Bagaimana Bahan Aktif Cistanche Tubulosa Memainkan Peranan dalam Penyakit Alzheimer?

JIANHUA YANG1*, BOWEI JU1,2*, YAO YAN1, HUANHUAN XU1, SHANSHAN WU1, DANDAN ZHU1, DANDAN CAO1 DAN JUNPING HU2

Abstrak.Kajian ini bertujuan untuk menyiasat kesan neuroprotektifphenylethanoid glikosida(PhGs) pada H2O2- dan β-amyloid peptida (Aβ)1-42 yang disebabkan oleh kecederaan sel PC12 sebagai model in vitro sel PC12 sebagai model in vitro selPenyakit Alzheimer(IKLAN). Keadaan induksi yang optimum telah ditubuhkan melalui pemeriksaan pelbagai masa inkubasi dan kepekatan. Sel PC12 dirawat dengan 0.5 μM Aβ1-42 dan H2O2 dengan kehadiran PhG untuk 24 h dan daya maju sel kemudian dinilai oleh ujian MTT; pelepasan laktat dehydrogenase (LDH) dan kandungan malondialdehid (MDA) juga diukur. Keadaan optimum untuk menubuhkanIKLANmodel adalah rawatan sel PC12 dengan 0.5 μM Aβ1-42 untuk 48 h, atau dengan 25 μM H2O2 dibubarkan dalam DMEM dengan PBS. PhG pada kepekatan 5, 25 dan 50 μg/ ml meningkatkan daya maju dan mengurangkan pelepasan LDH dan MDA oleh sel PC12 yang cedera dengan Aβ1-42 atau H2O2. Kesimpulannya, model kecederaan sel PC12 yang disebabkan oleh Aβ1-42- dan H2O2 berjaya ditubuhkan. PhG terbukti mempunyai kesan neuroprotektif yang ketara terhadap kecederaan sel yang disebabkan oleh Aβ1-42- atau H2O2.

Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche tubulosa mempunyai banyak kesan, klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut

Pengenalan

Penyakit Alzheimer(IKLAN), gangguan neurodegeneratif dengan ciri-ciri klinikal kehilangan ingatan progresif dan gangguan fungsi kognitif (1), adalah punca demensia yang paling biasa di seluruh dunia (2). Kos kewangan sangat besar kerana kelaziman AD (3). Oleh itu, adalah penting untuk membangunkan cara yang sesuai untuk pengurusan dan pencegahanIKLAN.

PatogenesisIKLANberkait rapat dengan pengumpulan kusut neurofibrillary dan plak nyanyuk (SP) di kawasan otak yang terjejas (4,5). β-amyloid peptida (Aβ), komponen utama SP, telah dilaporkan mempunyai peranan penyebab dalam perkembanganIKLANseperti yang mempunyai kesan toksik pada sel neuron (6). Serpihan Aβ, termasuk Aβ1-40, Aβ25-35 dan Aβ1-42, telah dijana melalui perpecahan protein prekursor amiloid (7). Neurotoxicity Aβ1-42 didapati jauh lebih tinggi daripada Aβ25-35 dan Aβ1-40, dan Aβ1-42 mampu mendorongIKLANmodel (1,8-10). Tekanan oksidatif mungkin terlibat dalam patogenesisIKLANdan merupakan mekanisme utama yang mendasari neurotoksikcity yang disebabkan oleh Aβ (11-13). Beberapa kajian mencadangkan bahawa Aβ1-42 menyebabkan pengumpulan intraselular spesies oksigen reaktif (ROS), yang membawa kepada pengoksidaan lipid dan protein, kerosakan DNA dan pengaktifan isyarat pusat pemeriksaan kitaran sel (1,14,15). Jumlah H2O2 yang berlebihan boleh menyebabkan kerosakan oksidatif dan menyebabkan apoptosis sel PC12 (16). Oleh itu, mensasarkan tekanan oksidatif mungkin merupakan pendekatan yang menjanjikan untuk pembangunan strategi terapeutik untuk menghalang neurotoksikitas yang disebabkan oleh Aβ dalam AD.

