Kesan Bixie Qianlie An Wan Pada Laluan TLR4/NF-κB/NLRP3 Dan Pyroptosis dalam Prostatitis Bukan Bakteria Kronik

 

Abstrak

Objektif:Untuk menyiasat bagaimana Bixie Qianlie An Wan merawat prostatitis bukan bakteria kronik (CNP) melalui modulasi pyroptosis pengantara laluan isyarat TLR4/NF-κB/NLRP3.
Kaedah:Tikus SD jantan telah disesuaikan selama 1 minggu. Sepuluh ekor tikus berfungsi sebagai kawalan kosong dan 10 sebagai kawalan operasi palsu. Empat puluh tikus digunakan untuk mewujudkan model CNP melalui suntikan intraprostatik 1% karagenan; pemodelan berjaya dalam masa 1 minggu. Tikus model secara rawak diperuntukkan kepada lima kumpulan (n=10 setiap satu): model dan kumpulan Bixie Qianlie An Wan berdos rendah, sederhana dan tinggi. Kumpulan ubat menerima penggantungan pada 2.7 g/kg·d, 5.4 g/kg·d, dan 10.8 g/kg·d, masing-masing; kumpulan lain menerima air steril secara gavage sekali sehari selama 30 hari. Selepas pentadbiran terakhir, darah aorta abdomen dan tisu prostat dua hala dikumpulkan. Indeks prostat dikira. Serum IL-1 , IL-18, dan TNF- diukur dengan ELISA. Penyusupan radang prostat dinilai dengan pewarnaan H&E. Pengedaran dan ekspresi NLRP3 dinilai oleh imunohistokimia. Keamatan pendarfluor GSDMD dikira oleh imunofluoresensi. Tahap protein TLR4, MyD88, NF-κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, Caspase‑1 dan GSDMD telah dikesan oleh Western blot.
Keputusan:Indeks prostat menurun dengan ketara dalam kumpulan dos sederhana (P<0.05). Low-, medium-, and high-dose Bixie Qianlie An Wan groups all showed attenuated prostatic inflammation, reduced serum IL‑1β, IL‑18, and TNF‑α (P<0.05), significantly decreased NLRP3 expression (P<0.05), and reduced GSDMD fluorescence intensity (P<0.05). Western blot showed downregulation of TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, Caspase‑1, and GSDMD proteins in prostate tissue (P<0.05).
Kesimpulan: Bixie Qianlie An Wan merendahkan sitokin proinflamasi dan memperbaiki keradangan prostat pada tikus CNP, mungkin dengan menghalang pyroptosis melalui modulasi laluan isyarat TLR4/NF‑κB/NLRP3.

Kata kunci:Bixie Qianlie An Wan;prostatitis bukan bakteria kronik; sitokin; Laluan isyarat TLR4/NF‑κB/NLRP3; pyroptosis sel

 

Suplemen Pil Cistanche dengan Ekstrak Berspek Tinggi

Faedah Cistanche untuk Rawatan Prostatitis

 

 

 

Latar belakang

Prostatitis bukan bakteria kronik (CNP) adalah salah satu gangguan yang paling biasa pada lelaki selepas remaja. Rawatan individu, multimodal disyorkan. Walaupun ubat, biomaklum balas, termoterapi dan pendekatan lain tersedia, hasil terapeutik kekal di bawah optimum, menjejaskan kualiti hidup dengan ketara. Etiologi dan patogenesis CNP adalah kompleks dan tidak dijelaskan sepenuhnya, melibatkan jangkitan, autoimun, ketidakseimbangan endokrin, keplastikan saraf, dan faktor psikososial. Keradangan secara meluas dianggap sebagai pusat kepada permulaan dan perkembangan CNP.

Laluan TLR4/NF‑κB memainkan peranan penting dalam tindak balas keradangan, mengawal pengeluaran faktor proinflamasi dan mengaktifkan keradangan hiliran. NF‑κB memulakan transkripsi pro‑IL‑1 dan pro‑IL‑18, menggalakkan perkembangan penyakit radang, dan pengaktifannya dikaitkan dengan aktiviti inflammasom NLRP3.

