Thrombomodulin Dikawal Dalam Buah Pinggang Wanita Dengan Pra-eklampsia
Mar 22, 2022
Trombomodulin glikoprotein endothelial mengawal pembekuan, keradangan vaskular, dan apoptosis. Di dalambuah pinggang, trombomodulin melindungi halangan penapisan glomerular dengan menimbulkan crosstalk antara endothelium glomerular dan podosit. Beberapa patologi glomerular dicirikan oleh kehilangan trombomodulin glomerular. Pada wanita dengan pra-eklampsia, paras serum trombomodulin larut meningkat, mungkin mencerminkan kehilangan dari endothelium glomerular. Kami berangkat untuk menyiasat sama ada ekspresi trombomodulin berkurangan dalam buah pinggang wanita dengan pra-eklampsia dan tikus terdedah kepada perencat angiogenesis. Ekspresi trombomodulin diperiksa menggunakan imunohistokimia dan qPCR dalambuah pinggangtisu bedah siasat dikumpul daripada 11 wanita praeklampsia, 22 kawalan hamil, dan 11 wanita hipertensi bukan hamil. Selanjutnya,buah pinggangdaripada tikus yang dirawat dengan peningkatan dos sunitinib atau sunitinib dalam kombinasi dengan antagonis reseptor endothelin telah dikaji. Tahap protein trombomodulin glomerular telah meningkat dalambuah pinggangwanita dengan pra-eklampsia. Secara selari, pada tikus yang terdedah kepada sunitinib, trombomodulin glomerular dikawal dengan cara yang bergantung kepada dos, dan penyelarasan trombomodulin glomerular mendahului permulaan perubahan histopatologi. Sekatan ETAR terpilih, tetapi bukan sekatan dua ETA/BR, menormalkan peningkatan yang disebabkan oleh sunitinib dalam ekspresi trombomodulin dan albuminuria. Kami mencadangkan bahawa ekspresi trombomodulin glomerular meningkat pada peringkat awalkerosakan buah pinggangdisebabkan oleh keadaan antiangiogenik. Peningkatan regulasi protein nefroprotektif ini dalam sel endothelial glomerular mungkin berfungsi sebagai mekanisme untuk melindungi halangan penapisan glomerular dalam pra-eklampsia.
Kata kunci;kegagalan buah pinggang; buah pinggang; kerosakan buah pinggang; Disfungsi buah pinggang; tisu buah pinggang; buah pinggang
CISTANCHE AKAN MEMPERBAIKI KEGAGALAN BUAH PINGGANG/BUAH PINGGANG
Pra-eklampsia menjejaskan 3–5 peratus wanita hamil dan merupakan punca penting morbiditi dan kematian ibu dan neonatal1. Pra-eklampsia dicirikan oleh disfungsi plasenta dan pengeluaran plasenta beberapa faktor antiangiogenik dan pro-radang (contohnya Flt larut-1, endoglin larut, dan TNF-alpha), yang menyumbang kepada disfungsi endothelial sistemik, peningkatan rintangan vaskular. , dan komplikasi dalam pelbagai organ2. Thebuah pinggangselalunya terjejas pada wanita dengan pra-eklampsia, dengan simptom dari proteinuria ringan hingga proteinuria julat nefrotik dankegagalan buah pinggangpada peringkat akhir penyakit3. Perubahan patologi dalambuah pinggangwanita dengan pra-eklampsia dicirikan oleh endothelin, penyingkiran proses kaki podosit, dan kehilangan podosit4,5. Apa yang mendorong perubahan patologi ini tidak difahami sepenuhnya.Disfungsi buah pinggangdalam pra-eklampsia berkemungkinan disebabkan oleh gangguan laluan isyarat yang terlibat dalam mengekalkan halangan penapisan glomerular6. Sebagai contoh, peningkatan tahap Flt larut faktor antiangiogenik-1 membawa kepada isyarat VEGF terjejas dalam glomerulus, mengakibatkan gangguan pada halangan penapisan glomerular, proteinuria dan endotheliosis glomerular7,8. Selaras dengan itu, ubat-ubatan yang menghalang isyarat angiogenik seperti sunitinib dikaitkan dengan kesan buruk yang meniru pra-eklampsia.buah pinggangfenotip9. Satu lagi pengantara penting hipertensi dankecederaan buah pinggangdalam pra-eklampsia dan perencatan VEGF ialah sistem endothelin10. Endothelin ialah vasokonstriktor kuat yang dihasilkan oleh sel endothelial yang memberi isyarat melalui jenis endothelin.
