Penentuan Kandungan Lima Sebatian dalam Semen Rehmanniae Dan Penubuhan Cap Jari HPLCnya

Jadual 3 Keputusan ujian pemulihan (n=6)

2.4 Penentuan sampel

Enam kelompok Rehmannia yang dikumpul telah disediakan mengikut kaedah di bawah "2.2.2" dan diambil sampel dan ditentukan mengikut keadaan kromatografi di bawah "2.1". Keputusan penentuan kandungan ditunjukkan dalam Jadual 4. Keputusan menunjukkan bahawa antara lima komponen, kandungan rehmannia glikosida D adalah yang paling tinggi, antara 0.460% hingga {{1 0}}.730%; kandungan leonuri glikosida adalah kedua, antara 0.100% hingga 0.270%, dan kandungan kedua-dua komponen dalam sampel dari kawasan pengeluaran yang berbeza tidak jauh berbeza. Dalam sampel SX1, kecuali untuk echinacoside, kandungan empat komponen lain adalah jauh lebih tinggi daripada kumpulan sampel lain; kandungan echinacoside, cistancheside A, dan verbascoside dalam Rehmannia glutinosa dari kawasan pengeluaran yang berbeza agak berbeza dan tidak teratur.

HERBA CISTANCHE DENGANKONSISTENSI BERKUALITI BAIK

2.5 Penubuhan dan penilaian persamaan cap jari HPLC Rehmannia glutinosa

Kromatogram dan data penentuan kandungan berbilang komponen dalam Rehmannia glutinosa telah diimport ke dalam perisian "Sistem Penilaian Kesamaan Kromatografi Cap Jari Perubatan Herba Cina (20Edisi 12)" dan kromatogram sampel ujian SX1 telah dipilih sebagai spektrum rujukan. Lebar tetingkap masa telah ditetapkan kepada 0.10 min, dan kaedah median digunakan untuk menjana spektrum bertindih dan spektrum rujukan. Sebanyak 23 puncak biasa dikenal pasti (lihat Rajah 3). Persamaan antara cap jari sampel Rehmannia glutinosa dan rujukan ialah 0.904~0.950, menunjukkan bahawa sampel Rehmannia glutinosa dari kawasan pengeluaran yang berbeza dan antara Rehmannia glutinosa mentah dan Rehmannia glutinosa yang dimasak adalah serupa dan mempunyai ketekalan kualiti yang baik.

Jadual 4 Keputusan penentuan kandungan 5 komponen dalam Semen Rehmanniae/%

13. rehmannioside D; 17. leonuride; 19. echinacoside; 20. castanoside A; 21. acteoside

Rajah 3 Mentindih kromatogram HPLC bagi 6 kelompok Semen Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) dan rujukan (R)

3 Perbincangan

3.1 Pemilihan keadaan kromatografi

Empat sistem fasa mudah alih, air asetonitril, asetonitril-0.1% larutan asid formik, air metanol dan metanol-0.1% larutan asid formik, telah disiasat dalam kajian ini. Keputusan menunjukkan bahawa lima komponen mempunyai kesan pemisahan yang baik dalam sistem asetonitril; berbanding dengan sistem fasa mudah alih air asetonitril, puncak rehmannia glutinosa dan glikosida motherwort dalam asetonitril-0.1% fasa mudah alih larutan asid formik adalah lebih sempit dan mempunyai simetri puncak yang baik. Pada masa yang sama, disebabkan oleh penyerapan ultraviolet yang berbeza dari lima komponen, kandungan komponen sangat berbeza. Untuk menentukan kandungan setiap komponen dengan lebih tepat dan untuk memastikan bahawa keamatan penyerapan lima komponen diagihkan sama rata dalam kromatogram yang sama, penyerapan ultraungu bagirehmannia glikosida D, glikosida motherwort, echinacoside, cistancheside A, dan verbascoside telah dianalisis, dan penentuan panjang gelombang berubah-ubah telah dipilih, iaitu, 0-24 min, glikosida rehmannia yang dipisahkan pertama ditentukan pada 203 nm, dan 24-40 min, echinacoside yang dipisahkan, cistancheside A, dan verbascoside ditentukan pada 330 nm. Selain itu, kajian ini juga menyiasat kesan pengekstrakan metanol, 70% larutan metanol, 50% larutan metanol, dan 50% larutan asetonitril sebagai pelarut pengekstrakan. Keputusan menunjukkan bahawa 70% larutan metanol sebagai pelarut pengekstrakan boleh melarutkan komponen yang akan diuji dengan lebih baik, dan sampel yang diekstrak mempunyai lebih sedikit kekotoran. Oleh itu, kajian ini memilih 70% metanol sebagai pelarut pengekstrakan, asetonitril-0.1% larutan asid format sebagai sistem fasa mudah alih dan menggunakan panjang gelombang berubah-ubah untuk menentukan kandungan lima komponen dalam Rehmannia.

