4.6. Bahan Tiobarbiturik Asid-Reaktif (TBAR)

Kandungan TBAR digunakan sebagai indeks lipoperoksidasi. Dalam tisu otak, penimbal fosfat 50 mM (pH 7.4) telah ditambah kepada kepekatan 25 mg/mL (w/v), dan penggantungan itu dihomogenkan melalui sonikasi selama 10 saat. Kepada 30 µL homogenat, 250 µL 1 peratus asid fosforik dan 75 µL 0.6 peratus asid tiobarbiturik (TBA) telah ditambah. Campuran reagen telah diinkubasi pada suhu 100 ◦C dalam tab mandi air selama 45 minit, selepas itu ia disejukkan dalam mandi ais dan kemudian disentrifugasi pada 3000× g selama 10 minit pada 4 ◦C. Isipadu 150 µL supernatan diambil daripada setiap sampel. Pendarfluor diukur menggunakan pembaca plat mikro FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ortenberg, Baden-Württemberg, Jerman) dengan penapis pengujaan ditetapkan pada 485 nm (lebar jalur 5 nm) dan penapis pelepasan ditetapkan pada 530 nm (lebar jalur 5 nm). Keluk penentukuran disediakan menggunakan malondialdehid (MDA) sebagai piawai. Hasilnya dinyatakan dalam pmol MDA / mg protein.

Glikosida cistanche juga boleh meningkatkan aktiviti SOD dalam tisu jantung dan hati, dan dengan ketara mengurangkan kandungan lipofuscin dan MDA dalam setiap tisu, dengan berkesan menghilangkan pelbagai radikal oksigen reaktif (OH-, H₂O₂, dll.) dan melindungi daripada kerosakan DNA yang disebabkan oleh OH-radikal. Glikosida phenylethanoid cistanche mempunyai keupayaan penghapusan radikal bebas yang kuat, keupayaan pengurangan yang lebih tinggi daripada vitamin C, meningkatkan aktiviti SOD dalam penggantungan sperma, mengurangkan kandungan MDA, dan mempunyai kesan perlindungan tertentu pada fungsi membran sperma. Polisakarida cistanche boleh meningkatkan aktiviti SOD dan GSH-Px dalam eritrosit dan tisu paru-paru tikus senescent eksperimen yang disebabkan oleh D-galaktosa, serta mengurangkan kandungan MDA dan kolagen dalam paru-paru dan plasma, dan meningkatkan kandungan elastin, mempunyai kesan penghapusan yang baik pada DPPH, memanjangkan masa hipoksia pada tikus senescent, meningkatkan aktiviti SOD dalam serum, dan melambatkan degenerasi fisiologi paru-paru dalam tikus senescent secara eksperimen Dengan degenerasi morfologi selular, eksperimen telah menunjukkan bahawa Cistanche mempunyai keupayaan antioksidan yang baik. dan berpotensi menjadi ubat untuk mencegah dan merawat penyakit penuaan kulit. Pada masa yang sama, echinacoside dalam Cistanche mempunyai keupayaan yang ketara untuk menghilangkan radikal bebas DPPH dan mempunyai keupayaan untuk mengais spesies oksigen reaktif dan menghalang degradasi kolagen yang disebabkan oleh radikal bebas, dan juga mempunyai kesan pembaikan yang baik pada kerosakan anion radikal bebas timin.

Klik pada Di Mana Saya Boleh Beli Cistanche

【Untuk maklumat lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

4.7. Aktiviti Enzim Enzim Antioksidan Utama

Untuk penentuan aktiviti enzim dalam tisu otak, penimbal lisis yang mengandungi penimbal fosfat 50 mM (pH 7.4) dan antiprotease (1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1 g/mL pepstatin, dan 1 g/mL leupeptin) telah ditambah kepada kepekatan 50 mg/mL (w/v). Kemudian, ampaian disonikasikan selama 30 saat dalam tab mandi ais, dan homogenat diempar pada 10,000 × g selama 15 minit pada suhu 4 ◦C. Supernatan dikumpul untuk penentuan aktiviti enzimatik enzim antioksidan.

Aktiviti superoksida dismutase (SOD) diukur dengan mengikuti perencatan autoksidasi pyrogallol pada 420 nm [69]. Satu unit enzim ditakrifkan sebagai jumlah enzim yang diperlukan untuk menghalang kadar autoksidasi pyrogallol sebanyak 50 peratus. Aktiviti enzimatik SOD dinyatakan sebagai unit antarabangsa (IU) / mg protein. Aktiviti Catalase (CAT) diukur dalam supernatan yang dirawat Triton-X-100 (1 peratus, v/v) dengan mengikuti kehilangan hidrogen peroksida (H2O2) pada 240 nm [70], dan aktiviti enzim dilaporkan sebagai substrat ( µmol H2O2) berubah/min · mg protein. Jumlah glutathione peroxidase (GPx) ditentukan berikutan pengoksidaan NADPH pada 340 nm dengan kehadiran lebihan GR, GSH, dan cumene hydroperoxide [71]. Aktiviti GPx dinyatakan sebagai substrat (nmol NADPH) berubah / min mg protein. Aktiviti glutathione reductase (GR) dianalisis berikutan pengoksidaan NADPH pada 340 nm dengan kehadiran GSSG [72] dan dinyatakan sebagai substrat (nmol NADPH) berubah/min · mg protein. GR dan kedua-dua aktiviti GPx telah diperbetulkan untuk tindak balas spontan tanpa ketiadaan sampel biologi (tanpa ketiadaan enzim).

