Kesan Runing II Pada Pertumbuhan Dan Metastasis Tumor yang Dipindahkan dalam Tikus Pembawa Kanser Susu Dan Mekanismenya
Mar 13, 2023
Objektif:
Untuk mengkaji kesan Runing II (sediaan herba Cina untuk kanser susu) ke atas pertumbuhan dan metastasis tumor pemindahan kanser payudara MA-891-membawa tikus TA2 dan mekanismenya. Kaedah: Model kanser payudara MA-891 tumor yang dipindahkan ketegangan sel tikus TA2 dengan metastasis paru-paru telah dibangunkan untuk melihat kesan Runing II pada pertumbuhan dan metastasis tumor yang dipindahkan. Kaedah imunohistokimia dan analisis imej telah diterima pakai untuk mengesan tahap faktor pertumbuhan endothelial vaskular (VEGF), reseptor faktor pertumbuhan endothelial vaskular (VEGFR), kiraan saluran mikro (MVC), dan kawasan mikro-vessel (MVA).
Keputusan: Dalam kumpulan Running II, kadar perencatan berat tumor dan kadar perencatan metastasis paru-paru masing-masing adalah 37.3 peratus dan 65.4 peratus, pertumbuhan tumor dan metastasis paru-paru jelas dihalang; Dan tahap VEGF dan VEGFR, MVC, dan MVA telah menurun dengan ketara berbanding dengan kumpulan kawalan tumor-bearing (P<0.05). Conclusion: The Chinese herbal preparation Running II can inhibit the metastasis of tumors by inhibiting angiogenesis, and the mechanism is possibly related to the down-regulation of VEGF and VEGFR expression.
Di samping itu, pada masa yang sama penyelidikan, kami mendapati bahawa echinacea dalam Cistanche mempunyai kesan anti-tumor. Untuk penggunaan echinacoside dalam ubat antitumor, ciptaan ini mula-mula menambah MTH1, pyrophosphatase tak organik dan dGTP ke dalam larutan tindak balas (100mM pH8.0 asid Tris-acetic, 40mM NaCl, 10mM magnesium asetat, 0.005 peratus Tween20 dan 1mMDTT) Dalam kaedah ini, enzim dan substrat diinkubasi pada suhu bilik selama 1 jam dan kemudian 25 ul larutan hijau malachite telah ditambah untuk menamatkan tindak balas. Penyerapan dikesan pada 630 nm dengan pembaca plat mikro BIO‑RAD iMark. Keputusan menunjukkan bahawa echinacoside mempunyai kesan perencatan yang ketara ke atas aktiviti enzim MTH1; Kedua, kesan echinacoside pada sel tumor pada peringkat selular telah dikesan oleh ujian MTT, dan keputusan menunjukkan bahawa echinacoside boleh menghalang pertumbuhan sel kanser kolon SW480 dan sel osteosarcoma manusia U2OS dengan ketara, dan ciptaan sekarang menghalang pertumbuhan echinacoside. MTH1, enzim khusus yang mengekalkan kelangsungan hidup dalam sel tumor, membawa kepada penggabungan nukleotida teroksida ke dalam DNA, menyebabkan pemutusan rantai dua DNA maut dalam sel kanser, dengan itu menghasilkan kesan anti-tumor. Aplikasi perubatan baharu akan meletakkan asas bagi pembangunan ubat antitumor baharu pada masa hadapan.
Kata kunci:
tumor susu; angiogenesis; faktor pertumbuhan endothelial vaskular (VEGF); Running II (persediaan herba Cina untuk kanser susu)
Kanser susu adalah tumor malignan yang sangat mengancam kesihatan wanita dan kejadian penyakit ini menduduki tempat pertama dalam kalangan tumor malignan wanita, dengan kecenderungan meningkat dari tahun ke tahun. Walaupun kaedah terapeutiknya telah membuat beberapa kemajuan, kadar kelangsungan hidup jangka panjang bagi pesakit kanser susu tidak dinaikkan kerana pertumbuhan invasif dan metastasis tumor. Angiogenesis tumor adalah keadaan asas untuk pertumbuhan, pencerobohan, dan metastasis tumor.
