Ekstrak Bunga Sebagai Pewarna Pelbagai Fungsi dalam Industri Kosmetik Bahagian 2

Sila hubungioscar.xiao@wecistanche.comuntuk maklumat lanjut

Banyak produk semula jadi digunakan dalam sistem perubatan tradisional untuk merawat melegakan simptom daripada kesakitan dan keradangan, [61] oleh itu, kesan ekstrak yang dianalisis ke atas perencatan aktiviti lipoksigenase dan proteinase telah disiasat. Dalam julat kepekatan yang dianalisis (100-500 ug/mL), ekstrak air CTE menunjukkan keupayaan paling kuat untuk menghalang proteinase (Rajah 4) (pada 57 peratus untuk kepekatan 500 ug/mL). Aktiviti ini dibandingkan dengan perencat proteinase yang terkenal diclofenac, digunakan sebagai kawalan (kira-kira 89 peratus perencatan pada kepekatan tertinggi yang diuji). Walau bagaimanapun, keputusan yang sama diperoleh untuk ekstrak GGE dan KTE (masing-masing kira-kira 56 peratus dan 53 peratus, untuk kepekatan tertinggi). Perencatan proteinase yang lebih rendah diperhatikan untuk ekstrak PRE dan PGE. Dalam ujian selanjutnya yang mengukur keupayaan untuk menghalang lipoxygenase, ekstrak akueus daripada KTE dan CTE menunjukkan nilai tertinggi (kira-kira 67 peratus dan 64 peratus perencatan, masing-masing, untuk kepekatan 500 ug/mL）. Diklofenak juga digunakan sebagai kawalan Ekstrak GGE, PGE, dan PRE juga mempunyai nilai yang sangat tinggi (masing-masing 60 peratus ,57 peratus , dan 54 peratus). Juga diperhatikan bahawa keupayaan untuk menghalang enzim LOX dan proteinase bergantung pada kepekatan ekstrak (Rajah 5).

Kajian terdahulu menunjukkan bahawa banyak sebatian polifenol menyumbang dengan ketara kepada aktiviti anti-radang banyak ekstrak tumbuhan[62]. Kajian telah menunjukkan penglibatan ROS dalam proses keradangan, dan sebatian fenolik seperti asid gallic dan quinic boleh menyekat metabolisme asid arakidonik dengan menghalang aktiviti aktiviti lipoxygenase, atau mereka mungkin berfungsi sebagai pemusnah radikal bebas reaktif, yang dihasilkan semasa asid arakidonik. [63]. Keputusan yang diperolehi oleh BenSaad et al. menunjukkan bahawa asid ellagic, asid gallic, dan punicalagin A&B yang diasingkan daripada P. granatum menghalang pengeluaran nitrik oksida(NO), prostaglandin E2(PGE2), dan interleukin 6 (IL-6) dalam lipopolisakarida (LPS) yang disebabkan RAW 267.4 makrofaj. Sama ada sebatian ini berfungsi sebagai agen tunggal atau mempunyai kesan sinergistik masih menjadi persoalan [64]. Oleh kerana banyak flavonoid menunjukkan sifat anti-radang, kerana tingkah laku antioksidan intrinsiknya, ia telah terlibat dalam pelbagai gangguan keradangan.kaedah pengekstrakan flavonoid pdf,Khususnya, quercetin adalah molekul yang paling menarik kerana ia mengganggu laluan biologi tertentu. Selain itu, kajian mencadangkan bahawa ia boleh mengurangkan proses keradangan yang terlibat dalam beberapa model melalui mekanisme yang berbeza[65]. Khususnya, laluan protein kinase yang diaktifkan AMP dan histone/protein deacetylase(AMPK/SIRT1) menghasilkan pengurusan keradangan yang lebih menarik. Oleh itu, pengaktif AMPK boleh mengurangkan keradangan makrofaj. Quercetin dan flavonoid lain, sebagai pengaktif AMPK dan SIRT1, boleh mengurangkan keradangan dengan mengganggu laluan ini [66]. Ia juga telah ditunjukkan bahawa quercetin dan quercetin monoglucosides mempunyai potensi perencatan LOX yang lebih tinggi [67]Nair et al. telah menunjukkan sifat anti-radang ekstrak KTE dengan menilai kehadiran flavonol dengan bahagian kuersetin seperti manghaslin Qu 3-[2G] rhamnosylrutinoside, Qu 3-O-dirhamnoside, dan rutin. Molekul ini telah menunjukkan perencatan kuat terhadap aktiviti COX{11}} dan penindasan separa ROS. Secara umum, polifenol yang terdapat dalam CTE menunjukkan sifat anti-radang dalam keradangan yang disebabkan oleh LPS dalam sel makrofaj RAW 264.7 [68].

