Pengasingan Berpandukan Aktiviti Komposisi Fenolik Dari Dinding Anneslea Fragrans. Dan Kesan Sitoprotektifnya Terhadap Tekanan Oksidatif Terinduksi Hidrogen Peroksida dalam Sel HepG2 Bahagian 2

Sila hubungioscar.xiao@wecistanche.comuntuk maklumat lanjut

2.7. Kesan Perencatan pada Penjanaan ROS Intraselular

Tekanan oksidatif adalah sejenis ketidakseimbangan antara pengoksidaan dan antioksida dalam badan [28]. Pengumpulan ROS yang berlebihan boleh menyebabkan tekanan oksidatif yang boleh menyebabkan kerosakan pada sel dan tisu seperti lipid, membran, dan DNA [29]. Antioksidan termasuk polifenol dan flavonoid boleh membantu tubuh mengurangkan kerosakan yang disebabkan oleh ROS. Secara amnya, H, O, digunakan secara meluas untuk mendorong pengeluaran bercelaru ROS intraselular dan menjejaskan pertahanan antioksidan sel [30]. Dalam kajian kami sekarang, H2O2 telah dipilih untuk mendorong pengumpulan abnormal ROS intraselular dan menjejaskan pertahanan antioksidan sel. Untuk menilai kesan perencatan pada penjanaan ROS intraselular dalam sel HepG2 yang disebabkan oleh H, O2-, tahap ROS intraselular telah diuji oleh sitometri aliran. Secara ringkasnya, sel HepG2 telah dikultur dalam 6-plat perigi(1 × 10 darjah sel/telaga). Selepas pengeraman selama 24 jam daripada 50 ug/ml ekstrak berbeza atau 8 ug/mL Vc (kumpulan positif), semua kumpulan kecuali bagi kumpulan kawalan telah diinduksi oleh H O, selama 6 jam. Tahap ROS intrasel bagi setiap sebatian telah diuji (Rajah 3). Nisbah penjanaan ROS meningkat dengan ketara kepada 215.64±9.80 peratus dalam H2O,-kumpulan yang dirawat berbanding dengan kumpulan kawalan (100 peratus). Berbanding dengan kumpulan yang dirawat H, O,, sebatian 2,5, dan 6 sangat menekan pengeluaran ROS intraselular (p<0.05), and="" their="" inhibitory="" effect="" was="" equal="" to="" the="" vc="" group="" (figure="" 3).="" many="" phenolics="" have="" been="" proven="" to="" have="" a="" protective="" effect="" against="" intracellular="" ros="" by="" h2o2="" induction[31].="" additionally,="" compound="" 6="" displayed="" the="" strongest="" suppressive="" effect="" on="" intracellular="" ros="" production,="" which="" suggests="" that="" flavonoid="" compounds="" play="" a="" crucial="" role="" in="" inhibiting="" intracellular="" ros="">

2.8. Kesan Sitoprotektif Terhadap H2O2-Apoptosis Sel Terinduksi

Apoptosis ialah fenomena biologi asas sel, yang memainkan peranan penting dalam mekanisme pengawalseliaan percambahan, pertumbuhan, dan mutasi sel, dan kestabilan persekitaran dalaman. Apoptosis, berbeza daripada nekrosis, adalah sejenis kematian sel khas. Gangguan proses apoptosis mempunyai kesan buruk pada tubuh dan menyebabkan banyak penyakit [32]. H2O2, sebagai molekul isyarat penting, mengawal proses percambahan sel, pertumbuhan, dan apoptosis [5]. Kajian ini mengukur apoptosis sel HepG2 yang disebabkan oleh H, O, dan menilai kesan sitoprotektif sebatian 2, 5, dan 6. Selepas merawat sel HepG2 dengan 1.0 mM H2O2, nisbah apoptosis telah ditambah dengan ketara ( 57.20±1.97 peratus ), berbanding kumpulan kawalan (9.10±0.62 peratus ,p<0.05)(figure 4).="" the="" ratios="" of="" apoptotic="" cells="" in="" the="" treated="" groups="" of="" compounds="" 2,="" 5,="" and="" 6="" significantly="" decreased="" compared="" with="" the="" h2o2-treated="" group="" (model="" group,=""><0.05)(figure 4).="" moreover,="" compound="" 6="" had="" significant="" efficiency="" in="" protecting="" hepa-2="" cells="" from="" h2o2="" toxicity,="" and="" the="" cell="" apoptosis="" ratio="" of="" 6(10.56±1.15%)was="" lower="" than="" that="" of="" the="" vc="" group="" (positive="" control),="" which="" was="" equal="" to="" that="" of="" the="" control="" group(figure="" 4).="" meanwhile,="" compounds="" 2="" and="" 5="" showed="" a="" moderate="" cytoprotective="" effect="" with="" cell="" apoptosis="" ratios="" of="" 2(26.76±2.60%)="" and="" 5(27.64±0.83%).="" the="" differences="" in="" antioxidant="" capacity="" may="" be="" attributed="" to="" the="" number="" of="" phenolic="" hydroxyl="" moieties="" and="" the="" link="">

