Profil Asid Amino Dan Sifat Biologi Kepompong Sutera Yang Terjejas Oleh Pengekstrakan Air Dan Enzim Bahagian 2

Sila hubungioscar.xiao@wecistanche.comuntuk maklumat lanjut

Bahawa SPE mempunyai keupayaan aktiviti pembentukan anti-AGEs boleh didapati dalam kedua-dua kaedah pengekstrakan (air dan pengekstrakan enzim), dengan perencatan 24.33 dan 26.83 peratus, masing-masing (dengan perbezaan yang ketara antara kaedah (p<0.05). however,="" enzymatic="" extraction="" provided="" better="" inhibition="" than="" water="" extraction="" (figure="" 4).="" the="" anti-glycation="" capacity="" of="" numerous="" medicinal="" herbs="" and="" dietary="" plants="" was="" comparable,="" or="" even="" stronger="" than="" that="" of="" aminoguanidine="" [38].="" several="" studies="" have="" demonstrated="" that="" the="" anti-glycation="" activity="" correlates="" significantly="" with="" the="" phenolic="" content="" of="" tested="" plant="" extracts="" [39,="" a0].="" polyphenols="" are="" the="" most="" abundant="" dietary="" antioxidants,="" being="" common="" constituents="" of="" fruits,="" vegetables,="" cereals,="" seeds,="" nuts,="" chocolate,="" and="" beverages,="" such="" as="" coffee,="" tea,="" and="" wine.="" they="" have="" been="" shown="" to="" lead="" to="" many="" health="" benefits,="" such="" as="" the="" prevention="" of="" cancer="" [41],="" neurodegenerative="" diseases="" [42,="" cardiovascular="" diseases,="" and="" diabetes="" [43].="" therefore,="" spe(water="" or="" enzyme="" extracts)="" with="" total="" flavonoid="" contents="" of="" 49.64="" and="" 52.02="" mg="" re/g="" dw,="" respectively,="" thus,="" would="" be="" capable="" of="" causing="" inhibitory="" activity="" against="" the="" enzymes="" a-amylase,="" α-glucosidase,="" and="" anti-ages="" formation="">

Sila klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut

Beberapa penyiasatan telah menemui korelasi yang signifikan antara proteinantioksidan hidrolisisaktiviti dan residu asid amino tertentu [44]. Contohnya, Zainol et al. [45]mendapati bahawa asid amino aromatik (seperti tirosin dan fenilalanin) boleh membantu menghilangkan radikal bebas dengan berfungsi sebagai penderma elektron yang kuat, manakala asid amino hidrofobik (seperti alanin, leucine, dan prolin) juga boleh membantu menghilangkan radikal bebas. Peptida yang kaya dengan metionin, leucine, histidine, alanin, dan valine mempunyaiantioksidanaktiviti [46]. Hasil daripada kuantiti yang tinggi residu asid amino ini dengan aktiviti antioksidan yang dipertingkatkan dalamhidrolisisyang dihasilkan oleh alcalde, hidrolisis harus mempunyai potensi antioksidan yang sangat baik.

3. Bahan dan Kaedah

3.1. Koko Sutera00ns

Kepompong kuning Thai-sutera (terikan Nangtui) berasal dari Daerah Phutthaisong Thailand, di Wilayah Buriram.

3.2. Bahan Kimia dan Reagen

Piawaian asid amino penting dan tidak penting datang daripada Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA). Sigma-Aldrich menyediakan reagen Folin-Ciocalteu,2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH),2,4,6-tripiridyl-s-triazine (TPTZ),2,2' -dan-bis (3-thylbenzthiazoline-6-asid sulfonik)(ABTS), -amilase(daripada Aspergillusoryzae), -Glucosidase(daripada Bacillus stearothermophilus),p-nitrofenil—D-glucopyranoside (PNP-G), albumin serum lembu (BSA), natrium azida, dan protease (daripada Bacillus licheniformis). Reagen untuk HPLC datang dari Merck, Darmstadt, Jerman.

3.3. Kaedah Pengekstrakan

(1) Rawatan kawalan adalah rawatan Sangwong et al. [17]. Cebisan kecil kepompong sutera (dua gram) direndam dalam 200 mL air suling selama dua jam (tanpa pemanasan) dan disentrifugasi selama sepuluh minit pada 5000×g (Universal 320/320R, Hettich, Boucherville, QC, Kanada). Ekstrak ditapis melalui kertas Whatman No.1 di bawah vakum untuk mengeluarkan bahan tidak larut. Ekstrak protein sutera (SPE) ialah produk akhir, disimpan pada-18 darjah dalam botol ambar.

(2) Kaedah pengekstrakan air adalah kaedah Bungthong dan Siriamornpun [10]. Cebisan kecil kepompong sutera (dua gram) diekstrak pada suhu 100 darjah selama 6 jam dalam 200 mL air suling. Proses sentrifugasi, penapisan, penyimpanan SPE dilakukan dengan cara yang sama seperti rawatan kawalan.

