RNA Pekeliling CircDVL1 Menghalang Perkembangan Karsinoma Sel Renal Sel Jelas Melalui Paksi MiR-412-3p/PCDH7

Abstrak

Karsinoma sel renal sel jelas (ccRCC) ialah kanser buah pinggang primer dengan fenotip agresif yang tinggi dan prognosis yang sangat buruk. Bukti terkumpul menunjukkan bahawa RNA bulat (circRNAs) memainkan peranan penting dalam kejadian dan perkembangan pelbagai kanser manusia. Walau bagaimanapun, ungkapan, kepentingan klinikal, dan peranan pengawalseliaan circRNA dalam ccRCC masih tidak jelas. Di sini kami melaporkan bahawa circDVL1 dikurangkan dalam serum dan tisu pesakit ccRCC, dan berkorelasi negatif dengan ciri malignan ccRCC. Ekspresi berlebihan circDVL1 menghalang percambahan, mendorong penangkapan G1/S, mencetuskan apoptosis, dan mengurangkan penghijrahan dan pencerobohan dalam sel ccRCC yang berbeza secara in vitro. Sejajar dengan itu, overexpression circDVL1 menindas tumorigenisiti ccRCC dalam model xenograf tetikus. Dari segi mekanikal, circDVL1 berfungsi sebagai span untuk miR-412-3p onkogenik, dengan itu menghalang penindasan pengantaraan miR-412-3p terhadap protocadherin 7 (PCDH7) sasarannya dalam sel ccRCC. Secara kolektif, keputusan kami menunjukkan bahawa circDVL1 menggunakan fungsi penindasan tumor semasa perkembangan ccRCC melalui paksi circDVL1/miR-412-3p/PCDH7, dan mencadangkan bahawa circDVL1 boleh menjadi penanda diagnostik dan prognostik baharu serta sasaran terapeutik untuk ccRCC.

Kata kunci

circDVL1; Karsinoma sel buah pinggang; miR-412-3p; PCDH7; penanda bio

Klik di sini untuk mengetahui kebaikan Cistanche

pengenalan

Karsinoma sel renal (RCC) adalah karsinoma malignan yang sangat mematikan pada sistem urologi dan memberi kesan teruk kepada kesihatan manusia [1]. Insiden RCC telah meningkat dalam beberapa dekad kebelakangan ini, dengan 73,750 kes baru didiagnosis di Amerika Syarikat pada tahun 2020 [2, 3]. Clear cell RCC (ccRCC), subjenis RCC yang paling biasa dan agresif, menyumbang 70-75 peratus kes RCC [4]. Yang penting, lebih daripada 30 peratus pesakit ccRCC dikaitkan dengan metastasis pada diagnosis awal. Selain itu, walaupun pembedahan radikal adalah pilihan rawatan utama untuk ccRCC primer, masih sekitar 40 peratus pesakit mengalami kambuh dan metastasis dengan 5-kelangsungan hidup keseluruhan tahun kurang daripada 10 peratus [5, 6]. Dilema ini menekankan keperluan mendesak untuk meneroka mekanisme molekul yang mendasari pembangunan ccRCC, baik sebagai biomarker diagnostik dan prognostik dan sebagai sasaran terapeutik yang berpotensi.

RNA bulat (circulars) ialah RNA bukan pengekodan dengan struktur gelung tertutup rantai tunggal yang menjadikannya sangat stabil [7, 8]. Kajian terbaru telah menunjukkan bahawa circRNAs banyak terdapat dalam darah [9, 10], air liur [11], dan exosom [12], menunjukkan bahawa mereka boleh berfungsi sebagai biomarker diagnostik baru [13]. Memandangkan biopsi cecair kurang invasif daripada biopsi tisu tradisional [14], circRNA telah dianggap sebagai alat ramalan yang berharga untuk perubatan ketepatan [15-17]. Khususnya, beberapa circRNA, seperti cricNOX4, circEGLN3, dan circPRRC2A, boleh bertindak sebagai biomarker yang berpotensi untuk diagnosis dan/atau prognosis RCC, yang telah diringkaskan dalam kajian terbaru kami [18]. Di samping itu, penyelidikan semasa terutamanya menumpukan pada penggantian ekspresi circRNA dalam tisu ccRCC [19, 20], bagaimanapun, tahap mereka dalam biopsi cecair masih tidak diketahui, yang menghalang penerokaan biomarker yang berpotensi. Tambahan pula, walaupun beberapa circRNA, termasuk circHIAT1 [21], circ-AKT3 [22], dan cRAPGEF5 [23], telah ditunjukkan memainkan peranan penting dalam permulaan dan perkembangan ccRCC [18], penyiasatan sistematik circRNA yang terlibat dalam ccRCC pembangunan, serta mekanisme molekul asasnya, masih kurang.

