Ekstrak Cistanche Deserticola Meningkatkan Pembentukan Tulang di Osteoblasts
Mar 05, 2022
Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com
Te-Mao Lia, Hsin-Chih Huangb, Chen-Ming Suc, Tin-Yun Hoa, Chi-Ming Wua, Wen-Chi Chend,Yi-Chin Fonga,edan Chih-Hsin Tangf,c
Abstrak
Objektif:Kami menyiasat kesanCistanche deserticola Ma. (CD) pada pembentukan tulang oleh osteoblasts berbudaya.KaedahUjian pembentukan nodule mineral digunakan untuk mengkaji kesan in-vitro CD pada pembentukan tulang. Alkali phosphatase (ALP), protein morfogenetik tulang (BMP)-2, dan osteopontin (OPN) ungkapan mRNA dianalisis oleh tindak balas rantaian polimerase masa nyata kuantitatif. Mekanisme tindakan ekstrak CD telah disiasat menggunakan blotting Barat. Kesan anti-osteoporotik in-vivo ekstrak CD dinilai dalam tikus ovariektom.Penemuan utamaEkstrak CD tidak mempunyai kesan ke atas percambahan, penghijrahan atau penyembuhan luka osteoblas kultur, tetapi meningkatkan ALP, BMP-2, dan OPN mRNA dan mineralisasi tulang. Kekusutan protein yang diaktifkan mitogen (MAPK) atau perencat faktor nuklear (NF)-kB mengurangkan pembentukan tulang yang disebabkan oleh ekstrak CD dan ALP, BMP-2, dan ekspresi OPN. Walau bagaimanapun, ekstrak CD tidak menjejaskan osteoclastogenesis. Di samping itu, ekstrak CD menghalang kehilangan tulang yang disebabkan oleh ovariektomi dalam vivo.KesimpulanCD boleh menjadi agen pembentukan tulang baru untuk rawatan osteoporosis.
Pengenalan
Tulang adalah tisu kompleks yang terdiri daripada beberapa jenis sel yang menjalani proses pembaharuan dan pembaikan berterusan yang disebut 'pembentukan semula tulang'. Dua jenis sel utama yang bertanggung jawab untuk pembentukan ulang tulang adalah osteoclasts, yang menyerap tulang, dan osteoblas, yang membentuk tulang baru. Pembentukan semula tulang dikawal oleh beberapa hormon sistemik (contohnya hormon paratiroid, 1, 25-hydroxyvitamin D3, hormon seks, dan calcitonin) dan faktor tempatan (contohnya nitrik oksida, prostaglandin, faktor pertumbuhan, dan sitokin). [1]
Osteoporosis terhasil apabila penyerapan dan pembentukan tulang tidak diselaraskan dan kerosakan tulang yang berlebihan melebihi pembinaan tulang. [2] Rawatan semasa untuk osteoporosis termasuk bisphosphonate, calcitonin, dan estrogen, yang merupakan perencat penyerapan tulang yang mengekalkan jisim tulang dengan menghalang aktiviti osteoclast. [3] Walau bagaimanapun, kesan ubat-ubatan ini dalam meningkatkan atau memulihkan jisim tulang agak kecil, pastinya tidak lebih daripada 2% setahun. [3] Oleh itu, terdapat keperluan untuk agen pembinaan tulang, seperti teriparatide, yang merangsang pembentukan tulang baru dan membetulkan perubahan dalam mikroarkistur trabecular yang merupakan ciri osteoporosis yang ditubuhkan. [4,5] Kerana pembentukan tulang baru adalah terutamanya fungsi osteoblast, agen yang bertindak dengan sama ada meningkatkan percambahan sel-sel keturunan osteoblastik atau mendorong pembezaan osteoblastik boleh meningkatkan pembentukan tulang. [5,6]
