Tindak Balas Biokimia Dan Histopatologi Biomphalaria Alexandrina Kepada RIPEX (Pengawal Pertumbuhan Tumbuhan)Ⅱ

3 Keputusan

3.1 Ketoksikan RIPEX

Keputusan ketoksikan RIPEX kepada Biomphalaria alexandrina selepas 1 hari menunjukkan bahawa nilai LC50 dan LC90 masing-masing ialah 39.9 5 dan 73.6 µL/L. Kepekatan sublethal Te LC10 dan LC20 ialah 8 dan 16 µL/L, masing-masing (Jadual 1 dan Rajah 1).

3.2 Kesan RIPEX pada penanda tegasan oksidatif

Pendedahan kepada RIPEX menjejaskan aktiviti SOD dan GST dan tahap MDA dalam kelenjar pencernaan B. Alexandrina (Jadual 2). Siput yang terdedah kepada RIPEX pada 8 µL/L menunjukkan peningkatan yang tidak ketara (p=0.6) dalam aktiviti SOD berbanding dengan siput kawalan. Walau bagaimanapun, siput B. alexandrina yang terdedah kepada 16 µL/L selama 7 hari menunjukkan pengurangan ketara dalam aktiviti SOD (p=0.05). Aktiviti GST meningkat dengan ketara (p Kurang daripada atau sama dengan 0.001) selepas pendedahan kepada kedua-dua kepekatan. Peningkatan tertinggi dicatatkan pada siput yang terdedah kepada 16 µL/L selama 1 hari (39.7±3.2 U/mg) dan nilai tertinggi pada kepekatan 8 µL/L ialah (33.7±1.7 U/mg) pada 7 hari, berbanding dengan kawalan pada 17.1±3.6 U/mg (selepas 1 hari) dan 22.6±1.3 U/mg (selepas 7 hari).

Klik untuk memberi manfaat kepada testosteron

Bergantung pada selang masa, pendedahan selama 7 hari menyebabkan peningkatan yang ketara (p=0.0{{20}}}3). Pendedahan kepada kepekatan RIPEX yang berbeza menyebabkan peningkatan ketara (p Kurang daripada atau sama dengan 0.04) dalam tahap MDA. Kepekatan 8 µL/L meningkatkan tahap MDA (45.06±4.1) berbanding kawalan (16.4±2.1). Bergantung pada masa pendedahan, tahap MDA ialah 45.06±4.1dan 56.1±0.7 nmol/g pada kepekatan, masing-masing 8 dan 16 µL/L, berbanding 13.5±0.7 nmol/g untuk kawalan (Jadual 2).

3.3 Kesan RIPEX ke atas aktiviti hormon steroid

Pendedahan kepada 16 µL/L menyebabkan peningkatan ketara dalam kepekatan testosteron (52.6±2.5 nmol/L) (p=0.002) berbanding dengan kawalan (34.6±2.3 nmol/L). Manakala kepekatan 8 µL/L RIPEX menyebabkan peningkatan ketara (p=0.005) dalam testosteron selepas 3 hari pendedahan berbanding 16 µL/L. Bergantung pada selang masa, tidak ada kepentingan kecuali penurunan ketara dalam kepekatan testosteron yang berlaku pada 7 hari (19.6±2 nmol/L) pendedahan (p=0.003) berbanding dengan 3 hari (47.3± 6 nmol/L). Mengenai estradiol, terdapat peningkatan ketara (p=0.003) dalam kepekatan hormon selepas 3 hari pendedahan kepada 16 µl/L (73.6±3.5 pg/mL berbanding kawalan (43.3 pg/mL) dan 7 hari pendedahan kepada 8 µL/L (56.3±1.5 pg/mL berbanding dengan kawalan (50.3±5.6 pg/mL) (Rajah 2, b).

