Acteoside: Penyelidikan Mengenai Aktiviti Antioksidan Dan Antihipertensi

Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com

Aktiviti Antioksidan Dan Antihipertensi Acteoside Dan Analognya

Chao-Hsiang CHEN1,2, Yin-Shiou LIN3, Mei-Yin CHIEN2,4, Wen-Chi HOU5,6,* dan Miao-Lin HU1,*

Abstrak. Acteoside(Act), glikosida phenylethanoid, adalah sebatian aktif dalam beberapa tumbuhan dan ubat-ubatan herba tradisional. Bertindak bersama dengan isomer strukturnya,isoacteoside(Isoact), dan analog, 6-O-aseti-lakteosida (6-O-acetylact), digunakan dalam kajian untuk menyiasatantioksidan, enzim penukar anti-angiotensin (ACE), dan aktiviti perencatan hemolisisdalam vitrodan aktiviti antihipertensi terhadap tikus hipertensi spontan (SHR)dalam vivo. Kami menunjukkan bahawa Act, Isoact dan 6-O-acetylact secara berkesan menghilangkan radikal 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil (dengan IC50 masing-masing pada 11.4, 9.48 dan 9.55 μM) dan radikal superoksida (dengan IC50 pada 66.0, 38.5 , dan 39.1 μM, masing-masing). Sebagai Isoact dan 6-O-acetylact mempunyai aktiviti pemusnahan radikal yang serupa, hanya Act dan Isoact digunakan untuk kajian berikut. Kedua-dua Act dan Isoact menghalang aktiviti xanthine oxidase dengan IC50 pada 53.3 dan 62.2 μM, masing-masing. Kedua-dua Act dan Isoact juga menghalang aktiviti ACE dan hemolisis dengan ketara yang disebabkan oleh 2,2'-azo-bis(2-amidinopropane)dihydrochloride, tetapi kesan Act adalah lebih kuat daripada Isoact. Kami kemudiannya secara lisan mentadbir satu dos Act atau Isoact (10 mg/Kg berat badan) kepada SHR dan mengukur perubahan tekanan darah sistolik (SBP) dan tekanan darah diastolik (DBP) selama 24 jam. Act, tetapi bukan Isoact, menunjukkan aktiviti antihipertensi dalam menurunkan SBP dan DBP. Hasilnya mencadangkan potensi kegunaan Akta sebagai produk makanan kesihatan untukantioksidanperlindungan dan peraturan tekanan darah.

Kata kunci: Acteoside; Aktiviti antihipertensi; Enzim penukar angiotensin (ACE); Antioksida; Hemolisis.

bahan aktif acteoside dalam cistanche

Pengenalan

Acteoside(Akta), glikosida phenylethanoid yang mengandungi asid caffeic, 3',4'-dihydroxy phenylethanol, glukosa, dan rhamnose, pertama kali diasingkan daripada bungaSyringa Vul- garis(Birkofer et al., 1968), dan bersama-sama dengan isomer struktur bagiisoacteoside(Isoact) dan terbitan daripada6-O-asetilakteosida(6-O-acetylact), telah ditemui dalam banyak tumbuhan dan ubat-ubatan herba, sepertiLigstrum purpurascens(Wong et al., 2001),Callicarpa dikotoma(Koo et al., 2006; Lee et al., 2006),Cistanche deserticoladanBoschniakia rossica(Wu et al., 2006),Scrophularia ningpoenis(Huang et al., 2008),Rehmannia glutinosa(Li et al., 2006). Perbuatan itu dilaporkan mempamerkan aktiviti antimetastatik pada sel melanoma B16 dalam model tikus C57BL/6 (Ohno et al., 2002). Act, Isoact dan 6-O-acetylact baru-baru ini ditunjukkan untuk menghalang IL-1 -ekspresi diaktifkan CAM antara sel-1 dan CAM vaskular-1 dalam sel endothelial vena umbilik manusia (Chen et al., 2009). Act juga melindungi sel endothelial pulmonari lembu daripada tekanan oksidatif akibat radikal hidroksil (Chiou et al., 2004) dan menghalang oksida nitrat dan pengeluaran TNF melalui penyekatan pengaktifan AP-1 dalam makrofaj yang dirangsang lipopolysaccharide (Rao et al. , 2009). Act dan Isoact mempamerkan aktiviti neuroprotektifdalam vitro(Koo et al., 2005). Koo et al. (2006) melaporkan bahawa Act dan aglyconesnya berkesan mengais 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) dan nitric oxidedalam vitro. Walau bagaimanapun, beberapa kajian telah membandingkan sebelah-menyebelahdalam vitro antioksidanaktiviti Act dan sebatian berkaitan strukturnya seperti Isoact dan 6-O- asetilak.

Beberapa kelas agen farmakologi telah digunakan dalam rawatan hipertensi (Mark dan Davis, 2000). Satu kelas ubat antihipertensi, yang dikenali sebagai perencat enzim penukar angiotensin I (ACE) (iaitu perencat peptidase), mempunyai insiden kesan sampingan yang rendah dan merupakan kelas pilihan antihipertensi.

agen apabila merawat pesakit dengan penyakit sekunder serentak (Fotherby dan Panayiotou, 1999). ACE (peptidyl-dipeptide hydrolase EC 3.4.15.1) ialah exopeptidase yang mengandungi Zn yang membebaskan dipeptida, yang mengeluarkan dipeptida daripada terminal C angiotensin I untuk membentuk angiotensin II, sebatian yang sangat hipertensi. beberapaantioksidanpeptida (glutathione dikurangkan dan peptida berkaitan karnosin) mempamerkan aktiviti perencatan ACE (Hou et al., 2003). Perencat ACE aktif secara klinikal yang pertama, captopril, telah dibangunkan untuk rawatan hipertensi (Ondetti et al., 1977; Borer, 2007). Perbuatan itu telah dilaporkan memberi kesan santai yang dimediasi nitrik oksida pada cincin aorta endothelium utuh tikus SD (Wong et al., 2001). Ahmad et al. (1995) telah melaporkan bahawa Akta mendorong penurunan yang bergantung kepada dos dalam tekanan darah sistolik (SBP) dan tekanan darah diastolik (DBP) berikutan suntikan intravenanya ke dalam tikus Wistar yang dibius normotensif. Walau bagaimanapun, tidak jelas sama ada Akta yang diberikan secara lisan dan/atau isomer berkaitannya adalah antihipertensidalam vivo. Dalam kajian ini, kami menyiasatdalam vitro antioksidankapasiti dan aktiviti perencatan ACE sertadalam vivoaktiviti antihipertensi Act, Isoact dan/atau 6-O-asetilak menggunakan tikus hipertensi spontan (SHR). Kajian ini diharapkan dapat menyediakan data yang berguna untuk pembangunan Act sebagai produk makanan kesihatan.

Bahan dan Kaedah

Bahan

2,2'-azo-bis(2-amidinopropane)dihydrochloride (AAPH), ACE (unit I, paru-paru arnab), butylated hydroxytoluene (BHT), DPPH, N-(3-[{{7 }}furyl]acryloyl)-Phe-Gly- Gly (FAPGG), NADH, phenazine methosulfate (PMS), xanthine, dan xanthine oxidase telah dibeli daripada Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Captopril telah dibeli daripada Calbiochem Co. (CA, USA). Act, Isoact dan 6-O-acetylact (Rajah 1) telah dibeli daripada Equal Corp. (tulen > 98 peratus, Shanghai, China). Bahan kimia dan reagen lain adalah daripada Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA).

Mengupas aktiviti daripada bertindak, Isoact, dan 6-O- asetilak terhadap dPPH radikal oleh spektrofotometri

Satu volum (0.3 mL) Act, Isoact dan 6-O-asetillak (kepekatan akhir ialah 1.56 hingga 50 µM), BHT dan asid askorbik (kepekatan akhir ialah 2.4 hingga 60 µM) telah ditambah kepada 0.1 mL penimbal Tris-HCl 1 M (pH 7.9 ) dan kemudian dicampur dengan 0.6 mL 100 µM DPPH dalam metanol kepada kepekatan akhir 60 µM selama 20 minit di bawah perlindungan cahaya pada suhu bilik (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Penurunan penyerapan pada 517 nm diukur dan dinyatakan sebagai ΔA517 nm. Air ternyahion digunakan sebagai eksperimen kosong. Aktiviti penghapusan radikal DPPH ( peratus ) dikira dengan persamaan: (ΔA517kosong − ΔA517sampel) ÷ ΔA517kosong × 100. IC50 bermaksud kepekatan perencatan separuh.

Menghalang aktiviti daripada Bertindak dan Isoact terhadap xanthine oksidase

Aktiviti xanthine oxidase diukur dengan menentukan pembentukan asid urik pada 295 nm menggunakan xanthine sebagai substrat (Kalckar, 1947). Jumlah Act dan Isoact yang berbeza (kepekatan akhir ialah 25, 50, dan 75 µM) telah dicampur terlebih dahulu dengan 50 μL 1 mU/mL xanthine oxidase pada 4 darjah selama 1 jam, dan kemudian 300 μL 1 mM xanthine telah ditambah. Perubahan penyerapan pada 295 nm direkodkan selama 2 minit dan dinyatakan sebagai ΔA295 nm / min. Aktiviti perencatan xanthine oxidase ( peratus ) dikira seperti berikut: (ΔA295 nm/min hitam − ΔA295 nm/min sampel) ÷ ΔA295 nm/min hitam × 100. Air ternyahiion digunakan sebagai ganti larutan sampel sebagai eksperimen kosong. IC50 bermaksud kepekatan separuh perencatan.

Mengupas aktiviti daripada bertindak, Isoact, dan 6-O- asetilak terhadap superoksida radikal oleh spektrofotometri

Radikal superoksida dijana oleh sistem PMS-NA-DH (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Semua sampel 0.2 mL, mengandungi jumlah Act, Isoact dan 6- yang berbezaO-asetilat (kepekatan akhir ialah 15.6, 31.3, 62.5, 125, dan 250 µM), telah ditambah mengikut urutan kepada 0.2 mL daripada 630 µM nitroblue tetrazolium, 0.2 ml 33 µM PMS, dan 0.2 ml 156 µM NADH dalam penimbal fosfat 100 mM (pH 7.4). Air ternyahion digunakan sebagai ganti larutan sampel sebagai eksperimen kosong. Asid askorbik (kepekatan akhir ialah 6, 9, 12, dan 24 μM) digunakan sebagai kawalan positif. Perubahan penyerapan pada 560 nm direkodkan selama 2 minit dan dinyatakan sebagai ΔA560 nm / min. Aktiviti penghapusan radikal superoksida ( peratus ) dikira seperti berikut: (ΔA560 nm/min hitam − ΔA560 nm/min sampel) ÷ ΔA560 nm/min hitam × 100. IC50 bermaksud kepekatan separuh perencatan.

keazaman daripada AcE penghalang aktiviti daripada Bertindak dan Isoact oleh HPLC

Setiap 50 µL Act (0.2, 0.4, 0.5 dan 2.0 µmol) dan Isoact ({{ 11}}.1, 0.2, 0.5, 1.0 dan 2.0 µmol) telah dicampurkan dengan 15 µL 1U/mL ACE selama 5 minit, dan kemudian 200 µL 0.5 mM FAPGG telah ditambah dan bertindak balas pada suhu bilik selama 10 minit (Anzenbacherova et al., 2001). Metanol 800 µL telah ditambah untuk menghentikan tindak balas. Percubaan kosong ialah FAPGG sahaja. Dalam eksperimen kawalan, ACE bertindak balas dengan FAPGG di bawah keadaan yang sama. Pemisahan kromatografi FAPGG dan FAP telah dijalankan pada sistem kromatografi Hitachi (Jepun) dengan gelung 10 µL. Analisis HPLC dilakukan pada lajur Biosil Aqua-ODS-W 5 µ (Biotic Chemical Co., Ltd., Taiwan, 250 × 4.6 mm id), saiz zarah 5 µm. Campuran yang bertindak balas diasingkan secara isokratik dengan fasa bergerak yang terdiri daripada 0.02 M nonylamine (dilaraskan kepada pH 2.4 dengan asid fosforik) dan asetonitril dalam nisbah 67.5:32.5 (V/V) (Anzenbacherova et al., 2001). Kadar aliran ialah 1 mL/min; isipadu suntikan ialah 10 µL; pengesan telah ditetapkan pada 345 nm. Perencatan ACE ( peratus ) Act dan Isoact dikira seperti berikut: [(Kawasan FAPGGblank − Kawasan FAPGGcontrol) − (Kawasan FAPGGblank − Kawasan FAPGGsample) ÷ (Kawasan FAPGGblank − Kawasan FAPGGcontrol) × 100.

Menghalang aktiviti daripada Bertindak dan Isoact terhadap Pengantara AAPH hemolisis

Pengoksidaan rantaian radikal bebas sel darah merah tikus (RBC) melalui hemolisis pengantara AAPH (Miki et al., 1987). Darah tikus dimasukkan ke dalam tiub berheparin dan disentrifugasi pada 1000 ×gselama 10 min. Selepas dibasuh dengan 0.15 M NaCl tiga kali, RBC yang dibungkus diperolehi dengan sentrifugasi pada 1000 ×gselama 1{10}} min. Jumlah Act dan Isoact yang berbeza (kepekatan akhir ialah 2, 5, dan 10 µM) dicampurkan 25 μL 20 peratus penggantungan RBC (V/V, dalam 10 mM PBS) dan 25 μL larutan 500 mM AAPH pada 37 darjah untuk 0 , 1, 1.5, 2, 2.5, 3, dan 3.5 jam dengan goncangan lembut. Setiap campuran diempar pada 1000 ×gselama 10 minit, dan supernatan diukur pada 536 nm. Air ternyahion digunakan sebagai ganti larutan AAPH atau larutan sampel, masing-masing, sebagai kumpulan kosong atau sebagai kumpulan kawalan. Perencatan hemolisis ( peratus ) Act dan Isoact pada 3 jam atau pada 3.5 jam dikira seperti berikut: (ΔA536 nmcontrol − ΔA536 nmsample) ÷ ΔA536 nmcontrol × 100.

Antihipertensi kesan daripada Bertindak dan Isoact pada SHr

Kesan Act, Isoact dan captopril yang diberikan secara lisan melalui tiub suapan (2.0 × 80 mm) pada SBP yang dikurangkan dan DBP yang dikurangkan telah ditentukan mengikut kaedah laporan sebelumnya (Lin et al., 2006; Lin et al., 2008; Han et al., 2011). Semua prosedur eksperimen haiwan mengikut garis panduan yang diterbitkan (National Science Council, 1994). SHR lelaki (berumur 8 minggu, Pusat Haiwan Makmal Kebangsaan, Taipei) ditempatkan secara individu dalam sangkar keluli yang disimpan pada suhu 24 darjah dengan 12-h kitaran gelap-gelap dan mempunyai akses percuma kepada ayam tetikus/tikus standard ( Prolab RMH2500, Diet 5P14, PMI Nutrition International, Brentwood, MO) dan air. SHR dibahagikan secara rawak kepada kawalan dan rawatan sampel untuk penentuan SBP dan DBP (enam tikus setiap kumpulan). Untuk eksperimen antihipertensi jangka pendek, 0.5 mL 10 mg Act atau Iso-act/Kg SHR atau 5 mg captopril/Kg SHR secara lisan diberikan sekali, dan tekanan darah ekor diukur pada 2, 4, 6, dan 24 h selepas satu pentadbiran lisan. 0.5 mL air suling digunakan untuk eksperimen kosong. Meter tekanan darah tidak langsung (BP-98A, Softron Co. Ltd. Tokyo, Jepun) digunakan untuk mengukur SBP dan DBP empat kali pada setiap penentuan bagi setiap rawatan.

data analisis

Nilai dibentangkan sebagai min ± SD dan dianalisis menggunakan ANOVA sehala, diikuti dengan ujian post hoc Tukey untuk beberapa perbandingan min. Pelajart-ujian dilakukan, apabila hanya dua kumpulan data dibandingkan (seperti antara Act dan Isoact pada kepekatan yang sama). Nilai-p < 0.05="" dianggap="" signifikan="" secara="" statistik.="" analisis="" statistik="" dilakukan="" menggunakan="" spss="" for="" windows,="" versi="" 10="" (spss,="" inc.,="" chicago,="" il,="">

acteosidedalam cistanche untuk meningkatkan daya ingatan

Keputusan

Mengupas aktiviti daripada PPH dan superoksida radikal

Act, Isoact dan 6-O-asetilak mempamerkan aktiviti penghapusan DPPH yang bergantung kepada dos pada pH 7.9 (Rajah 2). Nilai IC50 masing-masing ialah 11.4, 9.48 dan 9.55 µM, untuk Act, Isoact dan 6-O-asetillak. Nilai IC50 bagi kawalan positif asid askorbik dan BHT ialah 13.1 dan 18.5 µM, masing-masing.

Perencatan daripada xanthine oksidase aktiviti

Act dan Isoact ditunjukkan untuk mempamerkan perencatan bergantung kepada dos xanthine oxidase (Rajah 3). IC50 dikira masing-masing 53.3 dan 62.2 µM, untuk Act dan Isoact.

Perencatan daripada superoksida dismutase aktiviti

Oleh kerana kedua-dua Act dan Isoact menghalang aktiviti xanthine oxidase, kami menggunakan sistem PMS-NADH untuk menghasilkan radikal superoksida (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). bertindak,

Isoact dan 6-O-asetilak mempamerkan aktiviti penghapusan radikal superoksida yang bergantung kepada dos (Rajah 4). Nilai IC50 ialah 66.0, 38.5 dan 39.1 µM, masing-masing, untuk Act, Isoact dan 6-O-asetillak. Nilai IC50 bagi kawalan positif asid askorbik ialah 9.0 µM. Daripada keputusan Rajah 2 dan 4, adalah jelas bahawa Isoact dan 6-O-asetilat mempunyai aktiviti penangkapan radikal yang serupa terhadap radikal DPPH dan superoksida, dan oleh itu hanya Act dan Isoact dipilih untuk pemeriksaan aktiviti biologi selanjutnya.

AcE penghalang aktiviti daripada Bertindak dan Isoact

Dalam ujian awal, kami mendapati bahawa Act dan Isoact mengganggu penyerapan substrat ACE FAPGG dan FAP produk terhidrolisisnya pada 345 nm seperti yang digunakan untuk ujian spektrofotometri berterusan (Holmquist et al., 1979). Oleh itu, pemisahan ditambah dengan pengesananAct atau Isoact dan FAPGG oleh HPLC digunakan untuk memantau aktiviti perencatan ACE. Rajah 5A hingga Rajah 5D ialah kromatogram HPLC biasa daripada 10 µl campuran tindak balas ujian kosong (FAPGG sahaja, Rajah 5A); ujian kawalan (ACE bertindak semula dengan FAPGG untuk menghasilkan FAP, Rajah 5B); 0.5 µmol ofAct (312.5 µg), ACE dan FAPGG (Rajah 5C); dan 0.5 µmol Isoact (312.5 µg), ACE dan FAPGG (Rajah 5D). Luas FAPGG dalam Rajah 5B adalah yang paling rendah dan dalam Rajah 5A adalah yang tertinggi daripada empat kromatogram HPLC biasa. Kawasan FAPGG dalam Rajah 5C dan 5D adalah bergantung kepada aktiviti perencatan ACE kepekatan Act dan Isoact yang berbeza. Perencatan ACE yang dikira bagi Act dan Isoact ditunjukkan dalam Rajah 5E. Tindakan itu menunjukkan aktiviti perencatan ACE yang lebih tinggi daripada Isoact, dan IC50 yang pertama dikira sebagai 472 µM mengikut kawasan dalam kromatogram HPLC.

Menghalang aktiviti daripada Bertindak dan Isoact terhadap Pengantara AAPH hemolisis

Aktiviti perencatan Act dan Isoact terhadap hemolisis pengantara AAPH pada kepekatan 2, 5, dan 10 µM telah dinilai selama 3.5 jam (Miki et al., 1987). Keputusan Rajah 6A menunjukkan bahawa hemolisis dalam RBC tikus meningkat secara mendadak (dinyatakan sebagai ΔA536 nm) selepas 3-h atau 3.5-h tindak balas dengan kehadiran radikal AAP (sebagai kumpulan kawalan, simbol kitaran putih ). Sedikit atau tiada hemolisis diperhatikan dengan ketiadaan radikal AAPH semasa tindak balas 3.5-h (sebagai kumpulan kosong, simbol kitaran hitam). Oleh itu, perencatan hemolisis Act dan Isoact pada 3 jam atau pada 3.5 jam dikira seperti berikut: (ΔA536 nmcontrol − ΔA536 nmsample) ÷ ΔA536 nmcontrol × 100. Rajah 6B

menunjukkan bahawa kedua-dua Act dan Isoact pada 2, 5 dan 10 µM mempamerkan perencatan bergantung kepekatan pada hemolisis yang disebabkan oleh AAPH, dengan kesan perencatan Act jauh lebih kuat daripada Isoact pada setiap kepekatan yang digunakan.

Antihipertensi kesan daripada Bertindak dan Isoact pada SHr

SHR menerima satu pentadbiran lisan Act dan Isoact (10 mg / Kg SHR), dan perubahan dalam SBP dan DBP direkodkan selama 24 jam. Kami sebelum ini melaporkan bahawa tekanan darah (SBP dan DBP) SHR boleh berubah semasa 24-h (Lin et al., 2006; Han et al., 2011). Oleh itu, perbandingan pada masa tetap (seperti 2, 4, 6, 8, dan 24 jam) antara kosong dan sampel dan bukannya sebelum dan selepas pemberian lisan itu sendiri telah digunakan. Didapati bahawa Akta, tetapi bukan Isoact, berkesan mengurangkan SBP dan DBP SHR berbanding kumpulan kosong (air suling). SBP dikurangkan dengan ketara dalam kumpulan Akta pada 2, 4, dan 6 jam masing-masing sebanyak 18.8, 16.5, dan 14.9 mmHg, tetapi pengurangan SBP (3.3 mmHg) pada 24 jam selepas rawatan Akta tidak sta-

signifikan secara artistik (Rajah 7A). Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 7B, DBP telah menurun dalam kumpulan Act pada 2, 4 dan 6 jam (masing-masing sebanyak 8.5, 7.6, dan 12.0 mmHg), walaupun hanya keputusan yang diperoleh pada 6 jam adalah signifikan secara statistik (P< 0.05).="" telah="" diperhatikan="" bahawa="" act="" dan="" captopril="" (sebagai="" kawalan="" positif)="" mempunyai="" kesan="" yang="" sama="" pada="" sbp="" pada="" peringkat="" awal="" (2,="" 4,="" dan="" 6="" jam)="" selepas="" pentadbiran="">

acteosidedalam cistanche mempunyai kesan yang baik terhadap antioksidan

PERBINCANGAN

Spesies oksigen aktif dan tindak balas pengantara radikal bebas terlibat dalam proses degeneratif atau patologi seperti penuaan, kanser, penyakit jantung koronari, dan penyakit Alzheimer (Ames, 1983; Gey, 1990; Smith et al., 1996). Beberapa laporan telah menumpukan pada penyaringanantioksidanaktiviti daripada sumber semula jadi. Dalam kajian ini, kami mula-mula membandingkanantioksidanaktiviti Act, Isoact dan 6-O-asetilat. Act dan Isoact ialah isomer struktur di mana konstituen bahagian asid kafeik terikat pada kumpulan C{1}} hidroksil glukosa dalam bekas dan kepada kumpulan hidroksil C{2}} glukosa dalam kedua. Manakala juzuk rhamnose dan 3',4'- dihidroksi fenil etanol, masing-masing, terikat kepada kumpulan hidroksil C-3 dan C-1 bagi bahagian glukosa dalam molekul Act dan Isoact yang sama, { {8}}O-asetillak ialah terbitan Akta di mana asid asetik terikat pada kumpulan hidroksil C-6 dalam bahagian glukosa (Rajah 1). Koo et al. (2006) melaporkan bahawa Act dan aglikonnya mempamerkan aktiviti DPPH-scavenging, dan susunan aktiviti ini (dinyatakan sebagai IC50) ialah Act (1.28 µM) > asid kafeik (2.22 µM) > 3',4'-dihydroxy phenyl ethanol ( 7.72 µM) > -tokoferol (15.1 µM). Dalam laporan sekarang (Rajah 2), tertib aktiviti pemusnahan DPPH (dinyatakan sebagai IC50) ialah 6-O-asetilat (9.55 µM) ≈ Isoact (9.48 µM) > Act (11.4 µM). Nilai ini adalah setanding atau lebih baik daripada asid askorbik (IC50 sebanyak 13.1 µM) dan BHT (IC50 daripada 18.5 µM) untuk menghilangkan radikal DPPH. IC50 Akta yang lebih tinggi dalam laporan ini mungkin daripada kepekatan akhir 60 µM DPPH dan bukannya 30 µM yang digunakan oleh Koo et al. dilaporkan (2006). Memandangkan ujian radikal DPPH tergolong dalam tindak balas pemindahan elektron (Huang et al., 2005), adalah spekulasi bahawa terbitan dalam kumpulan hidroksil C-6 bagi bahagian glukosa, seperti kumpulan asetil dalam {{21 }}O- bahagian asetilat dan asid kafeik dalam Isoact, mungkin lebih mudah memberikan tindak balas pemindahan elektron daripada kumpulan hidroksil bebas C-6 dalam bahagian glukosa Act untuk ujian penghapusan DPPH.

Bertindak, 6-O-asetilat dan Isoact telah dilaporkan mempunyai aktiviti pengesanan superoksida secara in vitro menggunakan sistem xanthine/xanthine oxidase untuk menjana radikal superoksida (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999). Walau bagaimanapun, kajian semasa kami menunjukkan bahawa Act mempamerkan aktiviti perencatan xanthine oxidase (Rajah 3). Oleh itu, radikal superoksida dijana dengan menggunakan sistem PMS-NADH dalam laporan ini (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008) dan bukannya sistem xanthine/xanthine oxidase. Malah, menggunakan sistem xanthine/xanthine oxidase untuk menjana radikal superoksida, Wang et al. (1996) memperoleh IC50 sebanyak 63 µM Act terhadap radikal superoksida, dan nilai ini hampir dengan nilai ini untuk perencatan aktiviti xanthine oxidase oleh Akta, seperti yang dilaporkan dalam kajian ini (53.3 µM). Telah dilaporkan bahawa asid kafeik mempamerkan aktiviti perencatan xanthine oxidase (Chiang et al., 1994). Mungkin ada spekulasi bahawa aktiviti pemerolehan superoksida menggunakan sistem penjanaan xanthine/xanthine oxidase bagi sesetengah fitokimia dengan struktur yang berkaitan dengan asid kafeik, seperti Act atau Isoact (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999), mungkin mempunyai telah disumbangkan, sekurang-kurangnya sebahagiannya, pada perencatan xanthine oxidase. Menariknya, Wang et al. (1996) mendapati bahawa Act (0.5 dan 2.5 mM) tidak menghalang aktiviti xanthine oxidase yang ditentukan oleh elektrod oksigen untuk penggunaan oksigen semasa pengoksidaan xanthine. Oleh itu, adalah penting untuk diingat bahawa kaedah yang berbeza untuk menguji aktiviti pembersihan superoksida mungkin menghasilkan data yang bercanggah.

Li et al. (1993) telah melaporkan tahap perencatan Act dan Isoact yang sama terhadap hemolisis pengantara AAPH dalam RBC tikus. Walau bagaimanapun, kami menunjukkan di sini bahawa Act mempamerkan aktiviti perencatan yang lebih tinggi terhadap hemolisis yang disebabkan oleh AAPH dalam RBC tikus berbanding Isoact (Rajah 6). Tidak jelas sama ada ketidakkonsistenan itu mungkin disebabkan oleh perbezaan spesies tikus.

Kang et al. (2003) melaporkan bahawa Act mempamerkan aktiviti perencatan ACE, dan IC50 ialah 373.3 µg/mL yang dikira sebagai 598 µM menggunakan Hip-His-Leu sebagai substrat. Dalam laporan ini, Akta tersebut menunjukkan aktiviti perencatan ACE yang lebih tinggi daripada Isoact, dan IC50 yang pertama dikira sebagai 472 µM mengikut kawasan dalam kromatogram HPLC (Rajah 5). Perbuatan itu telah dilaporkan memberi kesan santai yang dimediasi nitrik oksida pada cincin aorta endothelium utuh tikus SD (Wong et al., 2001). Walaupun Act telah terbukti sebagai antihipertensi pada tikus Wistar,

kajian ini menggunakan suntikan intravena Act ke dalam tikus yang telah dibius untuk menolak faktor penjerapan (Ahmad et al., 1995). Di sini, kami mentadbir Akta secara lisan kepada SHR dan menentukan perubahan dalam tekanan darah. Kami mendapati bahawa fakta pentadbiran lisan, tetapi bukan Isoact, mempamerkan kesan antihipertensi dengan menurunkan SBP dan DBP selama 24 jam selepas satu pentadbiran (Rajah 7). Bertindak pada dos 10 mg/kg berat badan mempunyai kesan yang hampir sama dengan captopril dalam dos 5 mg/kg SHR dalam menurunkan SBP dan lebih baik daripada captopril dalam menurunkan DBP.