Walaupun mekanisme osteoporosis masih tidak jelas, ia mungkin berkaitan dengan penurunan ketersediaan atau kesan faktor pertumbuhan tulang, seperti protein morfogenetik tulang (BMP). [7] BCP, yang secara struktur berkaitan dengan faktor pertumbuhan trans-b superfamily, pada asalnya dikenal pasti oleh keupayaan mereka untuk mendorong pembentukan tulang ektopik pada tikus. [8] BPP memainkan peranan penting dalam pembentukan tulang dan pembezaan sel tulang dengan merangsang aktiviti phosphatase alkali (ALP) serta sintesis proteoglycan, kolagen, dan osteopontin (OPN). [9] Satu kajian baru-baru ini mendapati hubungan antara osteoporosis dan polimorfisme tertentu dalam gen BMP-2, ALP, dan OPN, menunjukkan bahawa ia dikaitkan dengan perkembangan osteoporosis. [10]
Cistanche deserticola Ma.(Orobanchaceae; disingkatkan sebagai CD) adalah herba asli di China dan digunakan secara meluas dalam perubatan tradisional sebagai agen terapeutik kerana sifat sedatif, analgesik, dan imunostimulatorinya. [11] Kajian logik farmakco moden telah menunjukkan bahawa ekstrak CD boleh merangsang imuniti,[12] radikal bebas scavenge[13], dan meningkatkan aktiviti dismutase superoksida. [14] Ejen anti-radang dan anti-oksida berpotensi untuk merawat osteoporosis dengan meningkatkan pembentukan tulang dan / atau menekan penyerapan tulang. [15,16] Walau bagaimanapun, kesan CD pada fungsi sel tulang belum ditentukan. Di sini, kami melaporkan bahawa ekstrak CD tidak menjejaskan percambahan, penghijrahan, atau aktiviti penyembuhan luka osteoblas kultur, tetapi meningkatkan ALP, BMP-2, dan ekspresi OPN dan mineralisasi tulang. Di samping itu, kami menunjukkan bahawa kinase protein yang diaktifkan mitogen (MAPK) dan laluan isyarat faktor nuklear (NF)-kB mungkin terlibat dalam peningkatan CD-mediated dalam ekspresi gen dan mineralisasi tulang. Sebaliknya, ekstrak CD tidak menekan osteoclastogenesis in vitro. Terutama, rawatan tikus dengan ekstrak CD menghalang kehilangan tulang yang disebabkan oleh ovariektomi dalam vivo. Oleh itu, data kami menunjukkan bahawa CD boleh digunakan untuk merangsang pembentukan tulang untuk rawatan osteoporosis.
Cistanche deserticola
Bahan dan Kaedah
Ekstrak dan bahan Deserticola Cistanche deserticola
Ekstrak CD dibeli dari Chuang Song-Zong Pharmaceutical Company (Kaohsiung, Taiwan). Pengekstrakan dan pengasingan CD diikuti seperti yang diterangkan sebelum ini (berdasarkan data spektral mereka telah mengenal pasti komposisi kimia termasuk beta-sitosterol, daucosterol, asid succinic, triacontanol, acteoside, betaine, dan polysaccharide). [17] Antibodi poliklonal arnab khusus untuk kinase yang dikawal isyarat p-extracellular (ERK), ERK, p-p38, p38, p-c-Jun N-terminal kinases (JNK), JNK, p-p65, dan p65 dibeli dari Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, Amerika Syarikat). Kit osteocalcin ELISA dibeli daripada Biosource Technology (Nivelles, Belgium). Telopeptida C-terminal kit ELISA kolagen jenis-I diperolehi daripada Cross Laps (Herlev, Denmark). Mutan dominan-negatif p38 disediakan oleh Dr. J. Han (Pusat Perubatan Selatan-Barat, Dallas, Amerika Syarikat). Mutan dominan-negatif JNK disediakan oleh Dr. M. Karin (Universiti California, San Diego, Amerika Syarikat). Mutan dominan-negatif ERK2 disediakan oleh Dr. M. Cobb (Pusat Perubatan Selatan-Barat). Semua reagen lain diperolehi dari Sigma-Aldrich (St Louis, Amerika Syarikat).
Budaya sel
Barisan sel osteoblast murine MC3T3-E1 dibeli daripada Koleksi Budaya Jenis Amerika (ATCC; Rockville, Amerika Syarikat). Sel-sel dikulturkan dalam 95% udara, 5% CO2 dengan a-MEM yang ditambah dengan 20 mm HEPES dan 10% serum betis janin yang tidak aktif haba, 2 mm-glutamine, penisilin (100 U / ml), dan streptomycin (100 mg / ml).
