Abstrak:Penyiasatan fitokimia bagi biji oren mandarin Mesir (Citrus reticulata Blanco, F. Rutaceae) menghasilkan tiga belas sebatian yang diketahui, 1–13. Struktur sebatian terpencil telah ditetapkan menggunakan analisis 1D dan 2D NMR dan HRESIMS. Untuk mencirikan aktiviti farmakologi sebatian ini, beberapa eksperimen berasaskan saringan maya dan dinamik molekul berasaskan simulasi telah digunakan. Akibatnya, sebatian 2, 3, dan 5 telah dikenal pasti sebagai hyaluronidase, xanthine oxidase, dan perencat tyrosinase. Ujian in vitro seterusnya dilakukan untuk mengesahkan eksperimen berasaskan siliko untuk menyerlahkan potensi flavonoid ini sebagai perencat hyaluronidase, xanthine oxidase dan tyrosinase yang menjanjikan dengan nilai IC50 antara 6.39 ± 0.36 hingga 73.7 ± 2.33. . Kajian ini memberi penerangan tentang potensi sisa oren mandarin Mesir (iaitu, bijinya) sebagai agen semulajadi yang menggalakkan kesihatan kulit. Selain itu, ia mendedahkan kebolehgunaan pemeriksaan maya berasaskan dok songsang bersepadu dan eksperimen berasaskan MDS dalam meramal potensi biologi produk semula jadi dengan cekap.

Glikosida cistanche juga boleh meningkatkan aktiviti SOD dalam tisu jantung dan hati, dan dengan ketara mengurangkan kandungan lipofuscin dan MDA dalam setiap tisu, dengan berkesan menghilangkan pelbagai radikal oksigen reaktif (OH-, H₂O₂, dll.) dan melindungi daripada kerosakan DNA yang disebabkan oleh OH-radikal. Glikosida phenylethanoid cistanche mempunyai keupayaan penghapusan radikal bebas yang kuat, keupayaan pengurangan yang lebih tinggi daripada vitamin C, meningkatkan aktiviti SOD dalam penggantungan sperma, mengurangkan kandungan MDA, dan mempunyai kesan perlindungan tertentu pada fungsi membran sperma. Polisakarida cistanche boleh meningkatkan aktiviti SOD dan GSH-Px dalam eritrosit dan tisu paru-paru tikus senescent eksperimen yang disebabkan oleh D-galaktosa, serta mengurangkan kandungan MDA dan kolagen dalam paru-paru dan plasma, dan meningkatkan kandungan elastin, mempunyai kesan penghapusan yang baik pada DPPH, memanjangkan masa hipoksia pada tikus senescent, meningkatkan aktiviti SOD dalam serum, dan melambatkan degenerasi fisiologi paru-paru dalam tikus senescent secara eksperimen Dengan degenerasi morfologi selular, eksperimen telah menunjukkan bahawa Cistanche mempunyai keupayaan antioksidan yang baik. dan berpotensi menjadi ubat untuk mencegah dan merawat penyakit penuaan kulit. Pada masa yang sama, echinacoside dalam Cistanche mempunyai keupayaan yang ketara untuk menghilangkan radikal bebas DPPH dan mempunyai keupayaan untuk mengais spesies oksigen reaktif dan menghalang degradasi kolagen yang disebabkan oleh radikal bebas, dan juga mempunyai kesan pembaikan yang baik pada kerosakan anion radikal bebas timin.

Klik Pada Faedah Tablet Cistanche

【Untuk maklumat lanjut: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

1. Pengenalan

Mandarin, C. reticulata, adalah antara tanaman sitrus yang paling luar biasa untuk kegunaan segar [1]. Mereka sering diperkenalkan sebagai 'tangerine;' namun, 'Mandarin' ialah nama yang lebih popular. Beberapa kacukan dan jenis spesies mandarin diedarkan di alam semula jadi [1]. Spesies yang paling terkenal dan canggih terdiri daripada C. unshiu Marcovitch, C. nobilis Loureiro, C. deliciosa Tenore, dan C. reticulata Blanco [1,2]. Mandarin adalah antara buah Citrus utama yang dituai di banyak negara. Walaupun tanaman digunakan terutamanya untuk pencuci mulut, mereka mempunyai kepentingan komersial yang besar kerana minyak patinya [3]. Perisa sitrus digunakan dalam minuman, kuih-muih, biskut, dan pencuci mulut [4]. Juga, kulit C. reticulata digunakan untuk perasa minuman keras [4].