Oleh itu, perencatan angiogenesis tumor adalah cara yang berkesan untuk mencegah pengeluaran dan perkembangan tumor dan memanjangkan hayat pesakit.1 Dalam kajian ini, mekanisme ubat Cina Running II dengan fungsi menambah qi dan menyuburkan yin, mengawal selia jalan raya dan saluran konsep, menyelesaikan jisim, dan menyahtoksik dalam menghalang tumor dan anti-metastasis telah dikaji daripada angiogenesis dan faktor pengawalseliaannya dalam tumor pemindahan MA-891 tikus TA2 dengan metastasis paru-paru.
BAHAN
Enam puluh ekor tikus TA2 betina SPF, seberat (20±2) g, berumur 6-8 minggu, telah dibeli daripada Jabatan Haiwan Makmal, Universiti Sains Perubatan Tianjin. Strain sel kanser payudara MA-891 tetikus dibekalkan oleh Prof. Luo Liqin, Makmal Patologi, Institut Tumor, Akademi Sains Perubatan China.
Runing II dianggotai oleh Sheng Huang Qi (Radix Astragali Monolici), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), Tai Zi Shen (Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Yi Yi Ren ( Semen Coicis), Yin Yang Huo (Herba Epimedii), Dang Gui (Radix Angelicae Sinensis), dsb., dengan nisbah dos 1.67: 1.67: 1.33: 1.33: 1.33: 1.33: 1.33: 1, yang disediakan rebusan oleh Bahagian Farmaseutik, Hospital Longhua, mengikut teknik tradisional, dan disimpan di 4ć untuk digunakan; Cyclophosphamide (CTX, 200mg/ampule, nombor cawangan: 981104) dan tamoxifen (TAM) telah dihasilkan oleh Shanghai Hualian Pharmaceutical Co. Ltd.; Normal saline dihasilkan oleh Shanghai Fumin Pharmaceutical Co.
Antibodi poliklonal faktor pertumbuhan endothelial vaskular (VEGF) (pencairan berfungsi 1:25–1:50), reseptor faktor pertumbuhan endothelial vaskular (VEGFR, pencairan berfungsi 1:30–1:50), dan antibodi poliklonal FVIIIAg (pencairan berfungsi 1:50 ) telah dibeli daripada Santa Cruz Biotechnology Inc; Antibodi kedua EnVision, antibodi VEGF anti-tikus arnab, antibodi FVIII Ag anti-arnab kambing dan antibodi VEGFR anti-arnab kambing, dan EnVision Kit telah dibeli dari Dako Co., Denmark; 3,3- Diaminobenzidine (DAB) telah dibeli daripada Shanghai Huamei Bioengineering Factory.
KAEDAH
Membangunkan model haiwan
Model haiwan telah dibangunkan dengan inferens kepada kaedah Luo dan Gao, et al.2,3. Sel MA-891 kanser mamari kultur in vitro tetikus pada fasa kemandirian logaritma telah dipilih dan kepekatan sel dikawal sebagai 1x107 /ml. Di bawah keadaan aseptik, sel-sel kanser mamalia telah disuntik ke dalam bahagian subkutaneus tikus TA2 pada axilla kanan (0.2 ml/tikus, iaitu 2X106 sel/tikus).
