Kesan menurunkan asid urik dan mekanisme acteoside dan echinacoside yang diekstrak dari cistanche tubulosa
Mar 03, 2025
Abstrak:Bertujuan untuk meneroka kesan penurunan asid urik dan mekanisme acteoside (AS) dan echinacoside (ECH) yang diekstrak dariCistanche Tubulosa.
KaedahModel tikus hyperuricemia (Hua) ditubuhkan menggunakan kalium oxonate (1.5 g · kg -1 · d -1) digabungkan dengan adenine (100 mg · kg -1 · d -1). Tikus model HUA secara rawak dibahagikan kepada kumpulan kawalan model, kumpulan allopurinol (30 mg · kg -1 · d -1), sebagai rendah dan tinggi (50, 100 mg · kg} mg · kg -1 · d -1) Kumpulan dos. Kumpulan kawalan biasa sebelum ini ditubuhkan. Selepas empat minggu pentadbiran, penganalisis biokimia darah digunakan untuk mengesan tahap urea, crea, adenosine deaminase (ADA) dan asid urik (UUA) dalam air kencing. Ujian imunosorben yang dikaitkan enzim digunakan untuk mengesan tahap xanthine oxidase (XOD) dalam serum. Tisu buah pinggang dikumpulkan, dan pekali buah pinggang ditimbang dan dikira. Hematoxylin eosin (HE) pewarnaan digunakan untuk melihat perubahan patologi buah pinggang. Immunohistochemistry (IHC) dan PCR masa nyata digunakan untuk mengesan tahap ekspresi protein dan mRNA pengangkut urat 1 (URAT1), pengangkut glukosa 9 (GLUT9), pengangkut anion organik 1 (OAT1), dan pengangkut anion organik 3 (OAT3) dalam tisu ganas. Keputusan sebagai dan ECH dapat meningkatkan fungsi buah pinggang dalam tikus model HUA, mengurangkan tahap asid urik darah, menggalakkan perkumuhan asid urik, mengundurkan paras serum ADA dan XOD, dan mengimbangi protein dan mRNA ekspresi URAT1 dan GLUT9 dalam tisu buah pinggang, sementara tisu protein dan mRNA yang renal.
Kesimpulan Glikosida phenylethanoid AS dan ECH dari cistanche tubulosa boleh menghasilkan kesan penurunan asid urik dengan meningkatkan fungsi buah pinggang dalam tikus model HUA, mengurangkan tahap ADA dan XOD, dan mengawal ekspresi urat1, glut9, oat1, dan oat3.
Kata kunci: cistanche tubulosa; Acteoside; echinacoside; Hyperuricemia; mengurangkan asid urik; mekanisme
Ekstrak Cistanche Tubulosa dengan 16% acteoside
Hyperuricemia (HUA) adalah penyakit metabolik yang disebabkan oleh metabolisme purine yang tidak teratur dalam tubuh manusia, yang membawa kepada paras asid urik darah tinggi [1]. Ia biasanya didiagnosis apabila paras asid urik darah melebihi 7. 0 mg · dl⁻¹ (416. 0 μmol·l⁻¹) pada lelaki dan 6. Perkembangan hyperuricemia terutama berkaitan dengan faktor-faktor seperti diet pulin tinggi, penggunaan alkohol kronik, penggunaan ubat, dan hipotiroidisme. Ia bukan sahaja meningkatkan risiko penyakit kardiovaskular, diabetes, dan hipertensi [3-4] tetapi juga memberi kesan yang ketara kepada kesihatan pesakit.
Pada masa ini, rawatan klinikal untuk hiperurikemia terutamanya termasuk ubat -ubatan yang menghalang pengeluaran asid urik dan menggalakkan perkumuhan asid urik. Walau bagaimanapun, rawatan ini mempunyai batasan tertentu untuk pesakit yang mengalami gangguan hati atau fungsi buah pinggang [5-6]. Oleh itu, meneroka ubat -ubatan yang berkesan dengan kesan sampingan yang rendah adalah sangat penting untuk pencegahan dan rawatan hiperurikemia.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, yang biasa digunakan dalam perubatan tradisional Cina sebagai herba yang menonjolkan buah pinggang, digunakan untuk merawat keadaan seperti mati pucuk, ketidaksuburan, kekurangan intipati dan darah, kelemahan di bahagian bawah dan lutut, kelemahan otot, dan sembelit akibat kekeringan usus [7]. Kajian telah menunjukkan bahawaCistanche TubulosaMempunyai neuroprotective [8], anti-radang [9], metabolisme tulang-regulasi [10], dan kesan peningkatan keberkesanan dalam kemoterapi untuk pesakit kanser [11]. Di antara pelbagai komponen aktifnya, glikosida phenylethanoid adalah yang paling banyak.