Di sini, kami mula-mula menentukan ekspresi circRNA dalam sampel serum daripada pesakit ccRCC dan kawalan sihat menggunakan microarray circRNA. Secara ketara, kami mengenal pasti novel circRNA circDVL1 yang berkaitan dengan ccRCC (ID bangkai: hsa_circ_ 0009267), yang dikodkan dalam gen DVL1. CircDVL1 dikurangkan dengan ketara dalam serum daripada pesakit ccRCC, dan ekspresinya berkorelasi songsang dengan penggredan ccRCC Fuhrman, mencadangkan potensi sebagai biomarker. Selain itu, CircDVL1 berkurangan dalam tisu tumor ccRCC. Sejajar dengan itu, circDVL1 boleh menghalang percambahan, mendorong penangkapan kitaran sel, mencetuskan apoptosis, dan mengurangkan penghijrahan dan pencerobohan sel ccRCC. Secara mekanikal, circDVL1 berfungsi sebagai span miR-412-3p untuk mengawal selia ekspresi PCDH7. Secara kolektif, penemuan ini mengenal pasti circDVL1 sebagai penindas tumor untuk ccRCC dan mencadangkan potensinya sebagai biomarker diagnostik dan sasaran terapeutik.

suplemen cistanche

Bahan dan Kaedah

1. Spesimen klinikal

Kajian ini telah diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Hospital Gabungan Pertama Universiti Zhejiang (2021-104). Lapan belas sampel sepadan ccRCC dan tisu bukan tumor bersebelahan telah dikumpulkan daripada pesakit ccRCC. Spesimen telah disimpan dengan cepat dalam nitrogen cecair selepas pembedahan dan kemudian disimpan pada -80 darjah sehingga digunakan selanjutnya. Spesimen serum daripada 60 pesakit ccRCC dan 66 kawalan sihat telah dikumpulkan. Kemudian, sampel telah diproses menggunakan kaedah yang sesuai, dan serum yang diperolehi disimpan pada -80 darjah sehingga digunakan selanjutnya.

2. Garisan sel dan kultur sel

Semua talian sel telah dibeli daripada Koleksi Kebangsaan Budaya Sel Sahih (China). Sel 786-O dan Caki-1 dibiakkan dalam RPMI 1640 (HyClone), sel ACHN dibiakkan dalam MEM (HyClone) dan sel 293T dibiakkan dalam media DMEM (Gibco). Semua media kultur sel telah ditambah dengan 10 peratus serum lembu janin (Gibco) dan 1 peratus campuran penisilin dan streptomisin (Gibco). Kultur sel dikekalkan dalam inkubator lembap pada 37 darjah dan 5 peratus CO₂.

3. Analisis microarray CircRNA

Profil microarray CircRNA dalam sampel serum dilakukan menggunakan Arraystar manusia CircRNA Array V2 (Bioteknologi Modal, China). Perisian GeneSpring V13.0 (Agilent Technologies) telah digunakan untuk ringkasan data, penormalan dan kawalan kualiti microarray. CircRNA dengan ambang perubahan lipatan Lebih daripada atau sama dengan 2 dan Kurang daripada atau sama dengan -2 dan nilai P < 0.05 dianggap sebagai signifikan secara statistik. Analisis kelompok hierarki dilakukan menggunakan jarak Euclidean piawai dengan kaitan lengkap.

4. Penjujukan RNA (RNA-seq) dan analisis data

RNA-seq generasi seterusnya telah dijalankan seperti yang diperincikan sebelum ini [24, 25]. sel miR-412-3p dan kawalan 786-0 yang ditransfeksi mimik telah digunakan untuk penjujukan RNA. Pembinaan perpustakaan dan analisis bioinformatik bagi data mentah telah dijalankan oleh Novogene Co., Ltd. (Beijing, China). Data RNA-seq telah disimpan dalam Gene Expression Omnibus (GEO) di bawah nombor penyertaan GSE175492.

5. Pengekstrakan RNA dan RT-PCR kuantitatif masa nyata (RT-qPCR)

RT-qPCR telah dilakukan seperti yang diterangkan sebelum ini [26, 27]. Jumlah RNA telah diasingkan daripada serum, sel, dan tisu tumor menggunakan AG RNAex Pro Reagent (AG, Hunan, China). Untuk pengesanan circRNA, 1 ug jumlah RNA telah dicerna dengan RNase R (3 U/ug, Epicenter Technologies, Madison, USA, Cat#RNR07250) pada 37 darjah selama 10 minit, dan DNA pelengkap (cDNA) dijana menggunakan HiScript II 1st Kit Sintesis cDNA Strand (Vazyme). Tahap ekspresi CircRNA dan mRNA telah dinormalisasi kepada -actin. Untuk menentukan ekspresi miRNA, transkripsi terbalik telah dijalankan dengan kit Sintesis untaian Pertama miR-XTM miRNA (Takara Bio USA, CA, USA, Cat. #638313) dengan ekspresi U6 (Rnu6–1) sebagai kawalan endogen. Tahap ekspresi RNA relatif ditentukan dengan kaedah 2-ΔΔCt. Semua jujukan primer analisis qRT-PCR ditunjukkan dalam Jadual S2.

6. Pembinaan plasmid dan pemindahan yang stabil

Untuk membina vektor overexpression circDVL1 dan circDVL1-MUT, jujukan circDVL1 dan circDVL1 bermutasi telah diklonkan ke dalam vektor pcDNA 3.1( tambah ) Laccase 2 MCS Exon, yang dipesan daripada Addgene (#69893) [28]. Sel ACHN dan 786-O telah ditransfeksi dengan circRNA dan vektor kawalan negatif menggunakan Lipofectamine 3000 (Invitrogen, Carlsbad, CA). Selepas 48 jam, sel yang ditransfeksi secara stabil yang menyatakan circDVL1 telah dipilih dengan penambahan 800 ug/mL G418 kepada medium kultur.