Reseptor (ETAR) pada sel otot licin vaskular, mengakibatkan vasokonstriksi11. Sebaliknya, isyarat endothelin melalui reseptor jenis B endothelin (ETBR) menghasilkan penghasilan nitrik oksida dan prostasiklin yang menggalakkan vasodilasi11,12. Sekatan ETR, dan antagonisme ETAR terpilih khususnya, mengurangkan tekanan darah dan proteinuria secara berkesan dalam model tikus pra-eklampsia dan perencatan VEGF13. Begitu juga, kami baru-baru ini menunjukkan bahawa sekatan ETAR terpilih menyelamatkanbuah pinggangfenotip tikus yang terdedah kepada perencatan VEGF14. Thrombomodulin ialah glikoprotein transmembran yang dinyatakan terutamanya oleh sel endothelial dan merupakan komponen permukaan endothelial glycocalyx15. Thrombomodulin mengekalkan homeostasis vaskular dengan mengawal pembekuan, keradangan, dan apoptosis15,16. Pada wanita dengan pra-eklampsia, peningkatan paras serum trombomodulin larut telah dilaporkan17, yang berkemungkinan mencerminkan peningkatan pembelahan ektodomain trombomodulin daripada endothelium18. Trombomodulin memainkan peranan penting dalam penyelenggaraan penghalang flrasi glomerular pada tikus diabetes: isyarat trombomodulin yang terganggu membawa kepada peningkatan apoptosis sel endothelial glomerular dan podosit dan peningkatan pengaktifan pelengkap glomerular, mengakibatkan proteinuria dan glomerulosklerosis yang lebih teruk19,20. Jadi, trombomodulin mempunyai kesan sitoprotektif yang penting pada penghalang flrasi glomerular, dan gangguan isyarat trombomodulin mungkin terlibat dalampenyakit buah pinggangdalam pra-eklampsia. Dalam kajian ini, kami menyiasat sama ada ekspresi trombomodulin menurun dalambuah pinggangwanita dengan pra-eklampsia dan dalam model tikus perencatan VEGF. Tambahan pula, kami menyiasat peranan sistem endothelin pada ekspresi trombomodulin buah pinggang dalam model tikus ini dengan menggunakan antagonis ETAR terpilih dan antagonis dwi ETA / BR.
Kaedah
Bahan pesakit. Kohort autopsi buah pinggang yang digunakan dalam kajian ini telah diterangkan sebelum ini (lihat:21). Ringkasnya, carian di seluruh negara di Dutch Pathology Registry (PALGA) telah dijalankan untuk mengumpultisu buah pinggangdaripada pesakit yang hamil dan disahkan kes pra-eklampsia. Di samping itu, dua kumpulan kawalan dimasukkan: (1) wanita hamil tanpa gangguan hipertensi sebelum atau semasa kehamilan dan (2) wanita muda yang tidak hamil dengan sejarah perubatan hipertensi kronik. Data patologi dikaitkan dengan rekod Jawatankuasa Kematian Ibu Kebangsaan Persatuan Obstetrik Belanda. Pra-eklampsia ditakrifkan berdasarkan kriteria diagnostik Persatuan Antarabangsa untuk Kajian Hipertensi dalam Kehamilan (ISSHP)22. Parafin dibenamkanbuah pinggangsampel daripada 11 wanita dengan pra-eklampsia, 22 kawalan hamil normotensif, dan 11 kawalan hipertensi tidak hamil tersedia untuk kajian ini. Semua sampel bedah siasat telah dikodkan dan kemudian dikendalikan dan dianalisis tanpa nama menurut garis panduan etika kebangsaan Belanda (Kod Penggunaan Menengah yang Betul Tisu Manusia, Persekutuan Persatuan Saintifik Perubatan Belanda). Kajian ini telah diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Perubatan Pusat Perubatan Universiti Leiden (nombor lesen P12.107).
CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN FUNGSI BUAH PINGGANG/BUAH PINGGANG
Tikus. Percubaan telah dilakukan mengikut garis panduan daripada Arahan 2010/63/EU Parlimen Eropah dan Akta Eksperimen Haiwan Belanda, selepas mendapat kelulusan daripada Jawatankuasa Etika Haiwan Pusat Perubatan Eras mus (nombor lesen 118-16-01). Tikus Wistar Kyoto jantan (WKY, 280–300 g) diperoleh pada usia 10 minggu. Haiwan itu ditempatkan di dalam bilik eksperimen dengan suhu dikekalkan pada 21–22 darjah dan 12-h kitaran terang/gelap. Haiwan mempunyai akses kepada makanan tikus makmal standard dan air ad libitum. Dua eksperimen berbeza telah digunakan dalam kajian ini, dengan kaedah terperinci dan fenotip haiwan ini diterbitkan sebelum ini14,23. Secara ringkas, tikus dirawat dengan dos sunitinib yang berbeza dengan atau tanpa antagonis ETR selama 8 hari. Tekanan darah aorta diukur menggunakan radiotelemetri. Sebelum dan selepas pemberian rawatan, tikus ditempatkan dalam sangkar metabolik selama 48 jam. Hari pertama digunakan untuk penyesuaian dan hari kedua untuk pengumpulan 24-h sampel air kencing. Dalam kajian pertama, tikus secara rawak ditugaskan untuk menerima dos rendah, pertengahan atau tinggi sunitinib (7, 14 atau 26.7 mg/kg/hari po sunitinib-L-malate (Sutent, Pfizer), masing-masing) atau kenderaan selama 8 hari . Pada akhir eksperimen, tikus telah dieutanasi dengan 60 mg/kg pentobarbital intraperitoneal dan exsanguination melalui tusukan vena perut23. Dalam kajian kedua, tikus diberikan kenderaan atau dos perantaraan sunitinib (14 mg/kg/hari po) sahaja atau digabungkan dengan macitentan (antagonis ETA/BR dwi, 100 mg/kg/hari po) atau sitaxentan (ETAR terpilih. antagonis, 30 atau 100 mg/kg/hari po). Pada penghujung eksperimen, tikus disingkirkan melalui overdosis anestesia Forane (isoflurane) dan exsanguination melalui tusukan vena perut14. Dalam kedua-dua kajian, berikutan euthanasia, yangbuah pinggangtelah dikeluarkan dengan cepat untuk analisis seterusnya.
Histologi buah pinggang.Bahagian buah pinggang dinilai secara buta oleh ahli patologi untuk kehadiran atau ketiadaan pembengkakan sel endothelial, pembengkakan sel epitelium, iskemia, dan protein intra-epitelium. Untuk mikroskop elektron dua glomeruli telah diperiksa, kehadiran endothelin glomerular dan morfologi podosit telah dikaji. Penemuan histopatologi dalam subjek manusia dan haiwan yang terdedah kepada kepekatan sunitinib yang berbeza telah diterbitkan sebelum21,23.