Sila klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut

2.5.Penilaian Sitotoksisiti

Dalam mencipta bahan mentah kosmetik baru, salah satu sifat yang paling penting ialah keselamatan penggunaannya. Bahan yang dikhaskan untuk digunakan dalam kosmetik mestilah bukan toksik, terutamanya berkaitan dengan sel kulit, seperti keratinosit dan fibroblas. Dua jenis ujian telah digunakan untuk menentukan ketoksikan ekstrak yang dianalisis pada sel HaCaT dan BJ.flavonoidKajian pertama, menggunakan ujian pengambilan merah neutral, membolehkan kami menilai daya maju sel yang dirawat dengan ekstrak yang dianalisis. Pewarna ini memasuki lisosom sel hidup dan dilepaskan ke dalam sitoplasma sel mati. Telah diperhatikan (Rajah 6) bahawa ekstrak CTE mempunyai keupayaan tertinggi untuk meningkatkan percambahan kedua-dua HaCaT dan sel BJ. Berbanding dengan kawalan, ekstrak ini mencapai nilai kira-kira 20 peratus dan 40 peratus lebih tinggi daripada parameter yang diuji pada kepekatan 250 μL/mL （HaCaT dan B】）dan 500 μL/mL（sel BJ）, masing-masing. Ekstrak GGE pada kepekatan 100 dan 250 μL/mL dan ekstrak KTE pada kepekatan 500 μL/mL dicirikan oleh sedikit kesan toksik pada sel BJ. Ekstrak lain mempunyai pengaruh positif terhadap daya maju sel-sel ini. Ekstrak PRE dan PGE pada kepekatan 100 μL/mL tidak berbeza dengan ketara daripada kawalan, dan ia meningkatkan percambahan sel BJ sebanyak kira-kira 10-15 peratus berbanding kawalan pada kepekatan 250 dan 500 μL/ mL. Dalam kes keratinosit, tiada penurunan daya maju sel diperhatikan. Bagi ekstrak PGE, PRE, dan CTE, peningkatan dalam percambahan dengan peningkatan kepekatan telah dicatatkan, manakala penurunan daya maju sel ditunjukkan dengan peningkatan kepekatan ekstrak KTE dan GGE.

Ujian kedua yang dijalankan untuk menentukan sitotoksisiti ekstrak yang diuji ialah ujian resazurin (Alamar Blue). Telah ditunjukkan (Rajah 7) bahawa daya maju sel bergantung pada kepekatan ekstrak yang mana sel itu diinkubasi. Dalam kes fibroblas, ekstrak PRE, PGE, dan CTE menyebabkan percambahan sel yang lebih tinggi dengan peningkatan kepekatannya. Pada kepekatan tertinggi yang dianalisis （500 μL/mL）, kira-kira 20 peratus percambahan lebih tinggi diperhatikan berbanding dengan kawalan.kegunaan hesperidinDalam kes ekstrak KTE dan GGE, penurunan daya maju sel diperhatikan dengan peningkatan kepekatan ekstrak. Ekstrak ini menunjukkan sedikit kesan toksik pada BJ pada kepekatan 250 dan 500 μL/mL. Dalam kes keratinosit, kesan serupa daripada ekstrak yang dianalisis pada sel kulit diperhatikan, tetapi keupayaannya untuk membiak tidak sekuat dalam kes fibroblas. Keupayaan tertinggi untuk meningkatkan percambahan keratinosit diperhatikan untuk ekstrak CTE dalam keseluruhan julat kepekatan yang dianalisis. Nilai yang sama diperoleh untuk ekstrak PRE pada kepekatan 250 μL/mL dan untuk ekstrak PGE pada kepekatan 500 μL/mL. Ekstrak KTE menunjukkan kesan toksik yang jauh lebih tinggi pada sel HaCa berbanding ekstrak GGE.

Ekstrak yang dianalisis belum pernah diuji secara meluas untuk ketoksikannya kepada sel kulit sebelum ini. Terdapat hanya beberapa kajian sitotoksisiti terhadap ekstrak atau bahan aktif utamanya, terutamanya terhadap sel-sel kanser. Pengarang kajian terdahulu menunjukkan bahawa ekstrak ini secara amnya tidak mempunyai kesan toksik pada sel kulit, dan keupayaannya untuk meningkatkan percambahan sel paling kerap dikaitkan dengan kandungan polifenol, anthocyanin dan flavonoid yang tinggi [45,69-73 ]. Sesetengah penulis juga menunjukkan bahawa komponen individu yang terkandung dalam ekstrak mungkin menunjukkan kesan toksik pada sel kulit, manakala ekstrak secara keseluruhan tidak. Ali Hijazi et al. [69] menunjukkan bahawa alkaloid yang diekstrak daripada Punica granatum adalah toksik kepada garis sel normal dan kanser, manakala keseluruhan ekstrak kurang toksik. Kajian Nasiri et al. [70] menunjukkan bahawa ekstrak bunga Punica granatum mungkin berguna dalam mempercepatkan proses penyembuhan luka kerana keupayaannya untuk meningkatkan percambahan sel kulit. Dalam kajian terdahulu kami [45], telah ditunjukkan bahawa ekstrak air-etanol yang diperoleh daripada tumbuhan yang dianalisis dicirikan oleh keupayaan yang lebih tinggi untuk meningkatkan percambahan sel BJ, dan ekstrak KTE dan GGE menunjukkan kesan toksik yang lebih rendah pada sel-sel ini. .cistanche empayar yang hilangKesan ekstrak air-etanol pada sel HaCaT adalah serupa dengan ekstrak akueus tulen, tetapi dalam kes ekstrak yang diperoleh dengan etanol, sifat percambahan yang lebih baik sedikit diperhatikan berbanding dalam kes ekstrak akueus. Perbezaan antara komposisi kedua-dua jenis ekstrak yang dianalisis boleh menyebabkan perbezaan ketoksikannya. Seperti yang ditunjukkan, ekstrak air tidak begitu kaya dengan bahan bioaktif seperti ekstrak etanol air. Perbezaan terbesar diperhatikan dalam kandungan rutin dan isoquercitrin.

Cistanche boleh anti-penuaan

2.6.Penentuan Faktor Perlindungan Matahari

Kesan buruk sinaran UV pada kulit mungkin terserlah sejurus selepas pendedahan dan juga beberapa tahun kemudian. Sinaran suria mempunyai kesan imunosupresif yang mempercepatkan proses penuaan kulit dengan semua akibat yang berkaitan dengannya, termasuk peningkatan karsinogenesis[74]. Trend yang diperhatikan pada masa ini menunjukkan keperluan yang semakin meningkat untuk membangunkan produk yang dicirikan bukan sahaja oleh tahap keselamatan yang sangat tinggi dalam penggunaan tetapi juga pelbagai fungsi dalam erti kata bahawa produk akan menampilkan perlindungan anti-radiasi kulit dengan skop tindakan yang lebih luas daripada yang digunakan setakat ini. Sesetengah bahan tumbuhan memainkan peranan yang tidak ternilai dalam aspek ini, yang bukan sahaja mampu memberikan perlindungan matahari tetapi juga untuk meneutralkan kesan negatif sinaran suria yang sedia ada pada kulit [75-77]. Kajian yang dijalankan menunjukkan bahawa ekstrak tumbuhan yang dianalisis PRE, PGE, KTE, CTE, dan GGE dicirikan oleh pekali SPF yang tinggi.