4.8. Ujian Aktiviti BACE1

Protokol ujian BACE1 melibatkan penggunaan substrat khusus secretase (peptida) yang terkonjugasi kepada dua molekul wartawan, iaitu EDANS dan DABCYL, yang menghasilkan pelepasan isyarat pendarfluor [73,74]. Aktiviti BACE1 diukur dalam lisat korteks dan hippocampus. Tindak balas telah dijalankan pada 37 ◦C selama 1 jam menggunakan substrat 10 µM dalam penimbal natrium asetat 50 mM (pH 4.5). Pengukuran intensiti pendarfluor dilakukan menggunakan pembaca plat mikro FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ortenberg, BadenWürttemberg, Jerman) dengan penapis pengujaan ditetapkan pada 360 nm (lebar jalur 5 nm) dan penapis pelepasan ditetapkan pada 530 nm (lebar jalur 5 nm). Tahap aktiviti enzimatik rembesan adalah berkadar dengan tindak balas fluorometrik, dan data dinyatakan sebagai peningkatan kali ganda dalam pendarfluor berbanding kawalan latar belakang (tindak balas tanpa ketiadaan substrat atau tisu). Aktiviti BACE1 telah dinormalisasi dengan kepekatan protein. Aktiviti BACE1 tikus, kuersetin atau rutin dirawat, dinyatakan sebagai peratusan aktiviti tikus kawalan TgAPP.

4.9. Ekspresi Gen RT-PCR Enzim Antioksidan Utama, APP, BACE1, ADAM10, Caspase-3 dan Caspase-6 dan Sitokin Radang

4.9.1. Pengekstrakan dan Pembersihan Jumlah RNA

Kami menganalisis kawasan otak yang berbeza, iaitu korteks, dan hippocampus, yang disimpan pada −80 ◦C. Kepada jumlah tisu otak yang diketahui, penimbal lisis Triomol® telah ditambah pada nisbah 1:10 (b/v). Sampel dihomogenkan selama 30 saat menggunakan motor Tanpa Kord (Pellet pestle, Sigma-Aldrich), dan diinkubasi selama 5 minit pada suhu 25 ◦C untuk membolehkan pemisahan lengkap kompleks nukleoprotein. Kemudian, 0.2 mL kloroform telah ditambah untuk setiap mL penimbal lisis Triomol® yang digunakan. Tiub digoncang dengan kuat selama 15 s dan diinkubasi pada suhu 25 ◦C selama 3 minit. Kemudian, ia telah disentrifugasi pada 11,000× g selama 15 minit pada suhu 4 ◦C. Selepas sentrifugasi, tiga fasa diperoleh, dengan RNA dalam fasa atas.

Untuk mengasingkan RNA, fasa atas dipindahkan ke tiub lain dan dimendakan dengan menambah 0.5 mL isopropanol. Selepas pencampuran menyeluruh isopropanol dan larutan akueus secara penyongsangan, campuran itu diinkubasi pada suhu bilik selama 10 minit untuk menggalakkan pemendakan, dan disentrifugasi pada 12,000 × g selama 10 minit pada 4 ◦C. Supernatan dikeluarkan, dan pelet dibasuh dengan 75 peratus etanol dan disentrifugasi pada 7500 × g selama 5 minit pada 4 ◦C. Pelet telah dikeringkan pada suhu bilik dan dilarutkan dalam 50 µL air yang dirawat DEPC. Untuk mengeluarkan kesan DNA, 2.5 µL DNase (tanpa RNase) telah ditambah dan diinkubasi pada suhu 37 ◦C selama 30 minit. Akhirnya, sampel diinkubasi pada 64 ◦C selama 5 minit untuk menyahaktifkan DNase.

Selepas itu, kepekatan RNA diukur dalam spektrofotometer UV-VIS (BMG LABTECH, Ortenberg, Baden-Württemberg, Jerman) pada 260 nm dan ketulenan dinilai dengan mengambil kira nisbah penyerapan pada 260 dan 280 nm (A260/A280).

Penentuan integriti dan ketulenan RNA dilakukan dengan elektroforesis dalam gel agarose 1 peratus yang diwarnai dengan GelRed dan divisualisasikan di bawah cahaya UV, di mana, jika RNA itu utuh, dua jalur atas sepadan dengan RNA ribosom (28S dan 18S) dan dua jalur bawah. sepadan dengan pemindahan RNA (tRNA) dan RNA ribosom 5S perlu diperhatikan.

4.9.2. Sintesis DNA Pelengkap (cDNA).

cDNA jauh lebih stabil daripada RNA dan oleh itu membolehkan pengendalian sampel yang lebih mudah dan selamat. CDNA telah disintesis daripada mRNA oleh retrotranskripsi menggunakan Kit Sintesis cDNA Strand Pertama untuk RT-qPCR (Fermentas Life Sciences).

Untuk menjalankan retrotranskripsi bagi sintesis cDNA kepada 2 µg RNA, 11 µL air yang dirawat DEPC dan 1 µL primer Rawak 10X telah ditambah. Kemudian, campuran itu diinkubasi pada 65 ◦C selama 10 minit untuk menyahnaturasi RNA. Selepas masa ini, tiub segera dibawa ke 4 ◦C selama 5 minit untuk mengelakkan penyatuan semula RNA. Campuran reagen untuk sintesis cDNA ditunjukkan dalam Jadual S1 (Data tambahan).

Lapan µL campuran tindak balas telah ditambah kepada setiap sampel. Keseluruhan isipadu dibawa ke bahagian bawah tiub dan diinkubasi pada 42 ◦C selama 60 minit. Akhirnya, tindak balas dihentikan dengan menyahaktifkan transkripase terbalik dengan memanaskannya pada 70 ◦C selama 10 minit.

