Ekstrak Daun Glochidion Littorale Mempamerkan Kesan Neuroprotektif dalam Caenorhabditis Elegans Melalui Pengaktifan-16 DAF

Untuk maklumat lanjut, hubungi e-meltina.xiang@wecistanche.com 
Abstrak:Sebilangan tumbuhan yang digunakan dalam perubatan rakyat di Thailand dan Asia Timur menarik minat kerana bioaktiviti tinggi ekstraknya. Matlamat kajian ini adalah untuk menyaring ekstrak daun yang boleh dimakan daripada 20 tumbuhan yang terdapat di Thailand dan menyiasat potensi kesan neuroprotektif bagi sampel yang paling bioaktif. Jumlah kandungan fenol dan flavonoid dan 2,2-difenil-1-aktiviti pemeras picrylhydrazylradical telah ditentukan untuk kesemua 20 ekstrak daun. Berdasarkan ujian ini, ekstrak daun Glochidionlittorale (GLE), yang menunjukkan nilai yang tinggi dalam semua parameter yang diuji, telah digunakan dalam eksperimen selanjutnya untuk menilai kesannya terhadap neurodegenerasi dalamCaenorhabditis elegans. Rawatan GLE memperbaiki tekanan oksidatif akibat H2O2-dengan melemahkan pengumpulan spesies oksigen reaktif dan melindungi cacing daripada 1-metil-4-kemerosotan saraf akibat fenilpiridinium. Kesan neuroprotektif yang diperhatikan mungkin dikaitkan dengan pengaktifan faktor transkripsi DAF-16. Pencirian ekstrak ini oleh LC-MS mengenal pasti beberapa sebatian fenolik, termasuk myricetin, coumestrin, asid klorogenik, dan hesperidin, yang mungkin memainkan peranan penting dalampelindung saraf. Kajian ini melaporkan aktiviti neuroprotektif baru GLE, yang boleh digunakan untuk membangunkan rawatan untuk penyakit neurodegeneratif seperti sindrom Parkinson.

Kata kunci: Caenorhabditis elegans; ekstrak daun;pelindung saraf; aktiviti antioksidan; DAF-16

1. Pengenalan 

Gangguan neurodegeneratif termasuk penyakit Alzheimer dan penyakit Parkinson (PD) menimbulkan kebimbangan kesihatan dan kewangan utama kepada organisasi penjagaan kesihatan global [1]. Walaupun jangka hayat manusia telah meningkat dalam beberapa dekad kebelakangan ini di negara perindustrian, kelaziman penyakit berkaitan usia juga telah meningkat. Insiden gangguan kemunculan lewat seperti gangguan neurologi dijangka meningkat dengan cepat dalam beberapa dekad akan datang. Oleh itu, adalah penting untuk menggalakkan kajian dan menjalankan ujian klinikal ke atas sebatian yang mungkin berpotensi untuk menyembuhkan, mencegah, atau sekurang-kurangnya melambatkan permulaan penyakit neurodegeneratif [2]. Salah satu ciri ciri PD ialah kehilangan progresif neuron dopaminergik (DA) dalam substantia nigra [3]. Dalam patogenesis PD, peningkatan pengeluaran spesies oksigen reaktif (ROS) memainkan peranan penting dalam kehilangan sel DA [4]. Oleh itu, pengurangan tekanan oksidatif dianggap sebagai pendekatan terapeutik yang menjanjikan dalam rawatan PD [5]. 1-metil-4-fenilpiridinium (MPP tambah), yang menghalang aktiviti kompleks mitokondria I, boleh menyebabkan gejala seperti PD pada manusia dan model haiwan [6].