Analisis pekali (SPF) telah dijalankan untuk ekstrak air yang diperolehi daripada tumbuhan yang disebutkan di atas pada kepekatan 10 dan 50 mg/mL. Bagi setiap tumbuhan yang disiasat kepekatan ekstrak yang lebih tinggi menghasilkan nilai SPF yang jauh lebih tinggi.pecahan flavonoid tulen mikronisasi 1000 mg kegunaanPerbandingan antara ekstrak menunjukkan bahawa nilai tertinggi SPF diperhatikan untuk ekstrak KTE, yang memegang kedua-dua kepekatan yang disiasat. Satu lagi pemerhatian yang menarik ialah walaupun dalam kepekatan yang lebih rendah yang disiasat, ekstrak KTE masih menunjukkan SPF yang tinggi, manakala nilai untuk ekstrak lain menurun dengan ketara. Ini jelas apabila kita menganalisis berapa banyak keputusan untuk KTE lebih tinggi daripada ekstrak lain. Untuk kepekatan 50 mg/mL, SPF adalah lebih tinggi dengan faktor 1.2 (jika dibandingkan dengan PGE, CTE) kepada faktor hampir 1.9 (jika dibandingkan dengan PRE, GE). Pengiraan yang sama untuk kepekatan 10 mg/mL akan memberikan faktor daripada 1.4(jika dibandingkan dengan PGE) kepada faktor julat 2-3 (jika dibandingkan dengan CTE, GGE), malah sehingga faktor seperti 10 jika dibandingkan dengan PRA. Apabila memfokuskan pada ekstrak KTE, seseorang dapat melihat bahawa penurunan kepekatan ekstrak oleh faktor 5 (dari nilai 50 mg/mL kepada nilai 10 mL/mL) mengakibatkan penurunan nilai SPF oleh faktor3.4 , yang bermaksud bahawa SPF berkurangan lebih perlahan daripada kepekatan. Di atas menunjukkan bahawa ekstrak KTE boleh menjadi cekap walaupun digunakan dalam kepekatan rendah (Rajah 8).

2.7. Pengukuran Kehilangan Air Transepidermal(TEWL) dan Penghidratan Kulit

Oleh kerana pelbagai aktiviti biologi dan farmakologi bahan mentah tumbuhan, bahan tumbuhan yang terkandung dalam ekstrak mempunyai kesan yang ketara terhadap keadaan kulit. Khususnya, kita bercakap di sini mengenai pengaruh metabolit sekunder pada keadaan kulit kita [78,79].

Pada peringkat seterusnya penyelidikan, analisis penghidratan dan TEWL telah dijalankan. Kesan ekstrak yang diuji pada kulit dinilai. Pengukuran dibuat pada selang dua masa 60 dan 360 min untuk kepekatan ekstrak 10mg/mL. Bagi pengukuran TEWL, peratusan penurunan terbesar ditunjukkan untuk ekstrak PGE, di mana nilai kawalan 13.9 jatuh kepada 8.71, mengakibatkan peratusan penurunan sebanyak 37 peratus . Ia juga bernilai menganalisis ekstrak KTE dari perspektif itu, kerana ini adalah yang mempamerkan nilai SPF tertinggi. Bagi ekstrak KTE, nilai kawalan TEWL menurun kepada nilai 10.22, yang bermaksud penurunan sebanyak 26 peratus (Rajah 9A).

Walau bagaimanapun, dalam kes pengukuran instrumen kedua, ia menunjukkan bahawa ekstrak yang dianalisis menyebabkan peningkatan dalam pelembapan berhubung dengan sampel kawalan, kedua-duanya selepas 60 dan juga selepas 360 minit.

Hasil daripada analisis, didapati bahawa ekstrak PRE, PGE, KTE, CTE, dan GGE yang dianalisis meningkatkan penghidratan kulit (Rajah 9B). Peningkatan dalam sifat pelembab diperhatikan bersama-sama dengan peningkatan kepekatan ekstrak dalam persediaan. Sifat pelembap terkuat telah diperhatikan untuk ekstrak PRE dan PGE bersamaan 32 peratus dan 29 peratus selepas 60 minit dan bersamaan 21 peratus dan 22 peratus selepas 360 minit. Paras terendah penghidratan kulit, bagaimanapun, telah ditemui untuk ekstrak KTE bersamaan 18 peratus selepas 60 minit dan hampir 3 peratus selepas 360 minit.

2.8. Analisis Aplikasi

2.8.1. Penentuan Parameter Warna Ekstrak

Oleh kerana warna semula jadinya, bahan aktif bunga tumbuhan boleh digunakan sebagai pewarna semula jadi dalam banyak produk komersial, seperti kosmetik dan makanan. Analisis warna dilakukan untuk ekstrak yang diperolehi (Jadual 5).

Ekstrak PRE, KTE, dan CTE didapati mempunyai potensi tertinggi sebagai pigmen kosmetik semulajadi. Walau bagaimanapun, nilai kroma tertinggi (C*) telah diperhatikan untuk CTE. Berdasarkan nilai parameter h darjah, didapati warna kuning ekstrak ini yang diperhatikan dan boleh dilihat dengan mata kasar. Dalam kes ekstrak KTE dan PRE, walaupun nilai C* rendah (2.8), warna ekstrak ini boleh dilihat dengan jelas dengan mata kasar dan dinyatakan sebagai merah-ungu untuk PRE dan biru-ungu untuk ekstrak KTE. Ekstrak air PGE dan GGE berwarna kemerah-merahan dan sedikit oren, dan nilai kroma yang diperoleh adalah pada tahap 1.3. Untuk warna ini, nilai ini tidak dapat dilihat dengan mata kasar.

