Ramuan Berkesan Cistanche: Kaedah Pemisahan Dan Pembersihan Glikosida Phenylethanoid

Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com

Pengasingan Dan Pemurnian Glikosida Phenylethanoid Daripada Cistanche Deserticola Dengan Kromatografi arus balas berkelajuan tinggi

Li a,b, Rong Tsao b,*, Raymond Yang b, Chunming Liu a,

J. Christopher Young b, Honghui Zhu b

Jabatan Kimia, Universiti Normal Changchun, Changchun 130032, China

b Pusat Penyelidikan Makanan Guelph, Pertanian dan Pertanian Makanan Kanada, 93 Stone Road West, Guelph, Ontario, Kanada N1G 5C9

Diterima 31 Mei 2007; diterima dalam borang semakan 16 Oktober 2007; diterima pada 29 Oktober 2007

Abstrak:

limaglikosida fenilethanoid(PhGs),echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside, dan 20-acetylacteoside, telah diasingkan dan ditulenkan daripadaCistanche deserticolabuat pertama kalinya dengan kromatografi arus balas berkelajuan tinggi (HSCCC) menggunakan dua sistem dwifasa, satu terdiri daripada etil asetat–etanol-air (5:0.5:4.5, v/v/v) dan satu lagi daripada etil asetat–n-butanol–etanol-air ({{10}}}.5:0.5:0.1:1, v/v/v/v). Sebanyak 28.5 mg echinacoside, 18.4 mg daripadacistanoside A, 14.6 mg daripadaacteoside, 30.1 mg isoacteoside dan 25.2 mg 20-asetilakteosida telah ditulenkan daripada 1412 mg ekstrak n-butanolCistanche deserticola, setiap satu pada ketulenan lebih 92.5 peratus seperti yang ditentukan oleh HPLC. Struktur telah dikenal pasti dengan masa pengekalan mereka, UV, LC-ESI-MS dalam mod ion negatif, dan disahkan oleh eksperimen NMR. Ciri corak pemecahan LC-ESI-MSn bagi lima sebatian dibincangkan, dan didapati sebagai alat yang sangat spesifik dan berguna untuk pengecaman struktur PhG daripada tumbuhan ubatan yang penting ini.

Hak Cipta Crown © 2007 Diterbitkan oleh Elsevier Ltd. Hak cipta terpelihara.

Kata kunci:Cistanche deserticola; Phenylethanoid;Echinacoside; Cistanoside A;Acteoside; Isoacteoside; 20-Acetylacteoside; HSCCC; LC–ESI-MS; NMR

1. Pengenalan

Cistanche deserticolaYC Ma ialah ubat herba Cina yang terkenal dan telah digunakan secara meluas dalam penyediaan tradisional yang serupa dengan bahan makanan berfungsi atau suplemen makanan hari ini (Wong, Li, Cheng, & Chen, 2006). Juzuk bioaktif utama dalam C. deserticola ialahphenylethanoidglikosida (PhGs), termasukechinacoside, acteoside, isoacteoside, 20-asetilakteosida dancistanoside A(Kobayashi, Karasawa, & Miyase, 1984; Kobayashi et al., 1987). PhGs diedarkan secara meluas dalam kerajaan tumbuhan dan telah dikaji secara meluas untuk pelbagai fungsi biologinya seperti hepatoprotektif (Xiong et al., 1998), aktiviti anti-radang, antinociceptive (Schapoval et al., 1998), dan aktiviti antioksidan (Cheng). , Wei, Guo, Ni, & Liu, 2005; He, Lau, Xu, Li, & But, 2000; Li, Wang, & Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu, & Jia, 1993; Wang, Jiang , Wu, & Wang, 2001; Xiong, Kadota, Tani, & Namba, 1996), meningkatkan fungsi seksual (Xie & Wu, 1993; Zong, He, Wu, & Chen, 1996), dan kesan sedatif (Lu, 1998) .