Kesimpulannya, Akta dipamerkanantioksidanaktiviti, aktiviti perencatan ACE, dan kesan antihipertensi pada SHR. Keputusan yang dibentangkan di sini akan memberi manfaat kepada usaha membangunkan ubat-ubatan herba atau produk berkaitan menggunakan Akta, yang telah ditemui dalam banyak tumbuhan dan ubat-ubatan herba, untuk perlindungan anti-oksidan dan kesan terapeutik pada masa hadapan.

Cistancheacteosideuntuk antioksida dan anti penuaan

1Jabatan Sains dan Bioteknologi makanan, Universiti Chung Hsing Kebangsaan, Taichung, Taiwan

2Ko Da Pharmaceutical Co., Ltd, Tao-Yuan, Taiwan

3Sekolah Farmasi, Universiti Perubatan Taipei, Taipei, Taiwan

4Institut Siswazah Bahan dan Kejuruteraan Bioperubatan, Universiti Perubatan Taipei, Taipei, Taiwan

5Pusat Penyelidikan Perubatan Herba Tradisional, Hospital Universiti Perubatan Taipei, Taipei, Taiwan

6Institut Farmakognosi Siswazah, Universiti Perubatan Taipei, Taipei, Taiwan

(Diterima 12 Mac 2012; Diterima 20 April 2012)

LITERATUR DIPETIK

Ahmad, M., GH Rizwani, K. Aftab, VU Ahmad, AH Gilani, dan SP Ahmad. 1995.Acteoside: ubat antihipertensi yang baru. Phytother. Res. 9: 525-527.

Ames, BN 1983. Karsinogen diet dan antikarsinogen: radikal oksigen dan penyakit degeneratif. Sains 221:1256-1264.

Anzenbacherova, E., P. Anzenbacher, K. Macek, dan J. Kvetina. 2001. Penentuan perencat enzim (angiotensin convertase) berdasarkan tindak balas enzim diikuti oleh HPLC.J. Farmaseut. Berbiomed. dubur. 24: 1151-1156.

Birkofer, L., C. Kaiser, dan U. Thomas. 1968.Acteosidedan neoacteoside: Zuckerester aus Syringa vulgaris. Naturforsc- digantung 23B: 1051-1058.

Borer, JS 2007. Perencatan enzim penukar angiotensin: kemajuan penting dalam rawatan untuk penyakit kardiovaskular. Eur. Jantung J. Suppl. 9(Bekalan E): E2-E9.

Chen, CH, TY Song, YC Liang dan ML Hu. 2009.Acteosidedan 6-O-acetylacteoside mengecilkan molekul lekatan sel yang disebabkan oleh IL-1 melalui perencatan ERK dan JNK dalam sel endothelial vaskular manusia. J. Agric. Makanan

Kimia. 57: 8852-8859.

Chiang, HC, YJ Lo dan FJ Lu. 1994. Xanthine oxidase inhibitors daripada daunAlsophila spinulosa (Hook) Tryon. J. Enzim Menghalang. 8: 61-71.

Chiou, WF, LC Lin dan CF Chen. 2004.Acteosidemelindungi sel endothelial daripada tekanan oksidatif yang disebabkan oleh radikal bebas. J. Pharm. Pharmacol. 56: 743-748.

Fotherby, MD dan B. Panayiotou. 1999. Terapi antihipertensi dalam pencegahan strok: apa, bila, dan untuk siapa? Dadah 58: 663-674.

Gao, JJ, K. Igalashi, dan M. Nukina. 1999. Aktiviti pembersihan radikal glikosida fenilpropanoid dalam Caryopteris incana. Biosci. Bioteknol. Biokim. 63: 983-988.

Gey, KF 1990. Theantioksidanhipotesis penyakit kardiovaskular: epidemiologi dan mekanisme. Biokim. Soc. Trans. 18: 1041-1045.428 Kajian Botani, Jld. 53, 2012

Han, CH, JC Liu, KH Chen, YS Lin, CT Chen, CT Fan, HL Lee, DZ Liu dan WC Hou. 2011. Aktiviti antihipertensi bawang putih yang diproses pada tikus hipertensi spontan dan manusia hipertensi. Bot. Stud. 52: 277-283.

Holmquist, B., P. Bunning, dan JF Riordan. 1979. Ujian spektrofotometri berterusan untuk enzim penukar angiotensin. dubur. Biokim. 95: 540-548.

Hou, WC, HJ Chen, dan YH Lin. 2003. Peptida antioksidan dengan aktiviti perencatan enzim penukar angiotensin dan aplikasi untuk penulenan enzim penukar angiotensin. J. Agric. Kimia Makanan. 51: 1706-1709.

Huang, D., B. Ou, dan RL Sebelumnya. 2005. Kimia di belakangantioksidanujian kapasiti. J. Agric. Kimia Makanan. 53: 1841-1856.

Huang, CG, YJ Shang, J. Zhang, JR Zhang, WJ Li dan BH Jiao. 2008. Kesan hiporisemia glikosida fenilpropanoidacteosidedaripada Scrophularia ningpoenis pada paras asid urik serum dalam tikus prarawat kalium oksonat. Amer. J.