3.4 Kesan RIPEX ke atas enzim berpotensi imun

Pendedahan B. Alexandrina kepada dua kepekatan RIPEX menyebabkan peningkatan ketara dalam aktiviti enzim MPO (Rajah 3a) bergantung pada masa pendedahan pada 3 hari (p=0.0{ {35}}4) dan 7 hari (p=0.01). Pendedahan kepada 8 µL/L RIPEX, meningkatkan dengan ketara aktiviti MPO (55.3±4.8 mU/mg protein (p=0.004) berbanding 15.4±1.2 mU/mg untuk kawalan. Manakala 16 µL/L terdedah siput aktivitinya ialah (53.03±2.3 mU/mg protein dan 73.9±2.8 mU/mg protein, p Kurang daripada atau sama dengan 0.05). Selain itu, kepekatan 16 µL/L menyebabkan peningkatan yang ketara (p=0 .05) dalam aktiviti jika dibandingkan dengan 8 µL. Kedua-dua kepekatan (8 dan 16 µL/L) meningkat dengan ketara (p Kurang daripada atau sama dengan 0.009) aktiviti ADA apabila dibandingkan dengan kawalan (Rajah 3b) pada setiap masa mata. Peningkatan aktiviti pada kepekatan 16 µL/L. Bergantung pada selang masa, pendedahan selama 7 hari mencatatkan peningkatan yang ketara jika dibandingkan dengan 1 hari dan 3 hari (p Kurang daripada atau sama dengan 0.05). Nilai-nilai aktiviti pada 7 hari ialah 27.03±14 dan 74.3±1.9 U/mg protein

3.5 Kiraan hemosit yang berbeza

Pemeriksaan sampel hemolimfa daripada siput B. alexandrina menunjukkan tiga jenis hemosit yang berbeza secara morfologi; hyalinosit, bulat kecil, dan hemosit merebak. Hyalinocytes dicirikan oleh bentuk bulatnya, membran sel yang jelas, padat, dan nisbah nukleus-ke-sitoplasma yang besar. Ia diwakili oleh kiraan yang tinggi dalam kawalan (56.3±0.5, 1 hari). Sel bulat kecil ialah sel perantaraan dengan sedikit butiran sitoplasma dan tiada pseudopodia. Hemosit yang menyebar mempunyai saiz yang berbeza, dengan nukleus kecil dan butiran sitoplasma yang besar. Mereka adalah sel fagositik kerana mereka boleh membentuk pseudopodia yang sedikit dan merebak pendek. Pendedahan kepada dua kepekatan RIPEX meningkatkan kiraan hemosit, dan peningkatan ketara diperhatikan dalam granulosit siput yang terdedah kepada 8 µL/L (p=0.02) dan 16 µL/L (p{{12). }}.006) selama 1, 3 dan 7 hari berbanding kawalan. (Jadual 3). Rawatan itu menyebabkan beberapa keabnormalan morfologi dalam hemosit seperti hyalinosit dengan pemanjangan filopodial, granulosit cacat dengan vakuol, dan filopodia yang merebak (Rajah 4).

3.6 Kesan RIPEX pada histopatologi kelenjar pencernaan dan ovotestis

Kelenjar pencernaan B. Alexandrina terdiri daripada tubulus, dan setiap tubul terdiri daripada satu lapisan sel epitelium kolumnar yang dibezakan kepada sel pencernaan dan rembesan, yang disusun di sekeliling lumen pusat (Rajah 5a). Tubulus disambungkan bersama oleh tisu penghubung. Pendedahan RIPEX menyebabkan beberapa perubahan, seperti degenerasi pada tisu penghubung. Siput yang terdedah kepada 8 µL/L menunjukkan kehadiran blebs selular, yang menunjukkan kematian sel dan tersumbat lumen. Makanan yang tidak dicerna diperhatikan (Rajah 5b–d). Siput yang terdedah kepada 16 µL/L, menunjukkan degenerasi sel bergaris dengan beberapa tanda patologi seperti vakuolasi dan pelebaran lumen. Tubul menjadi rosak, cacat, dan nekrotik (Rajah 5e, f).

Ovotestis kawalan B. siput alexandrina terdiri daripada beberapa acini yang disambungkan oleh tisu penghubung. Setiap acinus dilapisi dengan epitelium germinal yang terdiri daripada peringkat spermatogonia dan oogonia yang berbeza. Mereka membezakan kepada primer, sekunder, dan satu atau dua oosit matang (oogonia). Sperma matang ditemui dalam kumpulan di dalam acinus (Rajah 6a). Struktur histologi ovotestis siput terdedah berubah selepas 7 hari pendedahan kepada RIPEX. Dalam siput yang terdedah kepada 8 µL/L, peningkatan bilangan sperma, sperma nekrotik, dan atrofi diperhatikan. Ubah bentuk gametosit lelaki atau perempuan dan degenerasi acini juga banyak. Juga, pendedahan kepada 16 µL/L menjadikan acini lebih merosot dan nekrosis meningkat (Rajah 6b–e).

