sel MES23.5 yang cedera H2O2, menghalang fasL pro-apoptotik dan ekspresi caspase-3, mempromosikan ekspresi Bcl-2 anti-apoptotik. Walau bagaimanapun, serum yang mengandungi dadah mempunyai sedikit pengaruh pada ekspresi Fas dalam sel MES23.5 yang cedera H2O2. Hasil ujian immunosorbent berkaitan enzim menunjukkan bahawa serum yang mengandungi Herba Cistanches atau Herba Epimedii meningkatkan ekspresi faktor pertumbuhan saraf, faktor neurotropik yang berasal dari otak, dan faktor neurotropik yang berasal dari sel sel glial dalam sel MES23.5 yang cedera; Semen Cuscutae yang mengandungi serum hanya meningkatkan ekspresi faktor neurotropik yang berasal dari otak; manakala ungkapan faktor neurotropik di atas kekal sama dalam sel yang dirawat dengan selegiline yang mengandungi serum. Penemuan ini menunjukkan bahawa ubat-ubatan Cina yang digunakan untuk tonify buah pinggang boleh melindungi sel-sel saraf dengan mengawal selia ungkapanapoptosis- faktor yang berkaitan dan faktor neurotropik dalam sel MES23.5.

Kata kunci: pertumbuhan semula saraf, perubatan tradisional Cina, serum yang mengandungi dadah, MES23.5dopaminergiksel saraf, faktor neurotropik,apoptosisfaktor, penyakit Parkinson, neuroprotection

Sorotan Penyelidikan

(1) Kajian ini memantau faktor-faktor yang berkaitan dengan apoptosis dan faktor neurotropik untuk mendedahkan kesan perencatan ubat-ubatan Cina untuk tonifyingBuah pinggangpada apoptosis pada tahap molekul.

(2) Keputusan menunjukkan bahawa ubat-ubatan Cina untuk tonifyingBuah pinggangboleh melindungi sel-sel saraf dengan mengawal selia ungkapanapoptosis- faktor yang berkaitan dan faktor neurotropik.

cistanche untuk merawat fungsi buah pinggang

PENGENALAN

Penyakit Parkinson dicirikan oleh kemerosotan dan kehilangandopaminergikneuron di substantia nigra, kawasan midbrain, serta pembentukan badan Lewy[1,2]. Kehilangan neuron dopaminergik dan penyakit Parkinson sangat berkaitan dengan pengaktifan laluan apoptotik[3,4]. Pelbagai sitokin dan faktor neurotropik telah digunakan untuk neuroprotection[5,6]. Persediaan kompaun ubat-ubatan Cina yang boleh tonifyBuah pinggangtelah dilaporkan untuk meningkatkan gejala penyakit Parkinson dengan ketara. Walau bagaimanapun, mekanisme tindakan masih tidak jelas[7,8,9]. Kami sebelum ini telah menunjukkan bahawa ubat-ubatan Cina yang tonify buah pinggang boleh melindungidopaminergikneuron dengan mengawal selia ungkapanapoptosis- faktor yang berkaitan dan peningkatan kandungan faktor neurotropik dalam model haiwan penyakit Parkinson[10]. Walau bagaimanapun, bukti dari eksperimen in vitro kurang.

Garis sel MES23.5 hibrid dari sel midbrain dari embrio tikus dan garis sel neuroblastoma glioma tetikus N18TG2. Garis sel ini mempunyai sifat-sifatdopaminergikneuron dan lebih mudah untuk kultur daripada sel saraf midbrain. Oleh itu, sel-sel ini telah digunakan secara meluas untuk mengkaji penyakit neurodegeneratif[11].

Untuk menyiasat sama ada ubat-ubatan Cina yang tonifyBuah pinggangboleh melindungi budaya in vitrodopaminergikneuron, kami menyebabkan kerosakan oksidatif dalam sel MES23.5 menggunakan H2O2 dan merawat sel-sel yang cedera dengan Herba Epimedii yang mengandungi serum (Epimedium), Semen Cuscutae (Benih Dodder), atau Herba Cistanches (Desertliving Cistanche). Cytometry aliran dan ujian immunosorbent berkaitan enzim (ELISA) telah digunakan untuk mengesan ungkapanapoptosis- faktor yang berkaitan dan faktor neurotropik. Kami berhasrat untuk meneroka mekanisme neuroprotektif ubat-ubatan Cina yang boleh tonifyBuah pingganguntuk pencegahan penyakit Parkinson. Perencat Selegiline dan monoamine oxidase-B digunakan sebagai kawalan.

