Diet Fosforus Tinggi Mendorong Penyelarasan Ekspresi MRNA Bmp2 Dan Spp1 dalam Buah Pinggang Tikus

Untuk menjelaskan mekanisme pembangunannefrokalsinosisdisebabkan oleh adiet tinggi fosforus (P)., kami memberi tumpuan kepada protein berkaitan tulang seperti protein morfogenetik tulang 2 dan osteopontin. Kajian ini menyiasat kesan diet P tinggi pada ekspresi mRNA Bmp2 dan Spp1 dalam buah pinggang tikus. Tikus Wistar dibahagikan kepada dua kumpulan dan diberi makan diet kawalan (kumpulan kawalan) atau diet P tinggi (kumpulan P tinggi).Kalsium buah pinggangdan kepekatan P meningkat dengan ketara dalam kumpulan P tinggi berbanding kumpulan kawalan. Ekspresi mRNA kedua-dua Bmp2 dan Spp1 meningkat dengan ketara dalam kumpulan P tinggi berbanding kumpulan kawalan. Keputusan ini menunjukkan bahawa diet P tinggi mendorong peningkatan Bmp2 dan Spp1mRNA dalam buah pinggang.

Kata kunci:diet tinggi fosforus, nefrokalsinosis, Bmp2, Spp1,buah pinggang, tikus

KLIK DI SINI UNTUK MENDAPATKAN EKSTRAK CISTANCHE ORGANIK SEMULAJADI DENGAN 25% ECHINACOSIDE DAN 9% ACTEOSIDE UNTUK FUNGSI BUAH PINGGANG

pengenalan

Nefrokalsinosisdicirikan oleh deposit kalsium (Ca) dalamparenkim buah pinggang. Fosforus pemakanan(P), khususnya, merupakan faktor penting dalam perkembangan gangguan ini. Pentadbiran diet P tinggi telah terbukti menyebabkan peningkatan kepekatan Ca dalambuah pinggangdan deposit Ca dalam parenkim buah pinggang1-6). Walaupun kesan diet P tinggi terhadap perkembangan nephrocalcinosis telah menjadi tumpuan kajian berterusan, sedikit yang diketahui tentang mekanisme yang bertanggungjawab untuk perkembangan gangguan ini. Oleh itu, penyelesaian tepat pada masanya untuk isu ini diperlukan.

Kami melaporkan bahawa selepas pemeriksaan histologi menggunakan mikroskop elektron penghantaran, kristal berbentuk jarum seperti hidroksiapatit diperhatikan dalam tubul renal tikus yang diberi diet P tinggi6, 7). Mikroanalisis sinar-X menunjukkan bahawa deposit Ca yang disebabkan oleh diet P tinggi terutamanya terdiri daripada Ca dan P7). Keputusan ini mendedahkan bahawa deposit Ca yang disebabkan oleh diet P tinggi adalah satu bentuk hidroksiapatit. Berdasarkan penemuan ini, kami menganggap bahawa perkembangan nephrocalcinosis dikawal oleh mekanisme yang serupa dengan pembentukan tulang. Oleh itu, kajian ini memberi tumpuan kepada protein berkaitan tulang seperti protein morfogenetik tulang 2 (BMP2). BMP2 ialah faktor osteogenik yang mempamerkan aktiviti mendorong osteogenesis, 9). Perlu diperhatikan bahawa BMP2 dikenal pasti sebagai faktor yang mendorong pembentukan tulang ektopik10, 11). Oleh itu, kami membuat hipotesis bahawa jika BMP2 memainkan peranan penting dalam perkembangan nephrocalcinosis, ekspresi protein ini dalam buah pinggang akan dikawal oleh diet P tinggi. Kajian ini bertujuan untuk menentukan sama ada diet P tinggi mempengaruhi ekspresi mRNABmp2 dalam buah pinggang.

Sementara itu, kajian terdahulu kami melaporkan bahawa diet P tinggi meningkatkan ekspresi osteopontin (OPN) dalam tubul renal menggunakan analisis imunohistokimia, menunjukkan bahawa OPN mungkin terlibat dalam pembangunan deposit Ca yang disebabkan oleh diet P tinggi12). Oleh itu, kami menyiasat perubahan dalam ekspresi mRNA Spp1 dalam buah pinggang juga.

Keputusan kajian ini mungkin memberikan pandangan yang berharga tentang mekanisme yang bertanggungjawab untuk perkembangan nefrokalsinosis yang disebabkan oleh diet P tinggi.

Bahan dan kaedah

Haiwan dan diet. Kajian ini telah diluluskan oleh Jawatankuasa Penggunaan Haiwan Universiti Pertanian Tokyo, dan semua haiwan telah diselenggara oleh garis panduan universiti untuk penjagaan dan penggunaan haiwan makmal (No. Kelulusan 300049).

Adalah penting untuk diperhatikan bahawa tikus betina membina nefrokalsinosis lebih mudah daripada tikus jantan13, 14). Di samping itu, kami melaporkan bahawa diet P tinggi meningkatkan ekspresi OPN dalam tubul renal tikus betina12). Kajian ini kemudiannya menggunakan tikus betina sebagai haiwan eksperimen. Tikus Wistar betina berusia empat minggu (Clea Japan, Tokyo, Jepun) ditempatkan di dalam sangkar jaring dawai keluli tahan karat individu. Semasa tempoh percubaan, sangkar diletakkan di dalam bilik dengan pencahayaan terkawal di bawah cahaya 12-h : kitaran gelap (cahaya, 0800-2000} h), suhu 22 ± 1 darjah dan kelembapan relatif 60% hingga 65%.

