Diet Tinggi Lemak Memburukkan Buah Pinggang Iskemia-Kecederaan Reperfusi

untuk maklumat lanjut:ali.ma@wecistanche.com

BAHAGIAN Ⅰ: Pengubahsuaian Pemakanan Mengubah Mikromilieu Imunologi Intrarenal dan Kerentanan kepada Iskemia Kecederaan Buah Pinggang Akut

Junseok Jeon'f, Kyungho Leef, Kyeong Eun Yang, Jung Eun Lee, Ghee Young Kwon, Wooseong Huh & et al.

PENGENALAN

Iskemiakecederaan buah pinggang akut(AKI) adalah penyebab AKI yang paling biasa dan kerap menyumbang kepada perkembangan dan perkembanganpenyakit buah pinggang yang kronik(CKD) dalam kedua-dua asli dan pemindahanbuah pinggang(1,2). Kecederaan iskemia-reperfusi(IRI) mendorong kecederaan rasuah, akibat yang tidak dapat dielakkan daripadabuah pinggangpemindahan (3). Peranan penting mekanisme imunologi, di luar kecederaan hipoksia mudah, dalam patogenesis AKI iskemia telah ditunjukkan dalam banyak kajian (4,5). Dalam post-iskemiabuah pinggangmengikuti IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi), tindak balas keradangan yang kuat yang disebabkan oleh kedua-dua sistem imun semula jadi dan adaptif mengakibatkankerosakan buah pinggang(6). Sebagai tambahan kepada penyusupan sel imun yang beredar, lingkungan mikro imunologi intrarenal, termasuk sel imun intrarenal pemastautin(7) dan reseptor seperti Tol (TLR) pada tubul renal(8), menyumbang dengan ketara kepada kecederaan buah pinggang berikutan IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi) (6).

Kajian terkini telah melaporkan hubungan antara diet dan fungsi imun (9). Perubahan dalam komposisi pemakanan berpotensi untuk memburukkan atau mengurangkan keterukan penyakit di mana mekanisme imun memainkan peranan penting dalam patogenesis, seperti hipertensi dalam model murine hipertensi sensitif garam atau berkaitan obesiti.kerosakan buah pinggangdidalamtinggi lemak(HF) model obesiti akibat diet(10-12). Walau bagaimanapun, ia masih belum ditentukan sama ada pengubahsuaian diet boleh mengubah lingkungan mikro imunologi intrarenal dan kerentanan kepada AKI iskemia, walaupun peranan campur tangan diet dalam CKD telah dilaporkan (13). Memandangkan potensi kesan pencegahan atau terapeutik campur tangan diet dalam AKI iskemia, adalah penting untuk menyiasat kesan pengubahsuaian diet dalam keadaan normal.buah pinggang.

Dalam kajian ini, kami bertujuan untuk mendedahkan kesan HF(tinggi lemak) atau diet garam tinggi (HS) pada buah pinggang normal dan perkembangan AKI iskemia dengan tumpuan pada lingkungan mikro imunologi intrarenal.

Klik untuk organikCISTANCHE UNTUK PENYAKIT BUAH PINGGANG

BAHAN DAN KAEDAH

Pengubahsuaian Pemakanan dan IRI Renal(Kecederaan iskemia-reperfusi)Model

Kajian ini telah diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Pusat Perubatan Samsung dan Lembaga Semakan Institusi Pusat Perubatan Samsung (IACUC No.20180314002) dan telah dilakukan dengan mematuhi garis panduan eksperimen haiwan: pelaporan dalam vivo(14,15). Tikus C57BL/6 jantan 9-minggu telah dibeli daripada Orient Bio Inc. (Seongnam, Kyoungki-do, Korea). Semua tikus ditempatkan di kemudahan penghalang bebas patogen tertentu.

Kami menyiasat kesan HF(tinggi lemak)atau diet HS pada buah pinggang normal dan buah pinggang pasca-iskemik dalam model AKI iskemia yang disebabkan oleh IRI dua hala(Kecederaan iskemia-reperfusi)pembedahan. Dalam setiap model, tikus secara rawak diperuntukkan kepada empat rejimen diet; diet biasa (0.25 peratus NaCl mengikut berat, 10 peratus lemak mengikut kalori), HF(tinggi lemak) diet(0.25 peratus NaCl mengikut berat, 60 peratus lemak mengikut kalori), HS diet (8 peratus NaCl mengikut berat, 10 peratus lemak mengikut kalori) dan diet tinggi lemak dengan tinggi garam(HF(tinggi lemak)ditambah HS)(8 peratus NaCl mengikut berat, 60 peratus lemak mengikut kalori). Komposisi diet biasa dan HS ialah 20 peratus protein (sumber utama kasein), 70 peratus karbohidrat (sumber utama sukrosa), dan 10 peratus lemak (sumber utama minyak kacang soya)(D12450B,Research Diets, New Brunswick, NJ). Komposisi HF(tinggi lemak)diet dan HF(tinggi lemak) ditambah dengan diet HS ialah 20 peratus protein (sumber utama kasein), 20 peratus karbohidrat (sumber utama Lodex 10), dan 60 peratus lemak (sumber utama lemak babi)(D12492, Diet Penyelidikan). Semua rejimen diet mempunyai kepekatan mineral dan vitamin yang sama kecuali NaCl.

