Penentuan Lima Komponen dalam Rehmannia Glutinosa Dan Penubuhan Cap Jari HPLC

Abstrak:Kaedah penentuan kandungan lima komponen dalamRehmannia glutinosa, iaitu,rehmannoside D, Leonurin,echinacoside,cistancheside Adanverbascoside, telah ditubuhkan, dan cap jari kromatografi cecair prestasi tinggi (HPLC) Rehmannia glutinosa telah ditubuhkan untuk menyediakan asas saintifik bagi kawalan kualiti Rehmannia glutinosa. Lajur Shiseido CAPCELL PAK C18 telah digunakan, dengan asetonitril-0.1% larutan asid formik sebagai fasa mudah alih, elusi kecerunan, suhu lajur 30 darjah , penentuan panjang gelombang berubah-ubah dan kadar alir 1.0 mL/min. Cap jari HPLC Rehmannia glutinosa dianalisis oleh "Sistem Penilaian Kesamaan Cap Jari Kromatografi Perubatan Cina (2012 Edition)" software to evaluate its quality consistency. The results showed that according to the established content determination method, the five components had a good linear relationship within their respective concentration ranges (R2>{{0}}.999 0), RSD ujian ketepatan, ujian kebolehulangan dan ujian kestabilan ialah 0.12%~1.58% dan purata kadar pemulihan sampel ialah 96.5% ~98.6%; cap jari Rehmannia glutinosa HPLC yang telah ditetapkan mengenal pasti 23 puncak biasa, dan persamaan antara sampel Rehmannia glutinosa dan cap jari kawalan ialah 0.904~0.950. Keputusan menunjukkan bahawa kaedah penentuan kandungan yang ditetapkan dan cap jari HPLC adalah sesuai untuk penilaian kualiti Rehmannia glutinosa dan pengenalpastian Rehmannia glutinosa mentah dan Rehmannia glutinosa yang dimasak, dengan ketepatan yang tinggi dan kebolehulangan yang baik, dan boleh memberikan sokongan teknikal untuk kawalan kualiti Bahan perubatan Rehmannia glutinosa.

Kata kunci:Rehmannia glutinosa; penentuan kandungan; cap jari; penilaian kualiti

CISTANCHE HERBA BARU DENGANECHINACOSIDE,CISTANCHESIDE ADANVERBASCOSIDE

Rehmannia glutinosaialah ubi akar segar atau kering dari tumbuhan Scrophulariaceae Rehmannia glutinosa Libosch. Disebabkan oleh kaedah pemprosesan yang berbeza, ia terbahagi terutamanya kepada rehmannia segar, rehmannia mentah dan rehmannia masak [1-2]. Kawasan pengeluaran utama ialah tanah Henan, Shanxi, Shaanxi, dll. Antaranya, rehmannia glutinosa mentah mempunyai kesan membersihkan haba dan menyejukkan darah, menyuburkan yin dan menggalakkan pengeluaran cecair, dan digunakan terutamanya untuk merawat haba dalam darah, toksin hangat dan bintik-bintik, dsb.; rehmannia glutinosa yang dimasak mempunyai kesan menyuburkan darah dan yin, menambah pati dan menambah sumsum, dan digunakan terutamanya untuk merawat kekurangan darah, klorosis, dsb. Debaran jantung, kegelisahan, dsb.[1-2]. Kedua-duanya mempunyai sifat dan rasa yang berbeza, tetapi kedua-duanya tergolong dalam meridian hati dan buah pinggang. Rehmannia glutinosa mengandungi komponen kimia yang kompleks, terutamanya termasuk iridoid, ionon, phenylethanol glycosides, flavonoid, dsb. [3-5].

Selepas Rehmannia glutinosa diproses dengan kaedah pemprosesan yang berbeza, jenis, kandungan dan perkadaran komponen kimia dalam setiap produk yang diproses sangat berbeza, mengakibatkan perbezaan ketara dalam aktiviti farmakologinya [6-10]. mengikut

Kajian berkaitan[11-12] menunjukkan bahawa dalam proses Rehmannia glutinosa berubah daripada "mentah" kepada "dimasak", kandungan komponen kimia seperti catalpol, motherwort, stachyose, dan asid amino semuanya menurun dengan ketara, dan kandungan fruktosa, 5-hydroxymethylfurfural, dsb. Kandungan , isorebascoside, dsb. telah meningkat dengan ketara. Pada masa ini, kawalan kualiti rehmannia glutinosa mentah dan dimasak terutamanya menggunakan kandungan catalpol dan rehmanniaside D sebagai penunjuk penilaian. Penunjuk sistem penilaian agak tunggal, menjadikannya sukar untuk mengawal kualiti rehmannia glutinosa secara menyeluruh. Di samping itu, kajian telah menunjukkan bahawa kandungan rehmannia glutinosa D berubah sebelum dan selepas pemprosesan. Ia kecil dan mempunyai kekhususan yang lemah dalam mencirikan perubahan komposisi selepas pemprosesan dan tahap pemprosesan [12-13].