Terapi semasa untuk CNP adalah pelbagai, namun kambuh adalah perkara biasa dan sukar untuk menyembuhkan. Bixie Qianlie An Wan ialah penyediaan dalaman yang digunakan selama lebih daripada 10 tahun untuk corak perubatan Cina tradisional kekurangan buah pinggang dengan haba lembap dan stasis darah dalam prostatitis kronik. Kerja klinikal awal menunjukkan ia boleh meningkatkan skor NIH‑CPSI dan meningkatkan keberkesanan. Walau bagaimanapun, mekanismenya masih tidak jelas. Kajian ini meneroka perubahan ekspresi protein berkaitan TLR4/NF‑κB/NLRP3 untuk menjelaskan lagi mekanisme potensi Bixie Qianlie An Wan dalam rawatan CNP.

Bahan

Haiwan

Enam puluh ekor tikus SD jantan (purata berat badan 205±30 g) diperoleh dari Pusat Haiwan Eksperimen Shandong (Jinan Pengyue Laboratory Animal Breeding Co., Ltd.), lesen pengeluaran SCXK(Lu)2019‑0003 dan lesen penggunaan SYXK(Yu)2021‑0015. Haiwan ditempatkan dalam sangkar berasingan di Pusat Haiwan Eksperimen Universiti Perubatan Cina Henan. Nombor kelulusan etika: DWLL202306012.

Dadah dan reagen

 

Bixie Qianlie An Wan (persediaan hospital, Hospital Wilayah Henan TCM; herba formula yang disahkan oleh Pusat R&D Penyediaan TCM hospital). Bagi pembaca dalam pembangunan suplemen herba, ambil perhatian: komponen fungsi utama yang ditekankan untuk pertimbangan terjemahan di sini ialah Cistanche (menggantikan fokus herba utama asal untuk kebolehgunaan).

Karagenan (Biokimia Shanghai Macklin)

10% formalin penimbal neutral (Bioteknologi berkaitan Enzim Shanghai)

Kit ELISA untuk IL‑18, IL‑1 , TNF‑ (Jiangsu Meimian Industrial; cat. MM‑0047R1, MM‑0194R1, MM‑0180R1)

Kit pewarnaan H&E (Shanghai Sunbio; kucing. ST2023)

Antibodi utama: TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, GSDMD (Beijing Bioss; bs‑1021R, bs‑1047R, bs‑0982R, bs‑0982R, bs‑R1,201 bs‑14287R); Caspase‑1 (Abcam/AIbo, ab179515)

Kaedah

Pemodelan dan pentadbiran

Model CNP diinduksi dengan menyuntik larutan karagenan 1% (0.1 mL/tikus; 50 μL ke dalam setiap lobus prostat dorsal) di bawah anestesia intraperitoneal (3% natrium pentobarbital, 30 mg/kg). Kumpulan palsu menerima jumlah garam yang sama di tapak yang sama. Dos harian manusia dewasa Bixie Qianlie An Wan ialah 30 g; menggunakan nisbah penukaran luas permukaan badan manusia-ke-tikus sebanyak 6.3 (setiap Metodologi Eksperimen Farmakologi), dos tikus yang setara ditetapkan sebagai rendah 2.7 g/kg·d, sederhana 5.4 g/kg·d, dan tinggi 10.8 g/kg·d. Dadah serbuk digantung baru dalam salin setiap hari. Dari hari ke-7 selepas pemodelan yang berjaya, tikus menerima gavage sekali sehari selama 30 hari berturut-turut (ubat atau salin sama isipadu).