Bagi tikus biasa, setiap kumpulan dikekalkan pada diet yang diperuntukkan selama 42 hari dan kemudian beralih kepada diet biasa selama 14 hari.

Mengenai model AKI iskemia, kami menggunakan IRI murine yang telah ditetapkan(Kecederaan iskemia-reperfusi)model dengan pendekatan laparotomi (16, 17). IRI dua hala(Kecederaan iskemia-reperfusi)telah diinduksi selepas 1-minggu atau 6-tempoh minggu pengubahsuaian diet. Secara ringkas, tikus telah dibius dengan suntikan intraperitoneal ketamin (100 mg/kg; Yuhan, Seoul, Korea) dan xylazine (10 mg/kg; Bayer, Leverkusen, Jerman). Selepas hirisan garis tengah perut, kedua-dua pedikel buah pinggang diasingkan dan diapit selama 27 minit dengan pengapit mikrovaskular (Instrumen Pembedahan Roboz, Gaithersburg, MD). Semasa operasi, tikus yang telah dibius disimpan dengan baik dengan garam steril yang hangat dan diletakkan di atas meja pemanasan yang dikawal secara termostatik. Selepas 27 minit, pengapit mikrovaskular dilepaskan dari pedikel buah pinggang untuk reperfusi. Selepas menggunakan jahitan, tikus dibenarkan pulih dengan akses percuma kepada diet dan air yang diperuntukkan. Semua tikus telah dikorbankan pada hari ke-2 selepas IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi)operasi, dan buah pinggang selepas iskemia dituai selepas exsanguination.

CISTANCHE EKSTRAKBOLEH MENCEGAH BUAH PINGGANG DARIPADA KEROSAKAN

Penilaian Fungsi Buah Pinggang

Dalam tikus biasa, kepekatan nitrogen urea darah (BUN;Fujifilm, Bedford, UK) dan kreatinin plasma (Arbor Assays, Ann Arbor, MI) diukur dalam sampel plasma yang dikumpul daripada urat ekor secara bersiri pada hari 0,7,14 , 28,42, dan 56 selepas pengubahsuaian diet. Kit kolorimetrik telah digunakan mengikut kaedah yang disyorkan pengeluar. Dalam IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi)model, sampel plasma diukur pada hari 0, 1, dan 2 selepas operasi menggunakan kaedah yang sama.

Analisis Histologi Tisu

Dalam IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi)model, bahagian tisu buah pinggang selepas iskemik telah ditetapkan dengan 10 peratus penimbal formalin dan diwarnai dengan hematoxylin dan eosin. Seorang ahli patologi buah pinggang yang buta terhadap peruntukan diet mencatatkan nekrosis tubular renal dalam korteks dan medula luar buah pinggang selepas iskemia.

CD45 Imunohistokimia dan Analisis FAKS Tisu

Bahagian tisu buah pinggang tetap formalin telah diimunisasi untuk pengesanan CD45 seperti berikut. Bahagian-bahagian (4-tebal μm) telah dinyahparafinkan dengan xilena, dihidratkan semula dalam siri alkohol tergred dan diletakkan dalam larutan penimbal sitrat (pH6.0). Slaid diletakkan dalam periuk tekanan dan dipanaskan selama 10 minit untuk meningkatkan pengambilan antigen. Selepas penyejukan, bahagian buah pinggang direndam dalam larutan hidrogen peroksida (Dako, Carpinteria, CA) selama 30 minit untuk menyekat aktiviti peroksidase endogen, diikuti dengan pengeraman semalaman pada 4 darjah dengan blok protein bebas serum (Dako). Keesokan harinya, slaid diinkubasi dengan pencairan 1:100 antibodi monoklonal CD45 anti-tikus (BD Biosciences, San Jose, CA) selama 1 jam pada suhu bilik. Selepas dibilas, bahagian CD45-berwarna diinkubasi selama 30 minit pada suhu bilik dengan antibodi sekunder menggunakan kit Dako REAL EnVison (Dako). Selepas itu, 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (Dako) telah digunakan pada slaid untuk menghasilkan warna coklat, dan slaid diwarnakan balas dengan larutan hematoksilin Mayer (Dako).

Stesen kerja TissueFAXS (Tissue Gnostics,Vienna, Austria) telah digunakan untuk menganalisis dan mengira peratusan CD45-sel positif dalam sampel buah pinggang, seperti yang diterangkan sebelum ini (18).