PenggunaanCaenorhabditis eleganssebagai model in vivo memberikan kelebihan tertentu dalam kajian PD [7]. Nematod adalah mudah, murah, dan mempunyai kitaran hayat yang pendek. Ia menyokong kajian yang melibatkan analisis berskala besar. Selain itu, rangkaian neuron C. elegans telah dipetakan sepenuhnya. Ia mengandungi 8 neuron DA dan gen homolog berkaitan PD [8]. Neurodegeneration, yang meniru simptom parkinson, boleh didorong dalam C. elegans melalui rawatan dengan neurotoksin seperti MPP plus [9].
Sebatian antioksidan semulajadi mewakili sumber yang menarik untuk membangunkan ubat untuk merawat penyakit neurodegeneratif kerana kesan neuroprotektifnya dalam model haiwan dan ketoksikan yang rendah [3]. Polifenol dikenali sebagai antara antioksidan yang paling banyak dalam diet manusia [10]. Ia juga telah ditubuhkan bahawa proses oksidatif terlibat dalam banyak patologi, termasuk neurodegeneration, kanser, diabetes, penyakit kardiovaskular dan anti-radang. Oleh itu, mencari polifenol yang mempamerkan sifat antioksidan daripada sumber semula jadi boleh menyumbang ke arah mencegah atau merawat patologi tersebut. Kajian ini tertumpu kepada ekstrak daripada daun tumbuhan yang boleh dimakan yang terdapat di Thailand. Kebanyakan varieti yang ditanam secara meluas di utara dan selatan Thailand telah digunakan sebagai ubat rakyat terhadap kecederaan dan penyakit umum; walau bagaimanapun, terdapat beberapa laporan mengenai kesan neuroprotektif mereka.
Dalam kajian ini, kami mula-mula menyaring ekstrak daun yang boleh dimakan daripada 20 tumbuhan yang ditanam di Thailand dan menilai kandungan fenolik dan flflavonoid serta 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl (DPPH) aktiviti penangkapan radikalnya. Kesan ekstrak daun Glochidion littorale (GLE), yang menunjukkan nilai yang tinggi dalam semua parameter yang diuji, telah dinilai pada C. elegans dengan neurodegeneration. Tambahan pula, laluan berpotensi yang terlibat dalam kesan neuroprotektif GLE telah diperiksa, bersama-sama dengan pengenalpastian komponen utama dalam GLE.
Memandangkan faktor transkripsi DAF-16 diketahui memainkan peranan penting dalam mengawal tekanan oksidatif [11], telah dihipotesiskan bahawa GLE mungkin menyasarkan DAF-16. Strain C. elegans CF1038, yang merupakan strain mutan kehilangan{4}} DAF, telah digunakan untuk menentukan kadar kemandirian cacing yang dirawat dengan dan tanpa GLE. Dalam tekanan oksidatif yang disebabkan oleh H2O2-, rawatan GLE tidak meningkatkan kadar kemandirian cacing transgenik (Rajah 1C).

2. Keputusan

2.1. Saringan Daun Tumbuhan Thai

Ekstrak mentah daun yang boleh dimakan daripada tumbuhan yang ditanam di Thailand telah disediakan melalui ultrasonik. Ekstrak daun daripada 20 tumbuhan telah disaring untuk kandungan fenolik dan flavonoid dan aktiviti antioksidannya oleh DPPH radikal-scavenging assay. Beberapa sampel yang diuji, seperti Glochidion sphaerogynum dan Mentha piperita, didapati mempunyai aktiviti penghapusan radikal yang tinggi dengan kandungan fenolik dan flflavonoid yang rendah, manakala sampel tertentu, seperti Clinacanthus nutans dan Ocimum × citriodorum, menunjukkan arah aliran yang bertentangan (Jadual 1). ). Ekstrak daun G. littorale menunjukkan aktiviti penangkapan radikal DPPH yang tinggi serta kandungan fenolik dan flflavonoid yang tinggi. Oleh itu, bioaktiviti yang dikaitkan dengan G. littorale telah disiasat selanjutnya.