Herba (H.)Cistanche, ubat herba Cina yang biasa digunakan di tanah besar China untuk menyuburkan buah pinggang dan menambah intipati dan darah, telah digunakan untuk merawat kehilangan ingatan dan sembelit nyanyuk (17). Phenylethanoid glikosida (PhG), salah satu konstituen utama di H.Cistanche, meningkatkan kemerosotan apoptosis neuron yang disebabkan oleh Aβ25-35 melalui kesan anti-oksida (18,19). Kajian terdahulu mengenal pasti lima komponen utama daripada jumlah PhG, iaituacteoside, 2'-acetylacteoside,echinacoside, cistanosides dan isoacteoside (20). Antara komponen ini,acteosideDanechinacosidetelah dilaporkan mempunyai kesan neuroprotektif pada neurotoksikcity yang disebabkan oleh Aβ25-35- atau H2O2 (21-23). Sebagai contoh, Wu et al (24) mencadangkan bahawa acteoside danechinacoside

Kata kunci:phenylethanoidglikosida, sel PC12, H2O2, β-amyloid peptide1-42, neuroprotection,cistanche

Bahan dan kaedah

Penyediaan PhG. Jumlah PhG telah diekstrak dari H.Cistancheseperti yang diterangkan sebelum ini (25). Batang kering udara H.Cistanchetelah serbuk dan diekstrak oleh percolation dengan 80% EtOH. Percolate disejat di bawah tekanan yang dikurangkan, diikuti dengan penggantungan semula dalam jumlah H2O2 yang sesuai (100 μmol / l). Campuran itu diasingkan pada lajur resin makroporous SP-825 (Mitsubishi Chemical, Tokyo, Jepun) dan dicairkan dengan 0, 30, 50, 70, dan 90% EtOH dalam air. Untuk mendapatkan pecahan kaya PhG, eluent EtOH 30-50% tertumpu dan dikeringkan di bawah tekanan yang dikurangkan. Spektrofotometri Ultraviolet (UV) telah dilakukan untuk menentukan jumlah PhG. Kandungan echinacoside dan acteoside dihalang- dilombong oleh kromatografi cecair tekanan tinggi mengikut protokol sebelumnya (26). Lajur Hypersil ODS-2 (4.6x250 mm, 5 μm; Dalian Elite Analytical Instruments, Co., Ltd., Dalian, China) digunakan dan dikekalkan pada suhu bilik. Fasa mudah alih adalah metil cyanides dan air yang mengandungi 0.4% asid fosforik (v / v; Sigma-Aldrich; Merck KGaA, Darmstadt, Jerman). Kadar aliran ialah 0.75 ml/min dan panjang gelombang ditetapkan kepada 333 nm.

Budaya sel dan rawatan dadah. Barisan sel pheochromocytoma tikus PC12 disediakan oleh Dr He Chunhui, Sekolah Perubatan, Universiti Perubatan Xinjiang (Urumqi, China). Sel-sel telah dikulturkan dalam medium Eagle yang diubahsuai Dulbecco (DMEM; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, Amerika Syarikat) mengandungi 10% serum lembu janin (Sangon Biotech Co. Ltd., Shanghai, China), 100 U/ml penisilin, dan 100 U/ml streptomycins dalam inkubator pada 37°C yang mengandungi 5% CO2 dan 95% udara. Apabila mencapai 80% pertemuan, sel-sel telah dirawat dengan 0.25% trypsin dan laluan.