Imunohistokimia.Bahagian buah pinggang telah dinyahparafin. Pengambilan semula antigen yang disebabkan oleh haba dilakukan menggunakan penimbal sitrat (antibodi trombomodulin anti-manusia) atau Tris/EDTA (antibodi anti-tikus trombomodulin dan anti-ETAR). Peroksidase disekat dalam larutan hidrogen peroksida selama 20 minit.buah pinggangsampel diinkubasi dengan trombomodulin anti-manusia monoklonal tikus (1:200, Leica Biosystems, Danvers), trombomodulin anti-tikus/tikus monoklonal arnab (1:2000, Abcam) atau anti-ETAR poliklonal arnab (1:700, Invitrogen, Carlsbad) antibodi selama satu jam pada suhu bilik. Pengikatan antibodi primer divisualisasikan dengan anti-tikus berlabel peroksidase atau polimer anti-arnab berlabel (Dako, Denmark) dan diaminobenzidine sebagai kromogen.
Analisis pewarnaan.Pewarnaan trombomodulin dan ETAR telah dijaringkan oleh dua pemerhati bebas yang buta berkenaan dengan diagnosis dan rawatan klinikal (CCLA dan MB). Dua puluh lima glomeruli yang dipilih secara rawak setiap sampel telah dijaringkan menggunakan skala separa kuantitatif seperti berikut: 0, tidak hadir; 1,<10% glomerular="" staining;="" 2,="" 10–49%="" glomerular="" staining;="" 3,="" 50–90%="" of="" glomerular="" staining;="" and="" 4,="">90 peratus pewarnaan glomerular. Contoh perwakilan markah yang berbeza ditunjukkan dalam Rajah Tambahan S1, S2, S3. Perjanjian antara pemerhati adalah minimum mencukupi dalam semua eksperimen pemarkahan (κ Lebih besar daripada atau sama dengan 0.5). Apabila pemerhati menjaringkan glomeruli secara berbeza, konsensus diperolehi.
qPCR.PCR kuantitatif dilakukan untuk mengukur ekspresi mRNA thrombomodulin dan ET AR. RNA telah diasingkan dengan reagen TRIzol (Life Technologies, San Francisco, CA, Amerika Syarikat). Sintesis cDNA dilakukan dengan transkripase terbalik AMV (Roche, Basel, Switzerland), dan PCR kuantitatif SYBR Green dilakukan mengikut protokol pengilang (Bio-Rad Laboratories Inc, Hercules, CA, Amerika Syarikat). Urutan primer diterangkan dalam Jadual Tambahan S1. Ungkapan diukur dengan kaedah kitaran ambang perbandingan dan dinormalisasikan kepada ekspresi hypoxanthine phosphoribosyltransferase. Analisis lengkung lebur telah dilakukan untuk mengesahkan kekhususan aplikasi.
CISTANCHE AKAN MEMPERBAIKI DIALISIS BUAH PINGGANG/PINGGUL
Analisis statistik.Variasi antara pemerhati ditentukan menggunakan statistik kappa. Data berterusan teragih biasa dianalisis menggunakan ANOVA sehala diikuti dengan ujian post-hoc perbezaan paling ketara bagi perbandingan kumpulan berpasangan yang dirancang. Untuk menganalisis perbezaan dalam skor ekspresi trombomodulin glomerular antara kumpulan dalam kohort autopsi, regresi logistik ordinal untuk data berkelompok dengan persamaan anggaran umum (GEE) digunakan. Untuk menganalisis korelasi putatif antara ekspresi trombomodulin dan penemuan histopatologi atau klinikal, korelasi Pearson digunakan. Bentuk lengkung tindak balas thrombomodulin dan ET AR pada julat dos sunitinib telah diperiksa dengan menggunakan garis regresi. hlm<0.05 was="" considered="" statistically="" signifcant.="" unless="" stated="" otherwise,="" summary="" data="" in="" the="" figures="" are="" reported="" as="" the="">
Keputusan Trombomodulin glomerular meningkat dalam buah pinggang wanita dengan pra-eklampsia. Pewarnaan trombomodulin dianalisis dalam sampel buah pinggang daripada 11 wanita dengan pra-eklampsia,22 kawalan hamil normotensif, dan 11 kawalan hipertensi bukan hamil. Kawalan hipertensi adalah lebih tua daripada wanita daripada 2 kumpulan kajian yang lain; berbanding dengan kawalan hamil, wanita pra-eklampsia mempunyai kehamilan yang lebih lama dan tekanan darah yang lebih tinggi (Jadual Tambahan S2). Tanpa mengira kehadiran trombomodulin dalam glomerulus, trombomodulin hadir dalam kapilari