Analisis Sitometri Aliran Sel Mononuklear yang Menyusup Buah Pinggang

Pengasingan sel mononuklear buah pinggang(KMNCs) adalah berdasarkan protokol yang telah ditetapkan(19). Ringkasnya, buah pinggang yang dinyahkapsul telah direndam dalam penimbal RPMI(Mediatech, Manassas, VA) yang mengandungi 5 peratus FBS dan terganggu secara mekanikal menggunakan Stomacher 80 Biomaster(Seward, Worthing , UK). Sampel ditapis, dibasuh dan digantung semula dalam 36 peratus Percoll (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) diikuti dengan tindanan lembut pada 72 peratus Percoll. Sampel telah disentrifugasi pada 1,000g selama 30 minit pada suhu bilik. KMNC dikumpul daripada antara muka 36 peratus dan 72 peratus Percoll.

KMNC terpencil telah digantung semula dalam penimbal FACS dan pra-inkubasi dengan antibodi anti-CD16/CD32 selama 10 minit untuk meminimumkan pengikatan tidak spesifik melalui reseptor Fc. KMNC telah diinkubasi dengan anti-tikus anti-CD3,CD4, CD8, CD19, CD21,CD25,CD44,CD45,CD62L,CD69,CD126,CD138,Gr-1, F4/80, FoxP3 dan NK1.1 (semua dari BD Biosciences, San Jose, CA) selama 25 minit pada 4 darjah , dibasuh dengan penimbal FACS, dan dibetulkan dengan larutan paraformaldehid 1 peratus. Sampel diperoleh menggunakan cytometer aliran BD FACSVerse. Data dianalisis menggunakan program FACSuite (BD Biosciences).

Ujian Multiplex Cytokine/Chemokine

Analisis sitokin berganda dan kemokin dalam keseluruhan ekstrak protein buah pinggang telah dijalankan menggunakan Kit Sitokin/Chemokine Mouse Milliplex MAP (Luminex, Austin, TX) mengikut arahan pengilang. Antibodi monoklonal anti-sitokin yang dikaitkan dengan mikrosfera yang menggabungkan sifat berbeza dua pewarna pendarfluor telah digunakan dalam ujian sitometri aliran berasaskan zarah berganda ini. Ujian kami direka bentuk untuk mengukur interleukin(I)-2;IL-4; IL-6; I-10;interferon (IFN)-y; monocyte chemoattractant protein(MCP)-1;dikawal pada pengaktifan, sel T normal diekspresikan dan dirembeskan (RANTES/CCL5); faktor nekrosis tumor(TNF)- ; dan faktor pertumbuhan endothelial vaskular(VEGF). Nilai setiap sitokin atau kemokin dinormalisasi dengan membahagikan kepekatan mentah (pg/ml) dengan kepekatan protein buah pinggang (mg/ml, diukur dengan menggunakan kit ujian protein Pierce BCA, Thermo Fisher Saintifik, Waltham, MA).

Analisis Western Blot bagi Reseptor Seperti Tol Intrarenal 2 dan 4

Reseptor seperti Tol Intrarenal 2 dan 4(TLR-2 dan TLR-4) telah dianalisis dengan analisis western blot. Menurut arahan pengilang, jumlah yang sama bagi keseluruhan ekstrak protein buah pinggang （30 ug） dipisahkan oleh elektroforesis pada sistem gel mini NuPAGE Bolt(Thermo Fisher Scientific). Gel telah dipindahkan ke membran nitroselulosa menggunakan Sistem Pemadaman Kering iBlot 2 (Thermo Fisher Scientific) selepas elektroforesis. Membran disekat dengan 5 peratus larutan garam tris-buffered susu skim dengan 0.1 peratus Tween20 (TBST) selama 1j pada suhu bilik dan kemudian diinkubasi semalaman pada suhu 4 darjah dengan salah satu daripada antibodi berikut: antibodi anti-TLR2 monoklonal tikus (MyBioSource, San Diego ,CA)atau antibodi anti-TLR4 (Novus Biologicals, Centennial, CO). Antibodi sekunder terkonjugasi peroksidase lobak digunakan selama 30 minit pada suhu bilik selepas dicuci dengan TBST. Isyarat telah divisualisasikan menggunakan sistem pengesanan Amersham ECL (GE Healthcare, Chicago, IL), mengikut arahan pengilang. Band telah dianalisis secara densitometrik menggunakan perisian ImageJ 1.8 (Wayne Rasband, Institut Kesihatan Nasional, MD) dan dinormalisasi terhadap keamatan jalur -actin yang sepadan sebagai kawalan dalaman.

HK-2 Model Hipoksia Sel dan Ujian Percambahan

Sel buah pinggang manusia-2(HK-2) (garisan cll epitelium tubul proksimal yang diabadikan daripada buah pinggang manusia dewasa normal) model hipoksia telah digunakan untuk kajian in vitro untuk menyiasat kesan HS atau HF(tinggi lemak) persekitaran pada tahap selular.