4.9.3. PCR Masa Nyata

Ciri utama PCR masa nyata ialah analisis produk berlaku semasa proses penguatan dengan menentukan pendarfluor. Dengan cara ini, proses penguatan dan pengesanan berlaku serentak dalam tiub atau vial yang sama tanpa memerlukan sebarang tindakan lanjut. Untuk PCR masa nyata, kitar haba digunakan, yang boleh menguatkan dan mengesan pendarfluor secara serentak. Kami menggunakan kitar haba masa nyata LightCycler (Diagnostik Roche, Mannheim, Jerman).

Jadual S2 (Data tambahan) menyenaraikan reagen yang diperlukan untuk PCR masa nyata, menggunakan primer khusus jujukan dan pewarna pengikat DNA (SYBR Green I, Roche Molecular Systems, Inc., Rotkreuz, Switzerland) sebagai sistem pengesanan.

Untuk reka bentuk primer untuk penanda terkuantisasi yang berbeza, program bioinformatik Primer3Plus telah digunakan, yang mana kami mengambil jujukan cDNA gen yang diminati daripada pangkalan data akses terbuka Medline. Primer dibekalkan oleh Merck (Sigma-Aldrich). Suhu hibridisasi dan jujukan primer berbeza yang digunakan ditunjukkan dalam Jadual S3 (Data tambahan).

Keadaan tindak balas untuk penguatan gen yang menarik ditunjukkan dalam Jadual S4 (Data tambahan).

Akhirnya, sampel telah tertakluk kepada program lebur: 95 ◦C selama 15 s, 65 ◦C selama 30 s, dan sehingga 98 ◦C pada kadar 0.1 ◦C/s dengan rakaman pendarfluor berterusan.

Untuk kuantifikasi tahap cDNA, kaedah perbandingan ambang kitaran (Ct) [75] digunakan, menggunakan GADPH sebagai pembantu rumah. Penguatan pembantu rumah dilakukan selari dengan gen yang dianalisis. Nilai Ct dikira menggunakan perisian 4.0 yang disediakan oleh LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Jerman). Perisian ini membolehkan membezakan antara pendarfluor disebabkan oleh amplifikasi sampel dan latar belakang. Keluk lebur juga direkodkan. Penentuan suhu lebur serpihan yang dikuatkan dibenarkan untuk pencirian produk yang dikuatkan. Saiz jalur telah diperiksa pada gel agarose 1.5 peratus.

Variasi ekspresi gen yang dikaji dengan rawatan quercetin atau rutin dinyatakan sebagai fungsi kawalan TgAPP (tikus tanpa rawatan) dan menormalkan ungkapan ini dengan tahap GADPH. Lipatan Perubahan (2−∆∆Ct) mewakili bilangan kali gen yang diminati diubah suai di bawah rawatan tertentu berkenaan tikus kawalan.

4.10. Analisis Statistik

Semua ujian dilakukan sekurang-kurangnya dalam pendua dan dalam tiga eksperimen berbeza. Keputusan yang diperoleh dinyatakan sebagai min ± ralat piawai. Analisis varians sehala (ANOVA) dilakukan setelah data diuji dan menunjukkan bahawa ia sesuai dengan taburan normal. Ujian post-hoc perbandingan berbilang Newman–Keuls telah dijalankan, mengkaji perbezaan min antara kumpulan. Nilai p < 0.05 dianggap penting. Perisian SigmaPlot 11.0 digunakan untuk analisis statistik.

5. Kesimpulan

Tabiat pemakanan dan suplemen boleh menjejaskan status redoks selular. Atas dasar ini, kami berhasrat untuk memperbaiki homeostasis redoks selular dalam model tetikus AD dengan diet flavonoid yang mengandungi quercetin atau rutin untuk mengurangkan patologi amiloid, memandangkan interaksi antara status redoks selular dan ciri amiloid yang bergantung kepada proteasome dalam AD tanpa gejala. Set data kami adalah relevan kerana kesan flavonoid yang dipaparkan dalam model tetikus TgAPP adalah konsisten dengan yang dilaporkan sebelum ini dalam model in vitro dan ex vivo kami.

Kesimpulannya, penemuan kami menunjukkan bahawa memulakan rawatan diet pada peringkat asimtomatik atau permulaan simptom seperti AD mungkin mengembalikan status redoks selular dan pemprosesan fisiologi APP melalui regularisasi serentak ekspresi APP dan aktiviti BACE1.

Walaupun sukar untuk mengekstrapolasi penemuan kami kepada keadaan manusia, mereka mungkin mempunyai implikasi yang luas untuk tindak balas manusia terhadap terapeutik masa depan. Daripada dua flavonoid, rutin, dengan kesan in vivo keseluruhan yang lebih menonjol, nampaknya paling sesuai untuk dimasukkan ke dalam diet sehari-hari sebagai terapi pembantu dalam AD, berdasarkan pembesaran homeostasis redoks intraselular otak.

Bahan Tambahan:Maklumat sokongan berikut boleh dimuat turun di laman web. Rujukan [76] disebut dalam bahan tambahan.