Docking songsang ialah sejenis kaedah saringan maya yang boleh dimanipulasi untuk menjangka sasaran molekul yang berpotensi untuk struktur kompaun tertentu. Sebelum ini, kami telah menggunakan kaedah saringan maya yang cekap ini untuk menentukan sasaran protein terbaik untuk beberapa produk semula jadi yang terpencil [5]. Walau bagaimanapun, skor dok yang terhasil daripada langkah saringan awal ini hanya memberikan beberapa maklumat tentang kesesuaian struktur antara sasaran protein dan struktur kompaun pertanyaan [6]. Sehubungan itu, eksperimen simulasi dinamik molekul (MDS), termasuk tenaga bebas mengikat mutlak (∆Gbinding) memberikan hasil yang lebih ketat dan dipercayai yang boleh dipilih untuk ujian in vitro. Di sini, kami menundukkan benih C. reticulata kepada pengasingan kromatografi berperingkat untuk mendapatkan sedikit gambaran tentang fitokimia utama dalam produk buangan ini. Selepas itu, kami menyiasat sama ada fitokimia tersebut mempunyai kesan farmakologi tertentu dengan menundukkannya kepada analisis berasaskan siliko secara bertahap yang dimulakan oleh dok songsang yang komprehensif dan berakhir dengan beberapa eksperimen MDS. Potensi fitokimia bioaktif yang diperolehi daripada biji C. reticulata memberi penerangan tentang kapasiti tinggi produk buangan buah-buahan yang boleh dimakan sebagai takungan besar untuk agen menggalakkan kesihatan.

2. Bahan-bahan dan cara-cara

2.1. Bahan Tumbuhan

Buah-buahan C. reticulata telah dikumpul pada Januari 2021 dari wilayah tempatan di Beni-Suef, Mesir, dan disahkan oleh ahli botani kanan, Prof. Dr. Abd El-Halim A. Mohammed Jabatan Penyelidikan Flora dan Fitotaksonomi; Institut Penyelidikan Hortikultur; Dokki; Kaherah; Mesir). Satu spesimen buah-buahan itu disimpan di bawah nombor baucar 2021-BuPD 80 di Jabatan Farmakognosi; Pusat Pengajian Farmasi; Universiti Beni-Suef; Mesir).

2.2. Bahan Kimia dan Reagen

Etil asetat (EtOAc), metanol (MeOH), n-Heksana (n-Hex), etanol (EtOH), diklorometana (DCM), dan n-butanol (n-BuOH) diperoleh daripada Syarikat El-Nasr, Mesir. Sigma Aldrich, Saint Louis, MO, Amerika Syarikat, menyediakan pelarut deuterated untuk analisis NMR serta pelarut ketulenan tinggi untuk analisis HPLC, spektroskopi dan kromatografi (cth, metanol-d4 (CD3OD), dimetil sulfoksida-d6 (DMSO), kloroform -d (CDCl3), metanol untuk HPLC, air gred HPLC dan asetonitril gred HPLC). Untuk pengasingan kromatografi, Sephadex LH20 (0.25–0.1 mm, GE Healthcare, Sigma-Aldrich; CA, USA) dan Silica gel (E-Merck, Sigma-Aldrich, CA, USA) telah digunakan. Untuk kromatografi cecair vakum, gel silika untuk TLC (Farmaseutikal dan Bahan Kimia; Syarikat El-Nasr; Kaherah, Mesir) telah digunakan (VLC). Gel silika prasalut (E-Merck, Darmstadt, Jerman) digunakan untuk kajian TLC. Tompok yang dihasilkan dikenal pasti oleh para anisaldehid selepas dipanaskan pada 110 ◦C [7]. Semua bahan untuk penyiasatan biologi datang daripada Sigma Chemical Company (SCC; CA, USA).

2.3. Analisis Spektrum

Isyarat NMR diperolehi pada 400 untuk 1H-NMR dan 100 MHz untuk 13C-NMR. Puncak pelarut CDCl3-d, CD3OD-d4 dan DMSO-d6 digunakan sebagai isyarat rujukan. Isyarat NMR diperoleh menggunakan mesin NMR Bruker Advance-III 400 MHz (Bruker AG-Billerica, California, MA, USA).

Data jisim resolusi tinggi dikumpul menggunakan mesin Acquity-Ultra-Performance-Chromatography-Cecair yang dipautkan kepada Quadrupole-Time-of-Flight-Spectrometer-Hibrid-Mass-Spectrometer (Waters, Milford, MA, USA). Agilent/1260-Infiniti-preparative-HPLC telah digunakan untuk mencapai pemisahan kromatografi HPLC.