2.2. Rintangan Ditingkatkan GLE terhadap Tekanan Oksidatif melalui DAF-16 dalam C. Elegans

Kesan GLE terhadap kemandirian cacing N2 di bawah tekanan oksidatif telah disiasat. Rawatan dengan H2O2 (5 mM) menyebabkan 75 peratus kematian dalam kumpulan kawalan, manakala rawatan bersama dengan 5{11}} µg/mL dan kepekatan GLE yang lebih tinggi dikaitkan dengan kadar kemandirian yang tinggi (Rajah 1A). Antara kepekatan GLE yang diuji, 100 µg/mL dan 200 µg/mL dikaitkan dengan kadar survival tertinggi (masing-masing 82.0 peratus dan 88.2 peratus). Oleh itu, kedua-dua kepekatan ini digunakan dalam eksperimen seterusnya. Untuk menilai kesan antioksidan GLE dalam vivo, paras ROS intraselular diukur dalam nematod jenis liar menggunakan 2', 7'-dichlorodihydroflfluorescein diacetate (H2DCF-DA), probe pendarfluor yang terkenal untuk mengesan pengeluaran ROS intraselular. Pengurangan ketara dalam keamatan pendarfluor dalam kumpulan yang dirawat GLE telah diperhatikan berbanding dengan kumpulan yang tidak dirawat (Rajah 1B), mengesahkan sifat antioksidan GLE.

2.3. Rawatan GLE Mengurangkan Kematian MPP plus -Terinduksi DA Neurotoksisiti melalui DAF-16 dalam C. Elegans C. elegans mempunyai 8 neuron DA [8]. Kemerosotan selektif neuron DA ini dinilai selepas pendedahan kepada MPP plus . Rawatan cacing N2 jenis liar dengan 0.75 mM MPP tambah menghasilkan penurunan yang ketara dalam kemandirian (Rajah 2). Walau bagaimanapun, rawatan bersama dengan GLE meningkatkan kemandirian cacing dengan ketara. Kesan rawatan GLE pada cacing mutan daf-16 telah disiasat. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3 dan Jadual 2, rawatan GLE tidak meningkatkan kemandirian cacing ini selepas pendedahan kepada MPP plus berbanding dengan kumpulan kawalan. Keputusan ini menunjukkan bahawa DAF{15}} mungkin diperlukan untuk pengantaraan kesan neuroprotektif GLE dalam C. elegans. Seterusnya, terikan mutan kehilangan fungsi DAF{16}}, CB1370, digunakan untuk menentukan sama ada DAF-2 terlibat dalam kesan neuroprotektif yang diperhatikan. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4 dan Jadual 3, median dan kemandirian maksimum meningkat dengan ketara dalam daf-2 cacing mutan yang dirawat dengan GLE.

2.4. Kesan GLE pada DAF-16 Penyetempatan

Telah ditunjukkan bahawa pengaktifan DAF-16 dikawal oleh pengumpulan nuklearnya [12]. Selepas itu, kami menyiasat sama ada GLE boleh mendorong pengumpulan nuklear DAF-16 dalam terikan transgenik TJ356 yang menyatakan DAF-16::protein gabungan GFP. Keputusan menunjukkan bahawa selepas 48 jam pengeraman dengan 100 µg/mL GLE, keamatan pendarfluor hijau DAF-16 dalam nukleus meningkat dengan ketara berbanding kumpulan yang tidak dirawat (Rajah 5).

2.5. Pencirian Fitokimia dalam GLE

LC-MS telah dijalankan untuk memprofilkan fitokimia dalam GLE, dan keputusannya dibentangkan dalam Rajah6. Puncak kromatografi dikenal pasti dengan membandingkan data MS dengan pangkalan data berdasarkan pencarian nilai m/z puncak ion molekul dalam mod positif [M tambah H]tambah lagi. Akibatnya, miricetin, kumestrin, asid klorogenik, dan hesperidin dikesan sebagai sebatian utama (Jadual4).