Sumbangan Pengarang:PB-B. dan SM-A. memikirkan idea dan reka bentuk eksperimen, membantu dalam eksperimen, mentafsir keputusan yang diperoleh, dan menulis manuskrip. KLJ-A. menjalankan eksperimen, menjalankan analisis data, dan mentafsir keputusan yang diperolehi. JB membantu dengan analisis data dan semakan manuskrip. Semua data dijana secara dalaman, dan tiada kilang kertas digunakan. Semua pengarang bersetuju untuk bertanggungjawab terhadap semua aspek kerja yang memastikan integriti dan ketepatan. Semua pengarang telah membaca dan bersetuju dengan versi manuskrip yang diterbitkan.

Pembiayaan:Penyelidikan ini dibiayai oleh Yayasan Penyelidikan Perubatan «Mutua Madrileña» (Edisi Keempat Geran untuk Projek Penyelidikan Perubatan), Kementerian Pendidikan dan Sains Sepanyol (Ruj. AGL2008-04892-C03-02), dan Kementerian Sains dan Inovasi Sepanyol (Ruj. CTQ2010-16170).

Penyata Lembaga Semakan Institusi:Protokol haiwan telah diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Institusi (IACUC) di Complutense University of Madrid dan mematuhi sepenuhnya Arahan Eropah 2010/63/tentang perlindungan haiwan yang digunakan untuk tujuan saintifik dan perundangan Sepanyol mengenai Kebajikan Haiwan ( Titah Diraja 53/2013, 1 Februari 2013).

Kenyataan Persetujuan Termaklum:Tidak berkaitan.

Penyata Ketersediaan Data:Data yang menyokong penemuan kajian ini boleh didapati daripada pengarang yang berkaitan atas permintaan yang munasabah.

Penghargaan:Kami berterima kasih kepada Foundation Folch atas geran pra-kedoktoran kepada KLJA.

Konflik Kepentingan:Penulis mengisytiharkan bahawa tidak ada konflik kepentingan.

Singkatan

AD, penyakit Alzheimer; ADAM-10, A Disintegrin dan protein yang mengandungi domain metalloproteinase 10; APP, protein prekursor Amyloid; APPswe, mutasi Sweden protein prekursor amiloid; A , amiloid- ; BACE1, -enzim pembelahan APP tapak 1; CAT, Catalase; GPx, Glutathione peroksidase; GR, Glutathione reduktase; GSH, Glutathione berkurangan; GSSG, Glutathione teroksida; SOD, Superoksida dismutase.

Rujukan

1. Ebenau, JL; Pelkmans, W.; Verberk, IMW; Verfaillie, SCJ; van den Bosch, KA; van Leeuwenstijn, M.; Collij, LE; Scheltens, P.; Prins, ND; Barkhof, F.; et al. Persatuan CSF, Plasma dan Penanda Pengimejan Neurodegenerasi dengan Kemajuan Klinikal dalam Orang yang Mengalami Penurunan Kognitif Subjektif. Neurologi 2022, 98, e1315–e1326. [CrossRef] [PubMed]

2. Dominguez, LJ; Veronese, N.; Vernuccio, L.; Catanese, G.; Inzerillo, F.; Salemi, G.; Barbagallo, M. Pemakanan, Aktiviti Fizikal, dan Faktor Gaya Hidup Lain dalam Pencegahan Kemerosotan Kognitif dan Demensia. Nutrien 2021, 13, 4080. [CrossRef]

3. Tsarbopoulos, A. Penyakit Alzheimer: Meneroka 'dada perubatan' alam semula jadi untuk agen terapeutik baru. Biomol. Konsep 2020, 11, 201–208. [CrossRef] [PubMed]

4. Abu, KH; Zahs, KR Menyiasat biologi penyakit Alzheimer pada tikus. Neuron 2010, 66, 631–645. [CrossRef] [PubMed]

5. Zahs, KR; Ashe, KH 'Terlalu banyak berita baik'—Adakah model tetikus Alzheimer cuba memberitahu kita cara mencegah, bukan mengubati, penyakit Alzheimer? Trend Neurosci. 2010, 33, 381–389. [CrossRef]

6. Foley, AM; Ammar, ZM; Lee, RH; Mitchell, CS Kajian sistematik hubungan antara tahap amyloid dan ukuran defisit kognitif tikus transgenik dalam penyakit Alzheimer. J. Alzheimer's Dis. 2015, 44, 787–795. [CrossRef]

7. Anand David, A.; Arulmoli, R.; Parasuraman, S. Tinjauan tentang kepentingan biologi kuersetin: Flavonoid bioaktif. Pharm. Wahyu 2016, 10, 84–89.

8. Habtemariam, S. Rutin sebagai Terapi Semulajadi untuk Penyakit Alzheimer: Pandangan tentang Mekanisme Tindakannya. Curr. Med. Kimia. 2016, 23, 860–873. [CrossRef]

9. Martín-Aragón, S.; Jiménez-Aliaga, K.; Benedí, J.; Bermejo-Bescós, P. Tindak balas neurohormetik kuersetin dan rutin dalam garisan sel yang lebih mengekspresikan protein prekursor amiloid (sel APPswe). Phytomedicine 2016, 23, 1285–1294. [CrossRef]

10. Zhou, W.; Qing, H.; Tong, Y.; Song, ekspresi gen W. BACE1 dan degradasi protein. Ann. NY Acad. Sci. 2004, 1035, 49–67. [CrossRef]

11. Gutbier, S.; Spreng, AS; Delp, J.; Schildknecht, S.; Karreman, C.; Suciu, I.; Brunner, T.; Groettrup, M.; Leist, M. Pencegahan apoptosis neuron oleh astrocytes melalui modulasi tindak balas tekanan pengantara thiol dan pemulihan dipercepatkan daripada tekanan proteotoksik. Kematian Sel Berbeza. 2018, 25, 101–117. [CrossRef] [PubMed]