7. Daya maju sel

Ujian daya maju sel ditentukan dengan kit CCK8 (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Jepun, Cat# CK04), seperti yang diterangkan sebelum ini [29]. 786-O dan sel-sel kawalan circDVL1 O dan ACHN telah disemai dalam 96-plat perigi. Larutan CCK8 (10 μL) telah ditambah pada masa yang dinyatakan dan diinkubasi pada 37 darjah selama 2 jam, dan penyerapan diukur menggunakan spektrofotometer.

Herba Cistanche

8. Pembentukan koloni

Ujian pembentukan koloni telah dijalankan seperti yang diterangkan sebelum ini [24]. ACHN (800 sel/telaga) dan 786-O sel (400 sel/telaga) telah dikultur selama 10 hari dan seterusnya difiksasi dengan 4 peratus paraformaldehid selama lebih kurang 30 minit, diikuti dengan pewarnaan dengan 0.1 peratus larutan kristal violet selama lebih kurang 15 minit. Klon yang mengandungi lebih daripada 50 sel dikira sebagai koloni tunggal.

9. Analisis kitaran sel

Sel telah disegerakkan dalam medium RPMI 1640 tanpa FBS semalaman dan bertukar kepada sederhana dengan 10 peratus FBS untuk 48 jam seterusnya. Sel-sel telah dibasuh, digantung semula dalam 70 peratus etanol dalam PBS dan disimpan pada -20 darjah semalaman. Seterusnya, sel telah diwarnai dengan larutan propidium iodide (PI) yang mengandungi RNase A untuk analisis kitaran sel.

10. Analisis apoptosis

Analisis apoptosis sel ACHN dan 786-O telah dijalankan dengan kit pengesanan apoptosis Annexin V-FITC/PI (Bioteknologi Biosea Beijing, China) mengikut arahan pengilang.

11. Penghijrahan sel dan ujian pencerobohan

In vitro, kapasiti penghijrahan sel dinilai menggunakan ruang transwell dengan membran polikarbonat liang 8 μm (Millipore, MA, Amerika Syarikat). Ujian pencerobohan sel dilakukan dengan ruang transwell yang disalut dengan 100 μL Matrigel (BD Biosciences, Amerika Syarikat). 786-Sel O (2×104) atau sel ACHN (4×104) digantung dalam 200 μL RPMI 1640 tanpa serum dan disemai ke dalam ruang transwell atas, dan kemudian 600 μL medium yang mengandungi 20 peratus FBS telah ditambah ke dalam ruang bawah. Kemudian, sel telah dibiakkan selama 24 jam untuk mengukur penghijrahan dan selama 48 jam untuk menilai pencerobohan. Sel-sel di ruang atas telah dikikis dengan berhati-hati, dan sel-sel di bahagian bawah telah ditetapkan dengan 4 peratus paraformaldehid dan diwarnai dengan kristal violet. Imej diperoleh dan sel dikira dengan mikroskop.

12. Western blot

Jumlah protein telah diekstrak, dikira dan diasingkan pada 10 peratus gel SDS-PAGE, dan kemudian dipindahkan ke membran polivinilidena difluorida (Millipore, MA, USA), yang diinkubasi dengan anti-gliseraldehid 3-fosfat dehidrogenase (GAPDH) primer (Proteinch, 60004-1-Ig), anti-PCDH7 (Abcam, ab139274) antibodi primer pada 4 darjah semalaman.

13. Pewarnaan imunofluoresensi

Sel-sel telah disemai ke atas slip penutup selama 24 jam dan difiksasi dengan 4 peratus paraformaldehid, telap dengan 0.2 peratus Triton X-100 selama 20 minit dan diinkubasi dengan 5 peratus albumin serum lembu. Seterusnya, sel telah diinkubasi dengan antibodi utama khusus untuk Ki67 (1:400, ab48027, Abcam) pada 4 darjah semalaman dan seterusnya diinkubasi dengan 488-kambing konjugasi anti-arnab IgG (1:150, D110088, Sangon ) pada 37 darjah selama 1 jam. Sel telah diwarnai dengan 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) dan imej diperoleh dengan mikroskop pendarfluor Leica (DM4000).

14. Pembentukan tumor in vivo dan pewarnaan Ki67

Tikus bogel BALB/c jantan berusia enam minggu (dibeli dari Shanghai SLAC) dibahagikan kepada 2 kumpulan (n=5 untuk setiap kumpulan). Tikus telah diinokulasi dengan lebih kurang 3×106 sel kawalan atau circDVL1 yang mengekspresikan sel ACHN secara berlebihan melalui suntikan subkutan. Saiz tumor diukur dengan caliper gelongsor setiap 3 hari, bermula hari ke-6 selepas suntikan. Isipadu tumor dikira sebagai panjang × lebar × tinggi / 2. Semua eksperimen telah dijalankan mengikut Garis Panduan Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Makmal (penerbitan NIH 80-23, disemak 1996) dan telah diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan Haiwan Universiti Zhejiang, Hangzhou, China.

Kapsul cistanche

15. Hibridisasi in situ (IKAN)

Siasatan circDVL1 double-digoxigenin (DIG)- lobak pedas peroksidase (HRP) (Exon Biotechnology, Guangzhou, China) telah disintesis. Kawalan dan sel ACHN yang mengekspresikan circDVL1 secara berlebihan telah dibiakkan pada slaid penutup dan diinkubasi dengan probe berlabel pada 37 darjah selama 24 jam. Selepas mencuci, slaid diinkubasi dalam antibodi sekunder anti-DIG pada 37 darjah selama 1 jam. Kaedah penguatan isyarat tyramine digunakan untuk mengesan isyarat circDVL1, dan sel telah diwarnai dengan DAPI. Untuk IKAN bersama, slaid penutup diinkubasi dengan DIGlabeled circDVL1 dan miR{13}}p berlabel biotin.