Pengelompokan haiwan dan kaedah pentadbiran
Dua hari selepas inokulasi, tikus dibahagikan secara rawak kepada 4 kumpulan, 15 tikus dalam setiap kumpulan. 1) Kumpulan kawalan pembawa tumor: 0.4 ml garam biasa ditadbir secara intragastrik, sekali setiap hari, lima kali setiap minggu. 2) Kumpulan Runing II: Runing II telah dicairkan dengan garam biasa dan 0.4 ml pencairan ini sepadan dengan 48 g·kg{{10}}·d-1 iaitu dikira mengikut jadual yang dilampirkan "Jadual Penukaran antara Kawasan Permukaan Badan Manusia dan Haiwan" dalam " Metodologi Kajian tentang farmakologi Dadah Cina"4 diberikan secara intragastrik, sekali sehari, lima kali setiap minggu. 3) Kumpulan kawalan CTX: Mengenai dos yang digunakan oleh Jiang Bo,5 CTX telah dicairkan dengan garam biasa dan 0.4 ml bersamaan dengan 50 mg·kg-1·d-1 ialah diberikan secara intragastrik, sekali setiap hari, tiga kali setiap minggu. 4) Kumpulan kawalan TAM: TAM dicairkan dengan garam biasa dan 0.4 ml bersamaan dengan 2.7 mg·kg-1·d-1 ditadbir secara intragastrik, sekali sehari, lima kali setiap minggu. Dadah diberikan selama 3 minggu dalam semua empat kumpulan.
Persampelan
Pada hari ke-22 selepas pentadbiran, tikus dikorbankan dengan terkehel vertebra serviks dan ditimbang. Kemudian jisim tumor dan paru-paru diambil dan ditimbang masing-masing. Berat badan sebenar tetikus=berat badan yang ditimbang – berat tumor. Nod kelabu pada permukaan paru-paru, iaitu, fokus metastasis, dikira dengan mata kasar. Jisim tumor dimasukkan ke dalam larutan formaldehid neutral 10 peratus untuk penetapan, diikuti dengan pembenaman parafin, keratan ultranipis, penegangan dua langkah imunohistokimia Envision, dan penentuan VEGF, VEGFR, kiraan mikrovessel (MVC), dan kawasan mikrovessel (MVA).
Kadar perencatan berat tumor
Kadar perencatan tumor=(min berat tumor kumpulan kawalan selepas rawatan – purata berat tumor kumpulan ubat selepas rawatan)/min berat tumor kumpulan kawalan selepas rawatan × 100 peratus .
Kadar perencatan metastasis paru-paru
Kadar perencatan metastasis paru-paru=(min nombor nod metastasis paru-paru kumpulan kawalan – min nombor nod metastasis paru-paru kumpulan ubat)/min nombor nod metastasis paru-paru kumpulan kawalan x 100 peratus .
Immunohistokimia Bayangkan pewarnaan dua langkah
Bahagian parafin 4 μm diambil, diikuti dengan deparafin rutin dengan xilena, dehidrasi kecerunan, dan basuh dengan PBS, 5 min x 3 kali; bahagian itu direndam dalam 0.01 mol/L, penimbal sitrat pH6.0, dimasukkan ke dalam ketuhar gelombang mikro 98ć selama 10 minit untuk pembaikan antigen dan disejukkan secara semula jadi pada suhu bilik selepas diambil daripada ketuhar gelombang mikro; menitis antibodi pertama (antibodi yang disebutkan di atas dan masing-masing pencairan antibodi yang sepadan), 37ć, 90 min, basuh dengan PBS, 5 min x 3 kali; menitis Envasion antibodi kedua, pada suhu bilik selama 60 min, basuh dengan PBS, 5 min x 3 kali; menitiskan larutan pembentuk warna DAB yang baru disediakan, mengawal warna yang berkembang selama 3–10 minit di bawah mikroskop, pewarnaan balas selama 45 saat dengan campeachy, bilas dengan air paip, keringkan dengan blower, lekapkan dengan getah neutral. Sel dengan sitoplasma granul coklat-kuning atau hitam-coklat dianggap sebagai positif. Bahagian positif kanser susu yang diketahui telah digunakan sebagai kawalan positif, dan yang mana penimbal PBS digantikan untuk antibodi pertama digunakan sebagai kawalan negatif.