Untuk menghapuskan gangguan ubat itu sendiri pada pertumbuhan sel PC12, percubaan ketoksikan telah dilakukan. Secara ringkas, sel PC12 (sel 3x104 / ml) dibenih dalam plat 96-baik pada 100 μl / baik dan diinkubasi pada 37 ° C semalam. Selepas membuang supernatant, 200 μl lengkap DMEM telah ditambah dalam kumpulan kosong, manakala sel-sel dalam kumpulan intervensi dirawat oleh PhG pada pelbagai dos (5, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, dan 200 μg/ml). Berikutan inkubasi sel pada 37° C untuk 48 h, 20 μl penyelesaian MTT (Sigma-Aldrich; Merck KGaA) telah ditambah kepada setiap telaga. Selepas inkubasi selama 4 h, supernatant dibuang dan 150 μl dimethylsulfoxide ditambah setiap telaga, diikuti dengan pergolakan selama 10 minit. Nilai ketumpatan optik (OD) pada 490 nm dikesan menggunakan pembaca plat ELISA.

Aβ1- 42-disebabkan kecederaan sel PC12. Aβ1-42 peptida yang dibeli daripada Bioss Biotech (Beijing, China) dibubarkan dalam air (100 μg/ml). Selepas itu, campuran itu diinkubasi pada 37 ° C selama 4 hari dan disimpan pada 4 ° C sebelum digunakan.

Sel PC12 dibenih dalam plat 96-baik (3xl04 sel dalam 100 μl per telaga). Selepas budaya untuk 24 h untuk pematuhan, 50 μl Aβ1-42 pada pelbagai kepekatan akhir (0, 0.25, 0.5, 1, 1.5 atau 2 μM) dibubarkan dalam DMEM bebas serum ditambah, diikuti oleh inkubasi untuk 24, 48, 72 atau 96 h. Daya maju sel dinilai oleh ujian MTT. Kepekatan Aβ1-42 yang optimum adalah 0.5 ditentukan untuk menjadi μM.

Sel PC12 (3xl04 sel per telaga) dirawat dengan pelbagai dos PhG (0, 0.5, 5, 25, atau 50 μg / ml) dengan kehadiran 0.5 μM Aβ1-42 untuk 24 h. Daya maju sel dinilai oleh ujian MTT.

Kecederaan sel PC12 yang disebabkan oleh H2O2. Sel PC12 bersalut benih dalam plat 96-baik (3xl04 sel dalam 100 μl per telaga). Selepas memupuk selama 24 h untuk pematuhan, 100 μl H2O2 pada pelbagai kepekatan akhir (0, 25, 50, 100, 200, 300, 400, dan 500 μM) dibubarkan dalam DMEM dengan atau tanpa PBS (0.01 mol /l) ditambah, diikuti dengan inkubasi selama 24 jam. Daya maju sel dinilai oleh ujian MTT. Kepekatan dan pelarut H2O2 yang optimum telah ditentukan untuk menubuhkan model in vitro AD.

Sel PC12 (3xl04 sel per telaga) dirawat dengan pelbagai dos PhG (0, 0.5, 5, 25 dan 50 μM). Selepas memupuk 24 h untuk pematuhan, sel PC12 dirawat dengan 100 μl H2O2 dibubarkan dalam DMEM dengan PBS di hadapan PhG untuk 24 h. Daya maju sel dinilai oleh ujian MTT.

Lactate dehydrogenase (LDH) melepaskan ujian. Kecederaan sel dinilai dengan mengukur aktiviti LDH dalam supernatant sel PC12 menggunakan kit LDH mengikut protokol pengeluar (kucing no. 20150604; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China). Secara ringkas, H2O dua suling, 0.2 μmol / ml asid pyruvic, penampan matriks, dan penimbal coenzyme I ditambah dalam urutan pada 48 h selepas rawatan dadah. Selepas inkubasi pada 37° C selama 15 minit, 2,4-dinitro-phenylhydrazine telah ditambah. Selepas itu, 250 μl daripada penyelesaian 0.4 M NaOH telah ditambah kepada setiap telaga. Supernatant dikumpulkan selepas inkubasi selama 30 minit pada suhu bilik. Penyerapan pada 450 nm kemudiannya diukur dengan pembaca mikroplate.