Pengukuran pembentukan nodule mineral
Pembentukan nodule mineral dinilai seperti yang diterangkan. [18] Secara ringkas, osteoblas dikulturkan dalam medium yang mengandungi vitamin C (50 mg / ml) dan b-gliserofosfat (10 mm) selama dua minggu, dan medium itu diubah setiap tiga hari. Selepas inkubasi dengan ekstrak CD selama 12 hari, sel-sel telah dibasuh dua kali dengan 20 mm Tris-buffered saline yang mengandungi
0.15 m NaCl (pH 7.4), dipasang dalam ais sejuk 75% (v / v) etanol selama 30 minit, dan kering udara. Pemendapan kalsium ditentukan menggunakan pewarnaan merah-S alizarin. Secara ringkas, sel dan matriks etanol-tetap telah diwarnakan selama 1 jam dengan 40 mm alizarin merah-S (pH 4.2) dan dibilas secara meluas dengan air. Noda terikat telah dicairkan dengan 10% (w/v) cetylpyridinium klorida, dan alizarin merah-S dalam sampel telah diukur dengan mengukur penyerapan pada 550 nm dan berbanding dengan lengkung standard. Satu tahi lalat alizarin merah-S selektif mengikat kira-kira dua tahi lalat kalsium.
Reaksi rantaian polimerase masa nyata kuantitatif
Jumlah RNA diekstrak dari osteoblasts menggunakan kit TRIzol (MDBio Inc., Taipei, Taiwan). Transkripsi terbalik dilakukan menggunakan 2 mg jumlah RNA dan oligo(dT) primer. [19,20] Reaksi rantaian polimerase masa nyata kuantitatif (qPCR) telah dijalankan menggunakan Campuran Induk PCR satu langkah TaqMan® (Biosistem Gunaan, Carlsbad, Amerika Syarikat). Jumlah cDNA telah ditambah (100 ng setiap tindak balas 25-ml) dengan primer khusus urutan dan probe Taqman®. Semua primer dan probe gen sasaran dibeli secara komersial, termasuk b-actin sebagai kawalan dalaman (Biosistem Gunaan). Ujian qPCR telah dijalankan dalam tiga kali ganda pada sistem pengesanan jujukan Ste- pOnePlus (Biosistem Gunaan). Keadaan berbasikal adalah pengaktifan polimerase 10 minit pada 95 ° C diikuti dengan 40 kitaran 95 ° C untuk 15 s dan 60 ° C untuk 60 s. Ambang telah ditetapkan di atas latar belakang kawalan bukan-templat dan dalam fasa linear penguatan gen sasaran untuk mengira nombor kitaran di mana transkrip dikesan (ditandakan CT).
Analisis blot Barat
Lysates sel telah disediakan seperti yang diterangkan sebelum ini. [21,22] Protein diselesaikan oleh SDS-PAGE dan dipindahkan ke membran immobilon polyvinyl difluoride (Millipore, Billerica, Amerika Syarikat). Blots disekat dengan albumin serum lembu 4% untuk 1 h pada suhu bilik dan kemudian disiasat dengan antibodi anti-manusia arnab terhadap p-65, atau p-p65 (1: 1000) untuk 1 h pada suhu bilik. Selepas tiga cucian, blots telah diinkubasi dengan antibodi sekunder anti-arnab keldai peroxidase (1: 1000) selama 1 jam pada suhu bilik. Blots digambarkan oleh chemiluminescence yang dipertingkatkan menggunakan filem X-OMAT LS (Eastman Kodak, Rochester, Amerika Syarikat).
Osteoporosis yang disebabkan oleh ovariektomi
Tikus ICR betina, empat minggu, 22 ~ 28 g, digunakan untuk kajian ini. Tikus telah ovariectomized dua hala di bawah trichloro- asetaldehid (100 mg/kg) anestesia dan tikus kawalan adalah sham-operated (Sham) untuk perbandingan. Ketumpatan mineral tulang dan kandungan mineral tulang diukur selepas pentadbiran lisan pelbagai kepekatan ekstrak CD setiap dua hari selama empat minggu. Jumlah ketumpatan mineral tulang badan dan kandungan mineral tulang ditentukan oleh penyerapan X-ray dwi-tenaga (DEXA; XR-26; Norland, Fort Atkinson, Amerika Syarikat) menggunakan mod untuk subjek kecil seperti yang diterangkan sebelum ini. [18,23] Semua protokol mematuhi garis panduan institusi dan diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan Haiwan Universiti Perubatan China.