Acteoside (AS) dan echinacoside (ech), dua glikosida phenylethanoid dengan kandungan yang tinggi dalamCistanche Tubulosa, mempamerkan aktiviti biologi yang kuat dan memegang potensi besar untuk pembangunan dan aplikasi. Oleh itu, kumpulan penyelidikan kami dipilih sebagai dan ECH untuk kajian lanjut. Melalui ramalan farmakologi rangkaian dan pra-eksperimen pada tikus, kami mendapati bahawa ekstrak glikosida phenylethanoid dariCistanche Tubulosamungkin mempunyai kesan penurun asid urik tertentu. Walau bagaimanapun, laluan dan mekanisme kesan ini tetap tidak jelas.
Oleh itu, dengan menggunakan mekanisme pengeluaran asid urik dan laluan perkumuhan utamanya sebagai tumpuan penyelidikan, kami menyiasat kesan penurunan asid urik dari ekstrak glikosida phenylethanoid sebagai dan ECH. Kajian ini bertujuan untuk menjelaskan laluan dan mekanisme yang mana AS dan ECH menggunakan kesan penurun asid urik mereka.
1 bahan
1.1 Haiwan Eksperimen
Tikus-tikus SPF-gred Spf-Dawley (SD) tujuh puluh lelaki, dengan berat 150-180 g, dibeli dari pusat haiwan eksperimen Universiti Perubatan Xinjiang. Nombor lesen pengeluaran haiwan: scxk (xin) 2023-0001. Eksperimen ini telah diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Haiwan Institut Penyelidikan Perubatan Rantau Autonomi Xinjiang, dengan Nombor Kelulusan Etika Haiwan: IACUC- (Zhun) -2024-009.
1.2 Dadah dan Reagen
Ekstrak Glikosida Phenylethanoid (AS dan Ech)dariCistanche Tubulosa (purity >98%, yang disahkan oleh kromatografi cecair berprestasi tinggi) telah diekstrak, disucikan, dan disediakan oleh makmal utama sains formulasi Uygur, Institut Penyelidikan Perubatan Rantau Autonomi Xinjiang. Nombor batch: 20220617 (AS) dan 20220526 (ech).
Tablet allopurinol, nombor batch: 62208726, yang dihasilkan oleh Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Potassium oxonatedanadenine, Nombor Batch: I2130050 dan C2202255, dibeli dari Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.
Crea (creatinine), ua (urik asid), urea, dan ada (adenosine deaminase) kit assay, Nombor Batch: 141123010, 141223004, 141323008, dan 043624005, yang dibeli dari Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
XOD (xanthine oxidase) Kit assay aktiviti, Nombor Batch: Y10001219, dibeli dari Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.
Antibodi (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), nombor batch: 3i5723 0, 92f0296/4, 0F33081/2I44618, dibeli dari Affinity Biosciences.
IgG anti-arnab kambing berlabel HRP, nombor batch: 245440113, dibeli dari ZSGB-Bio.
Penyelesaian pewarnaan hematoxylin, Nombor Batch: 24135741H, dibeli dari Beijing Lanjieke Technology Co., Ltd.
DAB Kit Reagen Kromogenik, nombor batch: 240010512, dibeli dari ZSGB-Bio.
DEPC (Diethyl Pyrocarbonate), nombor katalog: D 60029-500 ml, dibeli dari Amresco (Amerika Syarikat).
M5 Hiclear DL2000 penanda DNA, Nombor Katalog: MF025, dibeli dari Beijing Genomics Biotechnology Co., Ltd.
Reagen TRIZOL ™, Nombor Katalog: 15596026, dibeli dari Thermo Fisher Scientific (USA).
5x All-in-One RT MastermixdanEvagreen Express 2 × QPCR Mastermix-Low Rox, Nombor Katalog: G492 dan G891, kedua -duanya dibeli dari Bahan Biologi Gunaan Inc. (ABM).
2 kaedah
2.1 Model Penubuhan dan Pengumpulan
Tikus Tujuh Puluh Lelaki Sprague-Dawley (SD) telah disesuaikan dan dibahagikan kepada dua kumpulan: kumpulan kawalan biasa (1 0 tikus) dan kumpulan kawalan model (60 tikus). Kumpulan kawalan biasa diberikan 0.5% CMC-NA melalui Gavage. Kumpulan kawalan model diberikan kalium oxonate (1.5 g · kg⁻¹) digabungkan dengan adenine (100 mg · kg⁻¹) pada dos 10 ml · kg⁻¹, sekali sehari selama 14 hari berturut -turut. Model ini dianggap berjaya ditubuhkan apabila tahap urea, CREA, dan SUA meningkat dengan ketara, seperti yang diukur oleh penganalisis biokimia.
Tikus model hyperuricemia dibahagikan kepada kumpulan berikut berdasarkan tahap sua, urea, dan crea: kumpulan kawalan model, kumpulan allopurinol (3 {12}} mg · kg⁻¹), rendahnya sebagai kumpulan (50 mg · kg⁻¹) Kumpulan ech dos tinggi (100 mg · kg⁻¹), dengan 10 tikus dalam setiap kumpulan. Untuk mengekalkan hyperuricemia yang stabil, semua kumpulan kecuali kumpulan kawalan biasa diberikan kalium oxonate (500 mg · kg⁻¹) yang digabungkan dengan adenine (100 mg · kg⁻¹) melalui Gavage pada waktu pagi, diikuti dengan pentadbiran ubat -ubatan masing -masing dalam setiap kumpulan rawatan pada waktu petang. Kumpulan kawalan biasa menerima penyelesaian 0.5% CMC-NA pada waktu pagi dan minum air pada sebelah petang dengan dos 10 ml · kg⁻¹, sekali sehari selama 14 hari berturut-turut. Selepas itu, pentadbiran ejen pemodelan dihentikan, dan ubat -ubatan masing -masing terus ditadbir setiap hari untuk tambahan 14 hari.