Cistanche boleh meningkatkan imuniti

(3) Rawatan enzim adalah rawatan Vaithanomsat danPunyasawon[47]. Potongan kepompong kecil yang direndam dalam air suling semalaman pada 10 darjah telah dirawat (kepompong: nisbah air 1:100 dengan Alcalase daripada Novozvmes 0.5 peratus (v/o)(pH diselaraskan kepada 8.0 ) dan diinkubasi (50 darjah ) selama 120 minit. Untuk menghentikan tindakan enzim, campuran dipanaskan hingga 100 darjah selama dua puluh minit dan kemudian disentrifugasi(6000×g selama 15 min). Proses penapisan dan penyimpanan SPE telah dilakukan dalam keadaan yang sama. cara seperti untuk rawatan kawalan.

3.4. Struktur Mikro Gentian Sutera

Mikroskop cahaya (Carl Zeiss Inc., Toronto, ON, Kanada) digunakan untuk memeriksa slaid bahagian gentian sutera [48]. Program Zeiss xioCamlCc3 telah digunakan untuk mendigitalkan fail. Mikroskop elektron pengimbasan (SEM; TM4000 plus, Hitachi, Jepun) yang dipasang dengan perisian TM 4000 plus telah digunakan untuk memeriksa penambahbaikan struktur. Sebelum analisis SEM dalam mod vakum, sampel disalut dengan emas.

3.5. Penentuan Protein

Untuk menentukan kandungan protein, kami menggunakan ujian Bradford [49]. SPE(0.5 mL)tambah larutan Bradford(1.0 mL) telah diinkubasi selama 5 minit. Albumin serum lembu (BSA) digunakan sebagai standard. Penyerapan ditentukan pada 595 nm dengan spektrofotometer yang boleh dilihat (DR 2700TM Portable Spectrophotometer, Hach, Loveland, CO, USA).

3.6. Kandungan Asid Amino oleh LCMS/MS

Kandungan asid amino ditentukan mengikut Chumroenphat et al. [50]. Kami menggunakan spektrometer jisim triple-quadrupole LC-MS-MS (LCMS-8030, Shimadzu, Kyoto, Jepun) dalam mod pengionan elektrospray (ESI).

3.7. Jumlah Kandungan Fenolik (TPC)

Jumlah kandungan fenolik ditentukan mengikut Kubota dan Siriamornpun [51]. Kami menggunakan spektrofotometer(UV-1700, Shimadzu, Tokyo, Jepun) untuk mengukur penyerapan sampel larutan pada 725 nm. TPC diukur dalam miligram bersamaan asid gallic (GAE) setiap gram berat kering (mg GAE/g DW). 3.8. JumlahFlavonoidKandungan (TFC) Jumlahflavonoidkandungan ditentukan mengikut Kubota dan Siriamorn-pun [51. Spektrofotometer (UV-1700, Shimadzu, Tokyo, Jepun) telah digunakan untuk mengira penyerapan pada 510 nm. Keputusan dinyatakan dalam miligram setara rutin (RE) setiap gram berat kering (mg RE/g DW).

3.9.Aktiviti Penghapusan Radikal DPPH

Aktiviti pemusnahan radikal DPPH ditentukan mengikut Brand-Williams et al. [52]. Spektrofotometer(UV-1700, Shimadzu, Tokyo, Jepun) digunakan untuk menentukan penyerapan pada 517 nm. Perencatan DPPH dikira menggunakan persamaan berikut:(1) Perencatan ( peratus )=[(Abs. control-Abs. sample)/Abs. kawalan]×100, di mana Abs. sampel=penyerapan sampel dan Abs.control= penyerapan kawalan. 3.10. Aktiviti Antioksidan oleh ABTS Assay. Untuk menilai keputusan penghapusan radikal bebas, kation radikal ABTS ditentukan mengikut Re et al. [53]. Serapan pada 734 nm diukur menggunakan spektrofotometer(UV-1700, Shimadzu, Tokyo, Jepun) dan 100 peratus metanol digunakan sebagai kawalan. Ujian ABTS dikira menggunakan Persamaan (1).

3.11. Ujian Kuasa Pengurangan Ferrik/Antioksidan (FRAP)

Ujian FRAP ditentukan mengikut Benzie dan Strain [54]. Penyerapan pada 593 nm diukur menggunakan spektrofotometer(UV-1700, Shimadzu, Tokyo, Jepun). Ujian FRAP dinyatakan dalam miligram FeSO4 per gram berat kering (mg FeSO4/g DW).