Disebabkan oleh bioaktiviti yang ketara di atas, kuantiti besar sebatian tulen diperlukan segera sebagai piawai rujukan dan untuk pelbagai kajian in vitro dan in vivo yang berkaitan dengan penggunaan ubat-ubatan tradisional Cina. Kaedah yang berkesan untuk pengasingan, penulenan, dan pencirian struktur PhG, oleh itu menjadi perlu. Walau bagaimanapun, kerja sedemikian biasanya memerlukan penggunaan pelbagai langkah kromatografi untuk pembersihan dan pengasingan sampel (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten, & Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin, & Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara, & Li, 1990; Shoyama, Matsumoto, & Nishioka, 1987), yang biasanya menghasilkan kadar pemulihan yang rendah disebabkan oleh penjerapan PhG yang tidak dapat dipulihkan pada sokongan padu semasa pemisahan (Lei et al., 2001). Sebaliknya, kromatografi lawan arus berkelajuan tinggi (HSCCC) telah menjadi alternatif yang berkesan kepada teknik kromatografi konvensional untuk pengasingan beberapa PhG daripada ekstrak tumbuhan (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Lei et al. berjaya dipisahkanacteosidedan 20-acetylacteoside daripada Cistanches salsa (CA Mey.) G. Beck dengan menggunakan HSCCC (Lei et al., 2001). Penulis kertas ini sebelum ini telah melaporkan pemisahanacteosidedan isoacteoside daripada Plantago psyllium L. oleh HSCCC (Li et al., 2005). Walau bagaimanapun, tiada laporan telah diterbitkan mengenai pengasingan dan pemurnian berbilang PhG daripadaCistanche deserticolamenggunakan HSCCC. Disebabkan kekurangan piawaian, kaedah LC-MS telah dibangunkan dan digunakan sebagai alat analisis yang berkuasa untuk pencirian pantas dan pengenalpastian beberapa PhG dalam ekstrak tumbuhan (Li et al., 2005; Wang et al., 2000).

Dalam kertas ini, kami melaporkan kaedah HSCCC yang dibangunkan untuk penyediaan echinacoside,cistanoside A, acteoside, isoacteoside dan 20-acetylacteoside fromCistanche deserticola. Pencirian dan analisis bagi lima PhG yang dipisahkan telah dicapai dengan penggunaan LC ditambah dengan spektrometri jisim ESI sebaris dan eksperimen NMR. Masa pengekalan, berat molekul, dan ion serpihan ciri lima PhG dibentangkan dan dibincangkan dalam kertas ini. Struktur lima PhG yang dikenal pasti dalam penyiasatan ini ditunjukkan dalam Rajah 1.

echinacosidedalam cistanche

2. Eksperimen

2.1. Bahan kimia dan reagen

Acteosidetelah dibeli daripada Sigma–Aldrich (Oak- Ville, ON), echinacoside dibeli daripada ChromaDex (Santa Ana, CA). Isoacteoside telah diasingkan daripada P. psyllium L. (Li et al., 2005).Cistanche deserticolatelah dibeli dari Beijing TongRenTang Medicinal Store (China). Semua pelarut adalah gred HPLC dan dibeli daripada Caledon Laboratories Ltd. (Georgetown, ON).

2.2. Penyediaan sampel

Cistanche deserticola(20 g) telah diekstrak lima kali pada suhu bilik selama 12 jam setiap satu dengan 100 mL etanol akueus 80 peratus. Setiap kali campuran pengekstrakan ditapis melalui kertas penapis Whatman No.1 (Whatman International Ltd., Maidstone, England). Turasan gabungan telah ditumpukan kepada 100 mL dalam vakuo pada <40 darjah.="" larutan="" akueus="" yang="" terhasil="" dinyahlemak="" dua="" kali,="" setiap="" satu="" dengan="" 100="" ml="" heksana,="" dan="" kemudian="" diekstrak="" berturut-turut="" selama="" lima="" kali,="" setiap="" satu="" dengan="" 100="" ml="" n-butanol.="" lapisan="" n-butanol="" telah="" digabungkan="" dan="" tertumpu="" kepada="" kekeringan="" dalam="" vakuo="" pada=""><40 darjah,="" yang="" menghasilkan="" 2.2="" g="" ekstrak="" n-butanol.="" ekstrak="" telah="" disimpan="" pada="" -20="" darjah="" sebelum="" pemisahan="">

2.3. Prosedur pemisahan HSCCC

HSCCC persediaan telah dijalankan dalam model CCC{{0}} kromatografi arus balas berkelajuan tinggi (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland USA). Radas ini mempunyai tiga gegelung persediaan, disambung secara bersiri (jumlah isipadu, 325 mL). Kelajuan revolusi radas boleh dikawal antara 0 dan 2000 rpm. Sistem HSCCC dilengkapi dengan pam HPLC (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, USA), pengesan UV Model 450 (Alltech, USA), perakam katil rata Model L 120 E (Linseis Inc., Princeton Jct, USA), pengumpul pecahan (Advantec MFS Inc., USA) dan injap suntikan sampel dengan 10-gelung sampel mL.