Sel buah pinggang manusia-2(HK-2) telah dibeli daripada American Type Culture Collection(CRL-2190, Manassas, VA) dan dikultur dalam media bebas serum keratinocyte (Thermo Fisher Scientific) ditambah dengan ekstrak pituitari lembu dan faktor pertumbuhan epidermis rekombinan manusia. Sel telah diinkubasi pada 37 darjah dalam suasana lembap sebanyak 5 peratus CO2 dengan media ditukar setiap 2-3 hari. Hipoksia disebabkan oleh pendedahan kepada 1 peratus O2 dan 5 peratus CO2 yang seimbang dengan nitrogen dalam inkubator berbilang gas(APM-30D,Astec,Fukuoka,Jepun) selama 48 jam.

HK-2 sel dibahagikan kepada empat kumpulan. Kumpulan pertama dan kedua adalah kawalan di bawah normoxia (21 peratus O2) dan hipoksia (1 peratus O2), masing-masing. Kumpulan ketiga dan keempat dirawat dengan tambahan NaCl 25 mM dan 1:250 pekat lipid cair (Thermo Fisher Scientific), masing-masing , sebelum dan selepas penghinaan hipoksik.

Tahap pembiakan sel HK{{0}} pada hari 0,1, dan 2 selepas hipoksia dinilai dengan ujian pembiakan sel larutan satu akueus Cell Titer96 (Promega,Madison, WI) mengikut arahan pengilang.

Untuk kuantifikasi ekspresi molekul isyarat radang dalam sel HK{{{0}} hipoksik,TLR-2 dan TLR-4 diukur dengan analisis western blot menggunakan anti-TLR2 monoklonal tetikus (Santa Cruz Antibodi Bioteknologi, Dallas, TX) dan anti-TLR4(Novus Biologicals, Centennial, CO) pada hari 0 dan 2. Secara ringkas, sel-sel tersebut diletakkan dalam penampan RIPA (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO) yang mengandungi koktel perencat protease (Sigma-Aldrich). Homogenat telah disentrifugasi pada 13,000g pada 4 darjah selama 10 minit, dan supernatan tertakluk kepada prosedur western blotting yang dinyatakan di atas.

Analisis Statistik

Semua data dinyatakan sebagai min ± ralat piawai min (SEM). Perbezaan antara kumpulan atau titik masa dianalisis menggunakan ujian Mann-Whitney U atau analisis dua hala bagi varians(ANOVA) diikuti dengan analisis post-hoc Tukey. Semua analisis statistik telah dijalankan menggunakan perisian GraphPad Prism versi 8 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Nilai P<0.05 were="" considered="" statistically="">

KEPUTUSAN

Kesan Pengubahsuaian Pemakanan terhadap Perubahan Fisiologi dalam Tikus Normal Untuk menyiasat perubahan fisiologi yang disebabkan oleh pengubahsuaian diet pada tikus normal, berat badan, jumlah kolesterol plasma, kreatinin, dan kepekatan BUN diukur secara bersiri. Jumlah keseluruhan pengambilan diet dalam HE, HF(tinggi lemak)ditambah HS, dan kumpulan kawalan adalah serupa, manakala kumpulan HS cenderung untuk mengambil lebih sedikit chow (Tambahan Rajah 1). Berat badan HF(tinggi lemak)kumpulan diet meningkat dengan ketara dari hari ke-7 selepas memulakan HF(tinggi lemak)diet. Kumpulan diet HS mempunyai berat badan yang lebih rendah daripada kumpulan kawalan pada hari ke-42 dan berat badan yang setanding dengan kumpulan kawalan dari l minggu selepas beralih kepada diet biasa (Rajah 1A). Paras kolesterol total plasma HF(tinggi lemak)kumpulan diet adalah jauh lebih tinggi berbanding kumpulan kawalan pada hari ke-14 dan menjadi setanding dengan kumpulan kawalan pada 1 minggu selepas beralih kepada diet biasa. Tahap kolesterol plasma dalam kawalan, diet HS, dan HF(tinggi lemak)ditambah kumpulan diet HS adalah setanding selama 6 minggu pengubahsuaian diet (Rajah 1B). BUN lebih tinggi dalam HF(tinggi lemak)kumpulan diet dan HF(tinggi lemak)ditambah kumpulan diet HS pada hari ke-7. Fungsi buah pinggang secara keseluruhan adalah setanding antara kumpulan selama 6 minggu pengubahsuaian diet (Rajah 1C).