2.4. Penyediaan Ekstrak Biji C. reticulata

Biji benih C. reticulata (1 kilogram) dibeli segar dan kemudian dikeringkan di udara di tempat teduh. Berikutan itu, benih diparut menggunakan mesin pengisar (Henan, Tanah Besar China). Produk serbuk kemudiannya diekstrak dengan teliti sebanyak 7{15}} peratus EtOH (1 L × 5). Ekstrak cecair yang terhasil telah ditumpukan menggunakan Rotary Evaporator (Buchi-Rotavapor-R-300, ColeParmer, Vernon Hills, IL, USA) di bawah vakum pada 45 ◦C untuk memberikan 100 g ekstrak kering kasar, yang kemudiannya dibahagikan menggunakan siri pelarut kekutuban yang semakin meningkat: n-Hex-DCMEtOAc-n-BuOH. Pecahan I (24.0 g), II (5.0 g), III (3.0 g) dan IV (6.0 g) diperoleh dengan menyejat fasa organik yang diasingkan pada tekanan menurun. Semua ekstrak dan pecahan disimpan pada suhu 4 ◦C untuk analisis fitokimia dan biokimia seterusnya.

2.5. Pengasingan Produk Semulajadi Utama Benih C. reticulata 

Lajur gel TLC-silika telah digunakan untuk mendedahkan pecahan I (20 g) kepada VLC biasa. Elusi berturut-turut EtOAc dan n-Hex (0–100 peratus , peningkatan 5 peratus) telah digunakan. Tiga sub-pecahan (I1–I3) diperoleh dengan mengumpul pecahan yang sama dan menyejatnya di bawah tekanan yang dikurangkan. Pada lajur gel silika yang lain, subfraksi I1 (1.0 g) telah dipecahkan secara meluas. Elusi kromatografi telah dijalankan oleh n-Hex kepada EtOAc, campuran kecerunan (0–10 peratus , 1 peratus meningkat, 100 mL setiap satu) untuk menyediakan sebatian 13. (10 mg).

Sub-pecahan I2 (50 mg) selanjutnya dikromatografi pada silika-gel-60 (100 × 1 cm, 20 g). Prosedur kromatografi dilakukan menggunakan DCM: MeOH, campuran isokratik (0.5 peratus , 500 mL) untuk menawarkan sebatian 8 (20 mg) dan 9 (15 mg). Sub-pecahan I3 agak dipecahkan pada gel silika 60 (100 × 1 cm, 20 g). Elusi yang dihasilkan menggunakan DCM: MeOH, campuran isokratik (0.5 peratus , 500 mL) hingga mampu membeli 10 (20 mg).

Lajur silika-gel TLC digunakan untuk mendedahkan pecahan II (2.5 g). DCM: EtOAc (0–100 peratus , meningkat sebanyak 5 peratus ) telah digunakan untuk mengeluskan sampel. Efluen yang dihasilkan telah diterima dalam bahagian 250 mL. Pecahan yang sama diperoleh dan dikurangkan kepada dua sub-pecahan (II1–II2) pada tekanan yang dikurangkan. Pada lajur gel silika yang lain, subfraksi I1 (1.0 g) telah dipecahkan secara meluas. Kompaun 5 telah dielusi menggunakan DCM: EtOAc (0–10 peratus , 1 peratus meningkat, 100 mL setiap satu) (10 mg).

Sub-pecahan I2 (50} mg) selanjutnya dikromatografi pada silika gel60 (100 × 1 cm, 20 g). Elusi kromatografi telah digunakan menggunakan DCM kepada MeOH, (elusi isokratik; 0.5 peratus , 500 mL) untuk menawarkan sebatian 11 (20 mg) dan 12 (15 mg).

Pada VLC biasa, pecahan IV (6.0 g) diasingkan menggunakan gel silika. DCM: EtOAc (0–100 peratus , 5 peratus meningkat, 250 mL setiap satu) telah digunakan untuk mengeluskan sampel. Efluen kromatografi telah diterima dalam kenaikan 250 mL.