Pengukuran malondialdehid (MDA). MDA diukur dalam supernatant sel PC12 menggunakan kit komersial (kucing no. 20150604; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute) mengikut protokol pengeluar Secara ringkas, alkohol kering dan reagen lain telah ditambah dengan teratur, diikuti dengan inkubasi dalam mandi air pada 95 ° C selama 40 minit. Campuran itu disedekahkan pada 1,006 x g dan 25 ° C selama 10 minit selepas penyejukan. Supernatant kemudiannya digunakan untuk menentukan kandungan MDA. Penyerapan kemudiannya diukur dengan pembaca mikroplate pada 532 nm.

Penilaian kesan perlindungan echinacoside dan acteoside terhadap AD in vitro. Sel PC12 dibenih pada ketumpatan 3xl04 sel / baik dalam plat 96-baik (100 μl / baik). Sel-sel telah diinkubasi dengan ubat-ubatan termasuk echinacoside (kucing no. 111670-200503; Institut Kebangsaan untuk Kawalan Makanan dan Dadah, Beijing, China) dan acetonida (kucing no. 111530-200505; Institut Kebangsaan untuk Kawalan Makanan dan Dadah) pada pelbagai kepekatan (0.5, 25 dan 50 μg / ml). Selepas itu, sel-sel dirawat dengan Aβ1-42 atau H2O2 selama 24 h dan daya maju sel diukur oleh ujian MTT.

Analisis statistik. Nilai dinyatakan sebagai min ± sisihan piawai. Ujian t pelajar digunakan untuk perbandingan antara kumpulan. Analisis statistik dilakukan menggunakan SPSS 18.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, Amerika Syarikat). P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Keputusan

Kuantifikasi PhG dari H. Cistanches. Spektra UV dariPhGsdiekstrak serta penyelesaian standardechinacosideDanacteosidetelah direkodkan, dan keputusan menunjukkan bahawa spektra UV adalah konsisten (Rajah 1). Spektrophotometri UV

menunjukkan bahawa kandungan PhG adalah 87.6%. Keputusan HPLC menunjukkan bahawa kandungan echinacoside dan acteoside masing-masing adalah 37.7 dan 17.8%, (Gamb. 2).

Penentuan kepekatan PhG yang ideal. Berbanding dengan kumpulan kosong, PhG pada 75, 100, 125, 150, 175 dan 200 μg/ml mempunyai kesan perencatan yang ketara pada sel PC12 (P<0.05), while="" phg="" at="" 5,="" 25="" and="" 50="" µg/ml="" showed="" low="" toxicity="" on="" pc12="" cells,="" and="" the="" cell="" viability="" was="">80% (Gamb. 3). Oleh itu, PhG pada kepekatan 5, 25, dan 50 μg / ml digunakan untuk merawat sel PC12 dalam eksperimen berikutnya kerana tidak menjejaskan daya maju sel.

Kecederaan sel PC12 yang disebabkan oleh Aβ1-42. Berbanding dengan kumpulan kawalan, daya maju sel dalam kumpulan kecederaan 0.5 μM Aβ1-42 adalah 63% (P<0.05). the="" cell="" viability="" was="" decreased="" by="" aβ1-42="" in="" a="" concentration-dependent="" manner,="" and="" the="" viability="" was=""><50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups="" (fig.="" 4).="" thus,="" treatment="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" in="" vitro="" ad="">

Aktiviti sel PC12 yang dirawat dengan 0.5 μM Aβ1-42 dengan kehadiran dos PhG yang selamat (5, 25, dan 50 μg / ml) untuk 24 h juga ditentukan. Berbanding dengan kumpulan model (P<0.01), phgs="" showed="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" rescued="" by="" phgs="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (fig.="">

Kecederaan sel PC12 yang disebabkan oleh H2O2. Daya maju sel PC12 yang dirawat dengan 25 μM H2O2 dibubarkan dalam DMEM dengan PBS adalah 56.43%. Daya maju sel PC12 yang dirawat dengan 200 μM H2O2 dibubarkan dalam DMEM tanpa PBS adalah 71.64% (Jadual I). Oleh itu, sel PC12 yang dirawat dengan 25 μM H2O2 dibubarkan dalam DMEM dengan PBS dipilih sebagai keadaan optimum untuk menubuhkan model AD.