peritubular dalam semua sampel yang dikaji (Tambahan Rajah S1). Dalam glomeruli, ungkapan thrombomodulin nampaknya berasal dari kutub vaskular (Rajah 1A). Secara purata, ekspresi trombomodulin glomerular adalah lebih tinggi pada pesakit pra-eklampsia berbanding kawalan hamil dan hipertensi (Rajah 1); berbanding dengan pra-eklampsia, kawalan mempunyai skor ekspresi trombomodulin glomerular yang lebih rendah (kawalan hamil, ATAU: 3.0; 95 peratus -CI: (1.1, 7.8), p<0.05; and="" hypertensive="" controls,="" or:="" 6.1;="" 95%-ci:="" (1.6,="" 23.3),=""><0.01). in="" pre-eclampsia="" cases,="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" presence="" of="" glomerular="" endothelins="" (r:="" −0.71;=""><0.05). furthermore,="" in="" hypertensive="" controls,="" thrombomodulin="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" glomerular="" tuf="" size="" (r:−0.79,=""><>
Ekspresi trombomodulin glomerular pada tikus yang terdedah kepada sunitinib.Untuk lebih memahami penemuan kami dalam pra-eklampsiabuah pinggang,Pewarnaan trombomodulin glomerular dikaji pada tikus yang terdedah kepada peningkatan dos perencat reseptor VEGF sunitinib. Pentadbiran sunitinib mengakibatkan peningkatan tekanan darah dan proteinuria dalam cara yang bergantung kepada dos23. Tikus yang terdedah kepada dos rendah sunitinib tidak mempunyai anomali histopatologi; endothelin diperhatikan dalambuah pinggangtikus yang terdedah kepada dos pertengahan dan tinggi sunitinib; deposit fibrin hanya dilihat dalam kapilari glomerular haiwan yang terdedah kepada dos sunitinib23 yang tinggi. Tiada glomeruli yang dijaringkan dalam tikus negatif untuk trombomodulin. Protein trombomodulin glomerular meningkat dalam buah pinggang tikus yang terdedah kepada dos rendah dan pertengahan sunitinib (p < 0.05,="" rajah="" 2a),="" tetapi="" tidak="" pada="" tikus="" yang="" terdedah="" kepada="" dos="" tertinggi="" bagi="" sunitinib.="" bagi="" menyokong="" penemuan="" ini,="" model="" regresi="" menunjukkan="" bahawa="" paras="" protein="" trombomodulin="" glomerular="" dikaitkan="" secara="" tidak="" linear="" dengan="" dos="" sunitinib="" sebagai="" hubungan="" kuadratik="" yang="" signifikan="" secara="" statistik="" (rajah="" 2b,="" y="2.829" tambah="" 0.="" 056x−0.002x2,=""><0.01). to="" study="" the="" factors="" that="" may="" induce="" upregulation="" of="" glomerular="" thrombomodulin,="" we="" next="" stained="" for="" the="" etar,="" which="" mediates="">kerosakan buah pinggangdisebabkan oleh perencatan VEGF. Dalam tikus yang dirawat dengan dos rendah dan pertengahan sunitinib, tetapi tidak pada tikus yang dirawat dengan dos tinggi sunitinib, pewarnaan ETAR glomerular meningkat berbanding tikus kawalan (p < {{0}}.0="" 1,="" rajah="" 2c).="" selari="" dengan="" tahap="" trombomodulin,="" tahap="" etar="" glomerular="" dikaitkan="" secara="" kuadratik="" dengan="" dos="" sunitinib="" (y="0.642" ditambah="" 0.087x−0.003x2,=""><0.001). without="" taking="" into="" account="" the="" different="" treatment="" groups,="" glomerular="" etar="" protein="" levels="" were="" directly="" correlated="" with="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" (r:="" 0.460,=""><>
Rawatan dengan sitaxentan penghalang ETAR menormalkan ekspresi trombomodulin.Untuk mengkaji sama ada ekspresi trombomodulin dikawal oleh isyarat endothelin, tikus yang terdedah kepada dos perantaraan sunitinib telah dirawat dengan agen penyekat ETR. Rawatan dengan antagonis ETAR terpilih (sitaxentan) menormalkan tekanan darah dan albuminuria dalam tikus yang dirawat sunitinib14 (Tambahan Rajah S4). Sebaliknya, rawatan dengan antagonis dwi ETA/BR (macitentan) menghasilkan normalisasi tekanan darah tetapi tidak dalam normalisasi albuminuria14 yang disebabkan oleh sunitinib (Tambahan Rajah S4).