Oleh itu, untuk menilai kualiti Rehmannia glutinosa secara lebih komprehensif, kajian ini mewujudkan hubungan antara rehmanniaside D dan Yimu dalam Rehmannia glutinosa.

Kaedah penentuan untuk kandungan lima komponen biasa, termasuk glukosida, echinaceaside, cistancheoside A, dan verbascoside, dan mewujudkan cap jari HPLC Rehmannia glutinosa untuk menganalisis kandungan komponen utama dalam Rehmannia glutinosa dari kawasan pengeluaran yang berbeza dan sebelum dan selepas pemprosesan, untuk menyediakan maklumat untuk kawalan kualiti Rehmannia glutinosa. Sokongan teknikal.

Instrumen, reagen dan ubat ujian

Agilent 1260 kromatografi cecair prestasi tinggi (pengesan ialah tatasusunan diod); imbangan analitik elektronik julat berubah (METTLER TOLEDO); pembersih ultrasonik digital (Kilang Alat Ultrasonik Shanghai, KH-500DE). Metanol (Kumpulan Sinopharm) ialah gred analisis; asetonitril (Merck) ialah gred kromatografi; air adalah air botol Watsons. Bahan rujukan Rehmannia glutinosa D (nombor kelompok RFSD8401909016, ketulenan 98.0%), bahan rujukan leonurus glikosida (nombor kelompok RFS-Y22002208010, ketulenan 98.0%) dan bahan rujukan cistancheside A (kelompok nombor RFS-R05002009014, ketulenan 96.0%) semuanya dibeli daripada Chengdu Ruifensidedan Biotechnology Co., Ltd.; bahan rujukan echinacoside (nombor kelompok 111670-201907, ketulenan 91.8%) dan bahan rujukan verbascoside (nombor kelompok 11530-201914, ketulenan 95.2%) semuanya dibeli daripada Institut Pemeriksaan Makanan dan Ubat China. Sampel Rehmannia (SX1~SX4, HN1 dan HN2) dikumpulkan dari kawasan pengeluaran yang berbeza (lihat Jadual 1), di mana SX4 dan HN2 masing-masing dikukus oleh SX1 dan HN1, dan SX2 dan SX3 dikumpulkan dari kawasan pengeluaran yang sama. Semua sampel telah dikenal pasti sebagai sahih oleh Song Pingshun, ketua pengamal perubatan Cina Institut Kawalan Dadah Wilayah Gansu.

Jadual 1 Maklumat sampel Air Mani Rehmanniae

2.1 Keadaan kromatografi

Lajur Shiseido CAPCELL PAK C18 (250.0 mm×4.6 mm, 5 μm) telah digunakan, asetonitril digunakan sebagai fasa mudah alih A, dan larutan asid formik 0.1% digunakan sebagai fasa mudah alih B . Keadaan elusi kecerunan ialah: 0-3 min, 1%A; 3-9 min, 1%A→5%A; 9-24 min, 5%A→35%A; 24-35 min, 35%A→65%A; 35-40 min, 65%A→90%A. Pengesanan panjang gelombang berubah (0-24 min, 203 nm; 24-40 min, 330 nm). Isipadu suntikan ialah 15 μL larutan rujukan dan 20 μL larutan sampel.

2.2 Penyediaan penyelesaian

2.2.1 Penyediaan penyelesaian rujukan

Ambil jumlah yang sesuai daripada lima bahan rujukan di atas, tambahkan 70% metanol untuk menyediakan larutan rujukan campuran dengan kepekatan jisim 0.4 mg/mL.

2.2.2 Penyediaan larutan ujian

Timbang kira-kira 1.0 g serbuk Rehmannia (melepasi ayak No. 2), timbang dengan tepat, masukkan ke dalam kelalang kon bersumbat, tambah dengan tepat 25 mL metanol 70%, tutup, timbang, rawat secara ultrasonik (kuasa 300). W, frekuensi 50 kHz) selama 30 minit, biarkan ia sejuk pada suhu bilik, timbang semula, isikan jisim yang hilang dengan 70% metanol, penapis, dan ambil turasan untuk mendapatkannya.