Analisis imej
Kamera video ACE (menyelesaikan kuasa 930 talian) dan penganalisis imej LEICAQ500W dan sistem analisis imej automatik penuh LEICA telah digunakan. Di bawah mikroskop x 200, 2 medan penglihatan dalam setiap bahagian dipilih secara rawak untuk penentuan VEGF atau 3 medan penglihatan untuk penentuan VEGFR dan MVA, dan peratusan kawasan positif kepada keseluruhan kawasan medan penglihatan dikira dalam semua kumpulan. . Untuk penentuan MVC, 5 kawasan dengan saluran darah terkaya telah dipilih dalam setiap bahagian di bawah mikroskop x 100, dan kemudian di bawah x 400, saluran mikro dalam setiap bidang penglihatan 5 kawasan tanpa pertindihan telah dikira, dan min telah digunakan. sebagai kaunter kapal mikro purata (MVC) tumor.
Kaedah statistik
Perisian SPSS8.0 telah digunakan dan ujian khi kuasa dua digunakan untuk perbandingan antara kadar dan ujian-t atau ANOVA sehala digunakan untuk perbandingan min.
KEPUTUSAN
Kesan perencatan tumor dan anti-metastasis Running II pada tumor pemindahan kanser payudara MA-891-mengandungi tikus TA2 dengan metastasis paru-paru
It was shown in Table 1 that the tumor weight inhibition rate was 37.3% in the Runing II group and 86.2% in the CTX control group, both tumor inhibition rates being >30 peratus , dengan perbezaan yang ketara (kedua-dua P<0.05) as compared with both tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor-inhibiting effect. And there was a significant difference (P<0.05) between the Runing II group and the CTX control group in the tumor inhibition rate, indicating that the tumor-inhibiting effect of Runing II was lower than that of CTX. The lung metastasis inhibition rate was 65.4% in the Runing II group and 43.9% in the CTX control group, with significant difference (both P<0.05) as compared with a tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor metastasis-inhibiting action. And there was a significant difference between the Runing II group and the CTX control group (P<0.05) in the lung metastasis inhibition rate, suggesting that the anti-metastasis action of Runing II is superior to that of CTX.
Kesan Running II pada ekspresi VEGF dan VEGFR dalam tumor pemindahan MA-891- yang mengandungi TA2 tikus
Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 2, ekspresi VEGF dan VEGFR dalam kedua-dua kumpulan Running II dan kumpulan kawalan CTX adalah jauh lebih rendah daripada kumpulan kawalan tumor-bearing (P<0.05), with a significant difference between the two. In the Running II group, the VEGF and VEGFR expressions were not significantly different from those in the CTX control group (P>0.05), ungkapan VEGF adalah jauh lebih rendah daripada dalam kumpulan kawalan TAM (P<0.05), and the VEGFR expression was similar to that in the TAM control group (P>0.05). In the CTX control group, the VEGF and VEGFR expression was lower than those in the TAM control group. In the TAM control group, the VEGF expressions were similar to that in the tumor-bearing control group (P>0.05), dan ungkapan VEGFR adalah lebih rendah daripada dalam kumpulan kawalan yang membawa tumor (P<0.05).
Kesan Running II pada MVA dan MVC tumor yang dipindahkan dalam MA-891-membawa tikus TA2
Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 3, tahap MVA dan MVC dalam kanser yang dipindahkan dalam kumpulan ubat adalah jauh lebih rendah daripada kumpulan kawalan yang membawa tumor (P<0.05); in the Running II group, the levels of MVA and MVC were significantly higher than those in the CTX control group (P<0.05), the level of MVC was lower than that in the TAM control group (P<0.05), and the MVA level was similar to that in the TAM control group (P>0.05).