3. Perbincangan

Ekstrak tumbuhan adalah sumber yang kaya dengan sebatian bioaktif semula jadi. Banyak kajian telah menilai ekstrak tumbuhan yang digunakan di negara-negara Asia Tenggara, termasuk Thailand, di mana ekstrak ini adalah komponen perubatan rakyat [13,14]. Dalam kajian ini, ekstrak 20 daun tumbuhan yang boleh dimakan dari Thailand telah disaring, dan G. littorale telah dipilih untuk penyiasatan lanjut kerana ia menunjukkan kandungan fenol yang tinggi, kandungan flflavonoid, dan aktiviti pemusnahan radikal. Beberapa kajian telah menyiasat pelbagai spesies genus Glochidion [15–19]; walau bagaimanapun, terdapat beberapa kajian mengenai sifat kefungsian dan juzuk G. littorale. Data kami menunjukkan bahawa GLE melindungi C. elegans daripada H2O2-tekanan oksidatif yang disebabkan dengan mengurangkan pengumpulan ROS intraselular. Ini mungkin disebabkan oleh kandungan sebatian fenolik yang tinggi seperti flavonoid, yang diketahui mempunyai aktiviti antioksidan yang kuat [20]. Penemuan ini adalah serupa dengan yang diperoleh oleh Duangjan et al. (2019), yang menunjukkan bahawa ekstrak daun G. zeylanicum boleh melindungi C. elegans daripada tekanan oksidatif [21]. Laluan isyarat insulin/insulin-like signaling (IIS) mengawal pertumbuhan, tindak balas tekanan dan jangka hayat dalam C. elegans [22,23]. Kami mendapati bahawa daf-16 null mutant C. elegans yang dirawat dengan GLE terdedah kepada tekanan oksidatif. Keputusan ini menunjukkan bahawa kesan antioksidan GLE dalam mengurangkan tekanan oksidatif dalam nematod mungkin terlibat bukan sahaja dalam aktiviti pemusnahan radikal tetapi juga pengawalseliaan faktor transkripsi DAF{16}}.

Kesan perlindungan GLE terhadap ketoksikan MPP plus -induced dalam C. elegans telah diperiksa. Neuron DA dalam nematod mengambil MPP ditambah terutamanya melalui pengangkut DA pertalian tinggi, yang juga diperhatikan dalam mamalia. Pengumpulan MPP plus di dalam neuron menyahaktifkan kompleks mitokondria I rantai pernafasan dan mendorong kematian sel [24-27]. Rawatan GLE didapati dapat mengurangkan dengan ketara kematian yang dikaitkan dengan rawatan MPP ditambah dalam cacing jenis liar. Laluan IIS dimodulasi oleh peptida seperti insulin melalui reseptor DAF-2 dalam C. elegans [28]. Dalam keadaan biasa, laluan IIS menghalang fosforilasi DAF-16 dan menghalang pemindahan nuklearnya. Dalam daf-2 mutan null, kumpulan yang dirawat GLE bertahan lebih lama daripada kumpulan kawalan. Sebaliknya, tiada perbezaan dalam kemandirian diperhatikan antara kumpulan kawalan dan kumpulan yang dirawat GLE yang mengandungi daf{12}} cacing mutan null. Adalah diketahui bahawa isyarat DAF{13}} yang dikurangkan memudahkan kemasukan DAF-16 ke dalam nukleus, di mana ia boleh mengawal selia ekspresi gen sasaran dan mengawal rintangan tekanan dan umur panjang [29]. Ini mungkin menjelaskan sebab cacing mutan daf{16}} yang dirawat dengan GLE menunjukkan kemandirian yang agak tinggi. Tambahan pula, peningkatan pengumpulan nuklear DAF-16 dalam cacing yang dirawat dengan GLE telah diperhatikan menggunakan TJ356 DAF transgenik-16::GFPC. elegans. Secara kumulatif, keputusan ini menunjukkan bahawa GLE mungkin telah menunjukkan kesan neuroprotektifnya melalui pengaktifan DAF-16.