RAJAH 1|Kesan pengubahsuaian diet pada perubahan fisiologi tikus normal.(A) HF(tinggi lemak)kumpulan diet mendapat berat badan dengan ketara dari hari ke-7 selepas memulakan HF(tinggi lemak)diet dan menunjukkan berat badan pegun selepas bertukar kepada diet biasa. Kumpulan diet HS mempunyai berat badan yang lebih rendah daripada kumpulan kawalan pada hari ke-42 dan kembali kepada berat badan yang setanding dengan kumpulan kawalan 1 minggu selepas beralih kepada diet biasa. (B) HF(tinggi lemak)diet secara signifikan meningkatkan jumlah kepekatan kolesterol plasma dari hari ke-14 selepas pengubahsuaian diet. Jumlah tahap kolesterol HF(tinggi lemak)kumpulan diet kembali ke kepekatan yang setanding selepas bertukar kepada diet biasa. (C) Tahap BUN pada hari ke-7 adalah lebih tinggi dengan ketara dalam HF(tinggi lemak)diet dan kumpulan diet HS. Keseluruhan fungsi buah pinggang yang diukur oleh kreatinin plasma adalah setanding antara kumpulan untuk keseluruhan tempoh kajian.*P < {{0}}.05,="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" kawalan="" pada="" setiap="" titik="" masa.="" †p="">< 0.05,="" berbanding="" dengan="" hari="" ke-7="" dalam="" kumpulan="" yang="" sama="" (n="5" untuk="" setiap="" kumpulan="" pada="" setiap="" titik="" masa).="" analisis="" statistik="" dilakukan="" dengan="" ujian="" anova="" dua="" hala="" diikuti="" dengan="" ujian="" tukey.="">(tinggi lemak), tinggi lemak; HS, garam tinggi; HF(tinggi lemak)ditambah HS, tinggi lemak dengan tinggi garam.

Kesan Pengubahsuaian Pemakanan ke atas Leukosit Intrarenal Tikus Normal Pemerdagangan jumlah leukosit ke dalam buah pinggang normal dinilai dengan pewarnaan imunohistokimia CD45, diikuti dengan analisis semikuantitatif dengan TissueFAXS(Rajah 2A). Perkadaran jumlah leukosit intrarenal antara jumlah sel bernukleus boleh dibandingkan adalah perbandingan. kumpulan pada setiap titik masa (Rajah 2B).

RAJAH 2|Kesan pengubahsuaian diet pada leukosit intrarenal tikus normal.Leukosit pemastautin dianalisis dengan imunohistokimia CD45 dan sitometri aliran pada tisu buah pinggang normal. (A) Findings imunohistokimia perwakilan dan analisis semikuantitatif CD45-leukosit positif dalam buah pinggang normal kumpulan kawalan pada hari 0. Anak panah menunjukkan CD45-leukosit positif (×200). (B) Peratusan jumlah leukosit yang menyatakan CD45 di antara jumlah sel bernukleus adalah setanding antara kumpulan yang diberi makan.

Sel-sel efektor utama kedua-dua sistem imun semula jadi dan adaptif diperdagangkan ke dalam buah pinggang selepas pengubahsuaian diet dianalisis dengan sitometri aliran. Mengenai subtipe sel T, jumlah sel T CD8, sel CD4T memori efektor dan sel NK T meningkat dari semasa ke semasa semasa pengubahsuaian diet, manakala jumlah sel T CD4 menurun. Dari segi perbezaan antara kumpulan pada setiap titik masa, HF(tinggi lemak)kumpulan dan HF(tinggi lemak)ditambah HSgroup menunjukkan bahagian sel CD8T yang lebih besar di antara jumlah sel T pada hari ke-42 selepas pengubahsuaian diet berbanding kumpulan diet kawalan. HF itu(tinggi lemak)ditambah kumpulan HS juga menunjukkan perkadaran yang lebih besar daripada subset memori effector sel CD4 dan CD8T dan sel CD4 dan CD8 T diaktifkan (Rajah 3A, B, Rajah Tambahan 2). Mengenai populasi sel bukan T, jumlah sel B berkurangan dan sel NK meningkat. pada hari ke-14berbanding dengan hari ke-7 selepas pengubahsuaian diet. Sel plasma mencapai nombor puncak dalam HF(tinggi lemak)kumpulan diet dan diet HS pada hari ke-42 dan menurun ke tahap yang setanding dengan kumpulan kawalan selepas diet biasa selama 2 minggu. Perkadaran sel NK dan sel B matang yang diaktifkan di antara jumlah sel B adalah lebih tinggi dalam HF.(tinggi lemak)diet dan HF(tinggi lemak)ditambah kumpulan diet HS pada hari ke-14 selepas pengubahsuaian diet.HF(tinggi lemak)kumpulan diet dan diet HS menunjukkan penyusupan intrarenal neutrofil yang lebih tinggi pada hari ke-14 selepas pengubahsuaian diet (Rajah 3C, D, Rajah Tambahan 2).