Berbanding dengan kumpulan kawalan, daya maju sel dalam kumpulan model adalah 48.8% (P<0.05). compared="" with="" the="" model="" group,="" phgs="" had="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" dose-dependently="" increased="">

PhG, dan daya maju sel PC12 yang dirawat dengan PhG pada kepekatan 5, 25 dan 50 μg / ml adalah 54, 57 dan 64%, masing-masing (Jadual II).

PhG menghalang pelepasan LDH yang disebabkan oleh kecederaan oleh sel PC12. Berbanding dengan kumpulan kawalan, kandungan LDH supernatant sel PC12 yang cedera telah meningkat, yang dihalang oleh PhG dengan cara yang bergantung kepada kepekatan. Keputusan ini menunjukkan bahawa PhG mempunyai kesan neuroprotektif yang ketara pada sel PC12 (Gamb. 6).

Jadual I. Daya maju sel (%) selepas rawatan H2O2.

Jadual II. Daya maju sel selepas gangguan dadah.

dihalang oleh PhG dengan cara yang bergantung kepada tumpuan. Keputusan ini menunjukkan bahawa PhG mempunyai kesan neuroprotektif yang ketara pada sel PC12 (Gamb. 7).

PhG dan komponennya echinacoside dan acteoside menyelamatkan daya maju sel PC12 yang cedera. Berbanding dengan kumpulan model, rawatan dengan acteoside dengan ketara meningkatkan daya maju sel PC12 Aβ1-42 yang cedera dengan cara yang bergantung kepada dos. PhG dan echinacoside juga meningkatkan daya maju sel PC12 Aβ1-42 yang cedera pada semua kepekatan yang diuji (Rajah 8A).

**P<0.05, vs.="" model="" group.="" aβ,="" â-amyloid="" peptide;="" phgs,="" phenylethanoid="" glycosides;="" ech,="" echinacoside;="" as,="">

Berbanding dengan kumpulan model, acteoside dengan ketara meningkatkan daya maju sel PC12 yang dirawat dengan H2O2. PhG juga meningkatkan daya maju sel PC12 yang dirawat dengan H2O2, manakala kesannya tidak ketara pada kepekatan 5 dan 25 μg/ ml (Gamb. 8B). Di samping itu, echinacoside meningkatkan daya maju sel pada 25 μg / ml.

Kesimpulannya, acteoside, PhGs dan echinacoside memberikan kesan neuroprotektif yang ketara pada sel PC12 yang mengalami kecederaan dengan Aβ1-42 atau H2O2.

Perbincangan

Tekanan oksidatif adalah mekanisme utama yang mendasari neurotoksikcity yang dimediasi Aβ dalam AD (11-13). Oleh itu, menyasarkan tekanan oksidatif mungkin mewakili pendekatan untuk rawatan AD. Dalam kajian ini, model in vitro AD yang terdiri daripada kecederaan sel PC12 yang disebabkan oleh Aβ1-42- dan H2O2 berjaya ditubuhkan. Keputusan ujian MTT, LDH, dan MDA menunjukkan bahawa PhG meningkatkan daya maju sel, dan mengurangkan pelepasan LDH dan MDA oleh sel PC12 yang mengalami kecederaan. Dapat disimpulkan bahawa PhG mempunyai kesan neuroprotektif yang ketara pada sel PC12.

Untuk mengurangkan kesan PhG sendiri pada pertumbuhan sel PC12 dan mencegah percambahan yang tidak normal, dos PhG yang selamat ditentukan dalam ujian saringan. Keputusan menunjukkan bahawa PhG pada 75, 100, 125, 150, 175 dan 200 μg/ml mempunyai kesan perencatan yang ketara pada sel PC12 (P<0.05,><0.01), while="" cell="" viability="" remained="">80% pada kepekatan 5, 25 dan 50 μg / ml. Oleh itu, PhG pada kepekatan 5, 25, dan 50 μg / ml adalah selamat untuk sel PC12.