3.2 Analisis keputusan penentuan sampel

Daripada keputusan penentuan, dapat dilihat bahawa selepas dikukus, kecuali sedikit peningkatan dalam kandungan echinacoside, kandungan empat komponen lain telah berkurangan dengan ketara, terutamanya kandungan leonuriside dan cistancheside A; kandungan rehmannia glycoside D dan cistancheside A dalam Rehmannia glutinosa dari kawasan pengeluaran yang sama adalah sedikit berbeza, dan kandungan leonuriside, echinacoside dan verbascoside adalah berbeza dengan ketara; kandungan echinacoside dalam Rehmannia glutinosa dari kawasan pengeluaran Henan adalah jauh lebih tinggi daripada sampel dari kawasan pengeluaran Shanxi, dan kandungan empat komponen lain sedikit berbeza. Pada masa yang sama, menurut cap jari HPLC yang ditubuhkan dalam kajian ini, persamaan antara 6 kelompok sampel Rehmannia dan cap jari kawalan ialah 0.904~0.950, menunjukkan bahawa bahan kimia utama komponen 6 kelompok sampel Rehmannia sebelum dan selepas pemprosesan adalah sangat konsisten.

Secara ringkasnya, kaedah penentuan kandungan dan cap jari HPLC yang diwujudkan dalam kajian ini adalah tepat, boleh dipercayai, dan mempunyai kekhususan yang baik. Ia boleh digunakan untuk mencirikan perubahan dalam komponen dan tahap pemprosesan Rehmannia glutinosa sebelum dan selepas pemprosesan, dan menyediakan sokongan teknikal untuk kawalan kualiti Rehmannia glutinosa. Walau bagaimanapun, kajian ini mempunyai kelemahan kumpulan sampel yang kecil dan liputan kawasan pengeluaran yang tidak lengkap, yang memerlukan analisis dan pengesahan lanjut.

Rujukan

[1] Jawatankuasa Farmakope Cina. Farmakope Republik Rakyat China: Jilid 1 [S]. Beijing: Akhbar Sains dan Teknologi Perubatan China, 2020: 129-130.

[2] Xu Jun, Fu Zhetong. Penyelidikan tentang evolusi sejarah nama-nama Rehmannia glutinosa yang diproses dan kajian keberkesanannya [J]. Perubatan Paten Cina, 2017, 39 (9): 1913-1916.

[3] Zhu Jue, Zhu Xiangmei, Shi Yuhe, et al. Kemajuan penyelidikan mengenai Rehmannia glutinosa dan analisis ramalan penanda kualitinya [J]. Perubatan Paten Cina, 2022, 45 (2): 1273-1281.

[4] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, et al. Kemajuan penyelidikan mengenai komposisi kimia dan kesan farmakologi Rehmannia glutinosa [J]. Perubatan Herba Cina, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Li Hongwei, Meng Xiangle. Kemajuan penyelidikan mengenai komponen kimia dan kesan farmakologi Rehmannia glutinosa［J］.

Penyelidikan Penilaian Ubat, 2015, 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei, et al. Analisis komponen kimia Rehmannia glutinosa segar, Rehmannia glutinosa mentah dan Rehmannia glutinosa yang dimasak oleh UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Perubatan Paten Cina, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian, Wei Yue, Li Feifei, et al. Pengecaman corak cap jari dan penentuan kandungan berbilang komponen bagi produk Rehmannia glutinosa yang diproses berbeza［J］. Hubei Agricultural Sciences, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, et al. Kemajuan penyelidikan mengenai komponen kimia dan kesan farmakologi Rehmannia glutinosa［J］. Perubatan Herba Cina, 2021, 52(6): 1772-1784.

[9] Tao Yi, Jiang Yanhui, Tang Kejian, et al. Kajian perbandingan komponen kimia Rehmannia glutinosa sebelum dan selepas pemprosesan oleh UHPLC-Q-TOF/MS［J］. Ubat Cina dan Farmakologi Klinikal Baharu, 2016, 27(1): 102-106.

［10］ Xu Zhuo, Dai Xinxin, Su Shulan, et al. Pengumpulan dinamik komponen nukleosida dan asid amino dalam Rehmannia glutinosa berdasarkan UPLC-TQ-MS［J］. Perubatan Herba Cina, 2021, 52(23): 7323-7330.

［11］ Li Yujiao. Kajian tentang teknologi pemprosesan dan mekanisme "sembilan pengukusan dan sembilan pendedahan" Rehmannia glutinosa［D］. Jinan: Universiti Shandong, 2023.

［12］ Wang Yue, Zhou Qiao, Zhang Xuelan, et al. HPLC Penentuan serentak kandungan lapan komponen dalam Rehmannia glutinosa dan produk diprosesnya yang berbeza dengan analisis cap jari UPLC dan penentuan kandungan komponen berbilang indeks [J]. Bahan Perubatan Cina, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai, Xue Shujuan, Chen Suiqing. Penilaian kualiti Rehmannia glutinosa berdasarkan cap jari UPLC dan penentuan kandungan komponen berbilang indeks [J]. Bahan Perubatan Cina, 2021, 44 (4): 917-923.