KEPUTUSAN

Pengaruh kepekatan H2O2 yang berbeza pada pertumbuhan sel MES23.5

Keputusan 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) menunjukkan bahawa kadar survival sel MES23.5 kekal selepas pendedahan kepada 50, 100, 150, 200, 300 dan 400 μmol/L H2O2 selama 1 jam (P > 0.05), tetapi berkurangan dengan ketara selepas 3 jam, kecuali sel-sel yang terdedah kepada 50 μmol/L H2O2 (P P< 0.01).="" moreover,="" there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" the="" survival="" rate="" among="" different="" h2o2="" concentration="" groups,="" except="" 50="" μmol/l="" h2o2,="" at="" each="" time="" point="" (p="">0.05). Kadar survival sel MES23.5 tidak dikurangkan sehingga rawatan 50 μmol / L H2O2 selama 24 jam (P P< 0.05).="" thus,="" we="" treated="" mes23.5="" cells="" with="" 100="" μmol/l="" h2o2="" for="" 3="" hours="" (table="">

Jadual 1 Kadar survival (%) sel MES23.5 yang dirawat dengan kepekatan H2O2 yang berbeza dari masa ke masa

Pengaruh kepekatan serum yang mengandungi dadah yang berbeza pada pertumbuhan sel MES23.5 yang disebabkan oleh H2O2

Keputusan MTT menunjukkan bahawa tiada perubahan ditemui dalam sel MES23.5 yang disebabkan oleh H2O2 dengan 5% (v/v) dan 10% (v/v) serum yang mengandungi dadah selama 24 jam (P > 0.05). Walau bagaimanapun, pretreatment dengan 15% (v / v), 20% (v / v), 25% (v / v) dan 30% (v / v) serum yang mengandungi ubat selama 24 jam dengan ketara meningkatkan kadar kelangsungan hidup sel MES23.5 yang disebabkan oleh H2O2 (P< 0.05="" or="" p="">< 0.01),="" but="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" among="" the="" concentrations="" (p="">0.05). Oleh itu, 15% (v / v) serum yang mengandungi dadah digunakan dalam eksperimen berikutnya (Jadual 2).

Jadual 2

Kadar survival (%) sel MES23.5 yang disebabkan oleh H2O2 berikutan rawatan dengan serum yang mengandungi ubat pada kepekatan yang berbeza

Pengaruh serum yang mengandungi dadah pada ungkapan faktor yang berkaitan dengan apoptosis dalam sel MES23.5 yang disebabkan oleh H2O2

Cytometry aliran menunjukkan bahawa kandungan FasL dan caspase-3 meningkat dengan ketara dalam kumpulan model berbanding dengan kumpulan yang dirawat serum kosong; P< 0.05).="" fasl="" and="" caspase-3="" content="" significantly="" reduced="" in="" the="" herba="" epimedii,="" semen="" cuscutae,="" herba="" cistanches="" and="" selegiline="" groups="" when="" compared="" with="" the="" model="" group="" (p="">< 0.05).="" however,="" fasl="" and="" caspase-3="" content="" in="" the="" herba="" epimedii="" group,="" as="" well="" as="" fasl="" content="" in="" the="" herba="" cistanches="" group,="" remained="" higher="" when="" compared="" with="" blank="" serum="" group="" (p="">< 0.05;="" table="">

Jadual 3

Kadar ekspresi FasL-, Fas-, caspase-3-, dan Bcl-2-positif (%) dalam sel MES23.5 yang disebabkan oleh H2O2 berikutan rawatan dengan serum yang mengandungi ubat

Perubahan dalam kandungan Bcl-2 dalam sel daripada setiap kumpulan adalah bertentangan dengan tahap FasL dan caspase-3. Kandungan Bcl-2 dikurangkan dengan ketara dalam kumpulan model jika dibandingkan dengan kumpulan serum kosong (P< 0.05);="" bcl-2="" content="" was="" significantly="" higher="" in="" the="" herba="" epimedii,="" herba="" cistanches,="" and="" selegiline="" groups="" when="" compared="" with="" the="" model="" group="" (p="">< 0.05),="" but="" the="" increase="" in="" bcl-2="" content="" was="" not="" obvious="" in="" the="" semen="" cuscutae="" group="" (table="" 3).="" no="" significant="" difference="" was="" found="" in="" fas="" content="" among="" the="" groups="" (p="">0.05; Jadual 3).