4. Perbincangan

Terdapat penggunaan PGR yang meluas dalam amalan pertanian. Bahan-bahan ini mempunyai banyak kesan buruk terhadap organisma hidup. Kajian ini bertujuan untuk menilai kesan toksikologi RIPEX (sejenis racun perosak organophosphorus yang mengandungi etefon yang mengandungi 48 peratus etefon sebagai bahan aktif ditambah 52 peratus bahan lengai). Ujian ketoksikan RIPEX dengan B. Alexandrina menunjukkan bahawa 1-nilai LC50 dan -LC90 hari masing-masing ialah 39.95 dan 73.6 µl/L.

Keputusan ini disokong oleh [54] yang menunjukkan nilai EC50 untuk ethephon terhadap embrio Daphnia magna (125 mg/L selepas 48 jam pendedahan). Racun perosak ini kelihatan lebih toksik kepada Biomphalaria berbanding formulasi sebatian organophosphorus lain seperti chlorpyrifos (LC50 9.6 mg/L; [30] dan profenofos (LC50 1.10 mg/L; [10]) .

Homeostasis wujud antara penjanaan radikal bebas oksigen dan penghasilan molekul antioksidan dalam keadaan fisiologi normal [23]. Ketidakseimbangan antara sistem antioksidan dan oksidan dikenali sebagai tekanan oksidatif [32]. Dalam kedua-dua eukariota dan prokariot, superoxide dismutase (SOD) dan glutation S-transferases adalah enzim antioksidan penting yang boleh mengeluarkan terlalu banyak oksigen daripada radikal bebas dan melindungi organisma daripada kerosakan oksidatif [34, 38].

Mereka juga mengambil bahagian dalam detoksifikasi beberapa xenobiotik [8, 15]. Kajian ini mendedahkan bahawa pendedahan siput B. alexandrina kepada kepekatan sublethal RIPEX 48 peratus EC mengganggu aktiviti antioksidan siput terdedah. Pendedahan akut (24 jam) cenderung untuk mengurangkan keseluruhan aktiviti SOD dan GST dalam siput, diikuti dengan peningkatan selepas 3 hari pendedahan dan perencatan mendadak selepas 7 hari pendedahan.

Tahap MDA adalah lebih tinggi dengan ketara dalam siput terdedah berbanding kawalan selepas semua tempoh pendedahan. Keputusan ini mencadangkan keadaan tekanan oksidatif dalam siput yang disebabkan oleh pendedahan RIPEX. Siput mengalami penurunan mendadak dalam aktiviti enzim selepas 1 hari pendedahan dan cuba mengimbangi dengan mengeluarkan enzim secara berlebihan selepas 3 hari pendedahan. Walau bagaimanapun, pada hari ke-7 pendedahan, siput tidak dapat mengatasi pengeluaran lebihan spesies oksigen reaktif, seperti yang ditunjukkan oleh peningkatan tahap MDA (peroksidasi lipid), yang membawa kepada perencatan pengeluaran enzim antioksidan. MDA adalah antara kesan utama peroksidasi lipid dan mempunyai kuasa untuk mengganggu pertukaran ion dalam membran sel, mengubah suai kebolehtelapan ion, dan mempengaruhi fungsi enzim [9].

Mekanisme RIPEX 48 peratus tekanan oksidatif akibat EC dalam Biomphalaria mungkin berbeza daripada racun perosak organophosphorus yang lain. Ia menyebabkan perencatan enzim hanya selepas 7 hari pendedahan. Walau bagaimanapun, chlorpyrifos, sebagai contoh, menyebabkan peningkatan dalam aktiviti SOD dan pengurangan dalam aktiviti GST di B. Alexandrina sejurus selepas 1 hari pendedahan [30]. Testosteron dan estradiol memainkan peranan penting dalam pembiakan siput B. alexandrina [20, 45]. Perubahan dalam hormon ini boleh digunakan sebagai titik akhir ketoksikan kimia [14]. RIPEX 48 peratus EC menyebabkan gangguan hormon dalam siput B. alexandrina.