Analisis statistik
Analisis statistik dilakukan menggunakan Prism 4.01soft- ware. (GraphPad Software Inc., San Diego, Amerika Syarikat). Nilai yang diberikan adalah min ± SEM. Analisis statistik antara dua sampel telah dilakukan menggunakan t-test Pelajar. Perbandingan statistik lebih daripada dua kumpulan dilakukan menggunakan analisis sehala varians dengan ujian posthoc Bonfer- Roni. Dalam semua kes, P< 0.05="" was="" considered="">
Ekstrak deserticola Cistanche
Keputusan
Ekstrak deserticola Cistanche meningkatkan mineralisasi tulang oleh osteoblasts
Penambahan ekstrak CD untuk 24 atau 48 h tidak menjejaskan percambahan sel osteoblast tetikus MC3T3-E1 dalam ujian MTT (data tidak ditunjukkan). Oleh kerana pembezaan osteoblast adalah proses yang kompleks yang melibatkan percambahan sel dan penghijrahan, kami juga menguji keupayaan migrasi sel MC3T3-E1 selepas rawatan dengan ekstrak CD. Menggunakan Ujian penyembuhan Transwell dan luka, kami mendapati bahawa ekstrak CD tidak menjejaskan penghijrahan osteoblast (data tidak ditunjukkan). Pembentukan nodul mineral adalah salah satu penanda kematangan osteoblast. Pewarnaan merah Alizarin menunjukkan bahawa nodul mineral terbentuk apabila osteoblas dikulturkan selama dua minggu dalam medium yang mengandungi vitamin C (50 mg/ml) dan b-gliserofosfat (10 mm), dan ini meningkat dengan cara yang bergantung kepada kepekatan dengan penambahan CD (Rajah 1a). Oleh itu, ekstrak CD menyebabkan pembentukan nodule tulang oleh osteoblasts berbudaya, tetapi bukan percambahan atau penghijrahan mereka. Kami juga mengkaji peranan ekstrak CD dalam osteoclastogenesis yang disebabkan oleh RANKL tetapi tidak menemui kesan (data tidak ditunjukkan).
Ekstrak deserticola Cistanche meningkatkan alkali phosphatase, protein morfogenetik tulang-2, dan ekspresi osteopontin dalam osteoblasts berbudaya
Osteoblas yang berbeza mempamerkan aktiviti ALP yang tinggi, yang berkorelasi dengan tahap ekspresi enzim yang tinggi. [18] Kami mendapati bahawa rawatan dengan ekstrak CD untuk 72 h dengan ketara meningkatkan aktiviti ALP osteoblast (Rajah 1b). Memandangkan peranan penting BMP-2, ALP, dan OPN dalam pembezaan osteoblast, kami menguji sama ada ekstrak CD memberikan kesannya pada pembezaan osteoblast dengan mengawal selia ungkapan BMP-2, ALP, dan OPN. Rawatan sel dengan ekstrak CD meningkatkan ekspresi mRNA ALP, BMP-2, dan OPN dengan cara yang bergantung kepada kepekatan (Rajah 1c), menunjukkan bahawa ekstrak CD menyebabkan pembezaan osteoblas dengan mengawal selia ALP, BMP-2, dan ungkapan OPN.
Ekstrak deserticola Cistanche meningkatkan pembentukan nodule tulang melalui laluan kinase protein yang diaktifkan mitogen
Telah dilaporkan bahawa MAPK memainkan peranan penting dalam pembentukan tulang[24,25] jadi kami seterusnya mengkaji sama ada laluan isyarat ini terlibat dalam mineralisasi tulang yang disebabkan oleh ekstrak CD. Pretreatment sel dengan perencat ERK U0126, perencat p38 SB203580, atau perencat JNK SP600125 mengurangkan mineralisasi tulang yang meningkat ekstrak CD (Rajah 2a, 3a, dan 4a). Tambahan pula, perencat juga menyekat ALP, BMP-2, dan ekspresi OPN yang disebabkan oleh ekstrak CD (Rajah 2b-4c). Transfeksi sel dengan ERK2, p38, atau Mutan JNK mengurangkan peningkatan ekstrak CD dalam ALP, BMP-2, dan ekspresi mRNA OPN (Rajah 2c, 3c, dan 4c). Seterusnya, kami secara langsung memeriksa pengaktifan ERK, p38, dan JNK selepas rawatan ekstrak CD. Inkubasi sel dengan ekstrak CD menyebabkan ERK, p38, dan JNK fosforilation (Rajah 2d, 3d, dan 4d). Oleh itu, ERK, p38, dan JNK menjadi pengantara pembentukan tulang yang meningkat yang disebabkan oleh rawatan CD osteoblas.