Campuran etil asetat–etanol-air (5:0.5:4.5, v/v/v) digoncang dengan kuat dalam corong pemisah dan biarkan berdiri dan diasingkan pada suhu bilik. Kedua-dua fasa digunakan dalam HSCCC selepas ia mencapai keseimbangan. Seluruh lajur bergelung pertama kali diisi dengan lapisan atas, yang berfungsi sebagai fasa pegun. Lapisan bawah (fasa mudah alih) kemudiannya dipam ke hujung kepala lajur pada kadar aliran 1.5 mL/min. Kelajuan putaran ditetapkan pada 1050 rpm. Satu sampel (kira-kira 230 mg setiap kali) dilarutkan dalam 8 ml campuran etil asetat–etanol-air (5:0.5:4.5, v/v/v) telah dimuatkan ke dalam injap suntikan selepas sistem mencapai hidrodinamik. keseimbangan. Sistem pelarut dwifasa ini dipilih berdasarkan pekali sekatan (K), iaitu 0.87, 1.11, dan 1.32 untukacteoside, isoacteoside, dan 20 acetylacteoside, masing-masing. Nilai K ialah nisbah kepekatan dalam lapisan atas dan bawah sebatian yang sama seperti yang ditentukan oleh HPLC (Rajah 2). Efluen dari alur keluar lajur dipantau secara berterusan oleh pengesan UV pada 254 nm dan dikumpulkan ke dalam tabung uji dengan pengumpul pecahan ditetapkan pada 4 minit untuk setiap tiub.

2.4. syarat LC

pensampel auto statik dan pengesan tatasusunan fotodiod (DAD) digunakan untuk analisis PhG dalam ekstrak n-butanolCistanche deserticoladan pecahan yang dikumpul daripada pemisahan HSCCC. Pemisahan dilakukan dalam lajur Phenomenex ODS-C18 (250 × 4.6 mm, 5 lm) dengan lajur pengawal C18. Fasa bergerak binari terdiri daripada asetonitril (pelarut A) dan air yang mengandungi 2 peratus asid asetik (pelarut B). Semua pelarut telah ditapis melalui a

{{0}}.45 lm tapis sebelum digunakan. Kadar alir dikekalkan malar pada 1.0 mL/min untuk jumlah masa larian selama 25 minit. Sistem telah dijalankan dengan atur cara kecerunan: 0–20 min: 90 peratus B hingga 60 peratus B; 20–22 min: 60 peratus B hingga 0 peratus B; dan 22– 25 min, 0 peratus B hingga 90 peratus B. Isipadu suntikan sampel ialah 10 lL. Puncak minat dipantau pada 320 nm oleh pengesan DAD.

2.5. Eksperimen LC-ESI-MS

Eksperimen LC-MS telah dijalankan menggunakan spektrometer jisim perangkap ion Finnigan LCQ DECA (Thermo Finnigan, San Jose, CA, Amerika Syarikat) yang dilengkapi dengan sumber pengionan elektrospray (ESI). Sampel dianalisis dalam keadaan kromatografi yang sama. Model negatif digunakan untuk pengumpulan data. Gas sarung dan kadar aliran tambahan ditetapkan masing-masing pada 96 dan 7 (unit arbitrari). Voltan kapilari ditetapkan pada 29 V dan suhunya dikawal pada 350 darjah. Voltan kanta masuk telah ditetapkan pada 40 V dan amplitud RF berbilang kutub ditetapkan pada 540 V. Voltan jarum ESI dikawal pada 4.5 kV. Ofset kanta tiub ialah 16 V, ofset kanta berbilang kutub 1 ialah 8.20 V dan ofset kanta berbilang kutub 2 ialah 10.5 V. Voltan pengganda elektron ditetapkan pada 980 V untuk pengesanan ion.

2.6. NMR untuk Pengenalan

Spektrum NMR telah direkodkan pada spektrometer Bruker Avance-600 (Bruker BioSpin Ltd., Milton, Kanada). Hanya sebatian 2 dan 5 (tiada piawaian tersedia) tertakluk kepada eksperimen NMR. Sampel telah dibubarkan dalam CD3OD.