16. Ujian imunopresipitasi RNA (RIP).

Ujian RIP dilakukan dengan Kit Immunoprecipitation Protein Pengikat RNA Magna RIP™ (Millipore, MA, USA). 786-Sel O telah dilisiskan dalam penimbal lisis RIP lengkap dan kemudian diinkubasi dengan penimbal imunopresipitasi yang mengandungi manik magnet yang digabungkan dengan kompleks antibodi AGO2 (Abcam, MA, USA) atau IgG pada 4 darjah semalaman. Kemudian, RNA immunoprecipitated telah diuji oleh RT-qPCR.

17. Ujian wartawan dwi-luciferase

Jujukan CircDVL1, PPM1H-3'UTR dan PCDH7-3'UTR, yang mengandungi tapak pengikatan miR-412-3p termutasi dan jujukan bermutasi yang sepadan, telah disintesis dan kemudian disubklonkan ke dalam wartawan luciferase vektor psiCHECK-2 (Promega) untuk menghasilkan circDVL1-WT, circDVL1-Mut1, circDVL1-Mut2, PPM1H-3'UTR-WT, PCDH{ {14}}Vektor 'UTRWT, PCDH7-3'UTR-Mut1 dan PCDH7-3'UTR-Mut2. Urutan 3'UTR PPM1H dan PCDH7 yang berbeza mengandungi serpihan 500 bp yang mengandungi tapak pengikatan miR{25}}p yang berpotensi (diapit 250 bp). Aktiviti luciferase relatif dinilai dengan ujian wartawan dwi-luciferase (Promega, Amerika Syarikat). Semua ujian dijalankan dalam tiga replika bebas.

18. Analisis statistik

Analisis statistik telah dijalankan dengan GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Perbezaan antara kumpulan dinilai dengan ujian-t Pelajar atau analisis varians sehala (ANOVA). Perbezaan antara kumpulan dianggap signifikan secara statistik apabila nilai-P < 0.05.

Perbincangan

Pelbagai jenis biomarker ccRCC telah dicadangkan dan dinilai secara eksperimen, termasuk mRNA [32], miRNA [33], lncRNA [34], dan circRNA [35]. Walau bagaimanapun, tiada satu pun daripada mereka telah disahkan sebagai biomarker diagnostik yang tepat untuk kegunaan klinikal rutin dalam pesakit ccRCC. Di sini, kajian kami menggambarkan bahawa circDVL1 memainkan peranan penting dalam perkembangan ccRCC. Pertama, kami menyaring serum daripada pesakit ccRCC dan kawalan sihat untuk mengenal pasti circRNA yang dinyatakan secara berbeza menggunakan microarray circRNA. Data RT-qPCR mendedahkan bahawa circDVL1 telah dikurangkan secara mendadak dalam sampel ccRCC. Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa circRNA boleh berfungsi sebagai biomarker serum laten dalam kanser yang berbeza [36, 37]. Sebagai contoh, Bei et al. menunjukkan bahawa lilitan exosomal{10}} telah meningkat dalam serum yang dikumpul daripada pesakit kanser kolorektal [38]. Walau bagaimanapun, penyelidikan mengenai peranan khusus circRNA sebagai biomarker bukan invasif dalam ccRCC masih terhad. Kajian kami mendedahkan bahawa circDVL1 telah dikurangkan dengan ketara dalam serum daripada pesakit ccRCC dan bahawa penurunan ekspresi serum circDVL1 mungkin berasal dari tumor. Tambahan pula, tahap serum circDVL1 mempunyai nilai diagnostik yang signifikan dalam mendiskriminasi antara pesakit dengan tumor gred I-II Fuhrman dan Fuhrman gred III-IV. Oleh itu, serum circDVL1 boleh menjadi penanda diagnostik yang menjanjikan untuk ccRCC. Walau bagaimanapun, beberapa pesakit yang sihat menunjukkan tahap circDVL1 yang rendah dalam serum mereka, menunjukkan bahawa pemantauan pesakit semata-mata berdasarkan analisis RNA yang beredar ini boleh menghasilkan keputusan positif palsu. Oleh itu, nilai circDVL1 sebagai penanda diagnostik tunggal agak terhad dan gabungan RNA beredar yang berbeza mungkin perlu dianalisis untuk mendapatkan ramalan yang boleh dipercayai untuk perkembangan tumor dan metastasis.

Sebagai circRNA yang baru dikenal pasti, peranan biologi dan patologi circDVL1 belum disiasat. Dalam kajian ini, kami menilai peranan dan mekanisme pengawalseliaan circDVL1 dalam ccRCC. Ujian fungsional menunjukkan bahawa circDVL1 yang terlalu tertekan boleh mengurangkan percambahan sel ccRCC, keupayaan pembentukan koloni, dan potensi tumorigenik, mungkin disebabkan oleh peningkatan apoptosis sel secara in vitro dan menyekat perkembangan tumor dalam vivo. Data menunjukkan bahawa circDVL1 boleh mempunyai fungsi penindas tumor dalam ccRCC.