Ekstrak deserticola Cistanche meningkatkan pembentukan nodule tulang melalui laluan faktor nuklear-kB
Seperti yang dinyatakan sebelum ini, pengaktifan NF-kB diperlukan untuk pembentukan tulang. [26,27] Kami seterusnya merawat osteoblasts dengan perencat NF-kB pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) dan N-tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK) dibeli dari Calbiochem (Darmstadt, Jerman) untuk menentukan sama ada pengaktifan NF-kB terlibat dalam mineralisasi tulang yang disebabkan oleh ekstrak CD. Rajah 5a menunjukkan bahawa pretreatment osteoblasts dengan PDTC atau TPCK menghalang pembentukan nodule tulang yang disebabkan oleh ekstrak CD dan juga mengurangkan peningkatan dalam ungkapan ALP, BMP-2 dan OPN (Rajah 5b dan 5c). Phosphorylation subunit NF-kB p65 adalah penunjuk pengaktifan NF-kB; [28] konsisten dengan ini, kami mendapati bahawa ekstrak CD meningkatkan p65 fosforilation dalam osteoblasts (Rajah 5d). Keputusan ini menunjukkan bahawa pengaktifan NF-kB adalah penting untuk ALP, BMP-2, dan ekspresi OPN dan pembentukan nodule tulang yang disebabkan oleh ekstrak CD.
Larangan kehilangan tulang oleh ekstrak deserticola Cistanche dalam tikus ovariektomized
Untuk mengkaji kesan ekstrak CD pada kehilangan tulang, osteoporosis disebabkan oleh tikus betina oleh ovariektomi. Seperti yang dijangkakan, tikus ovariektomized dipaparkan mengurangkan jumlah ketumpatan mineral tulang badan dan kandungan mineral tulang (Rajah 6a dan 6b). Rawatan dengan ekstrak CD selama empat minggu menghalang kehilangan ketumpatan mineral tulang dan kandungan mineral tulang dengan cara yang bergantung kepada dos (Rajah 6a dan 6b). Kepekatan darah ALP boleh mencerminkan aktiviti osteoblastik. [29] Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 6c, ekstrak CD menghalang penurunan aktiviti serum ALP yang disebabkan oleh ovariektomi. Di samping itu, ekstrak CD juga meningkatkan tahap osteocalcin, penanda pembentukan tulang, dan mengurangkan tahap telopeptida C-terminal kolagen jenis-I, penanda penyerapan tulang (Rajah 6d dan 6e). Penemuan ini sekali gus menyokong potensi dan keberkesanan ekstrak CD dalam mencegah kehilangan tulang dalam vivo.
Perbincangan
Cistanche deserticolaMa, herba asli di China, digunakan secara meluas dalam perubatan tradisional untuk pelbagai rawatan terapeutik kerana aktiviti sedatif, analgesik, dan imunostimulasinya. [11–15] Di sini, kami menunjukkan bahawa ekstrak CD menyebabkan mineralisasi tulang dalam osteoblasts kultur, tetapi tidak menjejaskan penghijrahan sel atau percambahan mereka. Di samping itu, kami mendapati bahawa ALP, BMP-2, dan OPN adalah protein sasaran isyarat yang disebabkan oleh ekstrak CD, yang memerlukan pengaktifan ERK, p38, JNK, dan NF-kB.
Tulang adalah tisu kompleks yang terdiri daripada beberapa jenis sel yang terus menjalani proses pembaharuan dan pembaikan. [30] Apabila penyerapan dan pembentukan tulang tidak seimbang, kerosakan tulang mengatasi pembentukan tulang dan hasil osteoporosis. [30] Kami menggunakan tikus ovariektom untuk memeriksa kesan anti-osteoporotik ekstrak CD. Tikus yang ovariektomized telah mengurangkan jumlah ketumpatan mineral tulang badan dan kandungan mineral tulang, yang dikurangkan dengan rawatan dengan ekstrak CD. Ekstrak CD juga meningkatkan tahap serum penanda osteogenik ALP dan osteocalcin. Oleh itu, CD adalah agen pembentukan tulang yang menghalang kehilangan tulang yang disebabkan oleh ovariektomi dalam vivo.
Walaupun mekanisme osteoporosis tidak sepenuhnya jelas, ia mungkin berkaitan dengan penurunan ketersediaan, atau penurunan kesan, faktor pertumbuhan tulang, seperti ALP, BMP-2 dan OPN. Ketiga-tiga faktor ini memainkan peranan penting dalam proses pembentukan dan pembentukan semula tulang,[31] dan telah didokumenkan dengan baik bahawa rangsangan pembezaan sel osteoblast dicirikan terutamanya oleh peningkatan ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN. [32] Dalam kajian ini, kami mendapati bahawa ekstrak CD meningkatkan ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN dan mineralisasi tulang yang dipertingkatkan. Oleh itu, ekstrak CD menjadi pengantara pembentukan tulang sebahagiannya dengan mengawal selia ungkapan ALP, BMP-2, dan OPN.