3. Keputusan dan perbincangan

3.1. Pemisahan HSCCC

Ekstrak n-butanol daripadaCistanche deserticoladan pecahan yang sepadan dengan setiap puncak yang diasingkan oleh HSCCC telah dianalisis oleh HPLC, dan keputusannya diberikan dalam Rajah 2. Lima sebatian utama (puncak 1–5) telah diasingkan dan dikesan dengan masa pengekalan pada 9.2 min, 10.7 min, 12.3 min. ,

13.3 min dan 16.2 min, masing-masing.

Pemisahan HSCCC yang berjaya bergantung sebahagian besarnya pada sistem pelarut dua fasa yang sesuai yang menyediakan pekali partition ideal (K) sekitar 1 untuk sebatian yang dikehendaki. Sistem dwifasa sedemikian juga harus menghasilkan masa penyelesaian yang agak singkat (Chen, Games, & Jones, 2003; Foucault & Chevolot, 1998; Oka, Oka, & Ito, 1991). Dalam eksperimen kami, kami memilih empat siri sistem pelarut mengikut keterlarutan sebatian sasaran dalamCistanche deserticola. HPLC digunakan untuk mengukur kepekatan dalam setiap fasa, dari mana nilai K sebatian sasaran dikira. Dua sistem, etil asetat– n-butanol–etanol-air (4:0.6:0.6:5, v/v/v/v) dan etil asetat–air (1: 1, v/v), telah digunakan sebelum ini dalam HSCCC untuk memisahkanacteosidedan 20-asetillakteosida daripadaC. salsa,acteoside, dan isoacteoside daripada P. Psyllium, masing-masing (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Walaupun sistem pertama mempunyai masa penyelesaian yang agak singkat, ia mempunyai prestasi yang lemah dalam memisahkan PhGsCistanche deserticola, disebabkan oleh nilai K yang rendah untuk sebatian 1 dan 2, dan nilai K yang tinggi untuk sebatian 3–5. Nilai K adalah sangat rendah untuk sebatian 1–4 dalam sistem kedua, tetapi sangat tinggi untuk sebatian 5 (Jadual 1). Sistem diubah suai yang mengandungi etil asetat–etanol-air (5:{{10}}.5:4.5, v/v/v), memberikan nilai K yang ideal untuk sebatian 3–5 pada 0.87, 1.11, dan 1.32, masing-masing, dan menghasilkan pemisahan yang baik bagi ketiga-tiga sebatian ini (Rajah 3A dan B). Sistem ini, bagaimanapun, dihasilkan

nilai K yang terlalu kecil untuk sebatian 1 dan 2, menyebabkan kedua-dua sebatian itu mencair bersama berhampiran hadapan pelarut (pecahan 1 dalam Rajah 3A). Pengubahsuaian selanjutnya kepada sistem (etil asetat–n-butanol–etanol-air (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/ v) menaikkan nilai K untuk kompaun 1 dan 2 kepada 0.52 dan 0.92, masing-masing, dan membawa kepada pengasingan lengkap (Rajah 3C). Rajah 3A menunjukkan pemisahan HSCCC bagi suatu sampel yang mengandungi 230 mg ekstrak n-butanol daripadaCistanche deserticolamenggunakan etil asetat–etanol-air (5:0.5:4.5, v/v/v). Pecahan yang telah disahkan oleh HPLC mengandungi hanya sebatian 3, 4, atau 5 digabungkan secara berasingan, dan yang mengandungi sebatian 3 dan 4 dikumpulkan, dikeringkan beku, dan tertakluk semula kepada HSCCC untuk pengasingan selanjutnya (Gamb. 3B). Pengasingan HSCCC dua langkah yang diterangkan di atas menghasilkan sejumlah 14.6 mg, 30.1 mg dan 25.2 mg sebatian 3–5 daripada 1412 mg ekstrak n-butanol. Rajah 3C menunjukkan pemisahan HSCCC bagi sampel yang mengandungi sebatian 1 dan 2 (pecahan 1 dalam pemisahan pertama) menggunakan etil asetat–n-butanol–etanol-air (0.5:0.5 :0.1:1, v/v/ v/v). Sebanyak 28.5 dan 18.4 mg sebatian 1 dan 2 telah diperolehi. Ketulenan kromatografi bagi sebatian beku-kering 1-5 adalah melebihi 92.5 peratus, yang digunakan secara langsung untuk analisis LC-ESI-MS dan NMR.