12. Aoyama, K. Glutathione dalam Otak. Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 5010. [CrossRef] [PubMed]

13. Scholey, A. Nutrien untuk neurokognisi dalam kesihatan dan penyakit: Langkah, metodologi, dan mekanisme. Proc. Nutr. Soc. 2018, 77, 73–83. [CrossRef] [PubMed]

14. Apelt, J.; Bigl, M.; Wunderlich, P.; Schliebsm, R. Peningkatan yang berkaitan dengan penuaan dalam tekanan oksidatif berkorelasi dengan corak perkembangan aktiviti beta-secretase dan pembentukan plak beta-amiloid dalam tikus Tg2576 transgenik dengan patologi seperti Alzheimer. Int. J. Dev. Neurosci. 2004, 22, 475–484. [CrossRef] [PubMed]

15. Howlett, DR; Richardson, JC Patologi tikus transgenik APP: Model penyakit Alzheimer atau hanya ekspresi berlebihan APP? Histol. Histopatol. 2009, 24, 83–100. [PubMed]

16. Cencioni, C.; Spallotta, F.; Martelli, F.; Valente, S.; Mai, A.; Zeiher, AM; Gaetano, C. Tekanan oksidatif dan peraturan epigenetik dalam penuaan dan penyakit yang berkaitan dengan usia. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 17643–17663. [CrossRef]

17. Tsang, AH; Chung, KK Tekanan oksidatif dan nitrosative dalam penyakit Parkinson. Biochim. Biophys. Acta 2009, 1792, 643–650. [CrossRef]

18. Mandal, PK; Saharan, S.; Tripathi, M.; Murari, G. Tahap glutation otak—Biomarker novel untuk gangguan kognitif ringan dan penyakit Alzheimer. biol. Psikiatri 2015, 78, 702–710. [CrossRef]

19. Chen, JJ; Thiyagarajah, M.; Lagu, J.; Chen, C.; Herrmann, N.; Gallagher, D.; Rapoport, MJ; Hitam, SE; Ramirez, J.; Andreazza, AC; et al. Glutathione pusat dan darah yang diubah dalam penyakit Alzheimer dan gangguan kognitif ringan: Analisis meta. Alzheimer's Res. Di sana. 2022, 14, 23. [CrossRef]

20. Pocernich, CB; Butterfield, DA Peningkatan glutation sebagai strategi terapeutik dalam penyakit Alzheimer. Biochim. Biophys. Acta (BBA)-Mol. Asas Dis. 2012, 1822, 625–630. [CrossRef]

21. Raza, A.; Xie, W.; Kim, KH; Dronamraju, VR; Williams, J.; Vince, R.; Lagi, SS Dipeptide ψ-GSH Menghalang Tekanan Oksidatif dan Neuroinflammation dalam Model Tetikus Penyakit Alzheimer. Antioksidan 2022, 11, 1075. [CrossRef] [PubMed]

22. Yang, H.; Xie, Z.; Wei, L.; Ding, M.; Wang, P.; Bi, J. Glutathione-mimetik D609 mengurangkan defisit ingatan dan mengurangkan pemendapan amiloid dalam model tetikus transgenik A PP/PS1. Neuroreport 2018, 29, 833–838. [CrossRef] [PubMed]

23. Guerrero-Gómez, D.; Mora-Lorca, JA; Sáenz-Narciso, B.; Naranjo-Galindo, FJ; Muñoz-Lobato, F.; Parrado-Fernández, C.; Goikolea, J.; Cedazo-Minguez, Á.; Pautan, CD; Neri, C.; et al. Kehilangan homeostasis redoks glutathione menjejaskan proteostasis dengan menghalang degradasi protein yang bergantung kepada autophagy. Kematian Sel Berbeza. 2019, 26, 1545–1565. [CrossRef] [PubMed]

24. Lefaki, M.; Papaevgeniou, N.; Chondrogianni, N. Redoks regulasi fungsi proteasome. Biol Redoks. 2017, 13, 452–458. [CrossRef] [PubMed]

25. Bonet-Costa, V.; Pomatto, LC; Davies, KJ Tekanan proteasom dan oksidatif dalam penyakit Alzheimer. Antioksida. Isyarat Redoks. 2016, 25, 886–901. [CrossRef]

26. Belkacemi, A.; Ramassamy, C. Urutan masa tekanan oksidatif dalam otak daripada model tikus transgenik penyakit Alzheimer yang berkaitan dengan lata amyloid. Radic Percuma. biol. Med. 2012, 52, 593–600. [CrossRef]

27. Tanigawa, S.; Fujii, M.; Hou, DX Action Nrf2 dan Keap1 dalam ungkapan NQO1 yang dimediasi ARE oleh quercetin. Radic Percuma. biol. Med. 2007, 42, 1690–1703. [CrossRef]

28. Chondrogianni, N.; Kapeta, S.; Chinou, I.; Vassilatou, K.; Papassideri, I.; Gonos, ES Anti-penuaan dan kesan meremajakan quercetin. Exp. Gerontol. 2010, 45, 763–771. [CrossRef]

29. Bodendorf, U.; Danner, S.; Fischer, F.; Stefani, M.; Sturchler-Pierrat, C.; Wiederhold, KH; Staufenbiel, M.; Paganetti, P. Ekspresi beta-secretase manusia dalam otak tetikus meningkatkan tahap keadaan mantap beta-amyloid. J. Neurochem. 2002, 80, 799–806. [CrossRef]