CircRNA boleh menggalakkan permulaan dan perkembangan tumor dengan bertindak sebagai span miRNA. Oleh itu, kami mengkaji sama ada circDVL1 boleh mengawal biogenesis miRNA semasa karsinogenesis ccRCC. Menggunakan perisian miRanda dan miRWalk, kami mendapati bahawa circDVL1 mempunyai tapak pengikatan yang berpotensi untuk miR-412-3p. Ujian wartawan Luciferase menunjukkan hubungan langsung antara circDVL1 dan miR-412-3p. Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa miR-412-3p terlibat dalam patogenesis kanser yang berbeza melalui pelbagai mekanisme molekul [31, 39, 40]. Contohnya, miR-412-3p mempunyai peranan onkogenik dalam kanser kolon, menggalakkan penghijrahan, pencerobohan dan percambahan sel sel stem kanser [31]. Selain itu, ekspresi miR-412-3p telah dikawal selia dalam vesikel ekstraselular daripada pesakit karsinoma sel skuamosa mulut (OSCC) [39]. Begitu juga, keputusan kami mencadangkan bahawa miR{13}}p ialah penganjur tumor yang penting dalam ccRCC.

Serbuk cistanche

Selain itu, sasaran circDVL1/miR-412-3p turut dikenal pasti. Protocadherins (PCDHs) ialah protein transmembran yang tergolong dalam superfamili cadherin, yang memainkan peranan penting dalam lekatan sel dan laluan isyarat. PCDH7 ialah ahli keluarga PCDH dan mempunyai peranan yang mantap dalam pengecaman sel-sel dan lekatan sel [41]. Umumnya diketahui bahawa kehilangan lekatan adalah langkah awal dalam pencerobohan sel tumor dan metastasis. Bukti yang muncul menunjukkan bahawa PCDH7 dinyatakan secara menyimpang dalam pelbagai jenis tumor. Sebagai contoh, dalam kanser paru-paru bukan sel kecil manusia, PCDH7 sering diekspresikan secara berlebihan dan berfungsi sebagai onkogen untuk mendorong transformasi selular dan menggalakkan tumorigenesis paru-paru dengan mempotensikan isyarat MAPK [42]. Sebaliknya, PCDH7 menghalang penghijrahan dan pencerobohan sel kanser gastrik melalui E-cadherin [43]. Selain itu, ekspresi PCDH7 yang dikurangkan telah ditemui dalam kanser kolorektal [44] dan pundi kencing [45]. Data ini menunjukkan bahawa PCDH7 mempunyai pelbagai fungsi dalam jenis tumor yang berbeza. Dalam kajian ini, kami menunjukkan bahawa tahap PCDH7 dikurangkan dalam spesimen tumor ccRCC. Menariknya, eksperimen penyelamat berfungsi mendedahkan bahawa sifat penindas tumor circDVL1 sebahagiannya disebabkan oleh kesannya pada PCDH7. Kajian kami amat mencadangkan kepentingan paksi kawal selia circDVL1/miR-412-3p/ PCDH7 dalam perkembangan ccRCC.

Kajian ini mempunyai beberapa batasan. Kami menguji tiga siRNA khusus untuk circDVL1 endogen, tetapi malangnya, semua siRNA ini gagal merobohkan circDVL1 mungkin disebabkan oleh struktur unik circRNA ini, serta ekspresi basalnya yang rendah dalam sel ccRCC. Di samping itu, keputusan kami menunjukkan bahawa circDVL1 boleh menjadi sasaran terapeutik dalam pesakit ccRCC, kajian klinikal dengan kohort besar pesakit diperlukan untuk menunjukkan lagi kepentingan klinikalnya. Dalam kajian kami, kami tidak menyiasat punca penurunan regulasi circDVL1 dalam lesi ccRCC. Telah dilaporkan bahawa protein pengikat RNA (RBP), termasuk gemetar (QKI), protein pengawalseliaan penyambung epitelium 1 (ESRP1), dan fusi-in-sarcoma (FUS) terlibat dalam pembentukan pascatranskripsi circRNA [{{10 }}]. Selain itu, beberapa faktor transkripsi (cth, ZEB1, c-Myb dan c-Jun) turut terlibat dalam biogenesis circRNA tertentu [49-52]. Juga, kajian telah menunjukkan bahawa pengubahsuaian m6A mengantara kemerosotan circRNA. Park et al. melaporkan bahawa circRNA diubah suai m6A juga dikurangkan melalui paksi YTHDF2- HRSP12-RNase P/MRP [53]. Sama ada RBP, faktor transkripsi dan metilasi m6A ini terlibat dalam downregulation circDVL1 masih tidak pasti. Dalam penyelidikan masa depan kami, kami akan cuba meneroka mekanisme pengawalseliaan huluan circDVL1 dalam pembangunan ccRCC dan tumorigenesis.

Ringkasnya, kami menunjukkan bahawa tahap circDVL1 dikurangkan dalam serum daripada pesakit ccRCC. Terutamanya, kami menyiasat lebih lanjut mekanisme pengawalseliaan circDVL1 dan menunjukkan bahawa circDVL1 menindas tumorigenesis ccRCC dengan mempromosikan ekspresi PCDH7 dengan span miR-412-3p. Oleh itu, kajian kami menunjukkan bahawa circDVL1 mungkin menjadi sasaran terapeutik yang berpotensi untuk rawatan ccRCC masa hadapan.