2.8.2. Penentuan Parameter Warna Kosmetik Berdasarkan Ekstrak

Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, terdapat keperluan yang kuat untuk membangunkan pewarna baharu yang berasal dari semula jadi, terutamanya dalam industri makanan dan kosmetik. Berbanding dengan pewarna yang diperoleh secara sintetik, ia mungkin mempunyai kesan negatif yang lebih rendah terhadap kesihatan manusia dan alam sekitar [80]. Ekstrak yang diperolehi digunakan dalam perumusan cecair penanggal solekan model micellar. Dalam setiap rumusan, ia digunakan dalam kepekatan 1 peratus . Keputusan parameter warna kosmetik model dibentangkan dalam Jadual 6.

Diperhatikan bahawa penambahan 1 peratus ekstrak air daripada PRE, PGE, CTE, dan GGE secara signifikan mempengaruhi warna penanggal mekap. Setiap sampel jelas kelihatan dengan mata kasar dalam warna. Ekstrak PRE menukar warna kosmetik kepada oren, dan ekstrak PGE, CTE, dan GGE menukarnya kepada kuning.

Kemungkinan untuk menggunakan ekstrak yang dianalisis sebagai pewarna berpotensi disahkan oleh nilai yang agak tinggi △Pembuang solekan dengan ekstrak/penanggal solekan asas, yang menunjukkan perubahan ketara dalam warna kosmetik model dengan penambahan ekstrak berbanding kepada sampel asas (tanpa menambah ekstrak). Data kesusasteraan [73] menunjukkan bahawa jika nilai AE lebih tinggi daripada 5, warna itu dilihat oleh malam telanjang dan dianggap sebagai kesan warna. Bagi penanggal solekan yang mengandungi ekstrak PRE, KTE dan CTE, nilai AE masing-masing 8.83,9.17 dan 8.14 telah diperolehi. Dalam kes produk dengan ekstrak PGE dan GGE, tiada pengaruh ketara dalam ekstrak pada warna penyediaan diperhatikan. Nilai AE berada dalam julat 2.51-2.82. Ini bermakna perbezaan warna hanya boleh dilihat oleh pemerhati yang berpengalaman [80,81].

3. Bahan dan Kaedah

3.1. Bahan Tumbuhan dan Prosedur Pengekstrakan

Bahan tumbuhan yang digunakan dalam penyelidikan adalah bunga kering P. rhoeas L., P.granatum L., C.ternatea L., C.tinctorius L., dan G.globosa L., yang diperoleh dari kedai herba tempatan. . Proses pengekstrakan dilakukan dalam mandi ultrasonik (Digital Mgtrasonic Cleaner, Berlin, Jerman), yang dijalankan menggunakan kaedah yang diterangkan oleh Yang et al.[82]. 10 gram bunga kering dan 100 g air digunakan untuk menyediakan ekstrak air tumbuhan yang diuji. Proses ini dijalankan selama 20 minit pada suhu bilik. Ekstrak yang diperoleh kemudiannya dikumpul dan ditapis sebanyak tiga kali melalui kertas turas Whatman No. Selepas penapisan, ekstrak telah disejat di bawah tekanan yang dikurangkan pada 40 darjah. Larutan stok pada kepekatan 100 mg/mL telah disediakan daripada ekstrak kering dan disimpan dalam gelap pada 4 darjah sehingga analisis selanjutnya. Singkatan berikut digunakan: PRE—Papaver rhoeas extract, PGE—Punica granatum extract, GGE—Gomphrena globosa extract, CTE—Carthamus tinctorius extract, KTE—Clitoria ternatea extract.