4.3. Jumlah Kandungan FenolikKaedah Folin-Ciocalteu digunakan untuk menentukan jumlah kandungan fenolik. Secara ringkas, 11.4 µL ekstrak (1 mg/mL) dicampurkan dengan 227.3 µL 2 peratus (b/v) larutan Na2CO3, dan kemudian campuran tersebut dibiarkan berdiri pada suhu bilik selama 2 minit. Selepas penambahan 11.4 µL 10 peratus (v/v) reagen Folin-Ciocalteu. Pengeraman dalam gelap dijalankan selama 30 minit. Selepas itu, penyerapan diukur pada 750 nm menggunakan pembaca plat mikro (Nivo 3F Multimode Plate Reader, PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Asid Gallic digunakan sebagai piawai untuk lengkung penentukuran. Jumlah kandungan fenolik dinyatakan sebagai setara asid gallik (mg bersamaan asid gallik/g ekstrak tumbuhan).

4.4. Jumlah Kandungan FlavonoidKaedah kolorimetrik aluminium klorida digunakan untuk mengukur jumlah kandungan flavonoid. Secara ringkas, 25 µL ekstrak (2 mg/mL) dicampur dengan 7.5 µL 5 peratus (b/v) larutan NaNO2 dan 152.5 µL air suling. Selepas 6 minit, 15 µL 10 peratus (w/v) larutan AlCl3 ditambah dan dibiarkan selama 5 minit. Kemudian, 50 µL larutan NaOH 1 M telah ditambahkan ke dalam campuran. Selepas itu, campuran itu diinkubasi dalam gelap selama 15 minit, dan penyerapan diukur pada 510 nm menggunakan pembaca plat mikro. Jumlah kandungan flavonoid dikira dengan menghasilkan lengkung penentukuran menggunakan kuersetin sebagai piawai dan keputusannya dinyatakan sebagai setara kuersetin (mg bersamaan kuersetin/g ekstrak tumbuhan).4.5. Aktiviti Penghapusan Radikal Bebas Keupayaan untuk menghilangkan radikal bebas dinilai menggunakan ujian DPPH [32]. Secara ringkas, 100 µL ekstrak (1 mg/mL) dicampur dengan 100 µL larutan DPPH. Selepas 30 minit, penyerapan diukur pada 517 nm menggunakan pembaca plat mikro. Hasilnya dinyatakan sebagai peratusan perencatan radikal DPPH.

4.10. Penyetempatan Nuklear DAF-16Transgenik C. elegans TJ356, yang menyatakan protein gabungan DAF-16-GFP, telah digunakan untuk memeriksa pengedaran intraselular DAF-16. Nematod peringkat L1 dirawat dengan GLE selama 48 jam pada 2{{30}} ◦C. Cacing kemudian dipindahkan ke pad agarosa 2 peratus pada slaid kaca dan dibius dengan menambahkan satu titisan (kira-kira 2{34}} μL) 25 μM natrium azida ke pad agarose. Ekspresi GFP diperiksa melalui mikroskop pendarfluor (EVOSflfl; Advanced Microscopy Group, Bothell, WA, Amerika Syarikat). Purata keamatan pendarfluor DAF{12}} dalam nukleus telah dianalisis menggunakan perisian Image J (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). 4.11. Pemprofilan Fitokimia Menggunakan LC-MSEkstrak daun dianalisis menggunakan LCMS-8040 (Shimadzu). Spektrum jisim diperoleh dalam julat m/z 50–1000 menggunakan mod imbasan Q3. Penyelesaian telah disuntik pada Inertsil ODS-3 (250 × 2.1 mm, 5 µm, GL Sciences, Tokyo Japan) pada suhu lajur pada 40 ◦C menggunakan kecerunan (A) 0.1 peratus asid formik dan (B ) asetonitril/air(80/20) yang mengandungi 0.1 peratus asid formik. Kecerunan berikut dengan kadar aliran 0.2 mL/min telah digunakan: 0–100 peratus B (0–45 min), 100 peratus B (45–50 min), dan 0 peratus B (50–60 min). Sebatian telah dikenal pasti dengan memadankan nilai m/z eksperimen kepada perpustakaan nilai m/z yang dikira secara teori dalam pangkalan data, termasuk Pangkalan Data Metabolom Manusia dan pangkalan data METLIN. 4.12. Analisis Statistik Data dinyatakan sebagai min ± sisihan piawai bagi setiap kumpulan. Perbezaan ketara antara kedua-dua kumpulan dinilai menggunakan ujian-t, manakala perbezaan antara tiga dan lebih kumpulan dinilai menggunakan ANOVA sehala, diikuti dengan ujian perbandingan post-hoc Tukey. Kepentingan statistik ditetapkan pada p <0.001 dan="" p=""><0.0001. untuk="" ujian="" jangka="" hayat,="" survival="" c.="" elegans="" diplot="" menggunakan="" lengkung="" survival="" kaplan-meier="" dan="" dianalisis="" melalui="" ujian="" peringkat="" log="" menggunakan="" perisian="" graphpad="" prism="" (versi="" 9.01;="" perisian="" graphpad,="" san="" diego,="" ca,="" amerika="">