PERBINCANGAN
Perubatan tradisional Cina berpendapat bahawa genesis dan perkembangan tumor terhasil daripada kesan menyeluruh faktor idiopatik dan empati tetapi dengan tekanan pada yang pertama. Dalam kajian klinikal sebelum ini, Prof. Lu dan Tang berpendapat bahawa kekurangan vital-qi di pedalaman dan ketidakharmonian jalan raya dan saluran konsep adalah punca utama genesis tumor, dan pencerobohan dalaman, pergerakan dan penyebaran patogen kanser adalah syarat utama pertumbuhan dan metastasis kanser susu.6 Oleh itu, dalam rawatan, mereka menyokong qi penting yang berkhasiat dan mengeluarkan jisim. Running II adalah formula herba Cina yang disimpulkan melalui amalan klinikal selama bertahun-tahun mengikut prinsip rawatan mengukuhkan ketahanan badan terlebih dahulu dan menghapuskan faktor patogenik kedua. Dalam formula, Sheng Huang Qi (Radix Astragali Monolici), Tai Zi Shen ( Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), Yin Yang Huo (Herba Epimedii) adalah bahan berdaulat, dengan kesan menambah qi dan menyuburkan yin, mengawal selia jalan raya dan saluran konsepsi, yang mematuhi ciri-ciri kanser susu yang biasa dilihat seperti kekurangan qi dan yin dan ketidakharmonian saluran jalan dan saluran konsepsi. Secara klinikal, formula ini mencapai kesan yang jelas untuk memanjangkan masa hidup, meningkatkan kualiti hidup, menstabilkan tumpuan tumor, dan mencegah metastasis kanser.
Kajian ini telah mewujudkan model tumor tumor pemindahan ketegangan sel MA-891 kanser payudara bagi tikus TA2 dengan metastasis paru-paru dan memerhatikan kesan Running II pada pertumbuhan tumor pepejal dan metastasis paru-paru, dan mendapati terdapat perbezaan yang ketara dalam tumor kadar perencatan dan kadar perencatan metastasis paru-paru antara kumpulan Running II dan kumpulan pembawa tumor, dan antara kumpulan Running II dan kumpulan kawalan CTX, menunjukkan bahawa Running II mempunyai fungsi yang jelas untuk menghalang pertumbuhan tumor dan anti-metastasis. Selain itu, tamoxifen (TAM) tidak mempunyai fungsi yang jelas untuk menghalang pertumbuhan tumor dan anti-metastasis dalam tikus model, yang serupa dengan keputusan bahawa kanser payudara MA-891 ialah ketegangan sel ER dan laporan tentang tindakan langsung kepekatan rendah TAM di luar negara.7
Tumor adalah penyakit yang bergantung kepada saluran darah biasa, dan pertumbuhan, penyusupan, dan metastasisnya bergantung kepada angiogenesis. Pada masa yang sama, neovaskularisasi sekali lagi membekalkan saluran metastasis untuk sel tumor, mewujudkan keadaan yang menggalakkan untuk pertumbuhan, metastasis, dan penyebaran tumor. 8, 9 VEGF ialah faktor pro-angiogenik dengan tindakan paling kuat, unik dan spesifik pada sel endothelial vaskular, dan banyak sel tumor boleh merembeskan VEGF, yang meningkatkan kebolehtelapan vaskular dan bertindak secara langsung pada sel endothelial vaskular melalui pengikatan kepada reseptor VEGF, merangsang pembahagian dan percambahannya, mendorong angiogenesis tumor dan mempengaruhi bilangan saluran mikro, untuk menggalakkan pertumbuhan dan metastasis tumor.10,11 Kebanyakan sel tumor mempunyai ekspresi VEGF yang tinggi, manakala dalam tisu normal, hanya sebilangan kecil organ seperti buah pinggang, ovari, dsb., mempunyai ekspresi VEGF yang lebih tinggi. Oleh itu, sesetengah sarjana berpendapat bahawa VEGF boleh digunakan sebagai penanda metabolisme tumor dan metastasis12 dan bahagian sasaran yang lebih ideal untuk menyekat neoangiogenesis dalam tumor,13 dan mengganggu faktor pengawalseliaan vaskular tumor dan pautan bertindaknya, mengawal ekspresi faktor angiogenesis, dan menghalang angiogenesis mungkin mengawal pertumbuhan dan metastasis tumor.