3.2. Penentuan Sebatian Bioaktif oleh HPLC-UV-ESI-MS

Ekstrak yang diperolehi dianalisis untuk menentukan sebatian bioaktif utamanya menggunakan HPLC(DionexUltiMate 300{{20}} RS Thermo Fisher Scientific, Sunnyvale, CA, USA), digandingkan dengan spektrometer jisim(4000 QTRAP, AB Sciex, Concord, ON, Kanada), dilengkapi dengan sumber pengionan elektrospray(ESI) dan jisim perangkap ion empat kali ganda tiga kali ganda penganalisis. Pemisahan kromatografi telah dicapai dengan sistem fasa songsang kecerunan. Tambahan pula, lajur kromatografi 100×4.6 mm Kinetex 3.5 μm XB-C18 100 A dengan rantai sisi iso-butil dan dengan fasa pegun penutup hujung TMS yang digunakan dengan tiang pengawal komposisi serupa telah dibeli daripada Phenomenex dan dikekalkan pada 30 darjah . Sistem pelarut binari yang terdiri daripada 0.1 peratus (o/v) asid formik akueus sebagai pelarut A dan metanol sebagai pelarut B telah digunakan di bawah mod kecerunan selama 19.1 minit masa larian. Syarat elusi yang digunakan adalah seperti berikut:0.0-15.0 min 25-100 peratus B,15.0-17.0 min 100 peratus B,17.0-17.1 min 100-25 peratus B,17.1-19.1 min 25 peratus B.Kadar alir fasa mudah alih ialah 0.6 mL/min dan isipadu suntikan ialah 10 μL. Eluen dipantau oleh spektrometer jisim ion elektrospray (ESI-MS) di bawah mod ion negatif dan diimbas dari m/z 20 hingga 1000 Da. Untuk analisis kuantifikasi, pengesan MS triple quadrupole berfungsi dalam mod imbasan pemantauan tindak balas berbilang (MRM). Keadaan penganalisis jisim optimum dan pemilihan ion produk untuk sebatian individu ditentukan secara eksperimen. Untuk tujuan ini, larutan piawai bagi sebatian yang disiasat (1 ng/mL) dalam komposisi fasa mudah alih telah diperkenalkan menggunakan pam infusi yang beroperasi dalam penghantaran sampel malar. Selepas memastikan bahawa ion prekursor yang betul telah dipilih, potensi declustering (DP), potensi masuk (EP), potensi keluar sel perlanggaran (CXP), dan tenaga perlanggaran (CE) telah dioptimumkan untuk setiap peralihan MRM (Jadual S1). Dua peralihan MRM telah dipantau, satu untuk kuantifikasi dan satu untuk pengesahan. Parameter MS telah ditetapkan seperti berikut: suhu kapilari 600 C, gas tirai pada 35 psi, gas nebulizer pada 60 psi, dan gas pengeringan pada 50 psi. Voltan sumber mod pengionan negatif -4500 V digunakan untuk penentuan sebatian bioaktif. Nitrogen digunakan sebagai gas tirai dan perlanggaran. Analisis data telah diproses dengan perisian Analyst 1.5.1. Pengenalpastian sebatian terpilih dilakukan oleh jisim molekul dan serpihan kemasukan anion setiap sebatian individu dan disahkan oleh pemecahan MS2. Identiti sembilan sebatian telah ditentukan bersama dengan formula kimianya, ion molekul terdeprotonasi, dan ion serpihan ciri untuk setiap puncak individu. Enam sebatian telah dikira berdasarkan keluk penentukuran yang dijana menggunakan kawasan puncak peralihan MRM paling sengit bagi piawaian analisis. Kelinearan tindak balas pengesan untuk sebatian terkuantiti ditunjukkan dengan suntikan piawaian penentukuran pada lapan tahap kepekatan antara 0.01 ug/mL hingga 2ug/mL. Keluk penentukuran adalah linear dengan pekali korelasi (R) lebih besar daripada 0.99. Sekiranya sampel tidak jatuh dalam julat linear pengesan CMS, sampel telah dicairkan.

Piawaian analisis asid kuinik, asid gallik, asid caffeik, asid caffeoylquinic(CQA, dua isomer:3- dan 5-CQA), dan kuersetin telah dibeli daripada Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Syarikat ). Semua piawaian yang digunakan adalah gred analitik (2 Lebih besar daripada atau sama dengan 99 peratus ketulenan).

Penyelesaian stok standard disediakan dengan menimbang dan melarutkan 20 mg setiap piawai dengan tepat dalam 10 mL metanol gred LC-MS untuk memberikan kepekatan 2 mg/mL. Pencairan bersiri 2.{{10}} ug/mL, 1.5 ug/mL,1.0 ug/mL, 0.5ug/mL,0 .1 ug/mL, 0.05 ug/mL,0.02 ug/mL dan 0.01 ug/mL kemudiannya dibuat menggunakan larutan metanol gred LC-MS. Had kuantiti (LOQ) ditakrifkan sebagai 0.01 ug/ml.

Ujian LC-MS / MS dilakukan dalam tiga kali ganda. Data yang diperolehi dibentangkan sebagai min ± sisihan piawai.

3.3. Penentuan Sifat Antioksidan

3.3.1.ABTS· ditambah dengan Ujian Scavenging

Mula-mula, larutan ABTS disediakan dengan mencampurkan 19.5 mg ABTS dan 3.3 mg kalium persulfat dengan penimbal fosfat 7mL (pH=7.4) dan dilarutkan selama 16 jam dalam kegelapan. Kemudian, larutan itu dicairkan kepada penyerapan pada tahap kira-kira 1.0. Penyerapan diukur pada panjang gelombang 入=734 nm. Seterusnya, 20 mL ekstrak KTE, PGE, PRE, CTE dan GGE (10,100,250,500 ug/mL) dicampur dengan 980 mL larutan ABTSe ​​tambah yang dicairkan dan kemudian diinkubasi selama 10 minit dalam kegelapan. Dalam langkah seterusnya, penyerapan sampel yang disediakan diukur pada 入=734 nm menggunakan spektrofotometer UV/VIS Aquamate Helion (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Air suling digunakan sebagai kosong. ABTS plus scavenging dikira daripada Persamaan (1):

di mana: As—penyerapan sampel; Ac—serapan sampel kawalan. Pengukuran telah dilakukan dalam tiga kali ganda untuk setiap sampel yang diekstrak. Prosedur ini diterangkan oleh Gawel-Beben et al. [83].

3.3.2.DPPH Radical Scavenging Assay

Keupayaan ekstrak untuk menghilangkan radikal bebas telah dijalankan menggunakan kaedah yang diterangkan oleh Brand-Williams et al. [84]. Ia berdasarkan penggunaan radikal 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl （DPPH）. Pertama, 33 μL larutan akueus ekstrak pada kepekatan 100ug/mL dicampur dengan 167 μL larutan metanol DPPH（4 mM） dan dipindahkan ke plat telaga 96-, kemudian dicampur dengan menggoncang. Selepas itu, penyerapan sampel diukur pada panjang gelombang 517 nm. Pengukuran dibuat setiap 5 minit selama 30 minit pada Penapis UV-VIS Max 入=5 spektrofotometer（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Tiga replika bebas telah dilakukan untuk setiap ekstrak. Air dengan larutan DPPH digunakan sebagai kawalan. Kapasiti antioksidan dinyatakan sebagai peratusan perencatan DPPH menggunakan Persamaan (2):

di mana: As—penyerapan sampel; Ac—serapan sampel kawalan. Pengukuran telah dilakukan dalam tiga kali ganda untuk setiap sampel yang diekstrak.