3.2. Pengenalpastian struktur oleh LC-ESI-MS dan NMR

Pengenalpastian tentatif sebatian 1, 3, dan 4 dicapai dengan masa pengekalan kongruen dan data spektrum UV dengan echinacoside tulen,acteoside, dan isoacteoside (Rajah 2). Sebatian 2 dan 5 tidak diketahui, walau bagaimanapun, spektrum UV bagi semua lima sebatian adalah sangat serupa, menunjukkan ciri struktur yang serupa.

Untuk menyiasat lebih lanjut struktur lima sebatian ini, eksperimen LC-ESI-MSn telah dicuba dan hasilnya ditunjukkan dalam Rajah 4 dan Jadual 2. Sebatian yang berkaitan dengan puncak (1-5) dalam Rajah 2 menunjukkan ion molekul terdeprotonasi yang sengit [MH]— pada m/z 785, 799, 623, 623, dan 665, masing-masing, dalam mod negatif. Ion dimerik [2M H]— juga diperhatikan untuk puncak 1–4 dalam Rajah 2. Ini mengesahkan berat molekul puncak 1–5 menjadi 786, 800, 624, 624, dan 666, masing-masing. Data LC-MSN (Jadual 2) memberikan maklumat struktur yang sangat berguna untuk lima PhG, seperti kehilangan neutral

prosedur Eksperimen: kira-kira 1 mg setiap sampel ditimbang dalam tabung uji 10 mL di mana 1 mL setiap fasa sistem pelarut dua fasa yang telah diseimbangkan telah ditambah. Tabung uji ditutup dan digoncang kuat selama 1 minit, dan dibiarkan berdiri sehingga ia terpisah sepenuhnya. Aliquot 100 lL setiap lapisan telah dikeluarkan dan disejat secara berasingan sehingga kering dalam vakuo pada<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">

bahagian caffeoyl (162), bahagian glukosa (162), bahagian rhamnose (146), radikal CH2 (14), dan kumpulan COCH2 (42).

LC–ESI-MS puncak 1 ditunjukkan dalam Rajah 4A. Ion molekul terdeprotonasi [MH]— pada m/z 785 dengan kelimpahan tinggi dan molekul terdeprotonasi dimerik

ion [2M H]— pada m/z 1571 diperhatikan dalam mod negatif, menunjukkan berat molekul 786, yang sama dengan echinacoside. Penyiasatan lanjut dalam eksperimen LC–MS2 bagi ion m/z 785 menghasilkan satu ion anak perempuan utama pada m/z 623 (Rajah 4B) yang dihasilkan terus daripada m/z 785 dengan kehilangan bahagian kafeil atau bahagian heksosa sebagai [M 162 H]—. Spektrum LC–MS3 m/z 623 mempamerkan dua ion utama pada m/z 477 dan 461, dan dua ion kecil pada m/z 315 dan 179 (Rajah 3C, Jadual 2). Perbezaan jisim antara m/z 623 dan ion serpihan m/z 477 dan 461 masing-masing ialah 146 dan 162, sepadan dengan kehilangan unit rhamnose dan bahagian glukosa atau bahagian rasa kafe [M 162 H]—. Ion m/z 623 juga kehilangan bahagian caffeoyl dan bahagian rhamnose untuk menghasilkan ion m/z 315. Ion pada m/z 179 dihasilkan daripada belahan bahagian kafeil, dengan cas negatif yang tinggal pada bahagian bahagian kafeil. Eksperimen LC-ESI-MSN pada echinacoside tulen menunjukkan corak pemecahan yang sama. Puncak 1 oleh itu disahkan sebagai echinacoside.

