Penggunaan Pemakanan Sumber Metionin Dan Bacillus Amyloliquefaciens CECT 5940 Mempengaruhi Prestasi Pertumbuhan, Histologi Hepatopankreatik, Pencernaan, Kekebalan dan Mikrobiota Pencernaan Litopenaeus Vannamei Makanan Makanan Ikan yang Dikurangkan
Oct 30, 2023
Ringkasan Mudah: Pengembangan ternakan udang yang dipercepatkan memerlukan sumber protein dengan nilai pemakanan yang tinggi untuk merumuskan makanan yang memenuhi keperluan nutrisi udang. Tepung ikan (FM) adalah sumber protein utama untuk formulasi aquafeed. Walau bagaimanapun, bekalannya yang terhad dan kos yang tinggi menggalakkan penyelidikan mengenai sumber protein alternatif untuk merumuskan makanan yang lebih menguntungkan yang menyumbang kepada kelestarian akuakultur. Hidangan kacang soya (SBM) dan makanan sampingan ayam (PBM) telah digunakan sebagai sumber protein untuk menggantikan tepung ikan, tetapi ketidakseimbangan asid amino pentingnya menyumbang kepada prestasi pertumbuhan udang yang rendah dan menjejaskan kesihatan udang. Oleh itu, tujuan kajian adalah untuk menilai kesan penggantian FM oleh SBM dan PBM dalam diet yang ditambah dengan DL-Met, MET-MET (AQUAVI®), Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) dan gabungannya pada prestasi pertumbuhan dan kesihatan juvana Litopenaeus vannamei. Keputusan menunjukkan bahawa FM boleh digantikan sebahagiannya dengan SBM dan PBM dalam suapan udang ditambah dengan 0.19% MET-MET atau 0.06% MET-MET ditambah 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 tanpa menjejaskan prestasi pertumbuhan dan kebajikan Litopenaeus vannamei. Keputusan ini mungkin menarik untuk membangunkan makanan ikan yang rendah dan menyumbang kepada kelestarian akuakultur.
faedah tambahan cistanche-meningkatkan imuniti
Abstrak:Satu {{0}}percubaan pemakanan minggu menyiasat kesan penggantian Tepung Ikan (FM) oleh makanan kacang soya (SBM) dan makanan sampingan ayam (PBM) dalam diet yang ditambah dengan DL-Met, MET-MET (AQUAVI ®), Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) dan gabungannya mengenai prestasi pertumbuhan dan kesihatan juvana Litopenaeus vannamei. Sebanyak enam diet eksperimen telah dirumus mengikut keperluan pemakanan L. vannamei. Sebanyak 480 udang (0.30 ± 0.04 g) telah diagihkan secara rawak ke dalam 24 tangki (4 ulangan/setiap diet , 20 udang/tangki). Udang diberi makan dengan diet kawalan (CD; 200 g/Kg tepung ikan) dan lima diet dengan 50% penggantian FM ditambah dengan sumber metionin yang berbeza, probiotik (B. amyloliquefaciens CECT 5940) dan gabungannya: D1 (0.13% DL-MET), D2 (0.06% MET-MET), D3 ({{ 69}}.19% MET-MET), D4 (0.13% DL-MET campur 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 dan D5 (0.06% MET-MET campur 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940). Udang diberi makan D3 dan D5 telah pertambahan berat badan mingguan dan biojisim akhir yang jauh lebih tinggi berbanding CD yang diberi makan udang (p < 0.05) Udang yang diberi makan D2 hingga D5 meningkatkan ketinggian sel epitelium hepatopankreas (p < 0.05). Aktiviti enzim pencernaan meningkat dengan ketara dalam makanan hepatopankreas udang D3 (p < 0.05) Sementara itu, udang yang diberi makan D1 mempunyai penurunan kawalan gen yang berkaitan dengan imun yang ketara (p < 0.05) Selain itu, udang yang diberi makan D3 dan D5 meningkatkan banyak mikroorganisma prokariotik yang bermanfaat seperti Pseudoalteromonas dan Demequina yang berkaitan dengan metabolisme karbohidrat dan imun. rangsangan. Selain itu, udang yang diberi makan D3 dan D5 meningkatkan banyak mikroorganisma eukariotik yang bermanfaat kerana Aurantiochytrium dan Aplanochytrium berkaitan dengan pengeluaran asid eicosapentaenoic (EPA) dan asid docosahexaenoic (DHA) yang memainkan peranan dalam menggalakkan pertumbuhan atau meningkatkan imuniti organisma akuatik. Oleh itu, tepung ikan boleh digantikan sebahagiannya sehingga 50% oleh SBM dan PBM dalam diet ditambah dengan 0.19% MET-MET (AQUAVI®) atau 0.06% MET-MET (AQUAVI®) ditambah 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) dan meningkatkan prestasi produktif, kesihatan, dan imuniti udang putih. Kajian lanjut adalah perlu untuk menyiasat kesan sinergistik asid amino dan probiotik dalam diet udang ternakan, serta untuk menilai bagaimana SBM dan PBM mempengaruhi komposisi asid lemak diet ikan yang dikurangkan dan kualiti otot udang. Namun begitu, maklumat ini mungkin menarik untuk membangunkan makanan rendah tepung ikan untuk akuakultur tanpa menjejaskan pertumbuhan dan kebajikan organisma akuatik.
Kebaikan cistanche tubulosa-menguatkan sistem imun
Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Enhance Immunity
【Minta lebih lanjut】 E-mel:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Kata kunci: Litopenaeus vannamei; pemakanan udang; penggantian tepung ikan; metionin; probiotik; prestasi; kesihatan; mikrobiota
1. Pengenalan
Penternakan udang menghasilkan hampir 11.2 juta tan pada tahun 2022 dan udang putih Pasifik (Litopenaeus vannamei) adalah spesies yang paling mewakili dengan 52% daripada jumlah pengeluaran [1]. Kelestarian dan keuntungan pengeluaran akuakultur memerlukan bekalan bahan mentah yang mempunyai nilai pemakanan yang tinggi untuk formulasi makanan yang memenuhi keperluan nutrisi udang ternakan [2,3]. Tepung ikan merupakan bahan utama dalam aquafeed kerana nilai pemakanannya yang tinggi [4]. Walau bagaimanapun, bekalan yang terhad dan kos tepung ikan yang tinggi memerlukan penyelidikan sumber alternatif untuk makanan yang lebih menguntungkan dan menyumbang kepada kelestarian akuakultur [5,6]. Kajian terdahulu, terutamanya tertumpu kepada prestasi produktif udang, melaporkan bahawa tepung ikan boleh digantikan sebahagiannya dengan pelbagai sumber haiwan dan sayur-sayuran [6]. Antara sumber protein sayuran, tepung kacang soya mempunyai kandungan protein yang tinggi. Walau bagaimanapun, kehadiran faktor anti-pemakanan, kebolehcernaan yang lemah, dan ketidakseimbangan asid amino penting (EAA) yang menjejaskan mikrobiota pencernaan, menyebabkan tindak balas keradangan dalam organ pencernaan, prestasi produktiviti yang rendah, dan menjejaskan tindak balas imun organisma akuatik [5,7,]. 8]. Hidangan produk sampingan ayam adalah sumber haiwan berprotein tinggi yang kekurangan metionin dan lisin, oleh itu, penggunaannya dalam makanan ikan yang berkurangan boleh menjejaskan pertumbuhan dan kebajikan organisma akuatik [9]. Methionine ialah EAA yang terhad dalam aquafeeds tepung ikan rendah dan diperlukan untuk pertumbuhan normal [10], sintesis protein [11], dan fungsi imun [12] organisma akuatik. Oleh itu, suplemen metionin dalam makanan ikan yang rendah diperlukan untuk mengimbangi asid amino dan mengurangkan kesan negatif terhadap pertumbuhan dan metabolisme organisma akuatik yang diternak [13]. Pelbagai sumber metionin tersedia secara komersial, seperti campuran rasemik isomer D-Met dan L-Met yang dipanggil DL-metionin (DL-Met) dan campuran empat stereoisomer metionin berbeza (LD-Met-Met, DL-Met -Met, LL-Met-Met dan DD-Met-Met) dikomersialkan sebagai AQUAVI® (Met-Met) [10]. Walau bagaimanapun, AQUAVI® mempunyai sifat fizikokimia yang lebih baik seperti keterlarutan air yang sangat rendah dan penyerapan yang lebih tinggi daripada DL-Met [10,14]. Sebaliknya, telah dilaporkan bahawa suplemen probiotik (Bacillus subtilis) mempunyai kesan positif terhadap prestasi pertumbuhan dan kesihatan dalam udang putih (L. vannamei) dan lembu jantan (Lithobates catesbeianus) yang diberi makanan rendah tepung ikan [15,16]. Probiotik adalah mikroorganisma hidup yang digunakan dalam aquafeeds kerana keupayaannya untuk meningkatkan penggunaan makanan, pencernaan enzimatik, pencegahan patogen, tindak balas imun, dan pertumbuhan [15]. Oleh itu, kemasukan probiotik dalam makanan ikan yang dikurangkan boleh meningkatkan kesihatan dan kebajikan organisma akuatik [16]. Bakteria Bacillus digunakan secara meluas dalam akuakultur sebagai probiotik kerana ia mempunyai kapasiti untuk menghasilkan sebatian antimikrob dan eksoenzim yang meningkatkan penghadaman nutrien, perencatan patogen, modulasi tindak balas imun, penyelenggaraan integriti usus, dan seterusnya prestasi pertumbuhan [17]. B. amyloliquefaciens mempunyai aktiviti antibakteria dan menghasilkan enzim pencernaan yang menyokong pencernaan [18].
Disebabkan perkara di atas, sumber alternatif kepada tepung ikan, digabungkan dengan banyak bahan tambahan telah digunakan dalam aquafeeds untuk menjamin bekalan nutrien penting, meningkatkan prestasi produktif, memelihara komposisi fizikokimia diet, dan mengekalkan kualiti persekitaran akuatik [19]. Oleh itu, diet rendah tepung ikan ditambah dengan sumber metionin yang berbeza dan B. amyloliquefaciens telah meningkatkan prestasi pertumbuhan dan kecekapan pemakanan organisma akuatik yang diternak [3,7,8,20,21]. Juga, B. amyloliquefaciens CECT 5940 dan kesannya telah dilaporkan ke atas prestasi pertumbuhan dan kesihatan ayam pedaging [22] dan tilapia Nil (Oreochromis niloticus) [21]. Walau bagaimanapun, beberapa kajian telah mengesahkan kesan diet rendah tepung ikan dan bahan tambahan terhadap kesihatan pencernaan dan tindak balas imun udang. Oleh itu, objektif utama kajian ini adalah untuk menilai kesan penggantian FM dengan SBM dan PBM dalam diet yang ditambah dengan DL-Met, MET-MET (AQUAVI®), B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) dan kombinasinya terhadap pertumbuhan. prestasi, histologi hepatopankreatik, aktiviti enzim pencernaan, tindak balas transkrip gen berkaitan imun, dan komposisi mikrob sistem pencernaan udang putih Pasifik remaja (L. vannamei).