Ekspresi mRNA thrombomodulin telah meningkat dalam buah pinggang tikus yang terdedah kepada sunitinib berbanding kawalan (Rajah 3A, p<0.01). administration="" of="" sitaxentan,="" at="" both="" concentrations,="" on="" top="" of="" sunitinib="" normalized="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" to="" control="" levels=""><0.01). however,="" the="" administration="" of="" macitentan="" did="" not="" affect="" thrombomodulin="" mrna="" levels.="" relative="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" relative="" etar="" mrna="" expression="" in="" the="" control="" group="" (r:="" 0.936,=""><0.01). in="" animals="" exposed="" to="" sunitinib="" only,="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" the="" amount="" of="" albuminuria="" (r:="" 0.876,=""><0.01). at="" the="" protein="" level,="" sunitinib="" exposure="" resulted="" in="" higher="" glomerular="" thrombomodulin="" expression="" as="" compared="" to="" controls="" (fig. 3b,=""><0.05). neither="" co-administration="" of="" sunitinib="" with="" sitaxentan="" or="" macitentan="" resulted="" in="" the="" normalization="" of="" the="" sunitinib-induced="" increase="" in="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="">
Perbincangan
Di sini, kami menunjukkan bahawa trombomodulin protein nefroprotektif meningkat dalambuah pinggangglomeruli wanita dengan pra-eklampsia. Tambahan pula, kami menunjukkan bahawa pada tikus yang terdedah kepada perencat angiogenesis sunitinib, trombomodulin glomerular dikawal dengan cara yang bergantung kepada dos, dan peningkatan trombomodulin glomerular mendahului permulaan manifestasi histopatologi. Akhirnya, kami menunjukkan bahawa menyekat ETAR menormalkan regulasi thrombomodulin glomerular yang disebabkan oleh sunitinib. Penemuan kami mencadangkan bahawa regulasi trombomodulin endothelial glomerular berlaku pada peringkat awal pra-eklampsia.kerosakan buah pinggangdan berfungsi sebagai mekanisme untuk melindungi halangan flrasi glomerular. Kajian kami adalah yang pertama melaporkan peningkatan ekspresi trombomodulin glomerular dalam pra-eklampsia. Oleh kerana kami sebelum ini mendapati bahawa dalam plasenta wanita dengan pra-eklampsia, trombomodulin dikurangkan24,
peningkatan paras serum ektodomain trombomodulin larut dalam pesakit pra-eklampsia17 mungkin berasal dari endothelium glomerular. Tambahan pula, kami mendapati persatuan songsang antara ekspresi trombomodulin glomerular dan kehadiran endothelin glomerular, menunjukkan bahawa regulasi trombomodulin berfungsi sebagai mekanisme perlindungan glomerular. Tanggapan ini disokong oleh bukti praklinikal dalam tikus diabetes, di mana trombomodulin secara kritikal mengekalkan kemandirian sel glomerular dan menyekat pengaktifan pelengkap glomerular19,20. Berbeza dengan penemuan kami bahawa keadaan antiangiogenik meningkatkan tahap trombomodulin glomerular, kajian terdahulu mendapati bahawa rawatan sFlt-1 mengurangkan ekspresi trombomodulin glomerular pada tikus dengan glomerulonefritis bulan sabit25. Hara et al.25 tidak mengkaji kesan sFlt-1 ke atas trombomodulin glomerulus dalam tikus yang sihat. Oleh itu, walaupun peningkatan tahap faktor keradangan juga didapati dalam pra-eklampsia, penurunan regulasi trombomodulin glomerular dalam kajian ini mungkin dijelaskan oleh keradangan glomerular gred tinggi yang terdapat dalam glomerulonephritis (sitokin proinflamasi, pengaktifan pelengkap), yang sangat menekan ekspresi trombomodulin26 .