3.12. Aktiviti Perencatan terhadap Enzim a-Amilase

Kaedah Xiao et al. [55] digunakan untuk menguji aktiviti perencatan -amilase, menggunakan kanji kentang sebagai substrat. Pembaca plat mikro (Asys UVM 340, Biochrom, Cambridge, UK) digunakan pada 650 nm. Acarbose adalah kawalan. Peratus perencatan -amilase ditentukan mengikut berikut, Persamaan (1). 3.13. Aktiviti Perencatan terhadap Enzim a-Glucosidase. Perencatan -glucosidase ditentukan mengikut Wang dan Zhao [56]. Kami menggunakan pembaca plat mikro (Asys UVM340, Biochrom, Cambridge, UK) pada 405 nm. Peratus perencatan o-glukosidase ditentukan menggunakan Persamaan(1).

3.14.Penilaian Aktiviti Pembentukan Anti-AGEs

Kapasiti perencatan pembentukan AGEs diukur dengan kaedah Vinson dan Howard [57]. Tahap AGE pendarfluor yang terbentuk ditentukan dengan spektrometer pendarfluor (F-7100, Hitachi, Tokyo, Jepun): panjang gelombang pengujaan,330 nm; panjang gelombang pancaran, 410 nm. Peratusan pembentukan anti-AGEs adalah berdasarkan keamatan pendarfluor (FI) yang terhasil oleh persamaan ini: (2) peratus Perencatan =[1-(FIsample-Flsample blank)/(control-FIcontrolblank)]×100 , di mana FIsample= intensiti pendarfluor sampel, sampel kosong=intensiti pendarfluorsampel kosong, FIcontrol=pendarfluorkeamatan kawalan dan kawalan kosong=keamatan pendarfluor-sen bagi kawalan sampel kosong.

3.15. Analisis statistik

Program SPSS berfungsi untuk mentafsir keputusan (IBM SPSS, Chicago, IL. USA), sebagai purata tiga ulangan sisihan piawai (SD). Analisis varians sehala (ANOVA) telah digunakan dengan ukuran perbezaan ketara terkecil (LSD), dengan aras keertian p 0.05.

4. Kesimpulan

Kajian kami telah menunjukkan bahawa pengekstrakan enzimatik kepompong sutera memberikan nilai kandungan protein yang lebih tinggi, asid amino, jumlah kandungan fenolik (TPC), jumlah kandungan flavonoid (TFC), aktiviti penghapusan radikal DPPH, ujian kapasiti penghapusan radikal ABTS, ujian FRAP, ant-c-amilase, anti- -glukosidase dan ant-glycation jika dibandingkan dengan pengekstrakan air. Batasan kaedah pengekstrakan yang dipilih dalam kajian ini ialah enam jam pengekstrakan air menghasilkan masa yang lama dan penggunaan tenaga yang lebih. Walau bagaimanapun, perahan air memberikan rasa yang lebih diingini jika digunakan sebagai minuman berfungsi yang dimaksudkan (kurang pahit, lebih manis, dan umami). Dalam memilih kaedah pengekstrakan yang diutamakan, prosedur berasaskan enzim mempunyai potensi yang tinggi untuk semua aspek rawatan protein sutera, tetapi terdapat kelemahan di mana enzim mahal dan rawatan enzim menghasilkan rasa pahit. Sebagai alternatif, rawatan enzim mungkin lebih sesuai jika digunakan sebagai nutraseutikal pekat dalam bentuk lain, seperti terkapsul, kosmetik, dan nutraseutikal, dan bukannya untuk penggunaan langsung, contohnya, sebagai minuman.

Sumbangan Pengarang:Pengkonsepan, TS; Metodologi, CBdan SS; Pengesahan, CBdan SS.; Analisis Formal, CB dan SS; Penyiasatan, CBdan SS; Penulisan—Penyediaan Draf Asal, CB dan SS; Penulisan—Semakan dan Penyuntingan, CBdan CW; Visualisasi, CB.dan SS. Semua pengarang telah membaca dan bersetuju dengan versi manuskrip yang diterbitkan.

Pembiayaan:Penyelidikan ini dibiayai oleh Penyelidik dan Penyelidik untuk Industri(RRI) di bawah seliaan Penyelidikan dan Inovasi Sains Thailand (TSRI dan Siam Natural Products Co., Ltd. Penyata Lembaga Kajian Institusi: Tidak berkenaan.Kenyataan Persetujuan Termaklum:Tidak berkaitan.

Penyata Ketersediaan Data:Semua data terkandung dalam artikel.

Penghargaan:Pusat Peralatan Makmal Universiti Mahasarakham dan Fakulti Teknologi, Universiti Mahasarakham, Thailand, atas kerjasama dan bantuan saintifik yang disediakan. Konflik Kepentingan: Pengarang mengisytiharkan tiada konflik kepentingan. Ketersediaan Sampel: Tidak tersedia.

Artikel ini diekstrak daripada Molecules 2021, 26, 3455. https://doi.org/10.3390/molecules26113455 https://www.mdpi.com/journal/molecules