Untuk puncak 2, LC–ESI-MS menunjukkan m/z 799 sebagai ion molekul terdeprotonasi [MH]— dan m/z 1599 sebagai ion dimeriknya, menunjukkan jisim molekul 800. Semasa eksperimen MS2, m/z 799 ion membentuk tiga anak perempuan

ion pada m/z 637, 623, dan 475 (Jadual 1). Ion pada m/z 637 terhasil terus daripada ion induk m/z 799 sekali lagi disebabkan oleh kehilangan neutral caffeoyl [M—162—H]— atau bahagian glukosa [M—162—H]—. Ion pada m/z 623 terhasil daripada kehilangan radikal CH2. Ion pada m/z 475 telah terbentuk daripada kehilangan neutral kedua-dua bahagian caféoyl [M 162 H]— dan bahagian glukosa daripada ion induk. Eksperimen MS3 pada m/z 637 menghasilkan tiga ion pada m/z 619, 491, dan 475, sepadan dengan kehilangan satu air, unit rhamnose, dan bahagian glukosa, masing-masing. Ion anak m/z 623 menghasilkan m/z 461 dan 315 dalam kajian MS3, yang mengikuti laluan pemecahan yang sama seperti echinacoside seperti yang dibincangkan di atas. Data LC– ESI-MSN menyokong pengenalpastian tentatif untuk puncak 2 sebagaicistanoside A.

Eksperimen LC-ESI-MS juga dijalankan untuk puncak

3 dan 4 (tR 12.49 dan 13.46 min dalam Rajah 2). Kedua-dua puncak menunjukkan ion [MH]— yang sama pada m/z 623 dan dimer pada m/z 1247 dalam mod negatif (Jadual 1), menunjukkan ia mungkin isomer dengan berat molekul yang sama

624, sama sepertiacteosidedan isoacteoside. Spektrum MS2 ion [MH]— juga menunjukkan satu ion anak perempuan yang sama bagi m/z 461, yang menunjukkan kehilangan bahagian caffeoyl daripada ion induk m/z 623 (Jadual 1). Spektrum MS3 yang serupa diperolehi untuk kedua-dua sebatian. Untuk puncak 3, spektrum MS3 ion pada m/z 461 membentuk tiga ion pada m/z 315, 161, dan 135. M/z 315 terbentuk selepas kehilangan rhamnose seperti yang dibincangkan sebelum ini. Ion m/z 161 dihasilkan daripada belahan bahagian caffeoyl, diikuti dengan kehilangan lagi satu air; cas kekal pada bahagian caffeoyl moiety. Ion pada m/z 135 [aglikon 18 H]— timbul daripada belahan ikatan glikosidik pada kedudukan C1 dengan kehilangan tambahan satu air, meninggalkan cas berada pada bahagian bahagian aglikon. Spektrum MS3 puncak 4 mengikuti laluan pemecahan yang sama seperti puncak 3 kecuali ion yang hilang pada m/z 135. Ion molekul dan corak pemecahan kedua-dua sebatian ini adalah konsisten dengan data literatur mengenaiacteosidedan isoacteoside (Wang et al., 2000), walaupun ion tambahan m/z 153 ditemui dan

ditetapkan sebagai [aglycone H]— oleh Wang et al. (Wang et al., 2000). Ion ini mungkin tidak stabil dan kehilangan air untuk memberikan m/z 135 dalam eksperimen kami. Berdasarkan data MS dan masa pengekalan kongruen bagi puncak 3 dan 4 dengan piawaian, ia dikenal pasti sebagaiacteosidedan isoacteoside, masing-masing.

Data LC–ESI-MS puncak 5 ditunjukkan dalam Jadual 2. Ion molekul terdeprotonasi [MH]— (m/z 665) ialah satu-satunya ion yang ditemui dalam mod negatif, membayangkan jisim molekul 666. Tiga ion anak perempuan telah diperhatikan pada m/z 623, 503, dan 461 dalam eksperimen MS2 (Jadual 2). Ion anak perempuan pada m/z 623 dan 503 terbentuk terus daripada ion induk dengan kehilangan kumpulan COCH2 dan gugusan kafeil, masing-masing. Ion pada m/z 461 datang daripada kehilangan kedua-dua caffeoyl dan bahagian COCH2 [M 162 42 H]— daripada ion induk. Dalam eksperimen MS, m/z 623 menghasilkan m/z 461, dan m/z 503 menghasilkan tiga ion pada m/z 485, 461, dan 315. Spektrum MS3 bagi ion anak m/z 461 memberikan dua ion pada 443 dan 315. Dengan membandingkan corak pemecahan LC– MSN puncak 5 dengan sebatian lain yang dilaporkan dalam kajian ini dan dengan lain-lain yang dilaporkan (Li et al., 2005; Wang et al., 2000), kami menyimpulkan bahawa puncak 5 secara struktur sangat berkaitan. untuk acteoside dengan satu-satunya perbezaan ialah unit COCH3 pada kedudukan R3. Oleh itu identiti tentatif diberikan kepada puncak 5 sebagai 20-asetillakteosida (Rajah 1).