Dagu. Med. 36: 149-157.

Lee, KY, EJ Jeong, HS Lee dan YC Kim. 2006.Acteosidedaripada Callicarpa dichotoma melemahkan gangguan ingatan yang disebabkan oleh skopolamin. biol. Pharm. lembu jantan. 29: 71-74.

Li, J., P. Wang, R. Zheng, Z. Liu, dan Z. Jia. 1993. Perlindungan glikosida fenilpropanoid daripada Pedicularis terhadap hemolisis oksidatif secara in vitro. Planta Med. 59: 315-317.

Li, H., GX Chou, ZT Wang dan ZB Hu. 2006. HPLC penentuanacteosidedalam Radix Rehmanniae. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 31: 822-824.

Lin, SY, CC Wang, YL Lu, WC Wu dan WC Hou. 2008.Antioksidan, amina oksidase sensitif anti-semicarbazide, dan aktiviti anti-hipertensi geraniin yang diasingkan daripada Phyllanthus urinaria. Kimia Makanan. Toksik. 46: 2485-2492.

Liu, DZ, YS Lin dan WC Hou. 2004. Monohydroxamate asid aspartik dan asid glutamat pameranantioksidandan aktiviti perencatan enzim penukar angiotensin. J. Agric.Kimia Makanan. 52: 2386-2390.

Kalckar, HM 1947. Spektrofotometri pembezaan sebatian purin melalui enzim tertentu. J. Biol. Chem.167: 429-443.

Kang, DG, YS Lee, HJ Kim, YM Lee dan HS Lee. 2003. Glikosida fenilpropanoid perencatan enzim penukar angiotensin daripada Clerodenron trichotomum. J. Ethnopharmacol. 89: 151-154.

Koo, KA, SH Sung, JH Park, SH Kim, KY Lee dan YC Kim. 2005. Aktiviti neuroprotektif in vitro glikosida phenylethanoid daripada Callicarpa dichotoma. Planta Med.71: 778-780.

Koo, KA, SH Kim, TH Oh dan YC Kim. 2006.Acteosidedan aglikonnya melindungi kultur utama sel kortikal tikus daripada eksitotoksik yang disebabkan oleh glutamat. Life Sci. 79:709-716.

Lin, CL, SY Lin, YH Lin dan WC Hou. 2006. Kesan protein simpanan ubi keladi (Dioscorea alata cv. Tainong No.1) dan hidrolisis peptiknya terhadap tikus hipertensi secara spontan. J. Sains. Pertanian Makanan. 86: 1489-1494.

Mark, KS dan TP Davis. 2000. Strok: pembangunan, pencegahan, dan rawatan dengan perencat peptidase. Peptida 21:1965-1973.

Miki, M., H. Tamai, M. Mino, Y. Yamamoto, dan E. Niki. 1987. Pengoksidaan rantaian radikal bebas sel darah merah tikus oleh oksigen molekul dan perencatannya oleh -tokoferol. Arch Biochem. Biophys. 258: 373-380.

Majlis Sains Negara. 1994. Panduan penjagaan dan penggunaan haiwan makmal. Majlis Sains Kebangsaan, Taiwan.

Ohno, T., M. Inoue, Y. Ogihara, dan I. Saracoglu. 2002. Aktiviti anti-metastatik daripadaacteoside, glikosida phenylethanoid.Biol. Pharm. lembu jantan. 25: 666-668.

Vendetti, MA, B. Rubin, DW Cushman. 1977. Reka bentuk perencat khusus enzim penukar angiotensin: kelas baru agen antihipertensi aktif secara lisan. Sains 196: 441-444.

Rao, YK, SH Fang, SC Hsieh, TH Yeh dan YM Tzeng. 2009. Konstituen Anisomeles India dan aktiviti anti-radangnya. J. Ethnopharmacol. 121: 292-296.

Smith, MA, G. Perry, PL Richey, LM Sayre, VE Anderson, MF Beal, dan N. Kowal 1996. Kerosakan oksidatif dalam Alzheimer. Sifat 382: 120-121.Wang, P., J. Kang, R. Zheng, Z. Yang, J. Lu, J. Gao, dan Z. Jia.

1996. Kesan scavenging glikosida fenilpropanoid daripada Pedicularis pada anion superoksida dan radikal hidroksil dengan kaedah perangkap putaran. Biokim. Pharmacol. 51: 687- 691.

Wong, IYF, Y. Huang, ZD He, CW Lau dan ZY Chen. 2001. Kesan santai ekstrak Ligstrum purpurascens dan disucikanacteosidedalam cincin aorta tikus. Planta Med. 67:317-321.

Wu, YT, LC Lin, JS Sung dan TH Tsai. 2006. Penentuanacteosidedalam Cistanche deserticola dan Boschniakia rossica dan farmakokinetiknya dalam tikus yang bergerak bebas menggunakan LC-MS/MS. J. Chromatogr. B 844: 89-95.