3. Bahan dan Kaedah

3.1. Bahan Kimia dan Reagen

Metanol, asetonitril dan asid formik untuk kromatografi cecair berprestasi tinggi (HPLC) adalah gred HPLC dan dibeli dari Merck (Darmstadt, Jerman). Pelarut untuk pengekstrakan sampel termasuk etanol, diklorometana, dan n-butanol adalah gred analitik. Air ternyahion telah disucikan menggunakan sistem air ultratulen Milli-Q (Millipore, Bedford, Massachusetts, MA, Amerika Syarikat) dan digunakan dalam semua eksperimen. Sebatian standard fenolik asid gallik, rutin, Trolox dan vitamin C telah dibeli daripada Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd.(Chengdu, China). Methylthiazol-2-yl-25-diphenyl tetrazolium bromide (MTT), reagen Folin-Ciocalteu, 2,2'-and-bis(3-ethylbenzene-thiazoline-6-asid sulfonic)( ABTS),2,2-difenil-1-picrylhydrazylradical (DPPH), 1,3,5-tri(2-pyridyl)-2,4,{{23 }}triazine (TPTZ),2',7'-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA), dan FeSO4-7HOdibeli daripada Sigma-Aldrich (Shanghai, China). Spektrum NMR diperoleh menggunakan spektrometer Bruker AV-400 dan/atau DRX-500. Spektrum ESIMS telah direkodkan pada spektrometer An Agilent 1290 UPLC/6540 Q-TOF.

Sila klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut

3.2. Penyediaan Sampel

Anneslea fragrans Dinding. daun dikumpulkan dari bandar Lincang di China pada 2 Julai020. Daun dikeringkan di dalam bilik berlorek sehingga berat tetap dan kemudian diserbukkan dengan pengisar elektrik. Pengekstrakan dan pecahan dilakukan sebagai kaedah kami yang dilaporkan sebelum ini dengan sedikit pengubahsuaian [33]. Sampel serbuk (10}0 g) dicampur dengan 1000 mL pelarut etanol akueus 80 peratus dan ultrasonik dalam mandi pembersihan ultrasonik pada 200 W tiga kali (0.5 jam setiap masa). Kemudian, buburan sonicated dikumpul dan diempar pada 1500×g selama 10 minit dengan Eppendorf centrifuge (TGL-20B, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, Shanghai, China). Supernatan gabungan itu dipekatkan pada 50 darjah oleh penyejat berputar (Hei-VAP, Heidolph, Jerman) dan selanjutnya dikeringkan oleh lyophilizer pengeringan vakum (Alpha 1-2 LD plus, Christ, Jerman). Ekstrak etanol mentah (CE, 30 g) digantung semula dengan air dan dibahagikan secara berurutan dengan pelarut diklorometana, etil asetat, dan n-butanol tiga kali. Selepas kepekatan dan liofilisasi, pecahan diklorometana (DF), pecahan etil asetat (EAF), pecahan n-butanol(BF), dan pecahan air sisa (RWF) seberat 3.2 g,6.3g,7.2 g, dan 8.2 g diperolehi. , masing-masing. Mengikut aktiviti antioksida bagi pecahan yang berbeza, BF telah dikromatografi pada tiang kaca(30 mm × 400 mm) yang dibungkus basah dengan 20 g(resin kering) resin terhidrat D101 terpilih. Isipadu katil (BV) resin adalah kira-kira 40 mL. Selepas mencapai ketepuan penjerapan, lajur itu mula-mula dibasuh dengan air suling dengan 4×BV dan kemudian dicairkan dengan air etanol(0:100,20:80,50:50,80:20,100:0,v/y, setiap 4× BV), untuk menghasilkan lima subfraksi (BF-A hingga E). Setiap bahagian larutan desorpsi ditumpukan kepada kekeringan di bawah vakum. CE, empat pecahan (DF, EAF, BF dan RWF) dan lima subfraksi (BF-A hingga E) telah disimpan dalam peti sejuk (-20 darjah ) untuk percubaan selanjutnya.