Pengaruh serum yang mengandungi dadah pada ungkapan faktor neurotropik dalam sel MES23.5 yang disebabkan oleh H2O2

Keputusan ELISA menunjukkan bahawa kandungan faktor pertumbuhan saraf telah dikurangkan dengan ketara dalam model dan kumpulan selegiline jika dibandingkan dengan kumpulan serum kosong (P< 0.05).="" however,="" nerve="" growth="" factor="" levels="" were="" greater="" in="" the="" herba="" epimedii,="" semen="" cuscutae,="" and="" herba="" cistanches="" groups="" when="" compared="" with="" the="" model="" group,="" but="" significant="" differences="" were="" only="" found="" between="" the="" herba="" cistanches="" and="" model="" groups="" (p="">< 0.05;="" table="">

Jadual 4

Faktor pertumbuhan saraf (NGF), faktor neurotropik yang berasal dari otak (BDNF), dan perubahan kandungan neurotropik yang berasal dari sel glial (GDNF) (penyerapan) dalam sel MES23.5 yang disebabkan oleh H2O2 berikutan rawatan dengan serum yang mengandungi ubat selama 24 jam

Kandungan faktor neurotropik yang berasal dari otak dikurangkan dengan ketara dalam model dan kumpulan selegiline jika dibandingkan dengan kumpulan serum kosong (P< 0.05),="" and="" was="" significantly="" greater="" in="" the="" herba="" epimedii,="" semen="" cuscutae,="" and="" herba="" cistanches="" groups="" when="" compared="" with="" the="" blank="" serum="" group="" (p="">< 0.05;="" table="">

Kandungan faktor neurotropik yang berasal dari sel Glial jauh lebih besar dalam kumpulan Herba Cistanches jika dibandingkan dengan serum kosong, model, Semen Cuscutae dan kumpulan selegiline (P< 0.05),="" but="" no="" significant="" difference="" were="" found="" between="" the="" herba="" epimedii="" and="" herba="" cistanches="" groups="" (table="">

cistanche untuk meningkatkan fungsi buah pinggang

PERBINCANGAN

Perubahan biokimia patologi dan saraf dalam penyakit Parkinson terutamanya termasukdopaminergikkehilangan neuron dalam substantia nigra-corpus striatum, pembentukan badan-badan Lewy eosinophilic, dan pengurangan pemancar dopamin dalam corpus striatum[14]. Kajian telah menunjukkan bahawa neuronapoptosisadalah punca penting untuk kejadian dan perkembangan penyakit neurodegeneratif seperti penyakit Parkinson dan penyakit Alzheimer[15,16].

Kajian farmakologi moden telah menangani bahawa ubat-ubatan Cina Herba Epimedii, Semen Cuscutae, dan Herba Cistanches, yang boleh tonifyBuah pinggang, adalah neuroprotective. Herba Epimedii, tumbuhan herba keluarga Berberidaceae, boleh melindungi sel-sel saraf daripada kecederaan beta-peptida amiloid (25-35) dan mengurangkanapoptosis[17]. Semen Cuscutae adalah benih matang kering. Ia boleh mengawal imuniti, melambatkan penuaan, mengurangkan pengeluaran radikal bebas, menggalakkan penjanaan dismutase superoksida, meningkatkan kandungan Ca2+ dalam serum, menghalang saluran kalsium jenis L, mengawal kemasukan kalsium, mengawal osteoporosis, dan menekan sel sarafapoptosis[18,19]. Herba Cistanches adalah chylocaulous daun skala di kawasan kering. Ia boleh memanjangkan jangka hayat, menghalang pengoksidaan, dan meningkatkan kandungan neurotransmitter pusat[20,21]. Selegiline, perencat monoamine oxidase-B, juga boleh melindungi sel-sel saraf dengan beberapa laluan yang termasuk perencatan aktiviti monoamine oxidase-B, pengurangan endogen atau eksogendopaminekemerosotan, penyelenggaraan kepekatan dopamin dalam terminal sinaptik, pengurangan monoamine oxidase-B, promosi aktiviti antioksida, pengoksidaan perlahan, mengurangkan penjanaan radikal hidroksil, dan melindungi neuron dopaminergik[22].