3.3.3.Pengesanan Tahap Intraselular Spesies Oksigen Reaktif (ROS)

Untuk menentukan keupayaan ekstrak yang dianalisis untuk menjana pengeluaran intraselular spesies oksigen reaktif dalam sel HaCaT dan BJ, pewarna H fluorogenik, DCFDA telah digunakan. Kompaun ini mempunyai keupayaan untuk memasuki sel melalui resapan pasif, di mana ia dideasetilasi oleh esterase intraselular kepada sebatian bukan pendarfluor. Jika spesies oksigen reaktif terdapat dalam sel, sebatian ini diubah menjadi DCF yang sangat pendarfluor. Untuk menentukan tahap intrasel ROS dalam HaCaT dan BJ, sel telah disemai dalam 96-plat perigi. Kemudian, sel dibiakkan dalam inkubator selama 24 jam. Medium DMEM telah dikeluarkan dan digantikan dengan 10 μM H2DCFDA（Sigma Aldrich, St.Louis, MO, USA） dilarutkan dalam medium DMEM tanpa serum. Sel HaCaT dan BJ diinkubasi dalam H, DCFDA selama 45 minit dan kemudian diinkubasi dengan ekstrak dalam kepekatan ∶ 100, 250, dan 500 ug/mL. Sel yang dirawat dengan 1 mM hidrogen peroksida (H2O2) telah digunakan sebagai kawalan positif. Sampel kawalan adalah sel yang tidak dirawat dengan ekstrak yang diuji. Pendarfluor DCF diukur setiap 90 minit menggunakan pembaca plat mikro FilterMax F5 (Thermo Fisher Scientific) pada pengujaan maksimum 485 nm dan spektrum pelepasan 530 nm [85].

3.4. Penilaian Perencatan Metallopeptidases Matriks

3.4.1.Penentuan Aktiviti Anti-Elastase

Untuk menentukan kemungkinan menghalang metalloproteinase matriks, elastase neutrofil (NE), kit fluorometrik (Abcam, ab118971) telah digunakan. Ujian telah dijalankan mengikut arahan yang dilampirkan pada kit dan dengan prosedur yang diterangkan oleh Niziol-Lukaszewska et al. [86]. Analisis telah dilakukan dalam plat perigi 96-piawai dengan bahagian bawah rata yang jelas. Untuk analisis, ekstrak tumbuhan dalam kepekatan 100 dan 250 ug/mL telah digunakan. Pada mulanya, larutan enzim NE, substrat NE, dan kawalan perencat (SPCK) telah disediakan mengikut arahan. Larutan NE yang dicairkan telah ditambah ke semua telaga dan kemudian, sampel ujian, kawalan perencat, dan kawalan enzim (Penimbal Assay) ditambah ke telaga berikutnya. Selepas itu, sampel dicampur dan diinkubasi pada 37 darjah selama 5 minit. Sementara itu, campuran tindak balas telah disediakan dengan mencampurkan Assay Buffer dan substrat NE. Campuran itu ditambah kepada setiap perigi dan dicampur dengan teliti. Pendarfluor diukur serta-merta pada panjang gelombang pengujaan 入=400 nm dan pancaran 入=505 nm menggunakan pembaca plat mikro(FilterMax F5, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Amerika Syarikat)Keupayaan untuk menghalang aktiviti NE yang dianalisis sampel dikira daripada Persamaan (3):

Keputusan akhir ialah min aritmetik bagi tiga ukuran bebas.

3.4.2. Penentuan Aktiviti Anti-Collagenase

Untuk menilai keupayaan ekstrak yang diperolehi untuk menghalang aktiviti kolagenase, kit fluoro-metrik (Abcam, Cambridge, UK, ab211108) telah digunakan. Ujian telah dijalankan mengikut arahan yang dilampirkan pada kit dan dengan prosedur yang diterangkan oleh Niziol-Lukaszewska et al. [86]. Analisis dilakukan dalam plat perigi 96-piawai dengan bahagian bawah rata yang jelas. Untuk analisis, ekstrak tumbuhan dalam kepekatan 100 dan 250 ug/mL telah digunakan. Pertama, kolagenase（COL） telah dibubarkan dalam penimbal analisis kolagenase(CAB). Kemudian, sampel yang dianalisis telah ditambah kepada COL dan CAB. Sampel kawalan perencat disediakan dengan mencampurkan perencat kolagenase(1,10-phenanthroline(80 mM) dengan kolagenase dan penimbal CAB. Telaga kawalan enzim disediakan dengan mencampurkan COL cair dengan CAB. Penampan CAB digunakan sebagai kawalan latar belakang Kemudian, sampel diinkubasi pada suhu bilik selama 15 minit. Campuran tindak balas telah disediakan dengan mencampurkan substrat kolagenase dengan CAB. Campuran tindak balas yang disediakan dengan cara ini telah ditambah kepada semua sampel yang dianalisis dan dicampur dengan teliti. Selepas itu, pendarfluor diukur pada satu panjang gelombang pengujaan 490 nm dan pancaran 520 nm. Pengukuran dilakukan dalam mod kinetik selama 60 minit pada 37 C. Keupayaan untuk menghalang aktiviti COL ekstrak yang diperolehi dikira dengan Persamaan (4):

3.5. Penentuan Sifat Anti-Radang

3.5.1. Perencatan Denaturasi Protein

Aktiviti perencatan protein PRE, PGE, KTE, CTE, dan GGEekstrak dilakukan mengikut kaedah Sakat et al.[87], yang telah diubah suai oleh Gunathilake et al.[88]. Secara ringkas, larutan tindak balas (2 mL) terdiri daripada 1 mL 1 peratus tripsin dalam 2{{1{0}} penimbal Tris-HCl mM(pH7.4) dan 1 mL sampel ujian ({{17} }.02 mL ekstrak 0.980 mL air). Penyelesaian telah diinkubasi (37 darjah selama 5 minit), dan kemudian 1 mL 0.8 peratus (w/v) kasein ditambah dan campuran itu diinkubasi lagi selama 20 minit. Pada akhir pengeraman, 2 mL asid perklorik 70 peratus telah ditambah untuk melengkapkan tindak balas. Campuran telah disentrifugasi, dan penyerapan supernatan diukur pada 210 nm terhadap penimbal sebagai kosong. Larutan penimbal fosfat digunakan sebagai kawalan. Peratusan perencatan denaturasi protein dikira menggunakan formula berikut:

di mana A1= penyerapan sampel kawalan dan A2= penyerapan sampel ujian.