2.2 Koleksi Sampel
Selepas dos akhir, tikus dipuasa semalaman (air tidak terhad). Urin dari setiap kumpulan dikumpulkan untuk ujian asid urik. Berat badan diukur selepas berpuasa, dan sampel darah dikumpulkan di bawah anestesia. Serum dipisahkan oleh sentrifugasi dan disimpan untuk kegunaan masa depan. Tisu buah pinggang dikumpulkan dan ditimbang. Satu buah pinggang telah ditetapkan dalam penyelesaian 4% paraformaldehyde, manakala yang lain adalah snap-beku dalam nitrogen cecair untuk analisis lanjut.
2.3 Pengukuran asid urik dalam air kencing tikus
Sampel air kencing dari setiap kumpulan telah disentrifugasi (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, radius centrifuge 14 cm), dan supernatan dikumpulkan. Sampel air kencing dicairkan 1: 9 dengan garam dan dianalisis untuk kandungan asid urik menggunakan penganalisis biokimia.
2.4 Pengukuran ADA, urea, crea, dan sua dalam serum tikus
Sampel darah dari setiap kumpulan telah disentrifugasi (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, radius centrifuge 14 cm), dan serum dikumpulkan. Tahap ADA, urea, crea, dan SUA dalam serum diukur menggunakan penganalisis biokimia.
2.5 Pengukuran XOD dalam Serum Tikus
Perubahan dalam tahap XOD dalam serum tikus diukur menggunakan ujian enzimatik mengikut arahan pengeluar. Penyerapan awal (A₁) dan penyerapan akhir (A₂) pada 290 nm direkodkan, dan ΔA (ΔA=a₂ - a₁) dikira. ΔA digantikan ke dalam formula:
Xod (nmol⁻¹ · min⁻¹ · ml⁻¹)=[ΔA × Sistem reaksi Jumlah volum ÷ (pekali kepupusan molar panjang urik asid × panjang optik) × 10⁹] ÷ sampel volume ÷ masa=4262,
Untuk mengira jumlah asid urik yang dipangkin per minit setiap mililiter serum.
2.6 Pengukuran pekali buah pinggang
Tisu buah pinggang dikumpulkan, dibasuh dengan garam, dan air berlebihan telah dikeluarkan. Berat organ diukur dengan tepat, dan pekali buah pinggang dikira seperti berikut:
Koefisien buah pinggang=berat buah pinggang (mg) / berat badan (g).
2.7 Pemerhatian histopatologi tisu buah pinggang oleh dia pewarnaan
Tisu buah pinggang yang ditetapkan dalam larutan paraformaldehid 4% telah dehidrasi dengan kepekatan etanol yang dinilai, dibersihkan dengan xilena, tertanam dalam parafin, dan dipotong ke dalam irisan 4- μM. Bahagian -bahagian itu dikurangkan dengan xilena, terhidrasi dengan etanol yang dinilai, berwarna dengan hematoxylin dan eosin (HE), dan dimeteraikan dengan gusi neutral. Perubahan morfologi dalam tisu buah pinggang diperhatikan di bawah mikroskop cahaya, dan imej ditangkap pada pembesaran 400 ×.
2.8 Pengesanan URAT1, GLUT9, OAT1, dan OAT3 Ekspresi protein dalam tisu buah pinggang oleh IHC
Tisu buah pinggang yang ditetapkan dalam larutan paraformaldehid 4% telah dehidrasi dengan kepekatan etanol yang dinilai, dibersihkan dengan xilena, tertanam dalam parafin, dan dibahagikan. Pengambilan antigen dan penyekatan serum kambing dilakukan. Antibodi utama (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) telah ditambah pada pencairan 1: 200 dan diinkubasi semalaman pada 4 darjah. Keesokan harinya, bahagian-bahagian itu dibasuh dengan PBS, udara kering, dan diinkubasi dengan IgG anti-arnab kambing biotin pada 37 darjah selama 30 minit. Bahagian -bahagian itu dibasuh dengan PBS dan diinkubasi dengan reagen kromogenik DAB selama 10 minit, diikuti dengan pembilasan PBS, pewarnaan hematoksylin selama 3 minit, pembezaan dengan larutan etanol asid hidroklorik, litium karbonat biru, dehidrasi dengan etanol gradien.
Untuk setiap tikus, dua rawak 4 0 0 × medan bahagian buah pinggang dipilih. Pewarnaan positif (coklat-kuning) dianalisis, dan ketumpatan optik bersepadu (IOD) setiap bidang diukur menggunakan Image-Pro Plus 6.0 untuk analisis statistik.