Siput yang terdedah kepada 16 µL/L menunjukkan peningkatan ketara dalam testosteron selepas 3 hari pendedahan. Walau bagaimanapun, RIPEX menurunkan paras hormon dalam siput yang terdedah kepada 8 µL/L selepas 1 dan 3 hari pendedahan. Mengenai estradiol, hormon cenderung meningkat dalam siput terdedah. Walau bagaimanapun, peningkatan yang paling ketara diperhatikan pada siput yang terdedah kepada 16 µL/L selepas 3 hari pendedahan. Oleh itu RIPEX mungkin mempunyai kesan gangguan endokrin pada siput B. alexandrina. Penemuan yang sama juga dilaporkan oleh Ibrahim dan Hussein [30], yang melaporkan peningkatan ketara dalam tahap kedua-dua testosteron dan estradiol selepas pendedahan B. Alexandrina kepada kepekatan sublethal chlorpyrifos 48 peratus EC. Agrokimia lain, walau bagaimanapun, seperti racun herba oxyfluorfen (24 peratus EC), mengurangkan paras testosteron dan 17-estradiol dalam B. Alexandrina selepas dua minggu pendedahan [31]. Myeloperoxidase (MPO), yang menukarkan H2O2 kepada asid hipoklorit (HOCl), antibiotik yang kuat, sering dianggap sebagai asas kepada sitotoksisiti pengantaraan ROS, dan terdapat bukti kukuh bahawa hemosit moluska mempunyai aktiviti MPO yang setanding dengan fagosit mamalia [22]. , 44, 49]. Adenosine deaminase (ADA) memainkan peranan penting dalam sistem imun haiwan vertebrata dan invertebrata, termasuk siput Biomphalaria [51].

Kekurangannya dikaitkan dengan penyakit immunodeficiency gabungan [25]. Pendedahan B. Alexandrina kepada 8 dan 16 µL/L RIPEX menyebabkan peningkatan ketara dalam aktiviti MPO dan enzim ADA dalam kelenjar pencernaan siput selepas 3 dan 7 hari pendedahan. Peningkatan dalam aktiviti enzim nampaknya bergantung pada masa dan gabungan. Kelenjar pencernaan adalah tapak utama untuk metabolisme bahan pencemar kimia dalam gastropod [46]. Peningkatan enzim ini menunjukkan tindak balas imunologi B. Alexandrina terhadap ketoksikan RIPEX kerana MPO, sebagai contoh, boleh menukar bahan pencemar kepada radikal bebas melalui pengabstrakan elektron tunggal [41], yang boleh mengakibatkan peristiwa kitaran redoks yang menghasilkan oksiradikal dan mungkin memulakan. peroksidasi lipid [36].

Siput bergantung terutamanya pada sitotoksisiti pengantaraan sel untuk menyingkirkan objek yang menyerang [5, 53]. Sel pertahanan yang paling banyak dikaji dalam siput ialah hemosit. Hemosit berkembang daripada sel kecil, bulat, agranular kepada sel yang besar, berbutir, menyebar melalui fasa perantaraan [6, 53]. Hemosit berbutir kebanyakannya memfagositosis bahan asing [28]. Pendedahan kepada dua kepekatan RIPEX 48 peratus EC meningkatkan kiraan hemosit. Hyalinocytes muncul dengan vakuol dalam sampel yang dikumpulkan daripada siput terdedah. Peningkatan ketara telah dicatatkan dalam granulosit, menunjukkan peningkatan dalam tindak balas imun selular siput untuk mencabar ketoksikan RIPEX. Ibrahim dan Hussein [30] menunjukkan bahawa pendedahan B. Alexandrina kepada chlorpyrifos mempunyai kesan negatif terhadap morfologi dan jumlah bilangan hemosit siput yang terdedah.