3.3. Pengasingan Berpandukan Bio Konstituen Aktif

Di bawah bimbingan ujian antioksidan dan analisis HPLC, pecahan antioksidatif dikromatografi selanjutnya untuk pengasingan sebatian tulen. Secara ringkas, BF telah tertakluk kepada lajur resin D101 terhidrat untuk menghasilkan lima subfraksi (BF-A hingga E). BF-C(1.5g) telah tertakluk kepada lajur gel silika, mengelusi dengan DCM/MeOH(15:1), dan kemudian diasingkan menggunakan TLC(DCM/MeOH, 10:1) sediaan untuk mendapatkan sebatian 6 (118 mg). ) dan 7(10 mg). BF-D(1.1 g) tertakluk kepada lajur gel silika(CHCl3/MeOH 10:1, 5:1) untuk memberikan sebatian 1(129 mg) dan 4(15 mg).BF-E(1.2 g) tertakluk kepada lajur gel silika (CHCl3/MeOH, 30:1, 10:1, 5:1) untuk menghasilkan sebatian 1(216 mg),2(135mg), dan campuran. Lajur gel silika (CHCl3/MeOH) telah ditulenkan ,12:1)untuk memperoleh sebatian 3 (19 mg) dan 5 (15 mg) (Rajah 5).

3.4.Penjelasan Struktur Sebatian 1-7

Mengikut aktiviti antioksidan pecahan yang berbeza, tiga subfraksi, BF-C hingga E telah diserahkan kepada kromatografi lajur. Dengan cara ini, pecahan berpandukan Bioaktiviti BF-C kepada E membawa kepada pengasingan tujuh sebatian fenolik individu. Strukturnya dikenal pasti sebagai confusoside(1)[34], vaccinifolin (2)[34],1-[4-( -D-glucopyranosyloxy)-2-hydroxyphenyl]-3- (4-hidroksi-3-methoxyphenyl)-1-propanon (3) [35], (S)-naringenin-7-O- -D-glucopyranoside (4)[ 22],2',3,4,4'-tetrahydroxydihydrochalcone(5)[26], (epi)-catechin (6)[26], dan cornoside (7)[36](Rajah 1B)dengan analisis 1D -NMR dan ESI-MS data dan perbandingan dengan sebatian yang dilaporkan sebelum ini dalam kesusasteraan. Antaranya, sebatian 3,4, dan 7 diasingkan daripada tumbuhan ini buat kali pertama.

Cistanche boleh meningkatkan imuniti

Confusoside (1). Formula molekul telah ditetapkan sebagai C21H24O, dan pemisahan memberikan 129 mg jarum kuning pucat. Data 'IH NMR (500 MHz, DMSO-d6) dan ESI-MS(m/z 421 [M tambah H]) adalah sama dengan kompaun yang dilaporkan sebelum ini dalam literatur [34]. Pengenalpastian itu disokong lagi oleh 13C NMR（125 MHz,DMSO-dg）∶δ204.4（s,C=O),163.5(s,C-2'),163.3(s,C -4'),155.5(s,C-4),132.6(d,C-6'),130.9(s,C-1),129.2(d, C -2, 6),115.0(d,C-3/C-5),114.4(s, C-1'),108.3(d, C{{45} }'),103.4(d,C-1"),99.6(d,C-3'),77.1(d, C-5"),76.4(d, C{{ 57}}"),73.1(d,C-2"),69.5(d, C4'),60.5(t,C-6'),39.8(t,C- ),28.9( t, C-6).