2. Bahan-bahan dan cara-cara
2.1. Persediaan Diet Eksperimen
Sebanyak enam diet eksperimen telah dirumus mengikut keperluan pemakanan L. vannamei [23] dan cadangan pengeluar (kumpulan Aqua R&D Evonik). Diet kawalan (CD) dirumuskan untuk mengandungi campuran protein FM (39%), protein SBM (53%), dan protein PBM (8%) seperti diet udang komersial biasa. SBM dan PBM merupakan sumber protein alternatif utama untuk menggantikan FM, manakala tepung gandum digunakan sebagai bahan pengikat dan pengisi. Minyak ikan digunakan sebagai sumber lipid utama untuk memenuhi n-3 keperluan asid lemak penting udang. CD mempunyai 2{{10}}0 g/Kg tepung ikan tanpa sebarang tambahan. Lima diet lain (D1–D5) di mana SBM dan PBM menggantikan FM pada 50% telah ditambah dengan sumber metionin yang berbeza, B. amyloliquefaciens, dan gabungannya. D1: 0.13% DL-MET, D2: 0.06% MET-MET (AQUAVI®), D3: 0.19% MET-MET (AQUAVI®), D4 : 0.13% DL-MET campur 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) dan D5: 0.06% MET-MET (AQUAVI®) campur 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®). Di samping itu, nisbah kestabilan air dinilai sebagai ciri fizikal diet dengan kaedah yang diterangkan sebelum ini [24]. Formulasi, komposisi proksimat, dan nilai kestabilan air diet eksperimen ditunjukkan dalam Jadual 1.
Jadual 1. Ramuan dan komposisi proksimat diet eksperimen (g/kg berat kering).
Jadual 1. Samb.
2.2. Udang, Percubaan Makanan dan Koleksi Sampel
Juvenile L. vannamei diperoleh dari ladang udang di Sonora, Mexico. Udang itu bebas patogen mengikut prosedur yang diterangkan dalam Manual Ujian Diagnostik untuk Haiwan Akuatik Pertubuhan Dunia untuk Kesihatan Haiwan [25]. Sebelum percubaan pemberian makanan, semua udang telah disesuaikan dalam makmal akuakultur dalam tangki 1500-L dengan air laut dalam keadaan terkawal (suhu 30 ± 0.5 ◦C, oksigen terlarut Lebih besar daripada atau sama dengan 4 mg/L, kemasinan 37 g/L, pH Lebih besar daripada atau sama dengan 7 dan tempoh foto selama 12 jam cahaya) dan diberi suapan komersial selama 7 hari. Pada permulaannya, 480 udang sihat dengan (0.30 ± 0.02 g) dipuasakan selama 24 jam dan diagihkan secara rawak kepada 24 tangki bulat (isipadu ialah 150 L) pada ketumpatan 20 ekor udang setiap tangki (bersamaan dengan ketumpatan sebanyak 133 ekor udang/m3 ). Terdapat empat tangki replika yang diperuntukkan secara rawak untuk setiap rawatan diet. Udang diberi makan hingga kenyang dengan catuan awal 12% daripada biojisimnya dibahagikan kepada tiga catuan pada siang hari (8:00, 13:00 dan 16:00 h) untuk 56 hari, diselaraskan setiap hari bergantung pada kehadiran atau ketiadaan sisa makanan. Suhu (27.84 hingga 28.36 ◦C), kemasinan (36.98 hingga 37.07 g/L), oksigen terlarut (4.00 hingga 5.17 mg/L) dan pH (7.41 hingga 7.84) telah direkodkan. Setiap hari, 30% air ditukar. Makanan yang tidak dimakan, najis, molt, dan udang mati dikeluarkan setiap hari. Selepas percubaan pemakanan dan tempoh berpuasa selama 24 jam, tiga ekor udang telah diambil secara rawak daripada setiap replika untuk mendapatkan 400 µL hemolymph untuk analisis ekspresi gen [26]. Udang yang sebelum ini berdarah telah dibedah secara aseptik untuk mendapatkan keseluruhan usus dan hepatopancreas mereka, kemudian disimpan pada suhu -80 ◦C sehingga aktiviti enzim pencernaan dan analisis mikrobiom. Selain itu, dua belas (tiga ekor udang/replikat) keseluruhan udang telah diambil sampel secara rawak daripada setiap rawatan dan difiksasi dalam larutan AFA Davidson untuk analisis histologi.
2.3. Prestasi Pertumbuhan
Semua udang ditimbang dan dikira untuk mengira prestasi pertumbuhan mengikut persamaan yang dilaporkan oleh kajian terdahulu [27-29].
Berat akhir=(Σ Berat individu akhir)/Bilangan akhir udang. Pertambahan berat badan mingguan=(Berat akhir − Berat awal)/Bilangan minggu. Kadar pertumbuhan khusus=100 × (dalam berat akhir − dalam berat awal)/hari percubaan. Kadar kemandirian=100 × (Bilangan akhir udang/Bilangan awal udang). Biojisim akhir=Berat akhir × Bilangan akhir udang. Pengambilan suapan=Input Suapan (berat kering) − Suapan dikumpul (berat kering). Kadar penukaran suapan=Pengambilan suapan/Biojisim akhir.
2.4. Histologi Hepatopancreas
Sampel hepatopancreas udang yang ditetapkan dalam larutan Davidson telah diproses mengikut kaedah yang diterangkan oleh Bell dan Lightner [30]. Bahagian histologi dengan ketebalan 4 µm, dipotong menggunakan mikrotom berputar (LEICA RM2115RT). Pewarnaan tisu, pemerhatian slaid, dan pendigitalan imej telah direalisasikan mengikut kaedah yang diterangkan oleh Casillas-Hernández [31]. Imej tisu digunakan untuk mengukur ketinggian sel hepatopancreas menggunakan sistem imej digital Perisian Image-Pro Premier v9.0 (Media Cyvernetics Inc., Rockville, MD, USA).
cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun
2.5. Aktiviti Enzim Pencernaan
Usus dan hepatopankreas dihomogenkan secara berasingan kepada nisbah 10% dengan larutan garam 0.9% dan disentrifugasi pada 3500 rpm selama 10 minit pada suhu 4 ◦C, dan supernatan segera dianalisis untuk ujian enzim pencernaan dengan pembaca plat mikro (Bio -Rad, Hercules, CA, Amerika Syarikat). Aktiviti protease dan lipase telah diuji oleh kit komersial (Sigma-Aldrich®, Louis, MO, Amerika Syarikat). Aktiviti amilase diukur menggunakan kanji larut sebagai substrat [32]. Jumlah kepekatan protein larut ditentukan oleh prinsip pengikatan pewarna protein menggunakan albumin serum lembu sebagai piawai [33]. Ujian semuanya dijalankan dalam tiga sampel replika. Aktiviti enzim pencernaan dinyatakan sebagai U/mg protein.
2.6. Tindak Balas Transkripsi Gen Berkaitan Imun
Hemolimfa telah disentrifugasi pada 35{30}}0 rpm selama 10 minit pada 4 ◦C untuk memisahkan hemosit daripada plasma. Jumlah RNA daripada hemosit telah diekstrak dengan Reagen TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, Amerika Syarikat) dan dirawat dengan DNase bebas RNA (Promega®, Madison, WI, USA). cDNA telah disintesis dengan Jumlah RNA (500 ng) menggunakan Sistem Transkripsi Terbalik ImProm-II™ (Promega®) dan oligo d(T)20 (T4OLIGO). Sintesis cDNA direalisasikan dengan transkripsi terbalik pada 42 ◦C selama 60 minit; kemudian transkripase terbalik dinyahaktifkan pada 70 ◦C selama 15 minit untuk menghentikan tindak balas. CDNA telah dicairkan dengan 80 µL air ultratulen, dan 5 µL digunakan sebagai templat untuk tindak balas PCR (qPCR) kuantitatif masa nyata. Tindak balas transkrip dianalisis daripada lima gen berkaitan imun dan -actin sebagai gen rujukan (Jadual 2) [34]. qPCR telah dijalankan pada Sistem PCR Masa Nyata StepOne (Thermo Fisher Scientific) menggunakan Kit SensiFAST™ SYBR® Hi-ROX (Bioline™, London, UK). Keadaan qPCR ialah denaturasi awal pada 95 ◦C selama 10 minit, diikuti oleh 40 kitaran denaturasi pada 95◦C selama 15 s, dan penyepuhlindapan/pelanjutan pada 60 ◦C selama 1 minit. Analisis keluk disosiasi (60–95 ◦C) pada kadar peralihan suhu 0.5 ◦C/s telah dilakukan untuk setiap pasangan primer. Kaedah kuantifikasi relatif digunakan untuk analisis ekspresi gen menurut Rodriguez-Anaya [35] dan Casillas-Hernández [36].
Jadual 2. Primer khusus yang digunakan untuk tindak balas transkrip gen berkaitan imun L. vannamei.
2.7. Analisis Pengekstrakan dan Penjujukan DNA
DNA genomik daripada hepatopancreas dan usus 12 ekor udang setiap rawatan telah diekstrak menggunakan Quick-DNA™ Fecal/Soil Microb (Zymo Research, Irvine, CA, USA), mengikut arahan pengilang. Kepekatan DNA dikira menggunakan spektrofotometer NanoDrop 2000 (Thermo-Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), dan kualiti DNA dinilai oleh elektroforesis gel agarose (1%, w/v). Sampel DNA genomik kemudiannya disalurkan ke Makmal Genom Mikrob (CIAD, Mexico) untuk penyediaan perpustakaan DNA dan penjujukan menggunakan protokol Illumina standard untuk penguatan [37]. Secara ringkas, rantau pembolehubah V4 bagi gen 16S rRNA dan 18S rRNA telah dikuatkan oleh PCR dengan primer berikut menggunakan penyesuai Illumina: 16S-V4_515F (50 - GTG CCA GCM GCC GCG GTA A{{ 13}} ), 16S-V4_806R (50 -TAA TCT WTG GGV HCA TCA GG-30 ), 18S-V9_Euk_1391F ( 50 -GTA CAC ACC GCC CGT C-30 ), dan 18S-V9_EukBr (50 -TGA TCC TTC TGC AGG TTC ACC TAC-30 ). Akhirnya, amplikon dikira dalam Qubit, dicampur dalam kolam equimolar, dan disusun pada platform Illumina Miniseq di bawah keadaan standard (300 kitaran, 2 × 150).
2.8. Analisis Bioinformatik
Fail FASTQ daripada bacaan akhir berpasangan dianalisis menggunakan pakej DADA2 v1.24.0 [38]. Aliran kerja analisis jujukan termasuk penapisan, dereplikasi, inferens sampel, pengenalan chimera dan penggabungan bacaan hujung berpasangan (PE) untuk mengumpulkannya ke dalam ASV (varian jujukan amplikon). DADA2 termasuk kaedah "Bayesian naif" menggunakan pangkalan data SILVA untuk kedua-dua rantau 16S-V4 (silva_nr99_v138.1_train_set.fa) dan rantau 18S-V9 (silva_132.18s.99_rep_set.dada2.fa). Maklumat taksonomi telah dianalisis dengan Phyloseq V1.40.0 dan pakej mikrobiom v1.18.0 untuk mendapatkan kepelbagaian alfa dan beta dan nilai pentahbisan [37]. Kepelbagaian beta telah dijalankan berdasarkan jarak UniFrac yang tidak berwajaran dan divisualisasikan menggunakan PCoA yang dibina dengan ggplot dalam R. Akhirnya, perbezaan peringkat komuniti multivariat antara kumpulan telah dikuantifikasi oleh analisis variasi pelbagai variasi permutasi (PERMANOVA) [39]. Jadual ASV akhir dari urutan 16S juga digunakan sebagai input untuk ramalan metagenomik berfungsi menggunakan PICRUSt [40]. Kandungan laluan KEGG yang diperolehi oleh PICRUSt telah dinormalisasi dan kemudian digunakan untuk mendapatkan ramalan fungsi metagenomik pada tahap KEGG hierarki yang berbeza (1, 2, dan 3) [41]. Penjujukan Illumina menggunakan primer untuk rantau hipervariable V4 dalam gen 16S rRNA menghasilkan 976,065 bacaan PE sebanyak 150 bp sepadan dengan usus dan hepatopancreas L. vannamei dengan purata 81,338 bacaan bagi setiap sampel. Selepas proses penapisan kualiti dan penghapusan chimera, purata 58, 235 jujukan setiap sampel dikekalkan, bersamaan dengan 71.6%, dan diberikan kepada 709 ASV. Sebaliknya, daripada penjujukan V9-18S rDNA, 871,699 bacaan PE sebanyak 150 bp diperoleh dengan purata 72,642 setiap sampel. Selepas aliran kerja analisis jujukan, bacaan dikurangkan sebanyak kira-kira 12.7%. Walau bagaimanapun, apabila melakukan pengecaman taksonomi dan pengelompokan ASV, kebanyakan jujukan sepadan dengan DNA hos (L. vannamei), menghapuskan sampel daripada hepatopancreas. Oleh itu, data yang dibentangkan mengenai pencirian mikrobiota eukariotik sepadan dengan mikroorganisma yang terdapat dalam usus. Dataset yang digunakan ialah 12,970 jujukan yang diberikan kepada 43 ASV.
2.9. Analisis statistik
Keputusan prestasi pertumbuhan, ketinggian sel hepatopancreas, aktiviti enzim pencernaan, dan tindak balas transkrip gen berkaitan imun telah dinilai oleh analisis varians sehala (ANOVA). Sekiranya terdapat sebarang kepentingan yang diperhatikan, ujian Tukey dilakukan untuk perbandingan cara. Analisis statistik dilakukan dengan Statgraphics Centurion XVI. Kepentingan ditetapkan pada tahap kebarangkalian 95%.
3. Keputusan
3.1. Prestasi Pertumbuhan
Nilai prestasi pertumbuhan dibentangkan dalam Jadual 3. Berbanding dengan CD, nilai prestasi pertumbuhan tertinggi (berat akhir, penambahan berat dan biojisim akhir) diperhatikan dengan udang yang diberi D3 dan D5, yang jauh lebih tinggi daripada udang yang diberi D1 (p < 0.05), tetapi tanpa perbezaan statistik dengan udang yang diberi makan D2 dan D4 dan (p > 0.05). Nilai terendah kadar penukaran makanan diperhatikan dengan udang yang diberi makan D3, tetapi tiada perbezaan ketara ditemui dalam FCR antara semua rawatan diet (p > 0.05). Manakala pengambilan makanan dengan ketara (p < 0.05) menurun dengan ketara pada udang yang diberi makan D1 dan meningkat dengan ketara (p < 0.05) dalam udang yang diberi makan D5. Tiada perbezaan ketara ditemui dalam kadar kelangsungan hidup di antara semua rawatan diet (p > 0.05).
Jadual 3. Kesan diet eksperimen terhadap prestasi pertumbuhan Litopenaeus vannamei.
3.2. Histologi Hepatopankreatik
Hepatopancreas udang mempunyai struktur yang teratur (Rajah 1A). Kecuali untuk udang yang diberi makan D1, semua udang yang diberi makan makanan ikan yang dikurangkan mempunyai ketinggian yang lebih tinggi (p < 0.05) bagi sel epitelium hepatopancreas daripada CD yang diberi makan udang (Rajah 1B).
Rajah 1. Histologi hepatopankreas udang L. vannamei makan kawalan diet dan 50% diet penggantian tepung ikan. (A) Mikrograf cahaya bahagian membujur (4 µm) hepatopankreas yang diwarnai dengan hematoksilin dan eosin, menunjukkan struktur yang teratur. Anak panah menunjukkan struktur normal sel epitelium tubul termasuk sel rembesan (sel B). Bar skala: 100 µm. (B) Hepatopancreas sel ketinggian epitelium udang. Data dibentangkan sebagai min ± SE, nilai dengan huruf yang berbeza adalah berbeza dengan ketara (p < 0.05). Singkatan: Tubul (Tb), sel epitelium (EC), dan sel B (HpB). CD (20{{30}} g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 (0.06% MET-MET), D3 (0.19% MET-MET) , D4 (0.13% DL-MET campur 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) dan D5 (0.06% MET-MET tambah 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
3.3. Aktiviti Enzim Pencernaan
Kesan sumber metionin diet yang berbeza dan Bacillus amyloliquefaciens terhadap aktiviti enzim pencernaan usus dan hepatopankreas daripada diet tepung ikan berkurangan L. vannamei ditunjukkan dalam Jadual 4. Aktiviti amilase, protease dan lipase hepatopankreas daripada D3 yang diberi makan udang adalah ketara. lebih tinggi (p < 0.05) daripada CD yang diberi makan udang, manakala aktiviti enzim pencernaan usus tidak dipengaruhi (p > 0.05). Dalam hepatopankreas daripada udang yang diberi makan D1, nilai amilase dan lipase yang paling rendah diperhatikan, manakala dalam usus aktiviti enzim pencernaan mempunyai nilai yang paling rendah tetapi tiada perbezaan yang ketara (p > 0.05) diperhatikan berbanding dengan CD yang diberi makan udang.
Jadual 4. Kesan diet eksperimen terhadap aktiviti enzim pencernaan Litopenaeus vannamei.
3.4. Tindak Balas Transkripsi Gen Berkaitan Imun
Tindak balas transkrip gen berkaitan imun udang putih yang diberi makan makanan ikan berkurangan dengan bahan tambahan telah ditentukan dan dibandingkan dengan CD yang diberi makan udang (Rajah 2). Kecuali untuk udang yang diberi makan D1, semua gen berkaitan imun yang dianalisis dalam kajian ini mempunyai ekspresi yang lebih tinggi daripada CD yang diberi makan udang. Hc dan pPO adalah ketara (p < 0.05) terkawal dalam udang yang diberi makan D3 dan D5. LGBP adalah ketara (p < 0.05) dikawal dengan ketara dalam udang yang diberi makan D2 dan D3. MnSOD telah dikawal dengan ketara (p <0.05) dalam udang yang diberi makan D2, D3 dan D5. HSP60 telah dikawal dengan ketara (p <0.05) dalam udang yang diberi makan D5. Nilai terendah tindak balas transkrip gen berkaitan imun diperhatikan dalam udang yang diberi makan D1 berbanding dengan semua rawatan pemakanan.
Rajah 2. Tindak balas transkripsi gen berkaitan imun bagi diet kawalan yang diberi makan udang dan 50% diet penggantian tepung ikan. (A) hemocyanin (Hc), (B) prophenoloxidase (pPO), (C) lipopolysaccharide dan -glukan-binding protein (LGBP), (D) cytosolic manganese superoxide dismutase (MnSOD), dan (E) protein kejutan haba 6{ {11}} (HSP60). Data dibentangkan sebagai min ± SE, nilai dengan huruf yang berbeza adalah berbeza dengan ketara (p < 0.05). Singkatan: CD (20{{30}} g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 (0.06% MET-MET), D3 (0.19% MET- MET), D4 (0.13% DL-MET campur 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) dan D5 (0.06% MET-MET tambah 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
3.5. Analisis Mikrobiota Pencernaan dan Ramalan Fungsian
Analisis lengkung rarefaction menunjukkan bahawa spesies yang diperhatikan setiap sampel adalah mencukupi untuk kedua-dua jujukan 16S-V4 (Rajah 3A) dan 18S-V9 (Rajah 4A). Mengenai kepelbagaian alfa, keputusan 16S menunjukkan bahawa indeks Chao1, Shannon, dan Simpsons hepatopancreas adalah lebih tinggi daripada usus (Rajah 3B). Sebaliknya, keputusan 18S menunjukkan bahawa semua indeks kepelbagaian alfa menurun dalam usus udang yang diberi makanan rendah tepung ikan berbanding dengan kawalan (Rajah 4B). Walau bagaimanapun, tidak terdapat perbezaan yang ketara antara rawatan diet dalam kedua-dua keputusan 16S dan 18S.
Rajah 3. Penjujukan gen rRNA 16S usus dan hepatopankreas daripada diet kawalan yang diberi makan udang dan 50% diet penggantian tepung ikan. (A) Lengkung Rarefaction, (B) Kepelbagaian Alpha, dan (C) Struktur mikrobiota divisualisasikan menggunakan plot analisis koordinat utama (PCoA). Singkatan: Usus (I) dan hepatopancreas (H). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 ({{20}}.{{27 }}6% MET-MET), D3 (0.19% MET-MET), D4 (0.13% DL-MET campur 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) dan D5 (0.06% MET-MET tambah 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 ).
Kesan diet eksperimen terhadap struktur mikrobiota ditentukan menggunakan jarak UniFrac dan divisualisasikan menggunakan plot PCoA. Hasilnya mendedahkan pemisahan yang jelas antara diet eksperimen, tetapi tanpa perbezaan yang ketara dalam komuniti prokariotik dari usus atau hepatopancreas (Rajah 3C) serta mikrobiota eukariotik dari usus (Rajah 4C). Walau bagaimanapun, analisis kepelbagaian beta menunjukkan pemisahan yang jelas antara komuniti otik prokari dari usus dan hepatopancreas (Rajah 3C).
Rajah 4. Penjujukan gen rRNA 18S usus daripada diet kawalan yang diberi makan udang dan 50% diet penggantian tepung ikan. (A) Lengkung Rarefaction, (B) Kepelbagaian Alpha, dan (C) Struktur mikrobiota divisualisasikan menggunakan plot analisis koordinat utama (PCoA). Singkatan: Usus (I). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 ({{20}}.{{27 }}6% MET-MET), D3 (0.19% MET-MET), D4 (0.13% DL-MET campur 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) dan D5 (0.06% MET-MET tambah 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 ).
Berdasarkan keputusan mikrobiota prokariotik, sejumlah 19 filum bakteria berbeza telah dikenalpasti. Proteobacteria ialah filum dominan dalam usus udang, manakala Pro teobacteria dan Actinobacteria adalah filum dominan dalam hepatopancreas udang. Dalam usus udang yang diberi makan D3 dan D5, peningkatan kelimpahan relatif Actinobacteria diperhatikan manakala kelimpahan relatif Bacteroidota berkurangan sedikit. Dalam atopancreas hep udang yang diberi makan D1, D2 dan D4, sedikit peningkatan dalam kelimpahan relatif Bacteroidota diperhatikan, manakala dalam hepatopancreas udang yang diberi makan D3 dan D5 kelimpahan relatif Actinobacteria telah meningkat (Rajah 5A). Pada peringkat genus, Pseudoalteromonas adalah yang paling lazim dalam usus udang manakala Demequina adalah yang paling lazim dalam hepatopancreas udang. Demequina mempunyai peningkatan yang rendah dalam usus udang yang diberi makan D3 dan D5, manakala Lysinimicrobium dan Ruegeria meningkat dalam hepatopancreas udang yang diberi makan D3 dan D5 (Rajah 5B). Keputusan kategori fungsi (tahap KEGG 2) menunjukkan bahawa jujukan bakteria dikaitkan dengan proses selular dan laluan metabolisme (Rajah 5C dan Jadual Tambahan S1). Metabolisme asid amino, metabolisme karbohidrat, kofaktor dan metabolisme vitamin adalah paling banyak dalam laluan metabolisme, manakala motilitas sel paling banyak dalam proses selular. Selepas penyingkiran bacaan penjujukan dari DNA tuan rumah, tiga filum pada mikrobiota eukariotik diperhatikan. Filum SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria) adalah yang paling lazim dalam semua usus udang, namun peningkatan dalam filum Opisthokonta diperhatikan dalam usus udang yang diberi makan D5 (Rajah 6A). Pada peringkat genus, Aplanochytrium adalah yang paling banyak dalam usus udang yang diberi makan D2 hingga D5, tetapi kelimpahan itu lebih tinggi dalam D5. Uncultured Alveolate diperkaya dalam CD yang diberi makan usus udang. Auranti ochytrium paling lazim dalam D2 hingga D4 dengan kelimpahan yang lebih tinggi dalam D3. Akhirnya, Ebria paling banyak terdapat dalam usus udang yang diberi makan D1 (Rajah 6B).
Rajah 5. Mikrobiota prokariotik usus dan hepatopankreas daripada diet kawalan yang diberi makan udang dan 50% diet penggantian tepung ikan. (A) Sepuluh teratas kelimpahan filum. (B) Analisis peta haba bagi 4 genera0 teratas dan (C) Analisis peta haba ramalan fungsi berdasarkan analisis laluan KEGG. Singkatan: usus (I) dan hepatopancreas (H). CD (200 g/Kg FM), D1 ({{20}}.13% DL-MET), D2 (0.06% MET -MET), D3 (0.19% MET-MET), D4 (0.13% DL-MET campur 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) dan D5 (0.06% MET-MET tambah 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
Rajah 6. Mikrobiota eukariotik usus daripada diet kawalan yang diberi makan udang dan 50% diet penggantian tepung ikan. (A) Kelimpahan Phyla. (B) Analisis peta haba bagi kelimpahan genera. Singkatan: usus (I). SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 (0.06% MET -MET), D3 (0.19% MET-MET), D4 (0.13% DL-MET tambah 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) dan D5 (0.06% MET-MET tambah 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
4. Perbincangan
4.1. Prestasi Pertumbuhan
Kajian terdahulu telah menilai kesan pengurangan diet tepung ikan yang ditambah dengan sumber metionin diet yang berbeza terhadap prestasi pertumbuhan L. vannamei, seperti makanan udang dengan 5% hingga 10% tepung ikan dan ditambah dengan tahap antara {{15 }}.15% dan 1.7% daripada MET-MET (AQUAVI®) atau 3% daripada DL-MET [2,3,8,20,42,43]. Namun begitu, kajian dengan keadaan kultur yang serupa yang menggunakan udang juvana (L. vannamei) dengan berat awal 0.98 ± 0.02 g, mencadangkan 0 .20% MET-MET (AQUAVI®) untuk prestasi pertumbuhan yang lebih baik apabila udang diberi makan makanan ikan yang berkurangan [20]. DL-MET telah dibuktikan pada udang juvana dengan berat awal 3.0 g mencadangkan tahap antara 0.{{50}}6–0.3 0% untuk tindak balas produktif yang baik apabila udang diberi makan makanan ikan yang berkurangan [2]. Sebaliknya, kesan B. amyloliquefaciens (104 dan 1{{90}}3 UFC/mL) yang dilarutkan dalam air sistem bio floc untuk L. vannamei yang diternak ialah dilaporkan [44,45], tetapi tiada laporan tentang kesan probiotik ini yang ditambah dalam makanan ikan yang berkurangan terhadap prestasi pertumbuhan L. vannamei. Oleh itu, kajian ini menilai kesan penggantian FM oleh SBM dan PBM dalam diet udang ditambah dengan 0.13% daripada DL-MET (D1), 0.06% daripada MET-MET (D2), 0.19% daripada MET-MET (D3), dan mengikut cadangan pengilang kami menggunakan gabungan 0.13% DL-MET campur 0.1% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (bersamaan dengan 109 UFC/g) (D4) dan 0.06% MET-MET campur 0.1% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (D5). Semua diet tepung ikan yang dikurangkan ditambah dengan sumber metionin dan probiotik menunjukkan nilai kestabilan air yang baik. Oleh itu, diet pengurangan tepung ikan yang dinilai dalam kajian ini adalah mengikut laporan terdahulu dan semua rawatan pemakanan menunjukkan tindak balas yang baik dalam prestasi pertumbuhan udang. Namun begitu, udang yang diberi makan D1 mempunyai parameter prestasi yang lebih rendah, manakala udang yang diberi makan D3 dan D5 mempunyai parameter prestasi yang lebih tinggi. Prestasi pertumbuhan rendah yang ketara dalam udang yang diberi makan D1 boleh dikaitkan dengan pengambilan makanan yang kurang baik akibat kekurangan metionin yang menyebabkan pengurangan kesedapan dalam akuafeed tepung ikan yang berkurangan [20]. Prestasi pertumbuhan yang tinggi dalam udang D3 berbanding dengan udang yang diberi makan D1 dan D2 mungkin disebabkan oleh kekurangan dan sumber metionin. Perkara di atas mungkin kerana telah dilaporkan bahawa dipeptida MET MET mempunyai keterlarutan air yang rendah dan bioavailabiliti tinggi, yang boleh digunakan dengan cekap oleh udang yang menggalakkan nilai prestasi pertumbuhan yang lebih baik [2,10,14]. Udang yang diberi makan D5 juga mempunyai prestasi pertumbuhan yang tinggi walaupun dengan paras dan sumber metionin yang sama dalam D2, tetapi dengan penambahan 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940. Prestasi pertumbuhan yang tinggi mungkin disebabkan oleh sifat berfaedah probiotik, termasuk aktiviti antimikrob dan pengeluaran -amilase, selulase, dan protease yang meningkatkan kebolehcernaan dan penyerapan nutrien [46]. Juga, kajian terdahulu melaporkan bahawa B. amyloliquefaciens ialah pengeluar metionin [47] dan ini boleh menyumbang kepada mengekalkan keseimbangan EAA ini dalam D5. Selain itu, telah dilaporkan bahawa campuran bahan tambahan makanan boleh meningkatkan keberkesanan prestasi pertumbuhan organisma akuatik [48-50] dan ayam pedaging [51]. Oleh itu, penggantian 50% FM oleh SBM dan PBM dalam diet ditambah dengan 0.19% MET-MET dan 0.06% MET-MET ditambah 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 boleh meningkatkan penggunaan nutrien dan seterusnya prestasi pertumbuhan udang. Adalah penting untuk ambil perhatian bahawa SBM dan PBM mempunyai tahap asid lemak yang tinggi, tetapi n-3 asid lemak politaktepu rantai panjang kekurangan sumber protein ini [52]. Dalam konteks ini, kajian lanjut adalah perlu untuk menentukan bagaimana penggunaan SBM dan PBM mempengaruhi komposisi asid lemak pengurangan diet tepung ikan dan kualiti otot udang.
manfaat cistanche untuk lelaki-menguatkan sistem imun
4.2. Histologi Hepatopankreatik
Hepatopancreas udang adalah organ pencernaan dan memainkan peranan penting dalam rembesan enzim pencernaan, pengangkutan nutrien, penyimpanan, dan penyerapan, oleh itu, fungsinya adalah kunci kepada prestasi pertumbuhan dan kesihatan udang [30,53]. Walau bagaimanapun, telah dilaporkan bahawa pengurangan diet tepung ikan boleh mengubah morfologi struktur organ pencernaan dan menjejaskan keadaan fisiologi dalam organisma akuatik yang mengakibatkan keterlambatan pertumbuhan [54]. Histologi hepatopankreatik dianalisis sebagai penunjuk prestasi pertumbuhan udang, kesihatan, dan status pemakanan. Kerosakan dalam struktur hepatopankreas tidak diperhatikan, sel B adalah sel hepatopankreatik yang paling lazim dan ketinggian epiteliumnya meningkat dengan ketara dalam semua rawatan pemakanan kecuali udang yang diberi makan D1, yang mempunyai tindak balas yang sama dengan diet kawalan. Keputusan menunjukkan bahawa hepatopancreas sensitif terhadap kemasukan sumber metionin diet yang berbeza dan B. amyloliquefaciens dalam diet ikan yang dikurangkan, meningkatkan sel B, mempengaruhi rembesan enzim pencernaan, penyerapan nutrien, dan asimilasi, dan penggunaan makanan seperti yang dilaporkan dalam kajian lain apabila digunakan. sumber dan bahan tambahan alternatif tepung ikan [53,55–58]. Selain itu, telah dilaporkan bahawa suplemen metionin boleh mengurangkan perubahan hepatopancreas kerana kekurangannya dalam diet rendah tepung ikan [8]. Oleh itu, menurut analisis histologi, tiada bukti ketoksikan yang disebabkan oleh pengurangan diet tepung ikan yang ditambah dengan sumber metionin diet yang berbeza dan B. amyloliquefaciens dalam L. vannamei hepatopancreas.
4.3. Analisis Enzim Pencernaan
Aktiviti pencernaan enzim adalah proses fisiologi yang meningkatkan pencernaan dan penyerapan nutrien, dan oleh itu, merupakan faktor utama untuk menggalakkan prestasi pertumbuhan udang [59]. Namun begitu, kajian terdahulu telah melaporkan bahawa aktiviti enzim pencernaan menurun dengan ketara dengan pengurangan diet tepung ikan tanpa tambahan tambahan [60,61]. Aktiviti enzim pencernaan digunakan sebagai penunjuk fungsi pencernaan udang. Dalam kajian ini, udang yang diberi makan D3 bertambah baik (p < 0.05) dalam aktiviti enzim pencernaan hepatopankreas berbanding antara semua kumpulan, dan tiada perbezaan ketara ditemui dalam aktiviti enzim pencernaan usus. Secara keseluruhannya, aktiviti enzim pencernaan yang rendah telah diperhatikan dalam kedua-dua organ udang yang diberi makan D1. Selaras dengan keputusan ini, suplemen metionin meningkatkan aktiviti enzim pencernaan dalam siakap merah (Pagrus major) [62], ikan mas rumput (Ctenopharyngodon idella) [63], udang putih (L. vannamei) [2,3,20], dan ikan rohu (Labeo rohita) [59]. Kesan makanan yang ditambah dengan B. amyloliquefaciens pada aktiviti enzim pencernaan udang tidak dilaporkan dalam L. vannamei tetapi diketahui bahawa probiotik meningkatkan aktiviti enzim pencernaan dan meningkatkan penggunaan makanan dan pencernaan [64]. Di samping itu, beberapa karya menilai suapan akuakultur yang berbeza ditambah dengan bahan tambahan yang digabungkan dengan probiotik dan menunjukkan peningkatan dalam proses pencernaan. [48,50]. Namun begitu, ketidakkonsistenan dalam aktiviti enzim pencernaan terbukti apabila ayam pedaging dengan asid organik, probiotik, dan kombinasi, mungkin disebabkan tahap induksi bahan tambahan makanan dan kombinasi berada pada tahap suboptimum [51]. Kajian ini juga melaporkan ketidakkonsistenan dalam aktiviti enzim pencernaan hepatopancreatic dalam udang yang diberi makan D3, D4, dan D5. Walau bagaimanapun, keputusan menunjukkan bahawa suplemen yang dinyatakan sebelum ini tidak menjejaskan fungsi pencernaan udang.
4.4. Tindak Balas Transkripsi Gen Berkaitan Imun
Tindak balas transkrip gen berkaitan imun adalah sangat penting untuk mendapatkan data mengenai status kesihatan udang [35]. Walau bagaimanapun, telah dilaporkan bahawa diet rendah tepung ikan menjejaskan tindak balas imun dan antioksidan udang disebabkan oleh nutrien yang tidak seimbang, faktor anti-pemakanan yang tinggi, dan kandungan serat yang mempengaruhi pengambilan makanan, kesedapan, dan penghadaman [56,65-67]. Sebelum ini, kami menyiasat kesan sumber dan tahap protein pada gen berkaitan imun (Hc, pPO, LGBP), kapasiti antioksidan (MnSOD) dan toleransi tekanan (HSP60) dan mencadangkan bahawa mekanisme pertahanan tidak terjejas apabila udang diberi makan diet yang mengandungi protein berasaskan tumbuhan (30-35%) pada tahap sederhana [35]. Sebaliknya, telah dilaporkan bahawa diet rendah tepung ikan mempunyai kesan buruk terhadap tindak balas imun udang apabila tepung ikan dikurangkan daripada 250 g/kg kepada 100 g/kg [68]. Walau bagaimanapun, tindak balas antioksidan telah dimodulasi tanpa menjejaskan status oksidatif hati dan usus apabila siakap Eropah (Dicentrarchus labrax) diberi makan ikan rendah ditambah dengan tahap DL-Met 12% di bawah keperluan yang ditetapkan [69]. Juga, tindak balas imun dan kapasiti antioksidan telah bertambah baik apabila udang putih (L. vannamei) [8] dan tilapia Nil (O. niloticus) [14] diberi makan makanan ikan yang rendah dengan 0.15% MET-MET. Selain itu, kajian menunjukkan bahawa tilapia Nil (O. niloticus) memberi makan makanan rendah tepung ikan ditambah dengan Spirulina platensis dan B. amyloliquefaciens telah meningkatkan tindak balas imun dan kapasiti antioksidan, tetapi mengurangkan toleransi tekanan [21]. Hasil kajian ini mendapati tindak balas transkripsi gen yang berkaitan dengan imuniti, kapasiti antioksidan, dan toleransi tekanan bertambah baik apabila udang diberi makan D2, D3, D4, dan D5, yang menarik kerana ini menunjukkan bahawa suplemen metionin dan probiotik boleh memodulasi secara positif. mekanisme pertahanan, mengurangkan kesan yang disebabkan oleh makanan ikan yang rendah. Sebaliknya, tindak balas transkrip rendah gen berkaitan imun yang diperhatikan dalam udang yang diberi makan D1 mungkin disebabkan oleh defisit metionin. Walau bagaimanapun, dengan mengambil kira prestasi produktif, rawatan pemakanan yang terbaik adalah D3 dan D5 tanpa menjejaskan pertumbuhan dan kesihatan udang.
4.5. Analisis Mikrobiota Pencernaan dan Ramalan Fungsian
Sistem penghadaman udang menjadi tuan rumah kepada komuniti mikroorganisma yang didominasi oleh bakteria, tetapi mikroorganisma eukariotik juga mungkin wujud, membina ekosistem mikrob besar yang dipanggil mikrobiota [70]. Mikrobiota sistem pencernaan udang mempengaruhi imuniti atau rintangan, pengeluaran metabolit yang bermanfaat, dan pencernaan dan asimilasi nutrien [71,72]. Diet merupakan salah satu faktor persekitaran utama yang mempengaruhi mikrobiota sistem pencernaan udang [73]. Kajian ini menilai kesan diet rendah tepung ikan ke atas kepelbagaian, struktur, dan kelimpahan relatif mikroorganisma prokariotik dan eukariotik daripada usus dan hepatopancreas L. vannamei menggunakan penjujukan 16S dan 18S. Keputusan kajian mencadangkan bahawa kepelbagaian dan struktur mikrobiota (prokariotik dan eukariotik) tidak berbeza antara rawatan pemakanan. Walau bagaimanapun, perbandingan kepelbagaian beta menentukan bahawa mikrobiota prokariotik usus berkumpul secara berasingan daripada mikrobiota prokariotik hepatopankreas, mencadangkan niche ekologi yang unik mengikut organ pencernaan udang [74]. Oleh itu, mikroorganisma khusus dalam kedua-dua usus dan hepatopancreas membantu meningkatkan tenaga yang diperolehi dengan cekap oleh tuan rumah dan proses metabolik yang diperlukan untuk pertumbuhan, tindak balas imun, pencernaan nutrien, dan asimilasi [75]. Seperti yang akan diterangkan di bawah, hasil kajian menunjukkan bahawa kelimpahan kedua-dua mikroorganisma prokariotik dan eukariotik boleh meningkat dan membantu udang menggunakan nutrien daripada diet rendah tepung ikan dengan cekap untuk proses metabolik yang diperlukan untuk mendapatkan tenaga, pertumbuhan, imuniti, pencernaan dan pemakanan. Mengikut banyaknya prokariot dalam semua sampel usus dan hepatopancreas, filum yang paling lazim ialah Proteobacteria manakala filum Actinobacteria mempunyai kehadiran yang lebih tinggi dalam sampel hepatopancreas. Keputusan ini adalah selaras dengan kajian terdahulu [36], dan ia juga telah diterangkan bahawa filum ini dominan dalam udang juvana dan dewasa (Penaeus monodon) [76]. Pseudoalteromonas yang tergolong dalam filum Proteobacteria ialah enzim pencernaan (protease, amilase, -galactosidases, dan fosfolipase) yang menghasilkan mikroorganisma yang menyumbang kepada pencernaan nutrien udang [77–79]; ia juga telah dilaporkan bahawa ia menyumbang kepada sintesis asid lemak tak tepu (PUFA) dan asid lemak rantai pendek (SCF) [80,81]. Ruegeria, yang tergolong dalam filum Proteobacteria, menghasilkan aktiviti triesterase, menyumbang kepada proses pencernaan menjadi tuan rumah serta aktiviti antibakteria terhadap Vibrio anguillarum [82]. Demequina yang tergolong dalam filum Actinobacteria boleh menghasilkan -amilase, xilanase, dan selulase, yang terlibat dalam penyerapan dan penggunaan karbohidrat [83–86]. Menurut profil chemotaxonomic dan genomik, Lysinimicrobium boleh dianggap sebagai sinonim subjektif Demequina [87] dan akibatnya boleh mempunyai sumbangan yang sama kepada aktiviti enzim pencernaan dan pencernaan karbohidrat. Peranan mikroorganisma prokariotik dalam sistem pencernaan udang berkait rapat dengan ramalan fungsi dalam pangkalan data KEGG, iaitu asid amino, karbohidrat, kofaktor, dan metabolisme vitamin serta motilitas sel. Penghasilan enzim pencernaan dan sintesis asid lemak penting menunjukkan peranan mikrobiota yang bermanfaat dalam kesihatan dan rangsangan imun sistem pencernaan udang. Selain itu, proses motilitas sel seperti kemotaksis bakteria dan pemasangan flagellar, boleh menyokong mikroorganisma prokariotik dalam menyesuaikan diri dengan persekitaran pencernaan tuan rumah [88]. Oleh itu, diet rendah tepung ikan, ditambah dengan 0.19% MET-MET atau 0.06% MET-MET ditambah probiotik (B. amyloliquefaciens) akan membantu peranan bermanfaat komuniti prokariotik dalam sistem pencernaan udang.
Sukar untuk mencirikan kelimpahan mikroorganisma eukariotik dengan penjujukan gen 18S kerana sejumlah besar DNA L. vannamei dikesan dalam kajian ini. Tambahan pula, adalah perkara biasa dalam metabarkod DNA najis bahawa DNA mikroeukariotik dalam najis terdegradasi lebih cepat daripada DNA perumah dan langkah tambahan seperti pembelahan atau menyekat DNA perumah menggunakan enzim sekatan atau primer menyekat diperlukan sebelum, atau selepas penguatan [89]. ]. Namun begitu, hasil kajian memberikan gambaran tentang komuniti mikroeukariotik sistem pencernaan udang. Filum SAR adalah yang paling banyak terdapat dalam usus udang yang diberi diet rendah tepung ikan. Aurantiochytrium mempunyai kelimpahan yang lebih tinggi dalam usus udang yang diberi makan D3 manakala Aplanochytrium paling banyak terdapat dalam usus udang yang diberi makan D5. Selain itu, Ebria adalah yang paling lazim dalam usus udang yang diberi makan D1. Aurantiochytrium ialah pengeluar asid eicosapentaenoic (EPA) [90] manakala Aplanochytrium menghasilkan asid docosahexaenoic (DHA) [91]. Asid lemak ini memainkan peranan penting dalam menggalakkan pertumbuhan atau meningkatkan imuniti organisma akuatik; juga, EPA dan DHA membantu organisma akuatik mengurangkan faktor keradangan dan mengurangkan keradangan [90]. Sebaliknya, Ebria mempunyai rangka silika pepejal dalaman, yang boleh mengakibatkan penghadaman yang lemah oleh organisma akuatik [92], yang boleh menurunkan prestasi pertumbuhan udang yang diberi makan D1. Mikroorganisma eukariotik hidup sebagai komensal atau mutualis dalam sistem pencernaan dan tisu invertebrata laut, tetapi berkemungkinan ia berasal dari air pantai yang digunakan untuk mengairi kolam udang, seperti yang diterangkan sebelum ini [93]. Walau bagaimanapun, penggunaan diet yang mesra alam dan ditambah dengan bahan tambahan dan probiotik boleh mengawal pertumbuhan mikroalga berbahaya dalam sistem pencernaan udang dan persekitarannya [94]. Ini bersetuju dengan keputusan kajian, yang menunjukkan bahawa diet rendah tepung ikan ditambah dengan 0.13% DL-MET meningkatkan kelimpahan Ebria yang menjejaskan prestasi produktif dan kesihatan udang, manakala diet ditambah dengan 0.19% METMET atau 0.06% MET-MET ditambah 0.10% B. amyloliquefaciens akan membantu peranan bermanfaat komuniti eukariotik dalam sistem pencernaan udang.
manfaat cistanche untuk lelaki-menguatkan sistem imun
5. Kesimpulan
Tepung ikan boleh digantikan sebahagiannya sehingga 50% oleh SBM dan PBM dalam makanan udang yang ditambah dengan MET-MET dan/atau B. amyloliquefaciens CECT 5940 tanpa kesan buruk terhadap prestasi pertumbuhan. Berbanding dengan diet kawalan, udang yang diberi makan mengurangkan diet tepung ikan dengan 0.19% MTE-MET dan 0.06% MET-MET ditambah 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 masing-masing mempunyai 43% dan 40% lebih biojisim akhir. Lebih-lebih lagi, udang yang diberi makan makanan ikan berkurangan ditambah dengan MET-MET dan/atau B. amyloliquefaciens CECT 5940 mempunyai ketinggian sel epitelium hepatopancreas yang lebih baik, aktiviti enzim pencernaan, tindak balas transkripsi gen berkaitan imun dan mikrobiota yang bermanfaat untuk sistem pencernaan. Kajian lanjut adalah perlu untuk menyiasat tahap graduan sumber metionin dan kesan sinergistik asid amino dan probiotik dalam diet ikan yang dikurangkan untuk udang ternakan. Juga, adalah menarik untuk menilai bagaimana SBM dan PBM mempengaruhi komposisi asid lemak diet ikan yang dikurangkan dan kualiti otot udang. Namun begitu, maklumat ini mungkin menarik untuk membangunkan makanan rendah tepung ikan untuk akuakultur tanpa menjejaskan pertumbuhan dan kebajikan organisma akuatik.
Rujukan
1. FAO. Keadaan Perikanan dan Akuakultur Dunia 2022. Ke Arah Transformasi Biru; FAO: Rom, Itali. [CrossRef]
2. Xie, J.-J.; Lemme, A.; Beliau, J.-Y.; Yin, P.; Figueiredo-Silva, C.; Liu, Y.-J.; Xie, S.-W.; Niu, J.; Tian, L.-X. Tahap tepung ikan boleh berjaya dikurangkan dalam udang putih (Litopenaeus vannamei) jika ditambah dengan DL-Methionine (DL-Met) atau DL-MethionylDL-Methionine (Met-Met). Aquac. Nutr. 2017, 24, 1144–1152. [CrossRef]
3. Lu, J.; Zhang, X.; Zhou, Q.; Cheng, Y.; Luo, J.; Masagounder, K.; Beliau, S.; Zhu, T.; Yuan, Y.; Shi, B.; et al. Suplemen DL-methionyl-DLmethionine pemakanan boleh meningkatkan prestasi pertumbuhan di bawah strategi tepung ikan yang rendah dengan memodulasi laluan isyarat TOR Litopenaeus vannamei. Aquac. Nutr. 2021, 27, 1921–1933. [CrossRef]
4. Cho, JH; Kim, IH Nilai pemakanan ikan. J. Anim. Fisiol. Anim. Nutr. 2011, 95, 685–692. [CrossRef] [PubMed]
5. Lagu, X.; Ye, H.; Jin, F.; Li, H.; Kim, Y.-S.; Xiao, J.; Guo, Z. Kesan tepung kacang soya yang ditapai dan guanosin 50 -monofosfat terhadap pertumbuhan, kesihatan usus dan keupayaan anti-tekanan Penaeus vannamei dalam diet rendah tepung ikan. Akuakultur 2022, 548, 737591. [CrossRef]
6. Yao, W.; Yang, P.; Zhang, X.; Xu, X.; Zhang, C.; Li, X.; Leng, X. Kesan menggantikan tepung ikan pemakanan dengan protein Clostridium autoethanogenum terhadap pertumbuhan dan kualiti daging udang putih Pasifik (Litopenaeus vannamei). Akuakultur 2022, 549, 737770. [CrossRef]
7. Zhang, J.; Yang, H.; Yan, Y.; Zhang, C.; Ye, J.; Sun, Y. Kesan probiotik asal ikan ke atas prestasi pertumbuhan, tindak balas imun dan kesihatan usus udang (Litopenaeus vannamei) diet yang diberi makan dengan tepung ikan digantikan sebahagiannya dengan tepung kacang soya. Aquac. Nutr. 2020, 26, 1255–1265. [CrossRef]
8. Ji, R.; Wang, Z.; Dia, J.; Masagounder, K.; Xu, W.; Mai, K.; Ai, Q. Kesan suplemen DL-methionyl-DL-metionine ke atas prestasi pertumbuhan, tindak balas imun dan antioksida udang kaki putih (Litopenaeus vannamei) yang diberi diet rendah tepung ikan. Aquac. Rep. 2021, 21, 100785. [CrossRef]
9. Chaklader, R.; Siddik, MAB; Fotedar, R. Jumlah penggantian tepung ikan dengan makanan sampingan ayam itik menjejaskan pertumbuhan, kualiti otot, struktur histologi, kapasiti antioksidan dan tindak balas imun barramundi juvana, Lates calcarifer. PLoS ONE 2020, 15, e0242079. [CrossRef]
10. Niu, J.; Lemme, A.; Beliau, J.-Y.; Li, H.-Y.; Xie, S.-W.; Liu, Y.-J.; Yang, H.-J.; Figueiredo-Silva, C.; Tian, L.-X. Menilai bioavailabiliti produk Novel Met-Met (AQUAVI®Met-Met) berbanding dl-methionine (dl-Met) dalam udang putih (Litopenaeus vannamei). Akuakultur 2018, 484, 322–332. [CrossRef]
11. Skiba-Cassy, S.; Geurden, I.; Panserat, S.; Seiliez, I. Ketidakseimbangan metionin pemakanan mengubah peraturan transkrip gen yang terlibat dalam metabolisme glukosa, lipid dan asid amino dalam hati trout pelangi (Oncorhynchus mykiss). Akuakultur 2016, 454, 56–65. [CrossRef]
12. Machado, M.; Serra, CR; Oliva-Teles, A.; Costas, B. Methionine dan Tryptophan Memainkan Peranan Modulasi Berbeza dalam Siakap Eropah (Dicentrarchus labrax) Tindak Balas Imun Semula Jadi dan Isyarat Apoptosis—Kajian In Vitro. Depan. Immunol. 2021, 12, 660448. [CrossRef]
13. Zhou, Y.; Dia, J.; Matahari.; Masagounder, K.; Xu, M.; Chen, L.; Liu, Q.; Ye, H.; Matahari, Z.; Ye, C. Kesan DL-metionin dan analog methionine hydroxy (MHA-Ca) pada pertumbuhan, profil asid amino dan ekspresi gen yang berkaitan dengan taurin dan sintesis protein dalam ikan mas biasa (Cyprinus carpio). Akuakultur 2021, 532, 735962. [CrossRef]
14. Guo, T.-Y.; Zhao, W.; Beliau, J.-Y.; Liao, S.-Y.; Xie, J.-J.; Xie, S.-W.; Masagounder, K.; Liu, Y.-J.; Tian, L.-X.; Niu, J. Pemakanan tambahan dl-methionyl dl-metionine meningkatkan prestasi pertumbuhan, keupayaan antioksidan, kandungan asid amino penting dan meningkatkan kepelbagaian mikrobiota usus dalam tilapia Nil (Oreochromis niloticus). Br. J. Nutr. 2020, 123, 72–83. [CrossRef]
15. Lin, J.; Zeng, Q.; Zhang, C.; Lagu, K.; Lu, K.; Wang, L.; Rahimnejad, S. Kesan suplemen Bacillus subtilis dalam diet berasaskan makanan kacang soya ke atas prestasi pertumbuhan, kebolehcernaan diet, dan kesihatan usus dalam bullfrog Lithobates catesbeianus. Aquac. Rep. 2020, 16, 100273. [CrossRef]
16. Tao, X.; Dia, J.; Lu, J.; Chen, Z.; Jin, M.; Jiao, L.; Masagounder, K.; Liu, W.; Zhou, Q. Kesan Bacillus subtilis DSM 32315 (Gutcare®) pada prestasi pertumbuhan, status antioksidan, keupayaan imun, dan fungsi usus untuk juvana Litopenaeus vannamei yang diberi diet tinggi/rendah tepung ikan. Aquac. Rep. 2022, 26, 101282. [CrossRef]
17. De Oliveira, MJK; Sakomura, NK; Dorigam, JCDP; Doranalli, K.; Soares, L.; Viana, G. Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 sahaja atau digabungkan dengan penggalak pertumbuhan antibiotik meningkatkan prestasi dalam ayam pedaging di bawah cabaran patogen enterik. Poult. Sci. 2019, 98, 4391–4400. [CrossRef]
18. Silva, TFA; Petrillo, TR; Yunis-Aguinaga, J.; Marcusso, P.; Claudiano, GDS; de Moraes, FR; de Moraes, JRE Kesan probiotik Bacillus amyloliquefaciens pada prestasi pertumbuhan, hematologi, dan morfometri usus dalam tilapia Nil yang dipelihara dalam sangkar. Lat. Am. J. Aquat. Res. 2015, 43, 963–971. [CrossRef]
19. Bai, S.; Katya, K.; Yun, H. Aditif dalam aquafeed. Dalam Amalan Makanan dan Pemberian Makanan dalam Akuakultur; Woodhead Publishing: Sawston, UK, 2015; ms 171–202. [CrossRef]
20. Wang, L.; Ye, L.; Hua, Y.; Zhang, G.; Li, Y.; Zhang, J.; Dia, J.; Liu, M.; Shao, Q. Kesan dietarydl-methionyl-dl-methionine (Met-Met) pada prestasi pertumbuhan, komposisi badan dan parameter hematologi udang putih (Litopenaeus vannamei) yang diberi diet berasaskan protein tumbuhan. Aquac. Res. 2019, 50, 1718–1730. [CrossRef]
21. Al-Deriny, SH; Dawood, MA; Zaid, AAA; El-Tras, WF; Paray, BA; Van Doan, H.; Mohamed, RA Kesan sinergistik Spirulina platensis dan Bacillus amyloliquefaciens terhadap prestasi pertumbuhan, histomorfologi usus, dan tindak balas imun tilapia Nil (Oreochromis niloticus). Aquac. Rep. 2020, 17, 100390. [CrossRef]
22. Sun, Y.; Zhang, Y.; Liu, M.; Li, J.; Lai, W.; Geng, S.; Yuan, T.; Liu, Y.; Di, Y.; Zhang, W.; et al. Kesan suplemen pemakanan Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 terhadap prestasi pertumbuhan, status antioksidan, imuniti, dan aktiviti enzim pencernaan ayam pedaging yang diberi diet jagung-gandum-kacang soya. Poult. Sci. 2022, 101, 101585. [CrossRef]
23. NRC (Majlis Penyelidikan Kebangsaan). Keperluan Khasiat Ikan dan Udang; Akhbar Akademik Kebangsaan: Washington, DC, Amerika Syarikat, 2011. [CrossRef]
24. Guo, J.; Davis, R.; Starkey, C.; Davis, DA Keberkesanan pelbagai bahan bersalut untuk mengelakkan larut lesap nutrien untuk diet komersial udang putih Pasifik Litopenaeus vannamei. J. World Aquac. Soc. 2020, 52, 195–203. [CrossRef]
25. Pejabat Epizootik Antarabangsa; Suruhanjaya Piawaian Kesihatan Haiwan Akuatik. Manual ujian diagnostik untuk haiwan akuatik. Pejabat des épizooties antarabangsa. 2022. Tersedia dalam talian: https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-andmanuals/aquatic-manual-online-access/ (diakses pada 1 September 2022).
26. Martinez-Porchas, M.; Ezquerra-Brauer, M.; Mendoza-Cano, F.; Higuera, JEC; Vargas-Albores, F.; Martinez-Cordova, LR Kesan penambahan bio floc heterotropik dan fotoautotropik, terhadap tindak balas pengeluaran, keadaan fisiologi dan kualiti selepas tuai udang putih, Litopenaeus vannamei. Aquac. Rep. 2020, 16, 100257. [CrossRef]
27. Peña-Rodríguez, A.; Elizondo-González, R.; Nieto-López, MG; Ricque-Marie, D.; Cruz-Suárez, LE Diet praktikal untuk pengeluaran mampan udang perang, Farfantepenaeus californiensis, juvana dengan kehadiran makroalga hijau Ulva clathrata sebagai makanan semula jadi. J. Appl. Phycol. 2017, 29, 413–421. [CrossRef]
28. Piérri, V.; Valter-Severino, D.; Goulart-De-Oliveira, K.; Manoel-Do-Espírito-Santo, C.; Nascimento-Vieira, F.; Quadros-Seiffert, W. Penanaman udang marin dalam sistem teknologi bioflok (BFT) di bawah kealkalian air yang berbeza. Braz. J. Biol. 2015, 75, 558–564. [CrossRef] [PubMed]
29. Gonzalez-Galaviz, JR; Casillas-Hernández, R.; Flores-Perez, MB; Lares-Villa, F.; Bórquez-López, RA; Gil-Núñez, JC Kesan genotip dan sumber protein terhadap prestasi udang putih Pasifik (Litopenaeus vannamei). Itali. J. Anim. Sci. 2020, 19, 289–294. [CrossRef]
30. Bell, TA; Lightner, DV Buku Panduan Histologi Udang Penaeid Biasa; Pertubuhan Makanan dan Pertanian Pertubuhan Bangsa-Bangsa Bersatu: Rom, Itali, 1988.
31. Casillas-Hernández, R.; Arévalo-Sainz, KJ; Gonzalez-Galaviz, JR; Rodríguez-Jaramillo, MDC; Bórquez-López, RA; Gil Núñez, JC; Flores-Pérez, MB; Lares-Villa, F.; Ibarra-Gámez, JC; Barrios, RMM Kesan kepekatan tinggi karbon dioksida terhadap prestasi dan histologi tisu udang Litopenaeus vannamei. Aquac. Res. 2021, 52, 3991–3996. [CrossRef]
32. Xiao, Z.; Ribut, R.; Tsang, A. Kaedah kanji–iodin kuantitatif untuk mengukur aktiviti alfa-amilase dan glukoamilase. dubur. Biokim. 2006, 351, 146–148. [CrossRef]
33. Bradford, MM Kaedah pantas dan sensitif untuk kuantiti mikrogram kuantiti protein menggunakan prinsip pengikatan pewarna-protein. dubur. Biokim. 1976, 72, 248–254. [CrossRef]
34. Zhang, S.-P.; Li, J.-F.; Wu, X.-C.; Zhong, W.-J.; Xian, J.-A.; Liao, S.-A.; Miao, Y.-T.; Wang, A.-L. Kesan tahap lipid pemakanan yang berbeza terhadap pertumbuhan, kelangsungan hidup dan ekspresi gen yang berkaitan dengan imun dalam udang putih Pasifik, Litopenaeus vannamei. Kerang Ikan. Immunol. 2013, 34, 1131–1138. [CrossRef]
35. Anaya, LR; Casillas-Hernández, R.; Flores-Pérez, MB; Lares-Villa, F.; Lares-Jiménez, LF; Luna-Nevarez, P.; Gonzalez-Galaviz, JR Kesan garis genetik, sumber protein, dan tahap protein pada pertumbuhan, kemandirian, dan ekspresi gen berkaitan imun Litopenaeus vannamei. J. World Aquac. Soc. 2020, 51, 1161–1174. [CrossRef]
36. Casillas-Hernández, R.; Arévalo-Sainz, KJ; Flores-Pérez, MB; Garcia-Clark, JG; Rodriguez-Anaya, LZ; Lares-Villa, F.; BórquezLópez, RA; Gil-Núñez, JC; Gonzalez-Galaviz, JR Tindak balas transkripsi gen berkaitan imun dalam Litopenaeus vannamei yang dibiakkan dalam sistem akuakultur yang beredar dengan CO2 yang tinggi. Bras Rev. de Zootec. 2021, 50, 20200197. [CrossRef]
37. Guzmán-Villanueva, LT; Escobedo-Fregoso, C.; Barajas-Sandoval, DR; Gomez-Gil, B.; Peña-Rodríguez, A.; Martínez-Diaz, SF; Balcazar, JL; Quiroz-Guzmán, E. Penilaian dinamik mikrob dan ekspresi gen enzim antioksidan berikutan pentadbiran probiotik dalam udang putih Pasifik yang diternak (Litopenaeus vannamei). Akuakultur 2020, 519, 734907. [CrossRef]
38. Callahan, BJ; Mcmurdie, PJ; Rosen, MJ; Han, AW; Johnson, AJA; Holmes, SP DADA2 : Inferens sampel resolusi tinggi daripada data amplikon Illumina. Nat. Kaedah 2016, 13, 581–583. [CrossRef]
39. Lahti, L.; Shetty, S. Microbiome R pakej; Keluaran (3.16); Biokonduktor: Boston, MA, Amerika Syarikat, 2017. [CrossRef]
40. Langille, MGI; Zaneveld, J.; Caporaso, JG; McDonald, D.; Knights, D.; Reyes, JA; Clemente, JC; Burkepile, DE; Vega Thurber, RL; Knight, R.; et al. Profil fungsional ramalan komuniti mikrob menggunakan jujukan gen penanda rRNA 16S. Nat. Bioteknol. 2013, 31, 814–821. [CrossRef]
41. Cornejo-Granados, F.; Lopez-Zavala, AA; Gallardo-Becerra, L.; Mendoza-Vargas, A.; Sánchez, F.; Vichido, R.; Brieba, LG; Viana, MT; Sotelo-Mundo, RR; Ochoa-Leyva, A. Microbiome udang putih Pasifik mendedahkan komposisi komuniti bakteria yang berbeza antara keadaan wabak Liar, Akuakultur dan AHPND/EMS. Sci. Rep. 2017, 7, 1–15. [CrossRef]
42. Façanha, FN; Oliveira-Neto, AR; Figueiredo-Silva, C.; Nunes, AJ Kesan ketumpatan stok udang dan tahap gred metionin diet terhadap prestasi pertumbuhan Litopenaeus vannamei yang diternak dalam sistem air hijau. Akuakultur 2016, 463, 16–21. [CrossRef]
43. Nunes, AJP; Sabry-Neto, H.; Masagounder, K. Protein kasar dalam diet makanan rendah ikan untuk juvana Litopenaeus vannamei boleh dikurangkan melalui suplemen asid amino penting yang seimbang. J. World Aquac. Soc. 2019, 50, 1093–1107. [CrossRef]
44. Llario, F.; Falco, S.; Sebastiá-Frasquet, M.-T.; Escrivá, J.; Rodilla, M.; Poersch, LH Peranan Bacillus amyloliquefaciens pada Litopenaeus vannamei Semasa Pematangan Sistem Bioflok. J. Mar. Sci. En. 2019, 7, 228. [CrossRef]
45. Llario, F.; Romano, LA; Rodilla, M.; Sebastiá-Frasquet, MT; Poersch, LH Aplikasi Bacillus amyloliquefaciens sebagai probiotik untuk Litopenaeus vannamei (Boone, 1931) yang ditanam dalam sistem bioflok. Iran. J. Ikan. Sci. 2020, 19, 904–920.
46. Gharib-Naseri, K.; Dorigam, JCDP; Doranalli, K.; Kheravii, S.; Swick, RA; Choct, M.; Wu, S.-B. Modulasi gen yang berkaitan dengan integriti usus, apoptosis, dan imuniti mendasari kesan berfaedah Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 dalam ayam pedaging yang diberi diet dengan tahap protein yang berbeza dalam model cabaran enteritis nekrotik. J. Anim. Sci. Bioteknol. 2020, 11, 104. [CrossRef]
47. Ajogwu, TMC; Ekwealor, CC; Mbah, AN; Madukwe, EJ; Ekwealor, IA Penyaringan Spesies Bacillus yang menghasilkan Metionin daripada Perasa Makanan Difermentasi Nigeria dan Kesan Beberapa Parameter Budaya terhadap Pengumpulan Metionin. Am. J. Nutr Makanan. 2020, 9, 16–22. [CrossRef]
48. Yu, M.-C.; Li, Z.-J.; Lin, H.-Z.; Wen, G.-L.; Ma, S. Kesan pemakanan Bacillus dan herba ubatan ke atas pertumbuhan, aktiviti enzim pencernaan, dan parameter biokimia serum udang Litopenaeus vannamei. Aquac. Int. 2008, 16, 471–480. [CrossRef]
49. Yılmaz, S.; Ergun, S.; Yigit, M.; Çelik, E. Kesan gabungan diet Bacillus subtilis dan asid trans-cinnamic pada tindak balas imun semula jadi dan rintangan trout pelangi, Oncorhynchus mykiss kepada Yersinia ruckeri. Aquac. Res. 2020, 51, 441–454. [CrossRef]
50. Zare, R.; Kenari, AA; Sadati, MY Pengaruh asid asetik diet, protein (probiotik), dan gabungannya terhadap prestasi pertumbuhan, mikrobiota usus, enzim pencernaan, parameter imunologi, dan komposisi asid lemak dalam sturgeon Siberia (Acipenser baerii, Brandt, 1869). Aquac. Int. 2021, 29, 891–910. [CrossRef]
51. Rodjan, P.; Soisuwan, K.; Thongprajukaew, K.; Theapparat, Y.; Khongthong, S.; Jeenkeawpieam, J.; Salaeharae, T. Kesan asid organik atau probiotik sahaja atau gabungan ke atas prestasi pertumbuhan, kebolehcernaan nutrien, aktiviti enzim, morfologi usus dan mikroflora usus dalam ayam pedaging. J. Anim. Fisiol. Anim. Nutr. 2018, 102, e931–e940. [CrossRef] [PubMed]
52. Hong, Y.; Chu, J.; Kirby, R.; Sheen, S.; Chien, A. Kesan menggantikan protein tepung ikan dengan campuran makanan sampingan ayam dan tepung kacang soya yang ditapai ke atas prestasi pertumbuhan dan komposisi pemakanan tisu siakap Asia (Lates calcarifer). Aquac. Res. 2021, 52, 4105–4115. [CrossRef]
53. Burri, L.; Berge, K.; Chumkam, S.; Jintasataporn, O. Kesan tahap kemasukan makanan yang berbeza bagi makanan krill pada pertumbuhan dan morfologi hepatopancreas Litopenaeus vannamei. Aquac. Res. 2020, 51, 4819–4823. [CrossRef]
54. Murashita, K.; Matsunari, H.; Fukada, H.; Suzuki, N.; Furuita, H.; Oku, H.; Rønnestad, I.; Yoshinaga, H.; Yamamoto, T. Kesan diet rendah ikan berasaskan tumbuhan pada fisiologi pencernaan dalam yellowtail Seriola quinqueradiata. Akuakultur 2019, 506, 168–180. [CrossRef]
55. Rahimnejad, S.; Yuan, X.; Wang, L.; Lu, K.; Lagu, K.; Zhang, C. Suplemen kitoligosaccharide dalam diet makanan rendah ikan untuk udang putih Pasifik (Litopenaeus vannamei): Kesan pada pertumbuhan, imuniti semula jadi, histologi usus dan ekspresi gen berkaitan imun. Kerang Ikan. Immunol. 2018, 80, 405–415. [CrossRef]
56. Peña-Rodríguez, A.; Pelletier-Morreeuw, Z.; García-Luján, J.; Rodríguez-Jaramillo, MDC; Guzmán-Villanueva, L.; Escobedo regoso, C.; Tovar-Ramírez, D.; Reyes, AG Penilaian ekstrak mentah produk Agave lechuguilla sebagai bahan tambahan makanan untuk udang juvanaLitopenaeus vannamei. Aquac. Res. 2019, 51, 1336–1345. [CrossRef]
57. Ray, GW; Liang, D.; Yang, Q.; Tan, B.; Dong, X.; Chi, S.; Liu, H.; Zhang, S.; Rimei, L. Kesan menggantikan tepung ikan dengan pekat protein kacang soya diet (SPC) pada pertumbuhan, indeks biokimia serum, dan fungsi antioksidan untuk udang juvana Litopenaeus vannamei. Akuakultur 2020, 516, 734630. [CrossRef]
58. Ambasankar, K.; Dayal, JS; Vasagam, KK; Sivaramakrishnan, T.; Sandeep, KP; Panigrahi, A.; Ananda Raja, R.; Burri, L.; Vijayan, KK Pertumbuhan, komposisi asid lemak, ekspresi gen berkaitan imun, histologi dan indeks hematologi Penaeus vannamei yang diberi makan tahap gred hidangan krill Antartika pada dua kepekatan tepung ikan yang berbeza. Akuakultur 2022, 553, 738069. [CrossRef]
59. Noor, Z.; Noor, M.; Khan, SA; Younas, W.; Ualiyeva, D.; Hassan, Z.; Yousafzai, AM Suplemen diet metionin meningkatkan prestasi pertumbuhan, imuniti semula jadi, enzim pencernaan, dan aktiviti antioksidan rohu (Labeo rohita). Fisiol Ikan. Biokim. 2021, 47, 451–464. [CrossRef]
60. Yun, H.; Shahkar, E.; Hamidoghli, A.; Lee, S.; Menang, S.; Bai, SC Penilaian makanan kacang soya sebagai pengganti makanan ikan untuk udang kaki putih juvana, Litopenaeus vannamei yang diternak dalam sistem bioflok. Int. Aquat. Res. 2017, 9, 11–24. [CrossRef]
61. Hu, X.; Yang, H.-L.; Yan, Y.-Y.; Zhang, C.-X.; Ye, J.-D.; Lu, K.-L.; Hu, L.-H.; Zhang, J.-J.; Ruan, L.; Matahari, Y.-Z. Kesan fructooligosaccharide pada pertumbuhan, imuniti, dan mikrobiota usus udang (Litopenaeus vannamei ) diet yang diberi makan dengan tepung ikan yang sebahagiannya digantikan dengan tepung kacang soya. Aquac. Nutr. 2019, 25, 194–204. [CrossRef]
62. Mamauag, REP; Gao, J.; Nguyen, BT; Ragaza, JA; Koshio, S.; Ishikawa, M.; Yokoyama, S. Suplemen dl-Methionine dan Methionine Dipeptide dalam Diet adalah Berkesan untuk Perkembangan dan Pertumbuhan Larva dan Juvana Red Sea Bream, Pagrus major. J. World Aquac. Soc. 2012, 43, 362–374. [CrossRef]
63. Wu, P.; Tang, L.; Jiang, W.; Hu, K.; Liu, Y.; Jiang, J.; Kuang, S.; Tang, W.; Zhang, Y.; Zhou, X.; et al. Hubungan antara diet metionin dan pertumbuhan, pencernaan, penyerapan, dan status antioksidan dalam tisu usus dan hepatopankreatik ikan mas rumput dewasa (Ctenopharyngodon idella). J. Anim. Sci. Bioteknol. 2017, 8, 1–14. [CrossRef]
64. Encarnação, P. Bahan Tambahan Makanan Berfungsi dalam Suapan Akuakultur. Dalam Formulasi Aquafeed; Akhbar Akademik: Cambridge, MA, Amerika Syarikat, 2016; ms 217–237. [CrossRef]
65. Xie, S.; Wei, D.; Yin, P.; Zheng, L.; Guo, T.; Liu, Y.; Tian, L.; Niu, J. Penggantian pemakanan sintesis protein terjejas makanan ikan dan tindak balas imun udang putih Pasifik juvana, Litopenaeus vannamei pada kemasinan rendah. Komp. Biokim. Fisiol. Bahagian B Biokim. Mol. biol. 2018, 228, 26–33. [CrossRef]
66. Ayiku, S.; Shen, J.; Tan, B.-P.; Dong, X.-H.; Liu, H.-Y. Kesan mengurangkan makanan ikan dengan suplemen yis pada pertumbuhan Litopenaeus vannamei, tindak balas imun dan rintangan penyakit terhadap Vibrio harveyi. mikrobiol. Res. 2020, 239, 126554. [CrossRef]