Rujukan

1.Cheng SK, Chuah KL. Karsinoma Sel Renal Metastatik ke Pankreas: Satu Tinjauan. Arkib patologi & perubatan makmal. 2016; 140: 598-602.

2. Jonasch E, Walker CL, Rathmell WK. Karsinoma sel renal sel jelas ontogeni dan mekanisme maut. Nat Rev Nephrol. 2021; 17: 245-61.

3. Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Statistik kanser, 2020. CA Cancer J Clin. 2020; 70.

4. Shuch B, Amin A, Armstrong AJ, Eble JN, Ficarra V, Lopez-Beltran A, et al. Memahami varian patologi karsinoma sel renal: menyuling peluang terapeutik daripada kerumitan biologi. Urologi Eropah. 2015; 67: 85-97.

5. Koul H, Huh JS, Rove KO, Crompton L, Koul S, Meacham RB, et al. Aspek molekul karsinoma sel renal: kajian semula. Am J Cancer Res. 2011; 1: 240-54.

6. Sanchez-Gastaldo A, Kempf E, Gonzalez Del Alba A, Duran I. Rawatan sistemik kanser sel buah pinggang: Kajian komprehensif. Rawatan Kanser Rev. 2017; 60: 77-89.

7. Kristensen LS, Andersen MS, Stagsted LVW, Ebbesen KK, Hansen TB, Kjems J. Biogenesis, biologi dan pencirian RNA bulat. Kajian Alam Semula Jadi Genetik. 2019; 20: 675-91.

8. Patop IL, Wüst S, Kadener S. Dahulu, sekarang dan masa depan circRNA. Jurnal EMBO. 2019; 38: e100836.

9. Perez de Acha O, Rossi M, Gorospe M. RNA Pekeliling dalam Keganasan Darah. Depan Mol Biosci. 2020; 7: 109.

10. Zhang SJ, Chen X, Li CP, Li XM, Liu C, Liu BH, et al. Pengenalpastian dan Pencirian RNA Pekeliling sebagai Kelas Baharu Biomarker Putative dalam Retinopati Diabetes. Oftalmologi penyiasatan & sains visual. 2017; 58: 6500-9.

11. Bahn JH, Zhang Q, Li F, Chan TM, Lin X, Kim Y, et al. Landskap mikroRNA, RNA berinteraksi Piwi, dan RNA bulat dalam air liur manusia. Kimia klinikal. 2015; 61: 221-30.

12. Li Y, Zheng Q, Bao C, Li S, Guo W, Zhao J, et al. RNA pekeliling diperkaya dan stabil dalam eksosom: biomarker yang menjanjikan untuk diagnosis kanser. Penyelidikan sel. 2015; 25: 981-4.

13. Li S, Han L. RNA Pekeliling sebagai biomarker yang menjanjikan dalam kanser: pengesanan, fungsi dan seterusnya. Perubatan genom. 2019; 11: 15.

14. Ye Q, Ling S, Zheng S, Xu X. Biopsi cecair dalam karsinoma hepatoselular: sel tumor yang beredar dan DNA tumor yang beredar. Kanser Mol. 2019; 18: 114.

15. Wen G, Zhou T, Gu W. Potensi menggunakan RNA pekeliling darah sebagai biomarker biopsi cecair untuk penyakit manusia. Sel Protein. 2020.

16. Zhang Z, Yang T, Xiao J. RNA Pekeliling: Penanda Bio yang Menjanjikan untuk Penyakit Manusia. EBioPerubatan. 2018; 34: 267-74.

17. Wang S, Zhang K, Tan S, Xin J, Yuan Q, Xu H, et al. RNA pekeliling dalam cecair badan sebagai biomarker kanser: sempadan baharu biopsi cecair. Kanser Mol. 2021; 20: 13.

18. Wang Y, Zhang Y, Wang P, Fu X, Lin W. RNA pekeliling dalam karsinoma sel renal: implikasi untuk tumorigenesis, diagnosis, dan terapi. Kanser Mol. 2020; 19: 149.

19. Chen D, Chen W, Xu Y, Zhu M, Xiao Y, Shen Y, et al. Pusat pemeriksaan imun yang dikawal HHLA2 dalam karsinoma sel renal sel yang jelas: biomarker prognostik novel dan sasaran terapeutik yang berpotensi. J Med Genet. 2019; 56: 43-9.

20. Lv Q, Wang G, Zhang Y, Shen A, Tang J, Sun Y, et al. CircAGAP1 menggalakkan perkembangan tumor dengan span miR-15-5p dalam karsinoma sel renal sel yang jelas. J Exp Clin Cancer Res. 2021; 40: 76.

21. Wang K, Sun Y, Tao W, Fei X, Chang C. Reseptor androgen (AR) menggalakkan penghijrahan dan pencerobohan karsinoma sel renal sel yang jelas (ccRCC) melalui mengubah circHIAT1/miR-195-5p/29a{{ 4}}p/29c-3p/CDC42 isyarat. surat kanser. 2017; 394: 1-12.

22. Xue D, Wang H, Chen Y, Shen D, Lu J, Wang M, et al. Circ-AKT3 menghalang metastasis karsinoma sel renal sel jelas melalui mengubah isyarat miR-296-3p/E-cadherin. Kanser molekul. 2019; 18: 151.

23. Chen Q, Liu T, Bao Y, Zhao T, Wang J, Wang H, et al. CircRNA cRAPGEF5 menghalang pertumbuhan dan metastasis karsinoma sel renal melalui laluan miR-27a-3p/TXNIP. surat kanser. 2019; 469: 68-77.