2.3 Penyiasatan metodologi

2.3.1 Penyiasatan khusus

Ambil larutan rujukan campuran di bawah "2.2.1" dan larutan ujian (sampel SX1) di bawah "2.2.2", dan suntik dan ukur mengikut keadaan kromatografi di bawah "2.1". Keputusan menunjukkan bahawa kromatogram sampel Rehmannia membentangkan puncak kromatografi dengan masa pengekalan yang sama seperti piawai rujukan Rehmannia glutinosa D, Leonurin, Echinacoside, Cistanche deserticola A, dan Verbascoside (lihat Rajah 1), menunjukkan bahawa kaedah ini mempunyai kekuatan yang kuat. kekhususan.

2.3.2 Penyiasatan hubungan linear

Tambah 70% metanol ke dalam larutan rujukan campuran, cairkan 5 kali, 10 kali, 25 kali, 50 kali, 100 kali, dan 250 kali masing-masing, dan suntik dan ukur mengikut keadaan kromatografi di bawah "2.1". Lengkung piawai dilukis dengan kepekatan jisim setiap rujukan sebagai paksi mendatar (x) dan kawasan puncak kromatografi yang sepadan sebagai paksi menegak (y). Keputusan ditunjukkan dalam Jadual 2, menunjukkan bahawa setiap komponen mempunyai hubungan linear yang baik dalam julat kepekatan jisim yang sepadan.

1.rehmannioside D; 2. leonuride; 3. echinacoside; 4. castanoside A;5. acteoside

Rajah 1 Kromatogram penyiasatan kekhususan

Jadual 2 Hubungan linear 5 komponen dalam Semen Rehmanniae

2.3.3 Penyiasatan ketepatan

Ambil larutan ujian (sampel SX1) di bawah "2.2.2", dan lakukan ujian suntikan mengikut keadaan kromatografi di bawah "2.1". Suntikan sampel 6 kali secara berterusan, rekodkan kawasan puncak setiap komponen dan kirakan kawasan puncak RSD rehmannia glutinosa D, motherwort glycoside, echinacea glycoside, cistanche glycoside A dan verbascoside dalam sampel ujian menjadi 0. 46%, 0.12%, 0.85%, 0.48% dan 0.82%, masing-masing menunjukkan bahawa instrumen mempunyai ketepatan yang baik.

2.3.4 Kajian Kebolehulangan

Enam sampel sampel akar Rehmannia (SX1) yang sama telah disediakan secara selari mengikut kaedah dalam "2.2.2" dan disuntik dan ditentukan mengikut keadaan kromatografi dalam "2.1". RSD kandungan glikosida akar rehmannia D, glikosida motherwort, glikosida echinacea, glikosida cistanche A dan verbascoside dalam enam sampel ialah 0.46%, 0.69%, 1.42%, {{ 12}}.48% dan 1.58%, masing-masing, menunjukkan bahawa kaedah tersebut mempunyai kebolehulangan yang baik.

2.3.5 Kajian Kestabilan

Ambil penyelesaian ujian (sampel SX1) di bawah "2.2.2" dan suntik serta ukur mengikut keadaan kromatografi di bawah "2.1" pada 0 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, 1{{ 15}} h, 12 h, 18 h, dan 24 h, masing-masing. RSD bagi kawasan puncak rehmannia glutinosa D, motherwort glycoside, echinacoside, cistanche glycoside A dan verbascoside ialah 0.94%, 1.04%, 0.73% , 0.83%, dan 0.71%, masing-masing, menunjukkan bahawa penyelesaian ujian mempunyai kestabilan yang baik dalam masa 24 jam.

2.3.6 Kadar pemulihan sampel

{{0}}.5 g sampel akar Rehmannia (SX1) dengan kandungan 5 komponen yang diketahui telah ditimbang dengan tepat ke dalam kelalang kon bersumbat, dan 6 bahagian selari telah ditambah, dan 5 larutan rujukan kepekatan tertentu telah ditambah. masing-masing. Sampel telah disediakan mengikut kaedah di bawah "2.2.2", dan sampel telah disuntik dan diukur mengikut keadaan kromatografi di bawah "2.1". Kadar pemulihan telah dikira, dan keputusan ditunjukkan dalam Jadual 3. Kadar pemulihan sampel purata bagi setiap komponen ialah 96.5%~98.6%, dan RSD ialah 0.73%~1.52%, menunjukkan bahawa kaedah tersebut mempunyai ketepatan yang baik.