Tambahan pula, mikroskop cahaya mendedahkan bahawa beberapa hyalinosit telah mengecut nukleus, pembahagian sel tidak lengkap, dan pembentukan pseudopodia. Kesan ini pada kiraan hemosit dan morfologi B. Alexandrina mempunyai implikasi negatif pada imuniti siput, kerana organisma ini bergantung pada hemosit untuk perlindungan mereka terhadap pertemuan asing. Penyiasatan histopatologi kelenjar pencernaan B. Alexandrina menunjukkan bahawa pendedahan RIPEX selama 7 hari menyebabkan beberapa perubahan patologi seperti degenerasi tisu penghubung, blebbing selular, dan degenerasi sel bergaris dalam lumen. Tubul pencernaan menjadi rosak, cacat, dan nekrotik. Histopatologi adalah titik akhir yang penting dalam menilai perubahan patologi dalam haiwan akuatik yang terdedah kepada bahan cemar [33].

Kepekaan tinggi kelenjar pencernaan secara langsung dikaitkan dengan peranannya dalam homeostasis, pengambilan bahan cemar, pencernaan, metabolisme, dan proses detoksifikasi [24]. Kesan yang diperhatikan mungkin disebabkan oleh pengumpulan langsung RIPEX dalam sel kelenjar pencernaan atau secara tidak langsung melalui kerosakan oksidatif yang disebabkan oleh pengeluaran spesies oksigen reaktif (ROS). Malah, tekanan oksidatif yang melampau telah dikaitkan dengan kerosakan tisu yang melibatkan pelbagai proses fisiologi dan pembolehubah persekitaran, termasuk kematian sel nekrotik dan apoptosis [19]. Selain itu, pendedahan kepada dua kepekatan RIPEX yang berbeza selama 7 hari mengubah struktur histologi ovotestis dengan peningkatan bilangan sperma nekrotik, atrofi, ubah bentuk gametosit lelaki atau perempuan, dan degenerasi acini. Perubahan ini berkemungkinan mengurangkan potensi pembiakan siput dan, oleh itu, kecergasan mereka dalam sistem akuatik.

5. Kesimpulan

Kepekatan sublethal RIPEX 48 peratus EC mempunyai kesan pelbagai rupa pada siput Biomphalaria alexandrina. Dalam siput, pendedahan kronik kepada RIPEX mengurangkan pengeluaran enzim antioksidan SOD dan GST sambil meningkatkan pengeluaran MDA, menunjukkan keadaan tekanan oksidatif. Tambahan pula, ia mempunyai kesan gangguan endokrin pada siput, seperti yang dibuktikan oleh peningkatan keseluruhan tahap hormon steroid. Sistem imun siput nampaknya terdedah kepada pendedahan RIPEX. Ia menyebabkan peningkatan ketara dalam aktiviti enzim MPO dan ADA dalam kelenjar pencernaan siput selepas 3 dan 7 hari pendedahan, serta peningkatan ketara dalam granulosit dalam kumpulan siput terdedah. Keabnormalan patologi dalam kelenjar pencernaan siput terdedah dan ovotestis juga merupakan tanda perubahan histopatologi yang disebabkan oleh pendedahan RIPEX. Penemuan ini menunjukkan bahawa RIPEX mencederakan fauna akuatik, termasuk B. Alexandrina. Tus, Siput Biomphalaria boleh digunakan sebagai bioindikator untuk pencemaran alam sekitar dengan pengawal selia pertumbuhan tumbuhan.

Mekanisme Cistanche meningkatkan kesan testosteron

Cistanche telah didapati meningkatkan tahap testosteron dalam beberapa cara. Pertama, ia mengandungi sebatian yang dikenali sebagai echinacoside dan acteoside, yang telah ditunjukkan dapat meningkatkan pengeluaran hormon luteinizing (LH) dalam kelenjar pituitari. LH merangsang sel Leydig dalam testis untuk menghasilkan testosteron. Cistanche juga mengandungi polisakarida dan glikosida phenylethanoid, yang telah terbukti mempunyai sifat antioksidan dan anti-radang. Ini boleh membantu mengurangkan tekanan oksidatif dan keradangan dalam testis, yang boleh menjejaskan pengeluaran testosteron Selain itu, Cistanche telah didapati meningkatkan ekspresi gen yang terlibat dalam sintesis testosteron dan mengurangkan aktiviti enzim yang memecahkan testosteron, seperti {{1} }alfa-reduktase. Secara keseluruhan, gabungan mekanisme ini dianggap menyumbang kepada kesan peningkatan testosteron Cistanche.