RAJAH 3|Analisis sitometri aliran KMNC yang diasingkan daripada buah pinggang tikus normal.(A) Perubahan dalam subpopulasi sel T intrarenal melalui pengubahsuaian diet. HF(tinggi lemak)dan diet HF ditambah HS meningkatkan perkadaran jumlah sel T CD8 di antara jumlah sel T pada hari ke-42 selepas pengubahsuaian diet. HF(tinggi lemak)ditambah dengan diet HS juga meningkatkan bahagian memori efektor CD4 dan sel T CD8. (B) Plot titik perwakilan menganalisis sel T pada hari ke 42. Sel berpagar menunjukkan sel T CD4 dan sel T CD8 di antara jumlah sel T. (C) HF(tinggi lemak)diet dan diet HS meningkatkan infifiltrasi sel plasma dan neutrofil pada hari ke 42 dan 14 selepas pengubahsuaian diet, masing-masing. HF(tinggi lemak)diet dan diet HF ditambah HS meningkatkan infifiltrasi sel B matang dan sel NK yang diaktifkan pada hari ke-14 selepas pengubahsuaian diet. (D) Plot titik perwakilan menganalisis sel plasma pada hari ke 42. Sel berpagar menunjukkan sel plasma mengekspresikan CD138 dan CD126 di antara jumlah sel mononuklear buah pinggang. *P < 0.05,="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" kawalan="" pada="" setiap="" titik="" masa.="" †p="">< 0.05,="" berbanding="" dengan="" hari="" ke-7="" dalam="" kumpulan="" yang="" sama="" (n="5" untuk="" setiap="" kumpulan="" pada="" setiap="" titik="" masa).="" analisis="" statistik="" dilakukan="" dengan="" ujian="" anova="" dua="" hala="" diikuti="" dengan="" ujian="" tukey.="">tinggi lemak; HS, garam tinggi; HF(tinggi lemak)tambah HS,tinggi lemakdengan garam yang tinggi.

Kesan Pengubahsuaian Pemakanan terhadap Sitokin Intrarenal/Kemokin Tikus Biasa

Berbanding dengan diet biasa, diet HS atau HF(tinggi lemak)ditambah dengan diet HS meningkatkan ekspresi intrarenal sitokin/kemokin proinflamasi termasuk TNF-, INF-y, MCP-1 dan RANTES (Rajah 4A). Ungkapan IL-6 adalah lebih tinggi dalam HF(tinggi lemak)ditambah kumpulan diet HS pada hari ke-7 (Tambahan Rajah 3). Sebaliknya, ekspresi intrarenal VEGF pada tikus memberi makan diet HS dan HF(tinggi lemak)ditambah dengan diet HS adalah jauh lebih rendah daripada kumpulan kawalan (Rajah 4B).

RAJAH 4|Kesan pengubahsuaian diet pada sitokin intrarenal dan kemokin tikus normal.HS dan HF(tinggi lemak)ditambah dengan diet HS meningkatkan ekspresi intrarenal TNF-, INF-, MCP-1 dan RANTES pada hari ke-42. HF(tinggi lemak)ditambah diet HS juga meningkatkan ekspresi IL-6 pada hari ke-7 selepas pengubahsuaian diet. Walaupun tiada perbezaan yang ketara dalam ekspresi IL-10, ekspresi intrarenal VEGF adalah lebih rendah dalam kumpulan diet HS dan HF.(tinggi lemak)ditambah kumpulan diet HS pada hari ke-7 dan hari ke-42 selepas pengubahsuaian diet. *P < 0.05,="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" kawalan="" pada="" setiap="" titik="" masa.="" †p="">< 0.05,="" berbanding="" dengan="" hari="" ke-7="" dalam="" kumpulan="" yang="" sama="" (n="5" untuk="" setiap="" kumpulan="" pada="" setiap="" titik="" masa).="" analisis="" statistik="" dilakukan="" dengan="" ujian="" anova="" dua="" hala="" diikuti="" dengan="" ujian="" tukey.="">tinggi lemak; HS, garam tinggi; HF tambah HS,tinggi lemakdengan garam yang tinggi.

Pengubahsuaian Pemakanan Menjejaskan Kecenderungan kepada lschemic AKI

Untuk menyiasat kesan pengubahsuaian diet pada buah pinggang pasca-iskemik, IRI dua hala(Kecederaan iskemia-reperfusi)dilakukan 1 atau 6 minggu selepas pengubahsuaian diet. Secara keseluruhan, kemerosotan fungsi buah pinggang selepas IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi)adalah lebih menonjol pada tikus yang menerima pengubahsuaian diet berasaskan HS untuk kedua-dua 1 minggu dan 6 minggu berbanding dengan kumpulan kawalan. Kedua-dua BUN dan kepekatan kreatinin plasma adalah jauh lebih tinggi pada tikus yang diberi makan HS atau HF(tinggi lemak)ditambah dengan diet HS selama 1 minggu berbanding kumpulan kawalan pada hari ke-2 selepas IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi)(Rajah 5A). Kepekatan kreatinin plasma dalam tikus yang diberi makan HF(tinggi lemak)ditambah diet HS selama 6 minggu adalah jauh lebih tinggi daripada kumpulan kawalan pada hari 1 dan 2 selepas IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi)(Rajah 5B).