Vacciniifolin (2) diperolehi sebagai serbuk amorf kuning(153 mg) dan diberikan formula molekul C2H24O1o.'H NMR(500 MHz, DMSO-dg) dan ESI-MS (m/z 437 [M ditambah H]) data adalah sama dengan data yang dilaporkan sebelumnya [34]. Pengenalpastian itu disokong lagi oleh 13CNMR（125 MHz,DMSO-de）∶δ204.4（s, C=O）,163.5（s, C-2'),163.3 (s, C{ {21}}),145.0(s, C-3),143.3(s, C-4),132.6(d, C-6),131.7(s, C{{33 }}),118.9(d, C-6),115.8(d, C-2),115.4(d, C-5),114.4(s, C-1 '), 108.3(d, C-5'),103.4(d, C-1'),99.6(d,C-3'),77.1(d, C{{57 }}"),76.4(d,C-3'),73.1(d,C-2"),69.5(d,C-4'),60.5(t,C{ {69}}'),39.4(t,Ca),29.1(t, C-6).

{{0}}[4-( -D-Glucopyranosyloxy)-2-hydroxyphenyl]-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl){{8 }}propanon (3). Kompaun itu diperolehi sebagai jarum tidak berwarna(19mg), dan formula molekul ditetapkan sebagai C22H2O10.'H NMR(400 MHz, DMSO-d6) dan ESI-MS (m/z451 [M tambah H]* ) data bersetuju dengan literatur [35]. Pengenalpastian seterusnya disokong oleh 13CNMR（100 MHz,DMSO-d）∶δ204.5（s,C=O）,163.5（s,C-2'）,163.3（s,C{ {31}}'),147.4（s,C-3),144.6(s,C-4),132.6(d,C-6),131.6(s,C{{ 43}}),120.4(d,C-6),115.2 (d, C-5),114.5(s,C-1'), 112.6(d,C{{55 }}),108.3(d,C-5'), 103.3 (d,C-1"),99.5 (d, C-3'),77.0(d,C{{ 67}}'),76.3(d, C-3"), 73.0(d,C-2"),69.5(d,C-4'),60.5(t,C -6'),55.5(q,C-OCH3),39.5(t, C- ),29.4(t,C-6).