Pecahan yang sama telah dikumpulkan dan dikurangkan di bawah tekanan yang dikurangkan untuk menghasilkan lima subfraksi (IV1–V5); sub-pecahan IV1, IV2, IV3, dan IV4 hanya dikromatografi sedikit pada lajur Sephadex-LH20 yang dielusi dengan MeOH untuk menghasilkan 4 (30 mg), 6 (50 mg), 7 (70 mg), dan 1 (15 mg, masing-masing, manakala sub-pecahan IV5 adalah pur (10 mg) dengan ketara.

2.6. Dalam Kajian Siliko

2.6.1. Docking Songsang

Sasaran molekul berkemungkinan untuk flavonoid yang dipisahkan telah disimpulkan dengan menundukkan strukturnya kepada saringan maya bergantung pada dok songsang terhadap hampir semua protein yang diberikan dalam Protein-Data-Bank; PDB.

Platform berasaskan dalam talian IdTarget telah digunakan untuk langkah ini. Program saringan kecil struktur maya ini menggunakan kaedah dok songsang tertentu, iaitu DivideConquer-Docking, yang membina rangkaian bertindih terhad, menjadikan penerokaan protein lebih terhad. Akibatnya, ia boleh melakukan sejumlah besar dok dalam masa yang singkat [8]. Markah yang terhasil digambarkan sebagai senarai penilaian yang terdiri daripada yang paling teruk hingga yang terbaik. Untuk mengenal pasti sasaran protein yang optimum untuk setiap struktur yang diberikan, kami menggunakan skor pertalian -10 kcal / mol sebagai nilai potong (Jadual 1).

Eksperimen simulasi dinamik molekul (MDS) telah dijalankan seperti yang dilaporkan sebelum ini oleh Alhadrami et al. 2021 [6]. Mesin MDS perisian Maestro (iaitu, Desmond v. 2.2; Hamburg, Jerman) telah digunakan untuk mengendalikan eksperimen MDS [9–11]. OPLS-Force-Field telah digunakan untuk larian simulasi.

Penyediaan struktur protein dilakukan oleh algoritma System-Builder, di mana ia dibungkus di dalam kotak air ortorombik (20 Å3 ) menggunakan model air TIP3P bersama-sama dengan Na tambah, dan ion Cl−, {{ 16}}.15 M bagi setiap daripada mereka. Kemudian, struktur model yang dioptimumkan telah tertakluk kepada keseimbangan awal selama 10 ns. Struktur ligan telah diparameterkan secara automatik semasa langkah penyediaan struktur mengikut Medan Kekuatan OPLS. Protein yang mengandungi logam seperti MMP yang melibatkan histidine-Zn ditambah 2 kompleks di tapak berkesan harus diparameterkan semasa langkah pembentukan protein. Untuk meneruskan, keadaan hetero harus disediakan untuk atom hetero seperti Zn (Jana Negeri Hetero). Fungsi ini adalah sebahagian daripada wizard Pembentukan Protein maestro. Langkah ini akan memudahkan pembangunan keadaan hetero yang betul atau keadaan kovalen koordinat, untuk heteroatom (iaitu, Zn tambah 2) dalam rangkaian dengan protein supaya medan daya seperti OPLS dapat memerhatikan atom zink dengan cepat. Untuk pengeluaran semula yang dilakukan oleh perisian Dinamik Molekul Nano-skala (NAMD 3.0) [12], topologi dan parameter struktur model ditentukan oleh platform dalam talian Ligand Reader dan Modeler. Daya Tcl harmonik digunakan untuk menahan Zn tambah 2 di tempatnya.

Pengiraan tenaga bebas mengikat (∆Gbinding) telah dilakukan seperti yang diterangkan sebelum ini oleh Alhadrami et al. 2021 [6]. ∆Pengisaran dilakukan menggunakan prosedur gangguan tenaga bebas (FEP) [12], yang diperincikan dalam penerbitan Kim et al. Secara ringkasnya, teknik ini mengira tenaga boleh diakses ∆Gbinding yang diperlukan menggunakan persamaan ∆Gbinding=∆GComplex − ∆GLigand. Nilai setiap ∆Pengisaran dikira menggunakan program NAMD dalam eksperimen berasingan.

Semua fail input boleh disediakan melalui laman web CharmmGUI. Fail tersebut kemudiannya digunakan untuk menghasilkan pengiraan ∆Gbinding yang dirancang menggunakan protokol FEP dalam NAMD. Keseimbangan kemudiannya ditetapkan dalam NPT (300 K, 1 atm, Langevin-Piston-Pressure "Complex"-"Ligand") dalam kewujudan model air TIP3P. Kemudian, simulasi FEP 10 ns telah dihasilkan untuk setiap struktur, dan 5 ns terakhir jumlah tenaga yang ada telah dikira untuk kadar tenaga bebas siap [12]. Akhirnya, pose yang mengikat telah dijangka dan dinilai dengan menggunakan program VMD [13].