Keputusan dalam kajian ini menunjukkan bahawa Runing II boleh menurunkan kawalan ekspresi VEGF dan VEGFR untuk mungkin menghalang pengaliran isyarat migrasi dan percambahan sel endothelial yang disebabkan oleh VEGF, dan seterusnya menghalang angiogenesis dalam tumor, dengan itu memberikan kesan antineoplastik dan anti-metastasis. .
Kajian terdahulu menunjukkan bahawa dalam perjalanan pertumbuhan tumor malignan, pertumbuhan tisu yang terlalu cepat tidak dapat dielakkan menyebabkan anoksia serius pada tisu tempatan, dan anoksia boleh merangsang sintesis mRNA VEGF dan melambatkan degradasi mRNA VEGF untuk mendorong genesis a sejumlah besar saluran kapilari baru tempatan.14,15 Dalam pemerhatian sel pewarnaan positif imunohistokimia, penulis mendapati ekspresi VEGF yang jelas dalam sitoplasma sel tumor nekrotik yang mati, sebaliknya, kurang atau tiada ekspresi VEGF dalam sel tumor dengan percambahan aktif , yang mungkin berkaitan dengan faktor pendorong anoksia tahap yang lebih tinggi dalam sel tumor, menepati laporan Talks KL, et al.16 Running II mengandungi Dang Gui (ᔧᔦ Radix Angelicae Sinensis), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Sheng Yi Yi Ren (Semen Coicis), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), dan lain-lain, yang berfungsi mengaktifkan peredaran darah, menyelesaikan kahak dan menghilangkan keruh. Mereka menghalang sintesis dan rembesan VEGF mungkin melalui peningkatan peredaran mikro tempatan tumor, meningkatkan bekalan oksigen ke sel-sel tumor, dengan itu menghalang pertumbuhan tumor untuk melakukan anti-metastasis.
RUJUKAN
1.Folkman J. Angiogenesis dan kanser payudara. J Clin Oncol 1994; 12: 441-443.
2. Folkman J. Penyelidikan angiogenesis: dari makmal ke klinik. Forum (Genova) 1999; 9: 59-62.
3. Potgens AJ. Ekspresi faktor kebolehtelapan vaskular mempengaruhi angiogenesis tumor dalam garisan melanoma manusia yang dixenograf kepada tikus bogel. Am J Pathol 1995; 5: 775-782.
4.Sauter ER, Nesbit M, Watson JC, et al. Faktor pertumbuhan endothelial vaskular ialah pasaran pencerobohan tumor dan metastasis dalam karsinoma sel skuamosa kepala dan leher. Clin Cancer Res 1999; 5: 775-782.
5.Warren RS, Yuan H, Matli MR, et al. Peraturan oleh faktor pertumbuhan endothelial vaskular oleh hipoksia. J Biol Chem 1996; 271: 2746-2753.
6. Levy AP, Levy NS, Goldberg MA. Peraturan pasca-transkripsi faktor pertumbuhan endothelial vaskular oleh hipoksia. J Biol Chem 1996; 271: 2746-2753.
7. Talks KL, Turley H, Gatter KC, et al. Ungkapan dan pengedaran faktor-faktor yang boleh disebabkan oleh hipoksia HIF-1 alfa dan HIF-2 alfa dalam tisu manusia normal, kanser dan makrofaj yang berkaitan dengan tumor. Am J Pathol 2000; 157: 411-421.
For more information:1950477648nn@gmail.com