Kecederaan oleh Aβ1-42 dipengaruhi oleh faktor-faktor tertentu, termasuk pelarut, masa inkubasi, dan kualiti produk. Dalam kajian ini, Aβ1-42 peptida dibubarkan dalam air (100 μg / ml) dan diinkubasi pada 37 ° C selama 4 hari dalam inkubator CO2 sebelum digunakan. Sel PC12 dirawat dengan Aβ1-42 pada kepekatan 0.5, 1, 1.5, dan 2 μM. Keputusan menunjukkan bahawa daya maju sel menurun dengan peningkatan Aβ1-42, dan daya maju adalah<50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups.="" thus,="" treatment="" of="" pc12="" cells="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" ad="" model.="" aβ25-35="" has="" been="" commonly="" used="" to="" establish="" ad="" models="" due="" to="" its="" low="" cost="" and="" simple="" operation="" (27-29).="" the="" neurotoxicity="" of="" aβ1-42="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" aβ25-35,="" and="" aβ1-42="" is,="" therefore,="" the="" optimal="" aβ="" fragment="" for="" establishing="" an="" ad="" model="">

H2O2 adalah pengoksida dan H2O2 yang berlebihan boleh menyebabkan kerosakan oksidatif dan menyebabkan apoptosis sel (30). Dalam kajian ini, sel PC12 dirawat dengan 25-500 μM H2O2 dibubarkan dalam DMEM dengan atau tanpa PBS. Keputusan menunjukkan bahawa H2O2 dibubarkan dalam DMEM tanpa PBS menyebabkan percambahan sel PC12 yang tidak normal. Oleh itu, rawatan sel PC12 dengan 25 μM H2O2 dibubarkan dalam DMEM dengan PBS adalah keadaan optimum untuk menubuhkan model AD. Kecederaan yang disebabkan oleh aβ1-42 adalah lebih besar daripada kecederaan yang disebabkan oleh H2O2 kerana kestabilan H2O2 dan kesan pelarut yang lemah.

Apabila sel rosak, kebocoran LDH ke dalam medium budaya meningkat dengan ketara. ROS diketahui menyebabkan pengeluaran MDA. Oleh itu, kandungan MDA dan LDH mencerminkan jumlah kerosakan oksidatif. Dalam kajian ini, aktiviti LDH dan MDA yang disebabkan oleh kerosakan telah dikurangkan dengan peningkatan dos PhG. Keputusan ini menunjukkan bahawa PhG mempunyai kesan neuroprotektif yang ketara pada sel PC12. Ujian MTT menunjukkan bahawa PhGs menunjukkan kesan neuroprotektif yang bergantung kepada dos pada sel PC12.

Kesimpulannya, model in vitro AD yang terdiri daripada kecederaan sel PC12 yang disebabkan oleh Aβ1-42- dan H2O2 berjaya ditubuhkan. Rawatan dengan PhG meningkatkan daya maju sel dan mengurangkan pelepasan LDH dan MDA oleh sel PC12 yang dirawat dengan Aβ1-42 atau H2O2. PhG mempunyai kesan neuroprotektif yang ketara pada kecederaan sel yang disebabkan oleh Aβ1-42- atau H2O2.

Rujukan

1. Qu M, Zhou Z, Xu S, Chen C, Yu Z, dan Wang D: Mortalin overexpression melemahkan neurotoxicity yang disebabkan oleh beta-amyloid dalam sel SH-SY5Y. Otak Res 1368: 336-345, 2011.

2. Uzun S, Kozumplik O, dan Folnegović-Small V: demensia Alzheimer: ulasan data semasa. Collegium antropologicum 35: 1333-1337, 2011.

3. Brookmeyer R, Johnson E, Ziegler-Graham K, dan Arrighi HM: Meramalkan beban global penyakit Alzheimer. Alzheimer & demensia 3: 186-191, 2007.