2.7. In Vitro Assay of Hyaluronidase Activity

Aktiviti perencatan hyaluronidase telah dibentuk mengikut prosedur yang telah ditetapkan sebelumnya yang diberikan kepada Chaiyana et al. 2019 [14]. Kesan perencatan terhadap aktiviti hyaluronidase dianggarkan daripada persamaan berikut: perencatan hyaluronidase ( peratus )=(1 − A/B) × 100, di mana A dan B ialah watak asid hyaluronik selepas rawatan dalam kewujudan atau kekurangan sampel, secara berasingan. Sebagai kawalan positif, 6-asid O-palmitoyl-Lascorbic telah digunakan. Percubaan dilakukan dalam tiga kali ganda.

2.8. In Vitro Assay of Xanthine Oxidase Activity

Potensi perencatan Xanthine oxidase (XO) telah dijalankan mengikut kaedah yang diterangkan sebelum ini [15]. Warna yang dihasilkan kerana pelepasan hidrogen peroksida semasa proses pengoksidaan XO diukur pada 570 nm menggunakan pembaca plat EPOCH™ "MICROPLATE READER (BIOTEK)". Empat puluh empat mikroliter penimbal xanthine oxidase dicampur dengan 2 µL larutan substrat xanthine dan 2 µL XO. L-mimosin digunakan sebagai kawalan positif. Eksperimen ini dilakukan dalam tiga kali ganda.

2.9. In Vitro Assay of Tyrosinase Activity

Aktiviti perencatan tyrosinase setiap flavonoid diperhatikan dengan menggunakan proses DOPAchrome yang mematuhi skema Momtaz et al. 2008 [16], yang telah diubah suai daripada Nerya et al. 2003 [17], dan Curto et al. 1999 [18]. Aktiviti perencatan tyrosinase diukur daripada persamaan berikut: aktiviti perencatan ( peratus )=(1 − A/B) × 100, (9) di mana A dan B ialah penyerapan campuran dalam kehadiran atau ketiadaan uji flavonoid, masing-masing. Setiap percubaan dilakukan dalam tiga kali ganda.

3. Keputusan dan perbincangan

3.1. Penyiasatan Fitokimia Biji C. reticulata

Menggunakan UV, 1H dan DEPT-Q NMR, selain perbandingan dengan literatur dan menggunakan beberapa sampel tulen, sebatian yang diketahui kaempferol 1 [19], kaempferol-40 -O- -Dglucopyranoside 2 [19], kaempferol -7-O- -D-glucopyranoside 3 [19], 2-hydroxy genistein 4 [19], hesperetin 5 [19], 3000 (1000-O- - D-glucopyranosyl)-sukrosa 6 [20], 6(1000 -O- -Dfructofuranosy)-30 (1"-O- -D-glucopyranosyl)-sukrosa 7 [20 ], 1-O-elaidoyl-glycerol 8 [21], 1- O-oleoyl-2-palmitoyl-glycerol 9 [22], 1-O-oleoyl-glycerol 10 [ 21], (E)-3-((4-metil heptil oksi) karbonil)asid akrilik 11 [23], (E)-3-((6-metil nonyl oksi) asid karbonil)akrilik 12 [23] dan -sitosterol 13 [24] (Rajah 1) telah dikenal pasti daripada ekstrak etanol mentah biji C. reticulata. Semua sebatian 11 dan 12 yang dikenal pasti telah diasingkan di sini buat kali pertama daripada genus Citrus ( Rajah 1 dan S1–S28) Perlu diingat bahawa, tidak seperti flavonoid dan flavon yang diedarkan secara meluas dalam bahagian udara C. reticulata, termasuk buah-buahan, flavonol nampaknya merupakan jenis flavonoid yang dominan dalam benih.

3.2. Dalam Siasatan Siliko

Untuk mencirikan aktiviti biologi sebatian terpencil, kami menundukkannya kepada satu siri analisis berasaskan dalam siliko. Pertama, kami menumpukan pada flavonoid terpencil (1-5) untuk langkah saringan maya awal kami kerana flavonoid adalah metabolit sekunder tumbuhan bioaktif yang terkenal. Selain itu, sebatian terpencil yang tinggal (6–13) adalah metabolit primer biasa yang mungkin tidak mempunyai keberkesanan terapeutik.