RAJAH 5|Kesan pengubahsuaian diet terhadap perkembangan kecederaan buah pinggang akut (AKI) selepas IRI dua hala(Kecederaan iskemia-reperfusi)pembedahan.(A, B) Perubahan fungsi buah pinggang selepas IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi)dalam setiap kumpulan diet. Kemerosotan fungsi buah pinggang selepas IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi)cenderung diburukkan oleh HF(tinggi lemak)atau diet HS yang diberi makan selama 1 minggu dan 6 minggu. BUN dan tahap kreatinin plasma adalah lebih tinggi dalam HS dan HF(tinggi lemak)ditambah kumpulan diet HS yang diberi makan selama 1 minggu selepas IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi). Tahap kreatinin plasma dalam HF(tinggi lemak)ditambah kumpulan diet HS yang diberi makan selama 6 minggu adalah jauh lebih tinggi daripada kumpulan kawalan pada hari ke-2 selepas IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi). *P < 0.05,="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" kawalan="" pada="" setiap="" titik="" masa="" (n="5–10" untuk="" setiap="" kumpulan).="" analisis="" statistik="" dilakukan="" menggunakan="" ujian="" mann-whitney="" u.="">tinggi lemak; HS, garam tinggi; HF tambah HS,tinggi lemakdengan garam yang tinggi.

Perkadaran tubul nekrotik cenderung lebih tinggi pada tikus yang diberi makan HS atau HF(tinggi lemak)diet berbanding kumpulan kawalan (Rajah 6). Kumpulan itu memberi makan HF(tinggi lemak)ditambah dengan diet HS selama 1 minggu menunjukkan bahagian tubul nekrotik yang ketara lebih besar daripada kumpulan kawalan (Rajah 6C).

RAJAH 6|Kesan pengubahsuaian diet pada kecederaan struktur berikutan IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi)pembedahan.(A, B) Hematoxylin dan pewarnaan eosin buah pinggang pasca-iskemik pada hari ke-2 selepas IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi). Anak panah menunjukkan tubul yang rosak atau nekrotik (×200). (C) Peratusan tubul nekrotik cenderung lebih tinggi pada tikus yang diberi makan HF(tinggi lemak)atau diet HS berbanding kumpulan kawalan. HF itu(tinggi lemak)ditambah kumpulan diet HS yang diberi makan selama 1 minggu menunjukkan peratusan tubul nekrotik yang ketara lebih tinggi daripada kumpulan kawalan. *P < 0.05,="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" kawalan="" (n="5–10" untuk="" setiap="" kumpulan).="" analisis="" statistik="" dilakukan="" menggunakan="" ujian="" mann-whitney="" u.="">tinggi lemak; HS, garam tinggi; HF tambah HS,tinggi lemakdengan garam yang tinggi.

Peratusan jumlah leukosit yang mengekspresikan CD45 di antara jumlah nukleus dalam buah pinggang pasca-iskemik adalah lebih tinggi dalam kumpulan yang diberi makan HF.(tinggi lemak)ditambah dengan diet HS untuk kedua-dua minggu l dan 6 minggu (Rajah7A, B). Kumpulan itu memberi makan HF(tinggi lemak)diet selama 6 minggu juga menunjukkan bahagian CD45-positif yang lebih besar berbanding kumpulan kawalan (Rajah 7C).

RAJAH 7|Kesan pengubahsuaian diet pada pemerdagangan leukosit ke dalam buah pinggang pasca-iskemik.(A,B) Perwakilan imunohistokimia fifindings dan analisis semikuantitatif CD{0}}leukosit positif dalam buah pinggang pasca-iskemik pada hari ke-2 selepas IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi). Terdapat infifiltrasi leukosit yang lebih ketara ke dalam buah pinggang pasca-iskemia tikus yang diberi HF.(tinggi lemak)atau diet HS untuk kedua-dua 1 minggu dan 6 minggu. Anak panah menunjukkan CD45-leukosit positif (×200). (C) Peratusan jumlah leukosit yang mengekspresikan CD45 di antara jumlah sel bernukleus adalah lebih tinggi dalam buah pinggang pasca-iskemik HF(tinggi lemak)-atau tikus yang diberi makan HS berbanding dengan tikus yang diberi diet biasa. *P < 0.05,="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" kawalan="" (n="5–10" untuk="" setiap="" kumpulan).="" analisis="" statistik="" dilakukan="" menggunakan="" ujian="" mann-whitney="" u.="">tinggi lemak; HS, garam tinggi; HF tambah HS,tinggi lemakdengan garam yang tinggi.

Ekspresi intrarenal TLR-2 dan TLR-4 pada hari ke-2 selepas IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi)telah dinilai dengan western blotting sampel protein yang diekstrak daripada buah pinggang pasca-iskemik. Ungkapan kedua-dua TLR-2 dan TLR-4 cenderung meningkat dalam tikus yang diberi makan HF(tinggi lemak)atau diet HS selama l minggu (Rajah 8A, C). Tikus diberi makan HF(tinggi lemak)ditambah dengan diet HS selama 6 minggu menunjukkan peningkatan ketara bagi kedua-dua TLR-2 dan TLR-4(Rajah 8B,C).