4. Castellani RJ, Rolston RK dan Smith MA: Penyakit Alzheimer. Penyakit-sebulan 56: 484-546, 2010.

5. Ahli Parlimen Mattson: Laluan ke arah dan jauh dari penyakit Alzheimer. Alam 430: 631-639, 2004.

6. Gouras GK, Tsai J, Naslund J, et al: Intraneuronal Aβ42 accumu- lation dalam otak manusia. Jurnal patologi Amerika 156: 15-20, 2000.

7. Shen C, Chen Y, Liu H, et al: Hidrogen peroksida menggalakkan pengeluaran Aβ melalui pengaktifan γ-secretase yang bergantung kepada JNK. Jurnal Kimia Biologi 283: 17721-17730, 2008.

8. Shih P-H dan Wu C-H, Yeh C-T dan Yen G-C: Kesan perlindungan antosianin terhadap kerosakan yang disebabkan oleh amiloid β-peptida dalam sel Neuro-2A. Jurnal kimia pertanian dan makanan 59: 1683-1689, 2011.

9. Figueiredo CP, Bicca MA, Latini A, Prediger R, Medeiros R, dan Calixto JB: Asid folik ditambah α-tocopherol mengurangkan neurotoxicity yang disebabkan oleh amyloid-β melalui modulasi aktiviti kompleks mitokondria. Jurnal penyakit Alzheimer: JAD 24: 61-75, 2010.

10. Dumont M, Lin MT, dan Beal MF: Mitokondria dan strategi terapeutik yang disasarkan antioksidan untuk penyakit Alzheimer. Jurnal penyakit Alzheimer: JAD 20: S633, 2010.

11. Sonnen JA, Breitner JC, Lovell MA, Markesbery WR, Quinn JF, dan Montine TJ: Kerosakan yang dimediasi radikal bebas ke otak dalam penyakit Alzheimer dan model tetikus transgeniknya. Biologi dan Perubatan Radikal Percuma 45: 219-230, 2008.

12. Lin MT dan Beal MF: Disfungsi mitokondrial dan tekanan oksidatif dalam penyakit neurodegeneratif. Alam 443: 787-795, 2006.

13. Trushina E dan McMurray C: Tekanan oksidatif dan disfungsi mitokondria dalam penyakit neurodegeneratif. Neurosains 145: 1233-1248, 2007.

14. Huang S-H, Lin C-M, dan Chiang B-H: Kesan perlindungan ekstrak Angelica Sinensis pada amiloid β-peptida yang disebabkan oleh neuro-toksik. Phytomedicine 15: 710-721, 2008.

15. Burhans WC dan Heintz NH: Kitaran sel adalah kitaran redoks: menghubungkan sasaran khusus fasa ke nasib sel. Biologi dan Perubatan Radikal Percuma 47: 1282-1293, 2009.

16. Xue HY, Gao GZ, Lin QY, Jin LJ, dan Xu YP: Kesan perlindungan aucubin pada apoptosis yang disebabkan oleh H O dalam sel PC12. Fisioterapi

18. Liu, F-x Wang, X-w Luo L, dan Xin H, Na B dan Wang X-f: Kesan glikosida cistanche pada pembelajaran dan ingatan dalam penyakit Alzheimer yang disebabkan oleh beta-amyloid peptida pada tikus dan mekanisme yang mungkin. Buletin Farmakologi Cina 22: 595, 2006.

19. Bao B, Tang X, Tian H, Tong Y, Wu W, dan Hong Y: Aktiviti antioksidan ekstrak dari padang pasir Cistanche tubulosa (Schrenk) R. Wright Shanghai J Tradit Chin Med 44: 68-71, 2010.

20. Jiang Y, Li S, Wang Y, Chen X, dan Tu P: Pembezaan Herba Cistanches dengan cap jari dengan cap jari dengan spektrometri jisim pengesanan kromatografi-diod cecair berprestasi tinggi. Jurnal Kromatografi A 1216: 2156-2162, 2009.