Komposisi diet percubaan ditunjukkan dalam Jadual 1. Diet eksperimen disediakan merujuk kepada diet AIN-93G15). Diet eksperimen mengandungi dua kepekatan P yang berbeza (diet kawalan, 0.3% ; diet tinggi P, 1.5%). Kepekatan P dalam diet P tinggi ditetapkan kepada 1.5%, kerana kajian terdahulu kami mendapati bahawa akepekatan P pemakanansebanyak 1.5% menyebabkan nefrokalsinosis teruk6, 7, 12, 14) dan ekspresi OPN yang tinggi12). Semua diet eksperimen mempunyai kepekatan Ca (0} yang sama.5%). Kepekatan P dan Ca, seperti yang ditentukan oleh analisis diet eksperimen, ditunjukkan dalam Jadual 1. Sebelum permulaan kajian, semua tikus telah disesuaikan selama 7 hari, di mana mereka diberi akses percuma kepada diet kawalan dan air ternyahion. . Selepas tempoh penyesuaian, tikus dibahagikan secara rawak kepada dua kumpulan dengan berat badan min yang sama dan diberi makan sama ada diet kawalan (kumpulan kawalan) atau diet tinggi P (kumpulan P tinggi) selama 14 hari. Tikus diberi akses percuma kepada diet eksperimen yang ditetapkan dan air ternyahion sepanjang tempoh percubaan. Pada penghujung tempoh percubaan, tikus telah dieutanasi dengan suntikan intraperitoneal campuran anestetik (medetomidine, midazolam dan butorphanol) dan sampel darah dan buah pinggang telah dikumpulkan untuk analisis. Sampel darah disentrifugasi dan supernatan digunakan sebagai sampel serum. Buah pinggang dikeluarkan dan kapsul buah pinggang dibuang. Thesampel serum dan buah pinggangdisimpan pada －80 darjah sehingga diperlukan untuk analisis. Buah pinggang kanan digunakan untuk analisis kuantitatif mRNA Bmp2 dan Spp1, dan buah pinggang kiri digunakan untuk analisis kepekatan Ca dan P.

Analisis mineral.

Sampel diet eksperimen dan buah pinggang telah diaburkan pada 550 darjah selama 48 jam dalam relau meredam, dan mineral diekstrak dalam 1 mol/L HCl untuk analisis. Kepekatan Ca dalam diet eksperimen dan buah pinggang ditentukan oleh spektrofotometri penyerapan atom16). Kepekatan P dalam diet eksperimen dan buah pinggang dianalisis menggunakan kaedah Gomori17).

Analisis kuantitatif mRNA Bmp2 dan Spp1.

Jumlah RNA telah diasingkan daripada buah pinggang yang dihomogenkan menggunakan reagen TRIzol (Life Technologies, CA, USA) mengikut spesifikasi pengeluar. Jumlah dan ketulenan RNA telah dinilai menggunakan NanoDrop 2000c (Thermo Fisher Scientific, MA, USA). cDNA telah disintesis menggunakan SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix untuk qRT-PCR (Life Technologies) dan kemudian tertakluk kepada RT PCR masa nyata kuantitatif menggunakan SYBR Select Master Mix (Life Technologies). Primer khusus18-20) digunakan untuk analisis Bmp2 (ke hadapan, 5'-ACCGTGCTAGCTTCCATCAC-3' ; terbalik, 5'-TTCCTGCATTTGTTCCCGAAA-3'), Spp1 (ke hadapan, 5'- TGAGACTGGCAGTGGTTTGC-3' ; belakang, 5'-CCACTTTCACCGGGAGACA-3') dan Gapdh (ke hadapan, 5'-TGGGAAGCTGGTCATCAAC-3' ; belakang, 5'-GCAT CACCCCATTTGA}}TT{{24} '). Reaksi PCR masa nyata dilakukan menggunakan Sistem PCR Masa Nyata StepOne (Applied Biosystems, CA, Amerika Syarikat), dan tahap ekspresi mRNA telah dinormalkan kepada tahap mRNA Gapdh. Nilai kumpulan kawalan dianggap sebagai 1.00.

Analisis statistik.

Keputusan dibentangkan sebagai min ± SEM untuk setiap kumpulan 6 tikus. Selepas menjalankan ujian-F untuk menentukan kehomogenan varians, ujian-t Pelajar digunakan untuk menentukan perbezaan yang signifikan antara kedua-dua kumpulan. Jika kehomogenan varians tidak sama, ujian-t Welch digunakan dan bukannya ujian-t Pelajar. Perbezaan dianggap ketara pada p ＜ 0.05

Keputusan

Berat badan, pengambilan makanan, dan analisis serum.

Berat badan akhir dan pengambilan makanan telah menurun dengan ketara dalam kumpulan P tinggi berbanding kumpulan kawalan (Jadual 2).

Berat buah pinggang dan kepekatan mineral.

Berat basah dan kering buah pinggang meningkat dengan ketara dalam kumpulan P tinggi berbanding kumpulan kawalan (Jadual 3). Kepekatan Ca dan P buah pinggang juga meningkat dengan ketara dalam kumpulan P tinggi berbanding kumpulan kawalan.

Ekspresi mRNA Bmp2 dan Spp1 Renal. Tahap mRNA Bmp2 dalam kumpulan P tinggi meningkat dengan ketara berbanding dengan kumpulan kawalan (Rajah 1A). Ekspresi mRNA Spp1 juga meningkat dengan ketara dalam kumpulan P tinggi berbanding kumpulan kawalan (Rajah 1B).

Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-Pengeksport cistanche terbesar di China:

E-mel:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Beli Untuk Butiran Spesifikasi Lebih Lanjut:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop