Polisakarida Cistanche Menghalang Pembiakan Sel Kanser Prostat Dan Menghasilkan Apoptosis Melalui Penjanaan ROS Dan Penindasan Gen Antioksidan
Jun 10, 2025
Abstrak:
Objektif:Untuk menyiasat kesan dan mekanisme asas bagiPolisakarida cistanchemengenai percambahan dan apoptosissel kanser prostat.
Kaedah:
Kanser prostat manusia sel DU145 telah dirawat dengan kepekatan rendah, sederhana dan tinggiPolisakarida cistanche(20, 40, dan 80 mg/mL, masing-masing). Proliferasi sel dinilai menggunakanujian MTT, dan apoptosis dinilai olehsitometri aliran. Intraselularspesies oksigen reaktif (ROS)tahap diukur melalui sitometri aliran, manakalaglutation (GSH)tahap ditentukan menggunakanELISA. Tahap ekspresi mRNA dan protein bagisubunit pemangkin ligase glutamat-cysteine (GCLC), subunit pengubah suai ligase glutamat-cysteine (GCLM), danthioredoxin reductase 1 (TXNRD1)telah dianalisis olehRT-PCRdantompok barat, masing-masing.
Keputusan:
Kepekatan perencatan separuh maksimum (IC₅₀) daripadaPolisakarida cistanchepada sel DU145 ialah 40.35 mg/mL, oleh itu 40 mg/mL dipilih sebagai dos sederhana untuk eksperimen seterusnya. Dos rendah, sederhana dan tinggi ditakrifkan sebagai 50%, 100%, dan 200% daripada IC₅₀, masing-masing.
Semua kumpulan rawatan menunjukkan kadar apoptosis yang meningkat dengan ketara berbanding kumpulan kawalan. Thekumpulan Cistanche dos tinggimempamerkan perencatan terbesar percambahan sel dan kadar apoptosis tertinggi, diikuti oleh kumpulan dos sederhana dan rendah (P< 0.01). Tahap ROS meningkat dengan ketara, dan tahap GSH berkurangan dengan ketara dalam semuaKumpulan yang dirawat dengan cistancheberbanding kawalan. Terutamanya,kumpulan dos tinggimempunyai ROS yang lebih tinggi dan paras GSH yang lebih rendah daripada kumpulan dos sederhana dan rendah (P< 0.05); kumpulan dos sederhana menunjukkan perbezaan yang sama berbanding kumpulan dos rendah (P< 0.05).
Tahap ekspresiGCLC, GCLM, danTXNRD1(kedua-dua mRNA dan protein) telah dikurangkan dengan ketara dalam semua kumpulan yang dirawat Cistanche berbanding kawalan (P< 0.05). Thekumpulan dos tinggimenunjukkan penindasan paling ketara terhadap gen dan protein yang berkaitan dengan antioksidan ini, diikuti oleh kumpulan dos sederhana dan rendah (P< 0.05).
Kesimpulan:
Polisakarida cistanchemenghalang ekspresi faktor antioksidanGCLC, GCLM, danTXNRD1, dengan itu mengurangkansintesis GSH, mempromosikanPengumpulan ROS, dan akhirnya mendorongapoptosis dalam sel kanser prostat. Penemuan ini mencadangkan bahawaCistancheboleh berfungsi sebagai aagen terapeutik semulajadiuntuk kanser prostat melaluimekanisme pengantara tekanan oksidatif.
Ekstrak Cistanche polisakarida tinggi
Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-The Hubungi Kami Untuk Mendapatkan Harga Borong
E-mel:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Latar Belakang dan Kaedah
Kanser prostatmenyumbang kira-kira7.1% daripada semua keganasan lelaki, dengan kejadian puncak berlaku selepas umur 60 tahun. Apabila penduduk China terus meningkat usia, kejadian penyakit ini dijangka meningkat lagi [1]. Kajian menunjukkan bahawa prevalens tinggi kanser prostat pada lelaki yang lebih tua mungkin berkaitan denganperubahan degeneratif dalam prostat, kecenderungan genetik, tabiat pemakanan, danfaktor gaya hidup [2].
Reseksi pembedahankekal sebagai asas dalam rawatan kanser prostat, bertujuan untuk membuang sebahagian besar jisim tumor. Walau bagaimanapun, ia dikaitkan dengan komplikasi yang ketara, sepertiinkontinensia kencing, disfungsi seksual, dan yang paling kritikal,tumor berulang dan metastasis, yang merupakan punca utama prognosis yang buruk [3].
Dalam beberapa tahun kebelakangan ini,Perubatan Tradisional Cina (TCM)telah mendapat perhatian yang semakin meningkat kerana peranannya dalam terapi kanser. TCM boleh membantumeningkatkan imuniti, mengatasi kesan sampingan kemoterapi/radioterapi, danmeningkatkan detoksifikasi. Sesetengah herba perubatan juga dipamerkansifat antitumor langsung, termasuk perencatan pertumbuhan tumor daninduksi apoptosis dalam sel kanser [4].
Antaranya,Cistanche (Cistanche deserticola)adalah herba tonik tradisional yang terkenal dengannyaimunomodulator, antioksida, dankesan antitumor. Komponen bioaktif utamanya ialahpolisakaridadanglikosida fenilethanoid. Kajian ini menyiasat kesan dan mekanisme asasPolisakarida cistanchepadapercambahan dan apoptosis sel DU145 kanser prostat.
1. Bahan dan Kaedah
1.1 Bahan Utama dan Reagen
DU145 sel kanser prostat manusiadiperoleh daripada Tongpai Biotech (Shanghai, China).
Polisakarida cistanche(No Batch: 0287181) telah dibeli daripada Weikeqi Bio Co., Ltd. (Sichuan, China).
Serum lembu janin, penisilin/streptomisin, danDMEMtelah disediakan oleh Zeta Life (AS).
ujian MTT, Kit apoptosis Annexin V/PI, Penampan lisis RIPA, Kit kuantiti protein BCAdiperoleh daripada Elabscience (Shanghai, China).
Kit pengesanan spesies oksigen reaktif (ROS).danKit GSH ELISAtelah dibeli daripada BioLab (Shanghai, China).
Reagen Trizol, kit transkripsi terbalik, danKit PCRdiperoleh daripada NeuroSym (Hangzhou, China).
Antibodi terhadapGCLC, GCLM, TXNRD1, -aktin, dan antibodi sekunder yang sepadan telah dibeli daripada UnivBio (Shanghai, China).
1.2 Kultur Sel dan Ujian Proliferasi
Sel DU145 telah dibiakkan dalamDMEM ditambah dengan 10% FBS dan 1% penisilin/streptomisindalam inkubator CO₂. Untukujian MTT, sel DU145 fasa logaritma telah disemai ke dalam plat 96-telaga dan dirawat denganLarutan polisakarida cistanchepada kepekatan10, 20, 40, dan 80 mg/mL. Kumpulan kawalan hanya menerima medium DMEM.
Selepas 24 jam rawatan,20 µL daripada 5 mg/mL MTTdimasukkan ke dalam setiap perigi dan diinkubasi selama 4 jam. Supernatan dikeluarkan, dan150 µL DMSOtelah ditambah. Selepas digoncang selama 10 minit, penyerapan diukur pada490 nmmenggunakan pembaca plat mikro. TheIC₅₀telah dikira, dan20, 40, dan 80 mg/mLtelah dipilih sebagaidos rendah, sederhana dan tinggiuntuk eksperimen seterusnya. Thekadar perencatan pembiakan seldikira sebagai:
Kadar perencatan (%)=(OD_control - OD_treated) / OD_control × 100
1.3 Ujian Apoptosis
Sel DU145 fasa log telah dirawat dengan kepekatan yang berbezaPolisakarida cistanchemengikut kumpulan. Selepas penetapan dan pewarnaan,Annexin V-FITCdanPIdigunakan untuk melabel sel apoptosis.Sitometri alirantelah dilakukan untuk mengesan isyarat pendarfluor, dan peratusan sel apoptosis telah direkodkan.
1.4 Pengesanan Tahap ROS dan GSH Intraselular
Tahap ROS diukur menggunakan aSiasatan pendarfluor ROSdan sitometri aliran. Tahap GSH dikira menggunakanELISA. Lengkung piawai disediakan menggunakan kepekatan piawaian GSH yang diketahui, dan penyerapan diukur untuk mengira kepekatan GSH dalam sampel.
1.5 RT-PCR untuk Ungkapan mRNA GCLC, GCLM, TXNRD1
Jumlah RNA diekstrak menggunakanTrizol, dan cDNA telah disintesis. PCR dilakukan menggunakan primer khusus:
GCLC:
Hadapan: 5'-GTCGGTGTCAAAATACGGAGTTCCA-3'
Terbalik: 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3'
GCLM:
Hadapan: 5'-CCGATGACGCCATAAACGTCCGTAGC-3'
Terbalik: 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'
TXNRD1:
Hadapan: 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3'
Terbalik: 5'-ATAATGCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'
-aktin (kawalan dalaman):
Hadapan: 5'-TTAGGCCGATGCAGTCAGATAAGC-3'
Terbalik: 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGGATAG-3'
Keadaan penguatan: 95 darjah selama 60 saat, diikuti oleh 30 kitaran 95 darjah selama 30 saat, 60 darjah selama 30 saat, dan 72 darjah selama 60 saat. Produk PCR dianalisis olehelektroforesis gel, dan ekspresi gen relatif telah dinormalisasi kepada-aktin.
1.6 Western Blotting untuk Ekspresi Protein
Jumlah protein diekstrak menggunakanPenampan RIPA, dan kepekatan protein ditentukan olehujian BCA. Protein dipisahkan olehSDS-PAGE, dipindahkan keMembran PVDF, disekat, dan diinkubasi semalaman pada 4 darjah dengan antibodi primer terhadapGCLC, GCLM, TXNRD1, dan-aktin. Selepas pengeraman denganAntibodi sekunder terkonjugasi HRP, band telah divisualisasikan menggunakanchemiluminescencedan dikira olehPerisian ImageJ.
1.7 Analisis Statistik
Semua data dianalisis menggunakanSPSS 25.0. ANOVA sehala danUjian LSD-tdigunakan untuk menentukan kepentingan statistik.