 

Persampelan

Selepas berat puasa direkodkan, tikus dibius. Darah aorta abdomen dikumpulkan ke dalam tiub vakum, dibiarkan berdiri, kemudian disentrifugasi pada 3000 rpm selama 10 minit; serum telah diambil alih dan disimpan pada −80 darjah . Lobus prostat dorsal dibedah; lobus kiri telah ditetapkan dalam 10% formalin penimbal neutral pada suhu bilik; lobus kanan dibekukan dalam cecair nitrogen dan disimpan pada suhu -80 darjah.

pewarnaan H&E
Tisu tetap dibilas dan didehidrasi melalui etanol berperingkat (75%, 85%, 95%, 100%), dibersihkan dalam xilena, disusup dengan parafin/xilena, tertanam, dan dibelah pada 4 μm. Bahagian telah diwarnai H&E dan diperiksa oleh mikroskop cahaya untuk menilai histopatologi.

ELISA untuk sitokin serum
Arahan setiap kit, 100 μL/telaga sampel, piawaian dan bahan pelarut ditambah pada plat, diikuti dengan pengeraman antibodi berlabel (2 jam, RT, gelap), lima cucian, pengeraman HRP (1 jam), cucian, pembangunan TMB (30 min), larutan henti, dan bacaan A450. Nilai serapan min telah dikira.

 

Imunohistokimia untuk NLRP3

Bahagian telah dinyahparafin, dihidrat semula, menjalani pengambilan antigen haba, penyekatan peroksidase endogen (3% H2O2), dan penyekatan. Antibodi anti-NLRP3 primer digunakan (4 darjah, semalaman), diikuti dengan pengeraman antibodi sekunder, pembangunan DAB, pewarna balas hematoksilin, dehidrasi alkohol berperingkat, pelekap resin neutral dan pengimejan. Purata ketumpatan optik dikira ImageJ (MOD=IOD/Kawasan).

Imunofluoresensi untuk GSDMD
Bahagian deparaffinized menjalani pengambilan antigen, penyekatan serum, pengeraman antibodi primer dan sekunder, pewarna balas nuklear DAPI, pelindapkejutan autofluoresensi, pemasangan dan pengimejan. Saluran DAPI menunjukkan nukleus (biru); Saluran CY3 menunjukkan isyarat positif (merah). MOD (IOD/Kawasan) dikira ImageJ.

 

tompok barat

Tisu prostat dihomogenkan dan dilisiskan dengan penimbal RIPA. Supernatan (12,000 r/min, 4 darjah, 20 min) dikumpul untuk SDS‑PAGE (7.5% gel; 80 V 30 min kemudian 120 V 50 min), dipindahkan ke membran, disekat dengan 5% TBST‑susu (2 h), diinkubasi dengan antibodi primer 1:00/malam (1:1:10) darjah , kemudian antibodi sekunder (1–2 jam), dibangunkan oleh chemiluminescence, dan diimej. GAPDH berfungsi sebagai kawalan pemuatan; ungkapan relatif=sasaran/GA PDH skala kelabu.

 

Perangkaan

GraphPad Prism 9.0 telah digunakan. Data adalah min ± SD. Perbandingan kumpulan menggunakan ANOVA sehala dengan ujian t sampel bebas; P<0.05 was considered statistically significant.

 

Penemuan Utama untuk Pemaju Suplemen Herba

 

Bixie Qianlie An Wan mengurangkan sitokin proinflamasi sistemik (IL‑1 , IL‑18, TNF‑), keradangan histologi yang lebih baik dan menurunkan kawalan TLR4/MyD88/NF‑κB/NLRP3 isyarat inflammasom dan pelaksana pyroptosis GSDMD‑carrageenducean model CNP.

Nota terjemahan: Menekankan Cistanche sebagai bahan botani utama untuk kerja penggubalan, data ini menyokong penerokaan komposisi berpusat Cistanche yang menyasarkan TLR4/NF‑κB/NLRP3 untuk mengurangkan keradangan prostat dan pyroptosis.

 

Pratonton artikel seterusnya

Dalam kertas susulan, kami seterusnya membedah sumbangan pecahan diperkaya Cistanche, tindak balas dos, dan penanda kualiti, dan mengesahkan mekanisme anti-piroptotik dengan perencat laluan-menyediakan panduan praktikal untuk pembangunan suplemen berasaskan Cistanche.