Abdel Fawaz Bagoudou 1, Yifeng Zheng 2, Masahiro Nakabayashi 2, Saroat Rawdkuen 3, Hyun-Young Park 4,Dhiraj A. Vattem 4,5, Kenji Sato 6, Soichiro Nakamura 1 dan Shigeru Katayama 1,2,*

1 Sekolah Siswazah Perubatan, Sains dan Teknologi, Universiti Shinshu, 8304 Minamiminowa, Kamiina,Nagano 399-4598, Jepun;

2Institut Sains Bioperubatan, Universiti Shinshu, 8304 Minamiminowa, Kamiina,Nagano 399-4598, Jepun;

3 Pusat Pengajian Agro-Industri, Universiti Mae Fah Luang, 333 Moo 1, Thasud, Muang, Chiang Rai 57100, Thailand;saroat@mfu.ac.th

4 Institut Bioteknologi Edison, Makmal Penyelidikan Konneker, Universiti Ohio, Athens, OH 45701, Amerika Syarikat;

5 Kolej Sains Kesihatan & Profesion, Universiti Ohio, Athens, OH 45701, Amerika Syarikat

6 Sekolah Siswazah Pertanian, Universiti Kyoto, Kyoto 606-8502, Jepun;

Sumbangan Pengarang:

Sumbangan Pengarang: Pengkonsepan, SR, DAV, dan SK; penyiasatan, AFB, YZ, MN, SR, H.-YP, DAV dan KS; penulisan—penyediaan draf asal, AFB; menulis—menyemak dan menyunting, SK; pengawasan, SN Semua pengarang telah membaca dan bersetuju dengan versi terbitan manuskrip.
Pembiayaan: Penyelidikan ini tidak menerima pembiayaan luar.
Penyata Lembaga Semakan Institusi: Tidak berkenaan.
Kenyataan Persetujuan Termaklum: Tidak berkenaan.
Pernyataan Ketersediaan Data: Data tersedia oleh pengarang yang sepadan atas permintaan yang munasabah.
Konflik Kepentingan: Pengarang mengisytiharkan tiada konflik kepentingan.
Ketersediaan Sampel: Sampel sebatian tidak tersedia daripada pengarang

Rujukan

1 Pohl, F.; Lin, PKT Potensi Penggunaan Produk Semulajadi Tumbuhan dan Ekstrak Tumbuhan dengan Sifat Antioksidan untuk Pencegahan/Rawatan Penyakit Neurodegeneratif: In Vitro, In Vivo dan Ujian Klinikal. Molekul 2018, 23, 3283. [CrossRef] [PubMed]

2. Kim, GH; Kim, JE; Rhie, SJ; Yoon, S. Peranan Tekanan Oksidatif dalam Penyakit Neurodegeneratif. Exp. Neurobiol. 2015, 24, 325–340. [CrossRef] [PubMed]