30. Yamakawa, H.; Yagishita, S.; Futai, E.; Potensi perencat Ishiura, S. beta-Secretase dikurangkan oleh lokasi pembelahan beta yang menyimpang bagi protein prekursor amiloid "mutan Sweden". J. Biol. Kimia. 2010, 285, 1634–1642. [CrossRef]

31. Keller, D.; Erö, C.; Markram, H. Ketumpatan Sel dalam Otak Tetikus: Tinjauan Sistematik. Depan. Neuroanat. 2018, 12, 83. [CrossRef] [PubMed]

32. Mladenovic Djordjevic, AN; Kapetanou, M.; Loncarevic-Vasiljkovic, N.; Todorovic, S.; Athanasopoulou, S.; Jovic, M.; Prvulovic, M.; Taoufik, E.; Matsas, R.; Kanazir, S.; et al. Campur tangan farmakologi dalam model tetikus transgenik meningkatkan fenotip patologi yang berkaitan dengan Alzheimer: Penglibatan pengaktifan proteasome. Radic Percuma. biol. Med. 2021, 162, 88–103. [CrossRef] [PubMed]

33. Tamagno, E.; Bardini, P.; Guglielmotto, M.; Danni, O.; Tabaton, M. Pelbagai keadaan pengagregatan beta-amyloid 1-42 mengantara kesan berbeza pada tekanan oksidatif, neurodegenerasi dan ekspresi BACE-1. Radic Percuma. biol. Med. 2006, 41, 202–212. [CrossRef] [PubMed]

34. Jorissen, E.; Prox, J.; Bernreuther, C.; Weber, S.; Schwanbeck, R.; Serneels, L.; Snellinx, A.; Craessaerts, K.; Thathiah, A.; Tesseur, I.; et al. Disintegrin/metalloproteinase ADAM10 adalah penting untuk pembentukan korteks otak. J. Neurosci. 2010, 30, 4833–4844. [CrossRef]

35. Kuhn, PH; Wang, H.; Dislich, B.; Colombo, A.; Zeitschel, U.; Ellwart, JW; Kremmer, E.; Roßner, S.; Lichtenthaler, SF ADAM10 ialah rembesan konstitutif yang berkaitan secara fisiologi bagi protein prekursor amiloid dalam neuron primer. EMBO J. 2010, 29, 3020–3032. [CrossRef]

36. Postina, R.; Schroeder, A.; Dewachter, I.; Bohl, J.; Schmitt, U.; Kojro, E.; Prinzen, C.; Endres, K.; Hiemke, C.; Berkat, M.; et al. Disintegrin-metalloproteinase menghalang pembentukan plak amiloid dan kecacatan hippocampal dalam model tetikus penyakit Alzheimer. J. Clin. Menyiasat. 2004, 113, 1456–1464. [CrossRef]

37. Elfiky, AM; Mahmoud, AA; Elreedy, HA; Ibrahim, KS; Ghazy, MA Quercetin merangsang laluan bukan amyloidogenik melalui pengaktifan ekspresi gen ADAM10 dan ADAM17 dalam model tikus penyakit Alzheimer yang disebabkan oleh aluminium klorida. Life Sci. 2021, 285, 119964. [CrossRef]

38. Copanaki, E.; Chang, S.; Vlachos, A.; Tschäpe, JA; Müller, UC; Kögel, D.; Deller, T. sAPPalpha menentang degenerasi dendritik dan kematian neuron yang dicetuskan oleh tekanan proteasomal. Mol. Neurosci Sel. 2010, 44, 386–393. [CrossRef]

39. Renziehausen, J.; Hiebel, C.; Nagel, H.; Kundu, A.; Kins, S.; Kogel, D.; Behl, C.; Hajieva, P. Hasil belahan protein amiloid-beta prekursor sAbetaPPalpha memodulasi BAG3-pembentukan agresif bergantung dan meningkatkan aktiviti proteasomal selular. J. Alzheimer's Dis. 2015, 44, 879–896. [CrossRef]

40. Livingstone, RW; Elder, MK; Singh, A.; Westlake, CM; Tate, WP; Abraham, WC; Williams, JM Rembesan Prekursor Amyloid Protein-Alpha Meningkatkan LTP Melalui Sintesis dan Pemerdagangan Ca2 plus -Reseptor AMPA Telap. Depan. Mol. Neurosci. 2021, 14, 660208. [CrossRef]

41. Crawford, HC; Dempsey, PJ; Brown, G.; Adam, L.; Moss, ML ADAM10 sebagai sasaran terapeutik untuk kanser dan keradangan. Curr. Pharm. Des. 2009, 15, 2288–2299. [CrossRef] [PubMed]

42. Saftig, P.; Lichtenthaler, SF Rembesan alfa ADAM10: Metalloprotease dengan pelbagai fungsi dalam otak. Prog. Neurobiol. 2015, 135, 1–20. [CrossRef] [PubMed]

43. Borreca, A.; Gironi, K.; Amadoro, G.; Ammassari-Teule, M. Disregulasi Bertentangan Protein Kerencatan Akal Fragile-X dan Heteronuklear Ribonukleoprotein C Protein Bersekutu dengan Terjemahan APP Dipertingkatkan dalam Penyakit Alzheimer. Mol. Neurobiol. 2016, 53, 3227–3234. [CrossRef] [PubMed]

44. Augustin, S.; Rimbach, G.; Augustin, K.; Schliebs, R.; Wolffram, S.; Cermak, R. Kesan rawatan jangka pendek dan panjang dengan ekstrak Ginkgo biloba pada tahap protein prekursor amiloid dalam model tetikus transgenik yang berkaitan dengan penyakit Alzheimer. Gerbang. Biokim. Biophys. 2009, 481, 177–182. [CrossRef] [PubMed]