3.5.2. Perencatan Aktiviti Lipoxygenase

Keupayaan ekstrak yang diperolehi untuk menghalang aktiviti lipoksigenase ditentukan menggunakan kaedah yang diterangkan oleh Sarvesvaran et al. 【89】. Mula-mula, 10 μL ekstrak tumbuhan dalam kepekatan yang berbeza（100, 250, dan 500 ug/mL） dicampur dalam 96-plat perigi dengan 160 μL 100 mM PBS dan 20 μL larutan lipoksigenase kacang soya（167 U/ mL）. Sampel diinkubasi pada 25 darjah selama 10 minit dan selepas masa ini 10 μL asid natrium linoleik ditambah untuk memulakan tindak balas. Kemudian, penyerapan sampel diukur pada 234 nm dalam tempoh 3 minit dalam setiap minit menggunakan pembaca FilterMax F5microplate (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Diclofenac digunakan sebagai kawalan positif. Peratusan perencatan aktiviti lipoksigenase dikira daripada Persamaan (6):

di mana: Seperti penyerapan sampel yang diuji, Ac ialah penyerapan kawalan negatif.

Keputusan akhir ialah min aritmetik bagi tiga ukuran bebas.

3.6. Analisis Sitotoksisiti

3.6.1. Kultur sel

Dalam kajian ini, dua garisan sel kulit telah digunakan: keratinosit manusia normal(HaCaT)dan fibroblas(BJ).HaCaT diperolehi daripada CLSell Lines Service(CLS Cell Lines Service GmbH, Eppelheim, Jerman) dan BJs daripada American Type Culture Collection ( Manassas, VA, Amerika Syarikat). Sel telah ditanam dalam Pengubahsuaian Sederhana Helang Dulbecco (DMEM, Industri Biologi, Cromwell, CO, Amerika Syarikat) dengan natrium piruvat, L-glutamin, dan kandungan glukosa tinggi (4.5g/L). Medium itu juga diperkaya dengan 10 peratus serum lembu janin (Gibco, Waltham, MA, USA) dan 1 peratus dengan antibiotik (100 U/mL penisilin dan 1000 ug/mL streptomycin, Gibco) untuk mengelakkan pencemaran mikrob. Sel-sel telah ditanam dalam inkubator pada 37 darjah dalam suasana lembap 95 peratus udara dan 5 peratus karbon dioksida.

3.6.2.Alamar Blue Assay

Selepas sel kultur (HaCaT dan BJ) telah mencapai pertemuan yang dikehendaki, medium DMEM disedut dalam kelalang kultur. Sel-sel yang melekat di bawah telah dibasuh dua kali dengan garam penimbal fosfat steril. Lapisan sel telah ditanggalkan dengan trypsin dan kemudian sel-sel diletakkan dalam medium DMEM segar. Sel telah disadur dalam 96-plat bawah rata dengan baik (VWR, Radnor, PE, USA) dan selepas melekat pada bahagian bawah plat, sel telah dirawat dengan ekstrak（100, 250, dan 500 ug/mL）. Sel telah diinkubasi selama 24 jam.

Ujian sitotoksisiti dilakukan dengan ujian Alamar Blue (Sigma, R7017, Life Technologies, Bleiswijk, Belanda). Selepas pengeraman, larutan resazurin pada kepekatan 60 uM dimasukkan ke dalam telaga, kemudian plat diletakkan di dalam inkubator pada suhu 37 darjah selama 2 jam. Selepas masa ini, pendarfluor telah diukur（入=570nm）. Setiap kepekatan ekstrak dilakukan dalam tiga replikasi.

3.6.3. Ujian Serapan Merah Neutral

Ujian Serapan Merah Neutral ialah ujian kedua yang digunakan untuk menentukan sitotoksisiti PRE, PGE, KTE, CTE, dan GGE. Mula-mula,96-plat bawah rata telaga telah disediakan seperti yang diterangkan dalam bahagian sebelumnya. Selepas 24 jam pendedahan sel kepada ekstrak, ia disedut dan digantikan dengan pewarna merah neutral (40 ug/mL) dan diinkubasi selama 2 jam. Selepas masa ini, sel-sel telah dibasuh dengan garam fosfat-buffered. Dalam langkah seterusnya, penimbal penyahwarna（150 μL）ditambah pada telaga. Kemudian, pengambilan dve merah neutral ditentukan dengan mengukur ketumpatan optik (OD) pada 540 nm. Setiap kepekatan ekstrak dilakukan dalam tiga replikasi.

3.7. Penentuan Faktor Perlindungan Matahari (In Vitro)

Faktor perlindungan matahari (SPF) ditentukan dengan mengukur penyerapan larutan akueus ekstrak dalam kepekatan 10 ug/mL dan 50 ug/mL, dalam julat panjang gelombang dari 290 hingga 320 nm pada selang 5-nm. Daripada keputusan yang diperolehi, SPF dikira daripada Persamaan Mansur [90]: di mana∶ EE（λ）—spektrum kesan erythemal, I（入）—spektrum keamatan suria, ABS（入）—penyerapan produk pelindung matahari, CF— faktor pembetulan（=10）, E（N）×I（λ）—nilai yang ditentukan oleh Sayre telah digunakan [91].