3. Lu, X.-l.; Yao, X.-l.; Liu, Z.; Zhang, H.; Li, W.; Li, Z.; Wang, G.-L.; Pang, J.; Lin, Y.; Xu, Z. Kesan perlindungan xyloketal B terhadap MPP plus-induced neurotoksisiti dalam Caenorhabditis elegans dan sel PC12. Otak Re. 2010, 1332, 110–119. [CrossRef]

4. Trimmer, PA; Bennett, JP, Jr. Model cybrid penyakit Parkinson sporadis. Exp. Neurol. 2009, 218, 320–325. [CrossRef]

5. Cheon, S.-M.; Jang, I.; Lee, MH; Kim, DK; Jeon, H.; Cha, DS Sorbus alnifolia melindungi neurodegenerasi dopaminergik dalam Caenorhabditis elegans. Pharm. biol. 2016, 55, 481–486. [CrossRef]

6. Schmidt, N.; Ferger, B. Penemuan neurokimia dalam model MPTP penyakit Parkinson. J. Transm Neural. 2001, 108, 1263–1282. [CrossRef] [PubMed]

7. Harrington, A.; Yacoubian, TA; Slone, SR; Caldwell, K.; Caldwell, G. Analisis Fungsional VPS41-Mediated Neuroprotection dalam Caenorhabditis elegans dan Model Mamalia Penyakit Parkinson. J. Neurosci. 2012, 32, 2142–2153. [CrossRef] [PubMed]

8. Fu, R.-H.; Harn, H.-J.; Liu, S.-P.; Chen, C.-S.; Chang, W.-L.; Chen, Y.-M.; Huang, J.-E.; Li, R.-J.; Tsai, S.-Y.; Hung, H.-S.; et al. n-Butylidenephthalide Melindungi daripada Degenerasi Neuron Dopaminergik dan -Pengumpulan Synuclein dalam Caenorhabditis elegans Model Penyakit Parkinson. PLOS ONE 2014, 9, e85305. [CrossRef]

9. Jadiya, P.; Khan, A.; Sammi, SR; Kaur, S.; Mir, SS; Nazir, A. Kesan Anti-Parkinsonian Bacopa monnieri: Pandangan daripada model transgenik dan farmakologi Caenorhabditis elegans penyakit Parkinson. Biokim. Biophys. Res. Commun. 2011, 413, 605–610. [CrossRef] 10. Andrade, JMDM; Fasolo, D. Polifenol Antioksidan daripada Sumber Semulajadi dan Sumbangan kepada Promosi Kesihatan. Dalam Polifenol dalam Kesihatan dan Penyakit Manusia; Elsevier BV: Amsterdam, Belanda, 2014; ms 253–265.

11. Hsu, A.-L.; Murphy, CT; Kenyon, C. Peraturan Penuaan dan Penyakit Berkaitan Umur oleh DAF-16 dan Faktor Kejutan Haba. Sains 2003, 300, 1142–1145. [CrossRef]

12. Henderson, ST; Johnson, TE daf-16 menyepadukan input pembangunan dan persekitaran untuk mengantara penuaan dalam nematod Caenorhabditis elegans. Curr. biol. 2001, 11, 1975–1980. [CrossRef]

13. Hutadilok-Towatana, N.; Chaiyamutti, P.; Panthong, K.; Mahabusarakam, W.; Rukachaisirikul, V. Aktiviti Antioksidatif dan Penghapusan Radikal Bebas Beberapa Tumbuhan yang Digunakan dalam Perubatan Rakyat Thai. Pharm. biol. 2006, 44, 221–228. [CrossRef]

14. Stewart, P.; Boonsiri, P.; Puthong, S.; Rojpibulstit, P. Aktiviti antioksidan dan perubahan ultrastruktur dalam garisan sel kanser gastrik yang disebabkan oleh ekstrak tumbuhan rakyat Thailand yang boleh dimakan Timur Laut. Pelengkap BMC. Altern. Med. 2013, 13, 60. [CrossRef]