45. Borreca, A.; Valeri, F.; De Luca, M.; Ernst, L.; Russo, A.; Nobili, A.; Cordella, A.; Korsetti, V.; Amadoro, G.; Mercuri, NB; et al. Peningkatan sementara kecekapan translasi dalam tikus Tg2576 prodromal dan gejala awal menyumbang kepada patologi A. Neurobiol. Dis. 2020, 139, 104787. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​D'Amelio, M.; Sheng, M.; Cecconi, F. Caspase-3 dalam sistem saraf pusat: Di luar apoptosis. Trend Neurosci. 2012, 35, 700–709. [CrossRef]

47. Ertürk, A.; Wang, Y.; Sheng, M. Pemangkasan tempatan dendrit dan duri dengan mekanisme bergantung-3-kaspase dan terhad proteasom. J. Neurosci. 2014, 34, 1672–1688. [CrossRef]

48. D'Amelio, M.; Cavallucci, V.; Middei, S.; Marchetti, C.; Pacioni, S.; Ferri, A.; Diamantini, A.; De Zio, D.; Carrara, P.; Battistini, L.; et al. Caspase-3 mencetuskan disfungsi sinaptik awal dalam model tetikus penyakit Alzheimer. Nat. Neurosci. 2011, 14, 69–76. [CrossRef]

49. Gervais, FG; Xu, D.; Robertson, GS; Vaillancourt, JP; Zhu, Y.; Huang, J.; LeBlanc, A.; Smith, D.; Rigby, M.; Shearman, MS; et al. Penglibatan caspases dalam pembelahan proteolitik protein prekursor amiloid-beta Alzheimer dan pembentukan peptida beta amyloidogenik A. Sel 1999, 97, 395–406. [CrossRef]

50. Park, G.; Nhan, HS; Tyan, SH; Kawakatsu, Y.; Zhang, C.; Navarro, M.; Koo, EH Caspase Activation dan Caspase-Mediated Cleavage of APP Dikaitkan dengan Amyloid -Protein-Induced Synapse Loss in Alzheimer's Disease. Rep. Sel. 2020, 31, 107839. [CrossRef]

51. Lu, DC; Rabizadeh, S.; Chandra, S.; Shayya, RF; Ellerby, LM; Ye, X.; Salvesen, GS; Koo, EH; Bredesen, DE Peptida proteolitik sitotoksik kedua yang diperoleh daripada prekursor protein beta amiloid. Nat. Med. 2000, 6, 397–404. [CrossRef] [PubMed]

52. LeBlanc, AC Caspase-6 sebagai sasaran awal baru dalam rawatan penyakit Alzheimer. Eur. J. Neurosci. 2013, 37, 2005–2018. [CrossRef]

53. Albrecht, S.; Bogdanovic, N.; Ghetti, B.; Winblad, B.; Pengaktifan LeBlanc, AC Caspase-6 dalam otak penyakit Alzheimer keluarga yang membawa protein prekursor amiloid atau mutasi presenilin I atau presenilin II. J. Neuropatol. Exp. Neurol. 2009, 68, 1282–1293. [CrossRef] [PubMed]

54. Morihara, T.; Teter, B.; Yang, F.; Lim, GP; Boudinot, S.; Boudinot, FD; Frautschy, SA; Cole, GM Ibuprofen menyekat interleukin-1aruhan beta alfa pro-amyloidogenic1-antichymotrypsin untuk memperbaiki patologi beta-amyloid (Abeta) dalam model Alzheimer. Neuropsychopharmacology 2005, 30, 1111-1120. [CrossRef] [PubMed]

55. Niu, YL; Zhang, WJ; Wu, P.; Liu, B.; Matahari, GT; Yu, DM; Deng, JB Ungkapan protein berkaitan apoptosis caspase-3 dan NF-kappaB dalam hippocampus tikus Tg2576. Neurosci. lembu jantan. 2010, 26, 37–46. [CrossRef]

56. Fuller, S.; Steele, M.; Munch, G. Mengaktifkan astroglia semasa keradangan kronik dalam penyakit Alzheimer–adakah mereka mengabaikan peranan sokongan neuro mereka? Mutat. Res. 2010, 690, 40–49. [CrossRef]

57. Lee, M.; Cho, T.; Jantaratnotai, N.; Wang, YT; McGeer, E.; McGeer, PL Pengurangan GSH dalam sel glial mendorong neurotoksisiti: Perkaitan dengan penuaan dan penyakit neurologi degeneratif. FASEB J. 2010, 24, 2533–2545. [CrossRef]

58. Hensley, K. Neuroinflammation dalam penyakit Alzheimer: Mekanisme, akibat patologi, dan potensi untuk manipulasi terapeutik. J. Alzheimer's Dis. 2010, 21, 1–14. [CrossRef]

59. Lu, J.; Wu, DM; Zheng, YL; Hu, B.; Zhang, ZF; Shan, Q.; Zheng, ZH; Liu, CM; Wang, YJ Quercetin mengaktifkan kinase protein diaktifkan AMP dengan mengurangkan ekspresi PP2C yang melindungi otak tikus tua daripada neurotoksisiti yang disebabkan oleh kolesterol tinggi. J. Pathol. 2010, 222, 199–212. [CrossRef]