3.8. Pengukuran Kehilangan Air Transepidermal (TEWL) dan Penghidratan Kulit

Pengukuran TEWL dan penghidratan kulit telah dijalankan menggunakan probe TEWAmeter TM 300 dan probe Corneometer CM 825 yang disambungkan kepada penyesuai MPA (Courage plus Khazaka Electronic, Köln, Jerman）. Lima sukarelawan mengambil bahagian dalam kajian itu. Pada lengan bawah mereka kulit, enam kawasan (bersaiz 2 × 2 cm) ditanda. Sejumlah 0.2 mL ekstrak tumbuhan yang diuji telah digunakan di lima tempat, tempat keenam adalah kawalan (tidak dirawat dengan mana-mana sampel). Selepas 60 dan 360 minit , tahap penghidratan dan pengukuran TEWL telah diambil. Keputusan akhir ialah min aritmetik (dari setiap sukarelawan) bagi lima ukuran bebas (penghidratan kulit) dan 20 ukuran (TEWL).

3.9.Penyediaan Model Kosmetik (Pembersih Mekap)Mengandungi Ekstrak

Model kosmetik (penanggal mekap) telah disediakan. Semua komponen yang digunakan adalah selaras dengan keperluan EcoCert dan COSMOS. Rumusan ditunjukkan dalam Jadual 7.

Produk dihasilkan dengan mencampurkan bahan-bahan (dari item 1 hingga item 6) pada suhu bilik sehingga cecair homogen diperolehi. Pada langkah terakhir, pH rumusan telah diselaraskan. Penanggal mekap dibahagikan kepada beberapa bahagian. Sejumlah 1 peratus daripada larutan stok ekstrak telah ditambah kepada setiap bahagian dan dicampur dengan teliti.

3.10.Penentuan Parameter Warna Ekstrak dan Kosmetik(Penyingkiran Mekap)Mengandungi Ekstrak

Sampel ekstrak dan kosmetik dengan ekstrak telah diuji pada suhu bilik, 48 jam selepas penyediaannya. CR METER CHROMA-400(Konica Minolta, Sensing Inc., Tokyo, Jepun) telah digunakan untuk menilai parameter warna(koordinat CIELAB). Sistem CIELAB telah ditakrifkan oleh Suruhanjaya Antarabangsa mengenai pencahayaan pada tahun 1978. Ia berdasarkan tiga atribut warna:L*, a*,b, di mana L* ialah pembolehubah kecerahan yang berkadar dengan nilai dalam sistem Munsell, dan a* dan b* ialah koordinat kromatik. Koordinat a* dan b* masing-masing menunjukkan kedudukan pada paksi merah/hijau dan kuning/biru ( tambah=merah, -a=hijau; tambah b=kuning, - b =biru).

Berdasarkan data yang diperoleh: L*, a* dan b*, parameter warna berikut telah dikira: kroma (C*) dan rona (h). Persamaan berikut digunakan:

4. Kesimpulan

Berdasarkan keputusan yang diperoleh, dapat disimpulkan bahawa ekstrak tumbuhan yang diuji menunjukkan beberapa ciri positif, yang mana ia boleh digunakan dalam pengeluaran kosmetik sebagai bahan selamat dan bioaktif. Telah ditunjukkan bahawa tumbuhan ini adalah sumber yang kaya dengan polifenol, yang memberikan mereka sifat antioksidan. PRE menunjukkan keupayaan terbaik untuk menghilangkan radikal bebas, yang mungkin kerana ia mengandungi paling banyak polifenol berbanding tumbuhan lain. PGE dan PRE menunjukkan keupayaan terbaik untuk mengurangkan pengeluaran ROS dalam sel. Selain itu, tumbuhan tidak menunjukkan sebarang aktiviti sitotoksik. Semua ekstrak yang diuji menunjukkan kesan perencatan pada enzim elastase dan kolagenase, dengan P. granatum dan GGE mempunyai kesan perencatan yang paling besar. Ini mungkin menunjukkan bahawa tumbuhan ini boleh digunakan dalam kosmetik sebagai bahan yang melambatkan proses penuaan. Selain itu, keputusan yang diperoleh menunjukkan bahawa tumbuhan ini mempunyai sifat anti-radang. Dalam kes ini, CTE dan KTE nampaknya yang terbaik. KTE dan PGE menunjukkan kesan perlindungan terhadap sinaran UV, walaupun pada kepekatan rendah. Pada kepekatan yang lebih tinggi, semua tumbuhan mempunyai kesan perlindungan UV. Tambahan pula, tumbuhan mempunyai kesan positif terhadap penghidratan kulit dan mengurangkan kehilangan air transepidermal. Ekstrak PRE, KTE, dan CTE boleh digunakan sebagai pewarna yang berkesan dalam produk kosmetik. Cecair model untuk menanggalkan solekan yang mengandungi ekstrak yang disebutkan di atas dicirikan oleh warna yang pekat dan stabil dari semasa ke semasa. Warna kosmetik dengan ekstrak PGE dan GGE hanya boleh dilihat oleh pemerhati yang berpengalaman, dan ia tidak jauh berbeza daripada sampel kosmetik kosong, tanpa penambahan ekstrak. Memandangkan semua keputusan yang diperolehi, dapat disimpulkan bahawa Papaver rhoeas, Clitoria ternatea, dan Carthamus tinctorius boleh berjaya digunakan sebagai sumber pewarna kuning, oren, biru, dan ungu dalam penghasilan kosmetik yang akan selamat digunakan, dan, apatah lagi akan memberi kesan positif pada kulit.

Artikel ini diekstrak daripada Molecules 2022, 27, 922. https://doi.org/10.3390/molecules27030922 https://www.mdpi.com/journal/molecules