Telah dilaporkan bahawa p38 terlibat dalam peraturan ungkapan ALP semasa pembezaan sel osteoblastik; [33] begitu juga, ERK1/2 adalah penting untuk percambahan dan pembezaan osteoblas. [34,35] JNK terlibat dalam pembentukan osteoclast. [36] Kami menunjukkan di sini bahawa ekstrak CD menyebabkan ERK, p38 dan JNK fosforilation, dan perencat enzim ini menentang kekuatan CD yang dimediasi oleh mineralisasi tulang, menunjukkan bahawa pengaktifan ERK, p38 dan JNK memainkan peranan wajib dalam pembentukan tulang yang disebabkan oleh ekstrak CD oleh osteoblas. Di samping itu, perencat enzim dan mutan dominan-negatif ERK, p38 dan JNK mengurangkan ungkapan ALP, BMP-2 dan OPN yang dipertingkatkan ekstrak CD. Data ini menunjukkan bahawa pengaktifan laluan ERK, p38 dan JNK diperlukan untuk peningkatan ungkapan ALP, BMP-2 dan OPN dan pematangan yang disebabkan oleh ekstrak CD dalam osteoblasts. ERK telah dilaporkan untuk meningkatkan percambahan osteoblast dan pembezaan. [34,35] Walau bagaimanapun, kami tidak mengesan kesan ekstrak CD pada percambahan osteoblast. Oleh itu, laluan lain mungkin telah mengatasi kesan ERK selepas rangsangan ekstrak CD, atau diperlukan untuk percambahan. Dalam hal ini, kami mendapati bahawa perencat PI3K dan Akt juga mengurangkan mineralisasi tulang yang disebabkan oleh ekstrak CD dan ungkapan ALP, BMP-2 atau OPN mRNA (data tidak ditunjukkan). Oleh itu, laluan ini mungkin diperlukan untuk pembentukan tulang yang disebabkan oleh ekstrak CD.
NF-kB telah ditunjukkan untuk mengawal fungsi osteoblast dalam tulang. [37] Hasil kajian ini menunjukkan bahawa pengaktifan NF-kB menyumbang kepada mineralisasi tulang yang disebabkan oleh ekstrak CD dan ungkapan ALP, BMP-2 dan OPN dalam osteoblast berbudaya dan perencat laluan isyarat yang bergantung kepada NF-kB (PDTC dan TPCK) menghalang mineralisasi tulang yang disebabkan oleh ekstrak CD dan ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN. p65 adalah phosphorylated di Ser536 oleh pelbagai kinase dalam beberapa laluan isyarat, yang meningkatkan potensi transaktif p65. [38] Hasil kajian ini menunjukkan bahawa ekstrak CD meningkatkan fosforilasi p65. Diambil bersama, keputusan ini menunjukkan bahawa pengaktifan NF-kB diperlukan untuk pembentukan tulang yang disebabkan oleh ekstrak CD dalam osteoblas berbudaya. Kami juga mendapati bahawa perencat ERK, p38 dan JNK membalikkan aktiviti luciferase NF-kB yang disebabkan oleh ekstrak CD (data tidak ditunjukkan), konsisten dengan enzim ini menjadi pengantara huluan pengaktifan NF-kB yang disebabkan oleh ekstrak CD. Oleh itu, ekstrak CD mendorong pembentukan tulang melalui laluan ERK/p38/JNK/ dan NF-kB.
Kesimpulan
Kajian ini menunjukkan bahawa ekstrak CD mendorong pembezaan osteoblast dan kematangan tetapi bukan percambahan atau penghijrahan. Ekstrak CD juga meningkatkan ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN dan mineralisasi tulang. Kami menunjukkan bahawa laluan ERK, p38, JNK dan NF-kB terlibat dalam pembentukan tulang yang dimediasi ekstrak CD dan ekspresi ALP, BMP-2 dan OPN. Tambahan pula, ekstrak CD menghalang kehilangan tulang in-vivo yang disebabkan oleh ovariektomi. Oleh itu, CD mungkin bermanfaat dalam merangsang pembentukan tulang dalam rawatan penyakit osteoporotik.