RAJAH 8|Western blotting sampel protein yang diekstrak daripada buah pinggang pasca-iskemik pada hari ke-2 selepas IRI(Kecederaan iskemia-reperfusi).(A) Ekspresi keseluruhan TLR2 dan TLR4 cenderung lebih tinggi dalam buah pinggang pasca-iskemik tikus yang diberi diet HF atau HS selama 1 minggu berbanding tikus yang diberi diet biasa. (B,C) Ungkapan TLR-2 dan TLR-4 adalah lebih tinggi dengan ketara dalam HF(tinggi lemak), HS dan HF(tinggi lemak)ditambah kumpulan diet HS yang diberi makan selama 6 minggu berbanding kumpulan kawalan. *P < 0.05,="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" kawalan="" (n="3–4" untuk="" setiap="" kumpulan).="" analisis="" statistik="" dilakukan="" menggunakan="" ujian="" mann-whitney="" u.="">tinggi lemak; HS, garam tinggi; HF tambah HS,tinggi lemakdengan garam yang tinggi.

Kesan Natrium dan Lipid Tinggi pada Sel HK-2 Hipoksik

Rajah 9A menunjukkan tahap percambahan sel HK selepas penghinaan hipoksik bergantung kepada rawatan NaClandlipid tambahan. Hari 0, penghujung hipoksia, ialah hari apabila sel HK-2 dialih keluar daripada inkubator berbilang gas selepas 48j hipoksia. Rawatan dengan garam tinggi (tambahan NaCl 25 mM) menyekat pembiakan sel HK-2 hipoksik. Sebaliknya, rawatan lipid memudahkan pembiakan sel HK-2hipoksik.

Analisis Western blot bagi TLR-2 dan TLR-4 dalam ekstrak protein sel HK-2 hipoksik menunjukkan bahawa rawatan lipid mengurangkan ekspresi TLR-2 dan meningkatkan ekspresi TLR{ {4}}, berbanding dengan kumpulan kawalan hipoksia pada hari ke-2 selepas penghinaan hipoksik (Rajah 9B, C). Rawatan NaCl tambahan tidak mengubah ekspresi TLR-2 atauTLR-4 dengan ketara berbanding dengan kumpulan kawalan hipoksia.

RAJAH 9|Kesan rawatan natrium dan lipid pada sel HK-2 hipoksik.(A) Rawatan NaCl tambahan menghalang pembiakan sel HK{{0}} selepas penghinaan hipoksik berbanding dengan kumpulan kawalan hipoksia. Sebaliknya, rawatan lipid tambahan memudahkan pembiakan sel HK-2 selepas penghinaan hipoksik. (B,C) Pembuangan barat TLR-2 dan TLR-4 menunjukkan bahawa rawatan lipid mengurangkan ekspresi TLR-2 dan meningkatkan ekspresi TLR-4 berbanding dengan hipoksia kumpulan kawalan pada hari ke-2 selepas penghinaan hipoksik. Hari 0: Hari apabila sel HK-2 dialih keluar daripada inkubator berbilang gas 48 jam selepas hipoksia. *P < 0.05,="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" kawalan="" normoxia.="" †p=""><0.05, berbanding="" dengan="" kumpulan="" kawalan="" hipoksia.="" analisis="" statistik="" dilakukan="" menggunakan="" ujian="" mann-whitney="">

Herba perubatan tradisional Cina:cistanche

Nota: Perubatan tradisional Cinaherba cistanche(juga dikenali sebagai "herba naga" dan "ginseng padang pasir"), tumbuh hanya di padang pasir yang gersang dan hangat. Sebagai salah satu daripada sembilan herba abadi,Cistanche(cistanche tubulosa/cistanche deserticola/desertliving cistanche/cistanche salsa)kandungan dengan ramuan berkesan yang kaya seperti echinacoside, acteoside, jumlah glikosida phenylethanoid, flavonoid, polisakarida, dll. bahan-bahan berkesan ini menjadikan cistanche sebagai herba berkhasiat dan bahan makanan yang berharga untuk imuniti, organ dalaman dan sel otak manusia dan neuron, dsb. Kajian farmakologi moden telah mengesahkan perkara berikutkesan cistanche(faedah cistanche): meningkatkan imuniti; meningkatkan fungsi seksual dan fungsi buah pinggang; anti-keletihan; anti penuaan; meningkatkan ingatan; penyakit anti-Parkinson; penyakit anti-Alzheimer; antioksida; mudah-sembelit; anti-radang; menggalakkan pertumbuhan tulang, memutihkan kulit; melindungi hati; dan lain-lain.

KLIK DI SINI UNTUK BAHAGIAN Ⅱ