24. Guo X, Lin W, Wen W, Huyghe J, Bien S, Cai Q, et al. Mengenalpasti Gen Kecenderungan Novel untuk Risiko Kanser Kolorektal Daripada Kajian Persatuan Transkriptom-Wide 125,478 Subjek. Gastroenterologi. 2021; 160.

25. Wang J, Nie W, Xie X, Bai M, Ma Y, Jin L, et al. MicroRNA-874-3p/ADAM (A Disintegrin and Metalloprotease) 19 Mengantara Pengaktifan Makrofaj dan Fibrosis Renal Selepas Kecederaan Buah Pinggang Akut. Hipertensi. 2021; 77: 1613-26.

26. Kun-Peng Z, Chun-Lin Z, Jian-Ping H, Lei Z. Novel yang beredar hsa_circ_0081001 bertindak sebagai biomarker berpotensi untuk diagnosis dan prognosis osteosarcoma. Int J Biol Sci. 2018; 14: 1513-20.

27. Yuan Y, Bao J, Chen Z, Villanueva AD, Wen W, Wang F, et al. Analisis multi-omik untuk mengenal pasti gen kerentanan untuk kanser kolorektal. Hum Mol Genet. 2021.

28. Kramer MC, Liang D, Tatomer DC, Gold B, Mac ZM, Cherry S, et al. Kawalan gabungan ekspresi RNA pekeliling Drosophila oleh ulangan intronik, hnRNPs, dan protein SR. Genes Dev. 2015; 29: 2168-82.

29. Guo X, Lin W, Bao J, Cai Q, Pan X, Bai M, et al. Analisis cis-eQTL Komprehensif Mendedahkan Gen Sasaran dalam Lokus Kecenderungan Kanser Payudara Dikenal pasti dalam Kajian Persatuan Seluruh Genom. Am J Hum Genet. 2018; 102: 890-903.

30. Zhong S, Wang J, Zhang Q, Xu H, Feng J. CircPrimer: perisian untuk menganotasi circRNA dan menentukan kekhususan primer circRNA. BMC Bioinformatik. 2018; 19: 292.

31. Zhu K, Wang Y, Liu L, Li S, Yu W. Long bukan pengekodan RNA MBNL1-AS1 mengawal percambahan, penghijrahan dan pencerobohan sel stem kanser dalam kanser kolon dengan berinteraksi dengan MYL9 melalui mikroRNA span -412-3hlm. Klinik dan penyelidikan dalam hepatologi dan gastroenterologi. 2020; 44: 101-14.

32. Schrödter S, Braun M, Syring I, Klümper N, Deng M, Schmidt D, et al. Pengenalpastian pengangkut dopamin SLC6A3 sebagai biomarker untuk pesakit dengan karsinoma sel renal. Kanser molekul. 2016; 15: 10.

33. Ran L, Liang J, Deng X, Wu J. miRNA dalam Ramalan Prognosis dalam Karsinoma Sel Renal Sel Jelas. Biomed Res Int. 2017; 2017: 4832931.

34. Li JK, Chen C, Liu JY, Shi JZ, Liu SP, Liu B, et al. RNA tanpa pengekodan panjang MRCCAT1 menggalakkan metastasis karsinoma sel renal sel jelas melalui menghalang NPR3 dan mengaktifkan isyarat p38-MAPK. Kanser molekul. 2017; 16: 111.

35. Sheng JQ, Liu L, Wang MR, Li PY. RNA pekeliling dalam kanser sistem pencernaan: biomarker berpotensi dan sasaran terapeutik. Am J Cancer Res. 2018; 8: 1142-56.

36. Vea A, Llorente-Cortes V, de Gonzalo-Calvo D. RNA Pekeliling dalam Darah. Adv Exp Med Biol. 2018; 1087: 119-30.

37. Vo JN, Cieslik M, Zhang Y, Shukla S, Xiao L, Zhang Y, et al. Landskap RNA Pekeliling dalam Kanser. sel. 2019; 176.

38. Pan B, Qin J, Liu X, He B, Wang X, Pan Y, et al. Pengenalpastian Serum Exosomal has-circ-0004771 sebagai Biomarker Diagnostik Novel Kanser Kolorektal. Genet Depan. 2019; 10: 1096.

39. Gai C, Camussi F, Broccoletti R, Gambino A, Cabras M, Molinaro L, et al. MiRNA yang berkaitan dengan vesikel ekstraselular saliva sebagai biomarker berpotensi dalam karsinoma sel skuamosa mulut. Kanser BMC. 2018; 18: 439.

40. Lenherr SM, Tsai S, Silva Neto B, Sullivan TB, Cimmino CB, Logvinenko T, et al. Profil Ekspresi MicroRNA Mengenalpasti Tumor Pundi Pundi Bergred Tinggi, Bukan Invasif Otot dengan Risiko Tinggi untuk Maju kepada Fenotip Invasif. Gen (Basel). 2017; 8.

41. Yoshida K. Bentuk sel fibroblast dan lekatan secara in vitro diubah oleh ekspresi berlebihan isoform 7a dan 7b protocadherin 7, tetapi bukan isoform 7c. Sel Mol Biol Lett. 2003; 8: 735-41.