15. Hui, W.; Lee, W.; Ng, K.; Chan, C. Kejadian triterpenoid dan steroid dalam tiga spesies Glochidion. Fitokimia 1970, 9, 1099–1102. [CrossRef]

16. Takeda, Y.; Mima, C.; Masuda, T.; Hirata, E.; Takushi, A.; Otsuka, H. Glochidioboside, glukosida daripada (7S,8R)-dihydrodeh ydrodiconiferyl alkohol daripada daun glochidia obovatum. Fitokimia 1998, 49, 2137–2139. [CrossRef]

17. Zhang, X.; Chen, J.; Gao, K. Bahan kimia daripada Glochidion wrightii Benth. Biokim. Syst. Ecol. 2012, 45, 7–11. [CrossRef]

18. Tian, ​​J.-M.; Fu, X.-Y.; Zhang, Q.; Beliau, H.-P.; Gao, J.-M.; Hao, X.-J. Juzuk kimia daripada Glochidion assamicum. Biokim. Syst. Ecol. 2013, 48, 288–292. [CrossRef]

19. Kongkachuichai, R.; Charoensiri, R.; Yakoh, K.; Kringkasemsee, A.; Insung, P. Nilai nutrien dan kandungan antioksidan sayur-sayuran asli dari Selatan Thailand. Kimia Makanan. 2015, 173, 838–846. [CrossRef]

20. Pietta, P.-G. Flavonoid sebagai Antioksidan. J. Nat. Prod. 2000, 63, 1035–1042. [CrossRef] [PubMed]

21. Duangjan, C.; Rangsinth, P.; Gu, X.; Zhang, S.; Wink, M.; Ekstrak daun Tencomnao, T. Glochidion zeylanicum mempamerkan sifat rintangan tekanan oksidatif yang memanjangkan jangka hayat dan dalam Caenorhabditis elegans melalui laluan isyarat DAF-16/FoxO dan SKN-1/Nrf-2. Phytomedicine 2019, 64, 153061. [CrossRef]

22. Jensen, VL; Gallo, M.; Riddle, DL Sasaran DAF-16 yang terlibat dalam Caenorhabditis elegans umur panjang dewasa dan pembentukan dauer. Exp. Gerontol. 2006, 41, 922–927. [CrossRef] [PubMed]

23. Daitoku, H.; Fukamizu, A. Faktor Transkripsi FOXO dalam Rangkaian Kawal Selia Umur Panjang. J. Biokim. 2007, 141, 769–774. [CrossRef]

24. Lakso, M.; Vartiainen, S.; Moilanen, A.-M.; Sirviö, J.; Thomas, JH; Nass, R.; Blakely, RD; Wong, G. Kehilangan neuron dopaminergik dan defisit motor dalam Caenorhabditis elegans overexpressing human -synuclein. J. Neurochem. 2004, 86, 165–172. [CrossRef] [PubMed]

25. Nass, R.; Dewan, DH; Miller, DM; Blakely, RD Neurotoxin yang disebabkan oleh degenerasi neuron dopamin dalam Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002, 99, 3264–3269. [CrossRef]

26. Wang, Y.-M.; Pu, P.; Le, W.-D. Pengurangan ATP adalah punca utama kematian neuron dopamin yang disebabkan oleh MPP dan kematian cacing dalam -synuclein transgenik C. elegans. Neurosci. lembu jantan. 2007, 23, 329–335. [CrossRef]

27. Braungart, E.; Gerlach, M.; Riederer, P.; Baumeister, R.; Hoener, M. Caenorhabditis elegans MPP plus Model Penyakit Parkinson untuk Pemeriksaan Dadah Berkualiti Tinggi. Neurodegen. Dis. 2004, 1, 175–183. [CrossRef]

28. Panowski, SH; Dillin, A. Isyarat belia: Peraturan endokrin penuaan dalam Caenorhabditis elegans. Trend Endokrinol. Metab. 2009, 20, 259–264. [CrossRef]