(S)-Naringenin-7-O- -D-glucopyranoside (4)mempunyai formula molekul C21H2.O10, yang diperolehi sebagai 15 mg serbuk putih. IH NMR (500 MHz, DMSO-dg)dan data ESI-MS (m/z 435 [M tambah H] tambah )adalah bersetuju dengan kerja sebelumnya[22]. Pengenalpastian seterusnya disokong oleh 13C NMR（125 MHz,DMSO-d）∶δ197.2（s, C-4）,165.3（s, C-7）,165.2 (s, C{{25 }}), 162.9(s, C-9), 157.9(s, C-4'),128.6(s, C-1'), 128.4(d, C{{37 }}',6'),115.2 (d, C-3'/C-5'),1{{110}}3.2 (s,C-10 ),99.6(d,C-1'),96.5(d,C-6),95.4(d,C-8),78.7(d,C-2) ,77.0(h, C{{6{{240}}}}"),76.3 (d,C-3'),73.0(d,C{{ 66}}"), 69.5 (d,C-4'),60.5(t,C-6'),42.0(t,C-3). 2'3,4,A'-Tetrahydroxydihydrochalcone (5) memiliki formula molekul sebagai C15H4O5 dan diasingkan (15 mg) sebagai serbuk putih.'H NMR(400 MHz, DMSO-dg)dan ESI-MS (m/z 275 [ M tambah H] tambah) data adalah konsisten dengan yang dilaporkan dalam kesusasteraan [26]. Pengenalpastian itu disokong lagi oleh 13C NMR（125 MHz, DMSO-d6）∶δ203.9 （s, C=O）,164.7(s,C-2'),164.2(s,C -4'),144.9(s, C-3),143.3(s, C-4),133.0(d,C-6),131.8(s,C{ {114}}),118.9 (d,C-6),115.7(d,C-2),115.4(d,C-5),112.5 (s,C{{126 }}),108.2(d,C-5'),102.4(d,C-3'),39.5(t, C-a2),29.2(t, CB). (Epi)-catechin(6) telah diasingkan sebagai serbuk putih(118 mg) dan membentuk formula molekul sebagai CHO4.1H NMR (400 MHz, DMSO-dg) dan ESI-MS (m/z 291 [M tambah H] tambah )data bersetuju dengan baik dengan yang dilaporkan dalam literatur [26]. Pengenalpastian itu disokong lagi oleh 13C NMR （125 MHz,DMSO-d6）∶δ156.4（s,C-7）,156.1（s, C-5）,155.3（s,C{{162} }}）,144.8(s,C-3'),144.8(s,C-4'),130.5(s,C-1'),118.4(d,C{{ 174}}'),115.0(d,C-5'),114.4(d,C{180}}'), 99.0(s,C-10),95.1(d,C{ {186}}),93.8(d, C-8),80.9(d, C-2),66.2 (d,C-3),27.8(t, C{{198} }}). Cornoside (7) diperolehi sebagai pepejal amorfus (10mg) dan menentukan formula molekul sebagai C1H20O8.'H NMR (500 MHz,DMSO-dg)dan ESI-MS (m/z317 [M tambah H] tambah )data sepadan dengan data yang diterbitkan [36]. Pengenalpastian itu disokong lagi oleh 13CNMR（100 MHz,DMSO-dg）∶δ185.3（s, C-4),153.3（d,C-2）,153.2 （d,C{{2200 }}）,126.4（d, C-3）,126.4(d,C-5),102.8(d,C-1'),76.8(d,C{{232} }'),76.6(d,C-3'),73.3(d,C-2'),70.0(d,C-4),67.3(s, C{{244 }}), 63.8(t, C-8), 61.0(t, C-6'), 39.7(t, C-7).

3.5.Penentuan Jumlah Fenolik(TPC) dan Jumlah Kandungan Flavonoid(TFC)

TPC dan TFC bagi empat pecahan (DF, EAE, BF, dan RWF) dan lima subfraksi (BF-A hingga E) diukur mengikut kaedah kami yang dilaporkan sebelum ini [37]. Untuk TFC,1.0 mL setiap sampel (dengan kepekatan pada 1.0 mg/mL) yang dilarutkan dalam metanol dicampur dengan 0.5 mL reagen Folin-Ciocalteu dalam tiub emparan dan diinkubasi selama 1 minit. Kemudian, 20 peratus larutan Na2CO3 (m/o)(1.5 mL) dan air ternyahion (7.0 mL) telah ditambah ke dalam tiub dan disimpan pada 70 darjah dalam tab mandi air selama 10 minit. Selepas disejukkan ke suhu bilik, 200 uL larutan dipindahkan ke 96-plat mikro telaga dan penyerapan ditentukan pada 765 nm oleh pembaca plat mikro SpectraMax M5(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA).

Untuk TFC, 1.2 mL larutan sampel (dengan kepekatan pada 1.0mg/mL) dicampur dengan 0.3 mL NaNO, (5 peratus m/o) dan 3.8 mL daripada 7 0 peratus etanol akueus dan diinkubasi selama 8 minit.Seterusnya,0.3 mL 10 peratus akueus Al(NO3),4 mL4 peratus akueus NaOH dan 0.4 mL 70 peratus etanol akueus ditambah kepada campuran dan dibiarkan bertindak balas pada suhu bilik selama 30 minit. Kemudian, 200 μL larutan dipindahkan ke 96-plat mikro telaga, yang mana penyerapan diukur pada 510 nm dengan menggunakan pembaca plat mikro. TFC dan TPC dinyatakan sebagai miligram setara asid gallik (mg GAE/gextract) dan setara rutin setiap gram ekstrak (mg RE/g ekstrak).

3.6. Penentuan Aktiviti Antioksidan

Aktiviti antioksidan empat pecahan (DF, EAF, BF, dan RWF) dan lima subfraksi (BF-A hingga E) dinilai dalam gabungan DPPH dan ABTS radikal scavenging assays dan FRAP assay berdasarkan kaedah yang diterangkan dalam kajian terdahulu kami [33]. Untuk ujian DPPH, 50μL larutan sampel （50,100,200ug/mL）dicampur dengan 0.2 mL larutan DPPH (0.1 mmol/ L) dalam 96-plat perigi dan dibiarkan mengeram selama 30 minit. Penyerapan diukur pada 517 nm dengan pembaca plat mikro SpectraMax M5 (Peranti Molekul, Sunnyvale, CA, Amerika Syarikat). Untuk ABTS, 25 μL larutan sampel（50, 100, 200 ug/mL） telah ditambah kepada 0.2mLABTSsolution(7 mmol /L).Campuran disimpan dalam gelap selama6min, dan kemudian, penyerapan direkodkan pada 734 nm.Untuk FRAP, 20 μL larutan sampel（50,100,200ug/mL）dicampurkan dengan0.18 mL reagen FRAP (7 mmol/ L). Selepas mengeram selama 10 minit dalam gelap pada 37 darjah, penyerapan ditentukan pada 593 nm. Semua ujian dilakukan dalam tiga kali ganda. Keputusan nilai DPPH, ABTS, dan FRAP dinyatakan sebagai umol Trolox setara per gram ekstrak （μmol TE/g ekstrak）.

3.7.Analisis HPLC

BF dan sebatian {{0}} telah dianalisis pada sistem HPLC Agilent 1260 ditambah dengan pengesan tatasusunan diod. Sebelum analisis, larutan sampel yang baru disediakan telah ditapis melalui 0.45 um membran nilon. Pemisahan dilakukan menggunakan lajur Reprosil-Pur Basic C18 （5 μm, 4.6×250 mm, Jerman）dikekalkan pada 35 darjah . Isipadu suntikan ialah 5.0 μL, kadar aliran ialah 1.0 mL/min, dan panjang gelombang pengesanan ditetapkan pada 280 nm. Fasa mudah alih ialah air berasid dengan 0.1 peratus asid formik (fasa A) dan asetonitril (fasa B), elusi kecerunan linear dilakukan seperti berikut:0-3 min, 20 peratus B;3-10 min, 40 peratus B;10-15 min, 60 peratus B;15-20 min,100 peratus B.

3.8. Kultur Sel dan Daya Daya Sel

Kanser hati manusia sel HepG2 telah dibeli daripada Bank Sel Kunming (Kunming, China). Sel HepG2 ditanam dalam DME ditambah dengan 1 peratus penisilin-streptomisin dan 10 peratus serum lembu janin dalam suasana 5 peratus CO,/95 peratus udara pada 37 darjah . Apabila sel diinkubasi pada ketumpatan yang sesuai (kira-kira 80 peratus ), mereka dirawat dengan kawalan positif (Vc) dan sebatian terpencil untuk eksperimen selanjutnya.

Daya maju sel ditentukan oleh ujian MTT untuk menilai sitotoksisiti setiap sampel [29]. Sel-sel pada ketumpatan 1×104 sel setiap telaga telah disemai dalam plat telaga 96-dan dibenarkan mengeram selama 24 jam. Setiap sebatian (disediakan sebagai empat dos dari 50 hingga 200 ug/mL） telah ditambah kepada setiap telaga selama 20 jam. Kemudian, sel-sel dirawat menggunakan larutan MTT dengan kepekatan akhir 4 jam. Medium dengan MTT telah dikeluarkan, dan 200 μL DMSO telah ditambah untuk melarutkan formazan. Penyerapan direkodkan pada 570 nm oleh pembaca plat mikro. Keputusan menunjukkan bahawa setiap sebatian tidak toksik kepada sel HepG2 pada kepekatan yang diuji.

3.9. Perencatan Penjanaan ROS dalam H2O2-Sel HepG2 Teraruh

Sel HepG2 yang disebabkan oleh H, O, digunakan untuk menentukan kesan perencatan pada pengeluaran ROS [3]. Sel HepG2 (1.0×10 sel darjah setiap telaga) telah disemai dalam 6-plat perigi dan dikultur bersama dengan sebatian terpencil dengan 50 ug/mL dan Vc（8ug/ mL）. Selepas pengeraman selama 20 jam, medium telah dikeluarkan, dan 2 μL H, O, (0.5 mM) telah ditambah kepada setiap telaga selama 6 jam lagi. Pada akhir eksperimen, sel telah dilabelkan dengan 2 μL DCFH-DA（10 mM） dalam gelap pada 37 darjah selama 20 minit. Penyerapan direkodkan oleh sitometri aliran (Jambu batu mudah tetapi 6-2L, Millipore, Billerica, Massachusetts, MA, Amerika Syarikat).

3.10.Penentuan Apoptosis Sel

Kesan perlindungan setiap sebatian pada apoptosis teraruh H2O2-sel HepG2 ditentukan menggunakan kit apoptosis annexin manusia VFITC/PI [38]. Sel HepG2 telah dirawat terlebih dahulu dengan atau tanpa sebatian terpencil selama 48 jam. Selepas pengeraman, 100 μL penimbal pengikat telah ditambah kepada sel, dan sel bertindak balas dalam gelap dengan 10 μL annexin V-FITC selama 5 minit pada suhu bilik dan dengan 10 μL propidium iodide （PI） dalam mandi ais selama 5 min, berturut-turut. Apoptosis sel segera dianalisis menggunakan sitometri aliran.

3.11.Analisis Statistik

Semua eksperimen dilakukan dalam tiga kali ganda. Semua nilai dinyatakan sebagai min ± sisihan piawai (SD). Perbezaan dalam dan antara kumpulan dianalisis menggunakan analisis varians sehala (ANOVA) diikuti dengan ujian Tukey. Perbezaan itu dianggap signifikan secara statistik pada p<0.05. all="" analyses="" were="" performed="" using="" origin="" 2019b="" software="" (originlab,="" northampton,="" ma,="">

4. Kesimpulan

Dalam kajian ini, pecahan berbeza daripada daun A.fragrans telah dipecahkan, dan TPC dan TFC mereka dianalisis. Di bawah pengasingan berpandukan aktiviti antioksidan, sebatian 1-7, termasuk empat glikosida flavonoid(1-4) dan dua flavonoid (5 dan 6), telah diasingkan dan dikenal pasti daripada daun A. fragrans, yang mencadangkan bahawa spesies ini kaya. dalam sebatian flavonoid. Sebatian 2, 5, dan 6 menunjukkan aktiviti antioksidan yang ketara dalam DPPH, penghapusan radikal ABTS, dan ujian FRAP. Tambahan pula, mereka secara nyata menghalang kerosakan tekanan oksidatif melalui penurunan kandungan ROS dan apoptosis sel dalam sel HepG2 yang disebabkan oleh H2O2-. Mengikut keputusan ini, sebatian polifenol, terutamanya flavonoid, mempunyai kapasiti antioksidan yang besar kerana kumpulan hidroksil fenoliknya. Tambahan pula, sebatian 2, yang mempunyai bahagian glikosida dan tiga kumpulan hidroksil fenolik, merupakan komponen antioksidan utama dengan kandungan tertinggi daripada daun A. fragrans. Kompaun 6 memaparkan aktiviti antioksidan terbaik, yang mungkin merupakan sumbangan besar kepada aktiviti A.fragrans. Tambahan pula, ekstrak A.fragrans boleh dihidangkan sebagai sumber antioksidan semulajadi yang boleh dilaksanakan dalam minuman kesihatan yang menjanjikan. Kajian mengenai sebatian daripada daun A. fragrans menunjukkan bahawa ini boleh dihidangkan sebagai teh sihat antioksidan untuk merawat kerosakan sel akibat tekanan oksidatif dan boleh berfungsi sebagai suplemen pemakanan yang digunakan dalam industri makanan dan kesihatan.

Artikel ini diekstrak daripada Molecules 2021, 26, 3690. https://doi.org/10.3390/molecules26123690 https://www.mdpi.com/journal/molecules