Struktur dua sebatian yang dikenal pasti secara tentatif, puncak 2 (sebagai cistanoside A) dan puncak 5 (sebagai 20-acetyl-acteoside) telah disahkan strukturnya oleh 1H NMR. Anjakan kimia dan pemalar gandingan semua proton dalam sebatian 2 dan 5, seperti ditunjukkan dalam Jadual 3., dipadankan dengan data NMR yang dilaporkan untukcistanoside Adan 20-acetylacteoside, masing-masing (Kobayashi et al., 1984, 1987). Eksperimen NMR 2D (korelasi COSY, ROESY, dan CH jarak jauh) juga telah dijalankan dalam kajian ini dan mereka mengesahkan lagi pengenalpastian (data tidak ditunjukkan).

phenylethanoidglikosida dalam cistanche

4. Kesimpulan

Dalam kertas kerja ini, HSCCC telah berjaya digunakan untuk pengasingan dan penulenan echinacoside,cistanoside A, acteoside, isoacteoside dan 20-acetylacteoside daripada ekstrak n-butanol C. deserticola. Oleh itu, ia adalah cara yang terbukti untuk pemisahan separuh persediaan bioaktif. Sementara itu, struktur lima PhG di Cistanche deserticola telah disiasat melalui LC–ESI-MSN; beberapa ciri ciri PhG ditemui, yang membolehkan kami menentukan kumpulan berfungsi dalam struktur. Oleh itu, kaedah LC-ESI-MSN adalah alat yang berkuasa untuk mengenal pasti pantasfeniletanoiddan glikosidanya masukCistanche deserticolaekstrak, terutamanya apabila dibuktikan oleh data NMR.

Pengakuan

Penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada Jun Gu dari Pusat Resonans Magnet Nuklear, Universiti Guelph, Ontario, Kanada atas bantuannya dalam eksperimen NMR. Projek ini sebahagiannya disokong oleh pembiayaan daripada Wilayah Jilin, China (No. 20060904).

Rujukan

Chen, LJ, Games, DE, & Jones, J. (2003). Pengasingan dan pengenalpastian empat juzuk flavonoid daripada biji benih Oroxylum Indicum dengan kromatografi arus balas berkelajuan tinggi. Jurnal Kromatografi A, 988, 95–105.

Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., Ni, W., & Liu, CZ (2005).Cistanche deserticolakultur penggantungan sel:Phenylethanoidglikosida bio-sintesis dan aktiviti antioksidan. Biokimia Proses, 40, 3119– 3124.

Foucault, AP, & Chevolot, L. (1998). Kromatografi arus balas: instrumentasi, pemilihan pelarut, dan beberapa aplikasi terkini untuk penulenan produk semula jadi. Jurnal Kromatografi A, 808, 3–22.

Gross, G.-A., Lahloub, MF, Anklin, C., Schulten, H.-R., & Sticher, O. (1988). Teucrioside, glikosida fenilpropanoid daripada Teucrium Chamaedrys. Fitokimia, 27, 1459–1463.

He, ZD, Lau, KM, Xu, HX, Li, PC, & But, PPH (2000).

Aktiviti antioksidan daripadaphenylethanoidglikosida daripada peluang Brandisia. Jurnal Etnofarmakologi, 71, 483–486.

Kobayashi, H., Karasawa, H., & Miyase, T. (1984). Kajian tentang juzuk Cistanchis Herba. III. Pengasingan dan struktur glikosida fenilpropanoid baru,Cistanoside Adan B. Buletin Kimia & Farmaseutikal, 32, 3009–3014.

Kobayashi, H., Oguchi, H., Takizawa, N., Miyase, T., Ueno, A., Usmanghani, K., et al. (1987). Baruphenylethanoidglikosida daripadaCistanchetubulosa (Schrenk) Cangkuk. Buletin Kimia & Farmaseutikal FI, 35, 3309–3314.

Lei, L., Yang, FQ, Zhang, TY, Tu, PF, Wu, LJ, & Ito, Y. (2001).