Fas, FasL, dan keluarga protein caspase dan Bcl-2 memainkan peranan penting dalam mengawal selia selapoptosis[23,24]. Eksperimen haiwan sebelumnya dari kumpulan kami telah menunjukkan bahawa ubat-ubatan Cina yang tonifyBuah pinggangboleh mengurangkan kandungan caspase-3 dan FasL dalam substantia nigra-corpus striatum tikus dengan penyakit Parkinson[11]. Ini menunjukkan peranan penting untuk ubat-ubatan Cina yang tonifyBuah pinggangdengan mengurangkan faktor apoptotik untuk melindungi neuron pada tikus dengan penyakit Parkinson. Kajian ini menggunakan sel-sel kultur in vitro dan mendedahkan mereka kepada serum yang mengandungi dadah untuk secara langsung memerhatikan kesan ubat-ubatan Cina. Selain itu, kaedah ini meminimumkan gangguan pendedahan langsung sel kepada ubat-ubatan. Keputusan menunjukkan bahawa Herba Epimedii dan Herba Cistanches mengawal selia ungkapan Bcl-2, dan Herba Epimedii, Semen Cuscutae, dan Herba Cistanches mengurangkan ekspresi caspase-3 dan FasL. Ini menunjukkan bahawa peraturan ungkapan Bcl-2 dan caspase-3 oleh Herba Epimedii dan Herba Cistanches memainkan peranan penting dalam sel sarafapoptosis.

Faktor neurotropik adalah sejenis polipeptida atau protein yang dikeluarkan oleh organisma. Kajian telah menunjukkan bahawa faktor pertumbuhan saraf, faktor neurotropik yang berasal dari otak, dan faktor neurotropik yang berasal dari sel glial dapat menawarkan persekitaran mikro yang berkhasiat untuk sistem saraf dan memainkan peranan penting dalam mengekalkan perkembangan normal sistem saraf, kelangsungan hidup neuron, dan peraturan sistem saraf[25,26,27]. Faktor pertumbuhan saraf bertanggungjawab terutamanya untuk pembangunan, pembezaan, dan kelangsungan hidupdopaminergikneuron, serta pembaikan yang cederadopaminergikneuron[28,29]. Faktor neurotropik yang berasal dari otak boleh berfungsi sebagai antioksidan dan melindungi sel saraf dengan mensinergi faktor neurotropik yang berasal dari sel glial [30,31]. Faktor neurotropik yang berasal dari sel glial mempunyai tindakan trophik khusus pada neuron dopaminergik dan boleh menyuburkan sel-sel saraf dengan mengubah jumlah sel saraf, panjang proses dan mempengaruhi pengeluaran protein tertentu[32]. Kajian kami sebelum ini menunjukkan bahawa ubat-ubatan Cina yang boleh tonifyBuah pinggangboleh mengawal kandungan endogen faktor pertumbuhan saraf, faktor neurotropik yang berasal dari otak, dan faktor neurotropik yang berasal dari sel glial dalam substantia nigra-corpus striatum tikus dengan penyakit Parkinson dan berkesan mengurangkan sel sarafapoptosis[11]. Hasil daripada kajian ini menunjukkan bahawa Herba Cistanches meningkatkan faktor pertumbuhan saraf dan kandungan faktor neurotropik yang berasal dari sel glial dan herba Epimedii, Semen Cuscutae, dan Herba Cistanches meningkatkan kandungan faktor neurotropik yang berasal dari otak dalam sel MES23.5.

Ringkasnya, ubat-ubatan Cina yang digunakan untuk tonifyingBuah pinggang, seperti Herba Epimedii dan Herba Cistanches, boleh melindungi sel-sel saraf dengan mengawal selia ungkapanapoptosis- faktor yang berkaitan dan faktor neurotropik. Tindakan Semen Cuscutae adalah perlahan dan ringan, jadi kesannya pada selapoptosistidak jelas. Walau bagaimanapun, kami hanya memantau kesan perencatan apoptotik ubat-ubatan ini. Kajian lanjut diperlukan untuk menyiasat mekanisme neuroprotektif iniBuah pinggangtonifying ubat-ubatan Cina.