42. Zhou X, Updegraff BL, Guo Y, Peyton M, Girard L, Larsen JE, et al. PROTOCADHERIN 7 Bertindak melalui SET dan PP2A untuk Menguatkan Isyarat MAPK oleh EGFR dan KRAS semasa Tumorigenesis Paru-paru. Kanser Re. 2017; 77: 187-97.

43. Chen HF, Ma RR, He JY, Zhang H, Liu XL, Guo XY, et al. Protocadherin 7 menghalang penghijrahan dan pencerobohan sel melalui E-cadherin dalam kanser gastrik. Tumor Biol. 2017; 39: 1010428317697551.

44. Bujko M, Kober P, Mikula M, Ligaj M, Ostrowski J, Siedlecki JA. Perubahan ekspresi gen berkaitan lekatan sel-sel dalam tumor kolorektal. Oncol Lett. 2015; 9: 2463-70.

45. Lin YL, Wang YL, Fu XL, Li WP, Wang YH, Ma JG. Ekspresi rendah protocadherin7 (PCDH7) ialah biomarker prognostik yang berpotensi untuk kanser pundi kencing invasif bukan otot utama. Oncotarget. 2016; 7: 28384-92.

46. ​​Conn SJ, Pillman KA, Toubia J, Conn VM, Salmanidis M, Phillips CA, et al. Gegaran protein pengikat RNA mengawal pembentukan circRNA. sel. 2015; 160: 1125-34.

47. Errichelli L, Dini Modigliani S, Laneve P, Colantoni A, Legnini I, Capauto D, et al. FUS menjejaskan ekspresi RNA bulat dalam neuron motor yang berasal dari sel stem embrio murine. Nat Commun. 2017; 8: 14741.

48. Yu CY, Li TC, Wu YY, Yeh CH, Chiang W, Chuang CY, et al. Pekeliling RNA circBIRC6 mengambil bahagian dalam litar molekul yang mengawal pluripotensi manusia. Nat Commun. 2017; 8: 1149.

49. Lee YH, Kim HS, Kim JS, Yu MK, Cho SD, Jeon JG, et al. C-my Mengawal Autofagi untuk Daya Tenaga Pulpa dalam Tekanan Oksidatif Glukosa. J Dent Res. 2016; 95: 430-8.

50. Li Q, Wang Y, Wu S, Zhou Z, Ding X, Shi R, et al. CircACC1 Mengawal Perhimpunan dan Pengaktifan Kompleks AMPK di bawah Tekanan Metabolik. Metab Sel. 2019; 30.

51. Ren C, Zhang Z, Wang S, Zhu W, Zheng P, Wang W. Pekeliling RNA hsa_litar_0001178 memudahkan pencerobohan dan metastasis kanser kolorektal melalui penyelarasan ZEB1 melalui span berbilang miRNA. Biol Chem. 2020; 401: 487-96.

52. Zeng K, Chen X, Xu M, Liu X, Hu X, Xu T, et al. CircHIPK3 menggalakkan pertumbuhan kanser kolorektal dan metastasis dengan span miR-7. Kematian Sel Dis. 2018; 9: 417.

53. Park OH, Ha H, Lee Y, Boo SH, Kwon DH, Song HK, et al. Pembelahan Endoribonukleolitik RNA yang Mengandungi mA oleh Kompleks RNase P/MRP. Sel Mol. 2019; 74.

Ying Wang1,2, Yunjing Zhang1,2, Xinwan Su3, Qiongzi Qiu4, Yuan Yuan2, Chunhua Weng2, Sailan Zou5, Yan Tian5, Weidong Han6, Pengyuan Liu4, Xingyi Guo7, Jianhua Mao8, Xianghui Fu5, Ping Wang3, Weiqiang

1. Hospital Gabungan Keempat, dan Institut Perubatan Antarabangsa, Sekolah Perubatan Universiti Zhejiang, Jinhua 322000, Zhejiang, China.

2. Pusat Penyakit Buah Pinggang, Hospital Gabungan Pertama, dan Institut Perubatan Translasi, Sekolah Perubatan Universiti Zhejiang, Hangzhou 310003, Zhejiang, China.

3. Jabatan Urologi, Hospital Gabungan Pertama, Sekolah Perubatan Universiti Zhejiang, Hangzhou 310003, Zhejiang, China.

4. Jabatan Perubatan Pernafasan, Hospital Sir Run Run Shaw dan Institut Perubatan Translasi, Sekolah Perubatan Universiti Zhejiang, Hangzhou 310016, Zhejiang, China.

5. Bahagian Endokrinologi dan Metabolisme, Makmal Utama Bioterapi dan Pusat Kanser Negeri, Hospital China Barat, Universiti Sichuan dan Pusat Inovasi Kolaboratif Bioterapi, Chengdu 610041, Sichuan, China.

6. Jabatan Onkologi Perubatan, Hospital Sir Run Run Shaw, Sekolah Perubatan Universiti Zhejiang, Hangzhou 310016, Zhejiang, China.

7. Bahagian Epidemiologi, Jabatan Perubatan, Pusat Epidemiologi Vanderbilt, dan Pusat Kanser Vanderbilt-Ingram, Sekolah Perubatan Universiti Vanderbilt, Nashville 37203, TN, Amerika Syarikat.

8. Jabatan Nefrologi, Pusat Penyelidikan Klinikal Kebangsaan Untuk Kesihatan Kanak-Kanak, Hospital Kanak-Kanak, Sekolah Perubatan Universiti Zhejiang, Hangzhou 310003, Zhejiang, China.