Pengasingan persediaan dan penulenanacteosidedan 2'-acetyl acteoside daripada Cistanches salsa (CA Mey) G. Beck oleh kromatografi arus balas. Jurnal Kromatografi A, 912, 181–185.

Li, L., Tsao, R., Liu, ZQ, Liu, SY, Yang, R., Young, JC, et al. (2005). Pengasingan dan pemurnianacteosidedan isoacteoside daripada Plantago psyllium L. oleh kromatografi arus balas berkelajuan tinggi. Jurnal Kromatografi A, 1063, 161–169.

Li, LL, Wang, XW, & Wang, XF (1997). Peroksidasi antilipid dan tindakan antiradikal glikosida dalam herba Cistanches. China Journal of Chinese Materia Medica, 22, 364–367.

Li, J., Wang, PF, Zheng, RL, Liu, ZM, & Jia, ZJ (1993). Perlindungan glikosida fenilpropanoid daripada Pedicularis terhadap hemolisis oksidatif secara in vitro. Planta Medica, 59, 315–317.

Lu, MC (1998). Kajian tentang kesan sedatif daripadaCistanche deserticola.Jurnal Etnofarmakologi, 59, 161–165.

Nishimura, H., Sasaki, H., Inagaki, N., Chin, M., & Mitsuhashi, H. (1991). Sembilan phenethyl alcohol glycosides daripada Stachys szeboldzz. Fitokimia, 30, 965–969.

Oka, F., Oka, H., & Ito, Y. (1991). Pencarian sistematik untuk sistem pelarut dua fasa yang sesuai untuk kromatografi arus balas berkelajuan tinggi. Jurnal Kromatografi, 538, 99–108.

Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M., & Li, X. (1990). Sebatian fenolik daripada Plantago Asiatica. Fitokimia, 29, 3627–3631.

Schapoval, EES, Winter de Vargas, MR, Chaves, CG, Bridi, R., Zuanazzi, JA, & Henriques, AT (1998). Aktiviti anti-radang dan antinociceptive ekstrak dan sebatian terpencil daripada Stachytarpheta cayennesis. Jurnal Etnofarmakologi, 60, 53–59. Shoyama, Y., Matsumoto, M., & Nishioka, I. (1987). Glikosida fenolik daripada akar Rehmannia glutinosa Var yang berpenyakit. Purpurea. Fitokimia, 26, 983–986.

Wang, XW, Jiang, XY, Wu, LY, & Wang, XF (2001). Kesan penghapusan glikosida daripadaCistanche deserticolaterhadap radikal bebas dan perlindungannya terhadap kerosakan DNA yang disebabkan oleh OH secara in vitro. Jurnal Farmakologi Cina, 36, 29–31.

Wang, YM, Zhang, SJ, Luo, GA, Hu, YN, Hu, JP, Liu, L., Zhu,

Y., & Wang, HJ (2000). Analisis terhadapphenylethanoidglikosida dalam ekstrak herba Cistanchis oleh LC/ESI-MS/MS. Acta Pharmaceutica Sinica, 35, 839–842.

Wong, C.-C., Li, H.-B., Cheng, K.-W., & Chen, F. (2006). Tinjauan sistematik aktiviti antioksidan 30 tumbuhan ubatan Cina menggunakan ujian kuasa antioksidan penurun ferik. Kimia Makanan, 97, 705–711. Xie, JH, & Wu, CF (1993). Kesan ekstrak etanol daripadaCistanche deserticolamengenai kandungan neurotransmitter monoamine dalam tikus

otak. Ubat Tradisional dan Herba Cina, 24, 417–419.

Xiong, Q., Hase, K., Tezuka, Y., Tani, T., Namba, T., & Kadota, S. (1998). Aktiviti hepatoprotektif daripadafeniletanoiddaripadaCistanche deserticola. Planta Medica, 64, 120–125.

Xiong, QB, Kadota, S., Tani, T., & Namba, T. (1996). Kesan antioksidan fenilethanoid daripadaCistanche deserticola. Buletin Biologi & Farmaseutikal, 19, 1580–1585.

Zong, G., He, W., Wu, GL, & Chen, LH (1996). Perbandingan antaraCistanche deserticolaYC Ma danCistanchetiub (Schenk) Berat pada beberapa aktiviti farmakologi. Jurnal Perubatan Tradisional Cina, 21, 436–438.