Struktur flavonoid 1-5 tertakluk kepada pemeriksaan maya berasaskan dok terhadap hampir semua protein yang dihoskan dalam PDB. Platform dalam talian, iaitu idTarget telah digunakan untuk tugasan saringan maya awal ini [8]. Markah yang dipulihkan telah diambil semula sebagai senarai daripada nilai negatif terbesar kepada yang terkecil. Kami menetapkan skor pertalian konklusif sebanyak -10 kcal/mol sebagai nilai potong untuk memilih sasaran yang baik untuk setiap flavonoid terpencil (1-5). Beberapa sasaran molekul yang menarik didapati mungkin sasaran yang baik untuk sebatian berkaitan ini, termasuk kinase protein dan sintase (Jadual 1).

Menariknya, tiga sasaran molekul biasa dilaporkan antara enzim flavonoid, hyaluronidase, xanthine oxidase dan tyrosinase ini. Enzim-enzim ini berkaitan dengan mengekalkan kulit yang sihat [25-30], dan oleh itu langkah saringan maya awal diduga telah mengenal pasti flavonoid ini sebagai agen penggalak penjagaan kulit yang berkemungkinan.

3.3. Simulasi Dinamik Molekul dan Pengiraan Tenaga Bebas Pengikat Mutlak

Untuk menyokong lagi langkah penyaringan berasaskan dok awal, kami menganggarkan tenaga bebas mengikat mutlak (∆Gbinding) sebatian 1–5 dengan enzim hyaluronidase, xanthine oxidase, dan tyrosinase menggunakan kaedah yang bergantung kepada MDS, iaitu kaedah gangguan tenaga bebas ( FEP) [26,31].

Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 2, hanya sebatian 2, 3, dan 5 yang dapat mencapai pertalian tertinggi terhadap enzim hyaluronidase, xanthine oxidase, dan tyrosinase dengan ∆Nilai pengisaran antara -8.1 hingga −9.9 kcal/mol. Sebatian selebihnya mendapat nilai ∆Gbinding lebih tinggi daripada −6 kcal/mol.

Eksperimen 50 ns MDS selanjutnya dilakukan untuk menyiasat interaksi dan kestabilan pengikatan sebatian 2, 3, dan 5 dengan enzim hyaluronidase, xanthine oxidase, dan tyrosinase. Seperti yang digambarkan dalam Rajah 2, kedua-dua kompaun 3 dan ligan terhablur bersama mencapai kestabilan pengikatan yang sama di dalam tapak pengikatan enzim di seluruh MDS dengan RMSD ~2.8 Å daripada pose dok awal. Kompaun 2 0 s RMSD juga seperti kompaun 3 sehingga 28.7 ns apabila ia mula menyimpang lebih tinggi sedikit daripada kompaun 3 dan ligan terhablur bersama untuk mencapai purata RMSD 3.8 Å sepanjang MDS. Gambar terakhir yang diperoleh daripada MDS sebatian 2 dan 3 serta ligan terhablur menunjukkan bahawa TYR-75, ASP-129 dan GLU-131 ialah sisa asid amino berinteraksi biasa melalui H- ikatan.

Mengenai xanthine oxidase, sebatian 3 mencapai pengikatan yang stabil di dalam tapak aktifnya sepanjang MDS, merekodkan purata RMSD sebanyak 2.6 Å yang menumpu kepada perencat penghabluran bersama (RMSD ~2.4 Å). Pengikatan sebatian 3 yang stabil sedemikian jelas disebabkan oleh rangkaian ikatan-H yang diwujudkan dengan LYS-771, PHE-798, GLU-802, SER-876, ARG{{ 12}}, PHE-911, ARG-912 dan THR-1010 (Rajah 3).

Akhirnya, sebatian 5 juga stabil di dalam tapak aktif tyrosinase sepanjang 50 ns MDS dengan nilai RMSD purata 4.9 Å, yang lebih tinggi daripada perencat penghabluran bersama (RMSD ~3.8 Å). Seperti yang ditunjukkan dalam petikan terbitan MDS yang terakhir, kompaun 5 dapat berinteraksi dengan dua ion Zn2 ​​tambah sama dengan perencat penghabluran bersama. Selain itu, ia telah distabilkan dengan beberapa ikatan H dengan LYS-198, GLY-209, TYR-362, ARG-374 dan THR-391 (Rajah 4 ).

【Untuk maklumat lanjut: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】