60. Chen, JC; Ho, FM; Chao, PDL; Chen, CP; Jeng, KC; Hsu, HB; Lee, ST; Wen Tung, W.; Lin, WW Perencatan ekspresi gen iNOS oleh quercetin dimediasi oleh perencatan kinase IkappaB, faktor nuklear-kappa B dan STAT1, dan bergantung pada aruhan heme oxygenase-1 dalam mikroglia BV-2 tetikus. Eur. J. Pharmacol. 2005, 521, 9–20. [CrossRef]

61. Dwivedi, D.; Mega, K.; Mishra, R.; Mandal, PK Glutathione dalam Otak: Gambaran Keseluruhan Konformasi, Fungsi, Ciri Biokimia, Kuantiti dan Peranan Terapeutik Berpotensi dalam Gangguan Otak. Neurokim. Res. 2020, 45, 1461–1480. [CrossRef] [PubMed]

62. Rossner, S.; Sastre, M.; Bourne, K.; Lichtenthaler, SF Transkripsi dan peraturan translasi ekspresi BACE1- implikasi untuk penyakit Alzheimer. Prog. Neurobiol. 2006, 79, 95–111. [CrossRef] [PubMed]

63. Westerman, MA; Cooper-Blacketer, D.; Mariash, A.; Kotilinek, L.; Kawarabayashi, T.; Younkin, LH; Carlson, GA; Younkin, SG; Ashe, KH Hubungan antara Abeta dan ingatan dalam model tetikus Tg2576 penyakit Alzheimer. J. Neurosci. 2002, 22, 1858–1867. [CrossRef] [PubMed]

64. Irizarry, MC; Locascio, JJ; Hyman, APP tapak Beta BT membelah ekspresi mRNA enzim dalam tikus transgenik APP: Pertindihan anatomi dengan ekspresi transgen dan tahap statik dengan penuaan. Am. J. Pathol. 2001, 158, 173–177. [CrossRef] [PubMed]

65. Hsiao, K.; Chapman, P.; Nilsen, S.; Eckman, C.; Harigaya, Y.; Younkin, S.; Yang, F.; Cole, G. Defisit memori korelatif, ketinggian Abeta, dan plak amiloid dalam tikus transgenik. Sains 1996, 274, 99–102. [CrossRef] [PubMed]

66. Hsiao, K. Tikus transgenik yang menyatakan protein prekursor amiloid Alzheimer. Exp. Gerontol. 1998, 33, 883–889. [CrossRef]

67. Simon, AM; Schiaparelli, L.; Salazar-Colocho, P.; Cuadrado-Tejedor, M.; Escribano, L.; López de Maturana, R.; Del Río, J.; Pérez-Mediavilla, A.; Frechilla, D. Ekspresi berlebihan APP manusia jenis liar dalam tikus menyebabkan defisit kognitif dan ciri patologi yang tidak berkaitan dengan tahap Abeta. Neurobiol. Dis. 2009, 33, 369–378. [CrossRef]

68. Senft, AP; Dalton, TP; Shertzer, HG Menentukan glutation dan glutathione disulfide menggunakan probe pendarfluor ophthalaldehyde. dubur. Biokim. 2000, 280, 80–86. [CrossRef]

69. Marklund, S.; Marklund, G. Penglibatan radikal anion superoksida dalam autooksidasi pyrogallol dan ujian mudah untuk superoksida dismutase. Eur. J. Biokim. 1974, 47, 469–474. [CrossRef]

70. Aebi, H. Catalase in vitro. Kaedah Enzim. 1984, 105, 121–126.

71. Barja de Quiroga, G.; Perez-Campo, R.; Lopez Torres, M. Pertahanan anti-oksidan dan peroksidasi dalam hati dan otak tikus tua. Biokim. J. 1990, 272, 247–250. [CrossRef] [PubMed]

72. Massey, V.; Williams, CH, Jr. Mengenai mekanisme tindak balas yis glutation reductase. J. Biol. Kimia. 1965, 240, 4470–4480. [CrossRef]

73. Jash, K.; Gondaliya, P.; Sunkaria, A.; Kalia, K. MicroRNA-29b Modulates -Secretase Activity dalam Talian Sel SH-SY5Y dan Otak Tetikus Diabetik. Sel Mol. Neurobiol. 2020, 40, 1367–1381. [CrossRef] [PubMed]

74. Jimenez-Aliaga, K.; Bermejo-Bescos, P.; Benedi, J.; Martin-Aragon, S. Quercetin dan rutin mempamerkan kesan anti-amyloidogenic dan fibril pengasingan secara in vitro dan aktiviti antioksidan yang kuat dalam sel APPswe. Life Sci. 2011, 89, 939–945. [CrossRef] [PubMed]

75. Ramos, CA; Bowman, TA; Boles, NC; Peniaga, AA; Zheng, Y.; Parra, I.; Fuqua, SA; Shaw, CA; Goodell, MA Bukti untuk kepelbagaian dalam profil transkrip sel stem hematopoietik tunggal. Genet PLoS. 2006, 2, e159.

76. Schmued, LC; Stowers, CC; Scallet, AC; Xu, L. Fluoro-Jade C menghasilkan resolusi ultratinggi dan pelabelan kontras neuron yang merosot. Otak Re. 2005, 1035, 24–31. [CrossRef] [PubMed]

Penafian/Nota Penerbit:Kenyataan, pendapat dan data yang terkandung dalam semua penerbitan adalah semata-mata dari pengarang dan penyumbang individu dan bukan MDPI dan/atau editor. MDPI dan/atau editor(s) menafikan tanggungjawab untuk sebarang kecederaan kepada orang atau harta benda akibat daripada sebarang idea, kaedah, arahan atau produk yang dirujuk dalam kandungan.

【Untuk maklumat lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】