Untuk menjelaskan sama ada dalam pra-eklampsia, trombomodulin glomerular dikawal selia akibat perencatan reseptor VEGF sistemik, kami mengkaji ekspresi trombomodulin pada tikus yang terdedah kepada sunitinib. Sunitinib bergantung kepada dos meningkatkan trombomodulin glomerular pada dos rendah dan pertengahan, tetapi tidak pada dos tertinggi. Oleh kerana perubahan histologi tidak dilihat pada buah pinggang tikus yang terdedah kepada sunitinib23 dos rendah, peningkatan ekspresi trombomodulin glomerular mendahului permulaan umur empangan histopatologi glomerular yang disebabkan oleh sunitinib. Dalam tikus yang terdedah kepada dos perantaraan sunitinib, tahap ekspresi tertinggi trombomodulin glomerular diperhatikan, dan ini secara langsung dikaitkan dengan jumlah albuminuria. Fenotip histopatologi buah pinggang kes preeklampsia manusia kita adalah setanding dengan kerosakan buah pinggang tikus yang dirawat dengan dos perantaraan sunitinib: endothelin diperhatikan dalam 6 daripada 11 pra-eklampsia
kes dan mikrotrombi diperhatikan dalam 1 daripada 11 kes pra-eklampsia21, manakala dalam model tikus, tikus yang dirawat dos pertengahan mempunyai endothelin dan tikus yang dirawat dos tertinggi mempunyai endothelin yang digabungkan dengan deposit fibrin23. Kami mencadangkan bahawa ekspresi trombomodulin glomerular meningkat pada peringkat awal pra-eklampsia dan perencatan angiogenik, sebagai mekanisme perlindungan untuk mengimbangi tekanan antiangiogenik kepada halangan flrasi glomerular. Sebaliknya, dalam tikus yang dirawat dengan dos tertinggi, ekspresi trombomodulin dikurangkan untuk mengawal tahap. Kajian baru-baru ini mendapati bahawa dimensi lapisan glikokaliks endothelial berkurangan pada wanita dengan pra-eklampsia awal yang teruk27. Oleh itu, kami juga mencadangkan bahawa dalam tikus yang dirawat sunitinib dos tinggi, glycocalyx endothelial terjejas, yang menimbulkan interaksi antara trombomodulin dan enzim, dengan itu menyumbang kepada pembelahan proteolitik dan kehilangan protein trombomodulin glomerular. Dalam kes pra-eklampsia kami, peningkatan paras trombomodulin glomerular dikaitkan dengan kurang endothelin glomerular, lesi secara langsung disebabkan oleh isyarat VEGF glomerular yang terganggu. Kajian in vitro telah mengenal pasti VEGF sebagai faktor pendorong kuat ekspresi trombomodulin dalam sel endothelial28. Oleh itu, penyelarasan trombomodulin buah pinggang di bawah keadaan antiangiogenik seperti pra-eklampsia dan perencatan angiogenik mungkin kelihatan berlawanan dengan intuisi. Menariknya, satu kajian menunjukkan bahawa VEGF meningkat dalam glomeruli wanita dengan pra-eklampsia29, mungkin mencerminkan mekanisme pampasan glomerular dalam usaha untuk mengimbangi bioavailabiliti VEGF yang berkurangan. Oleh itu, peningkatan regulasi trombomodulin mungkin disebabkan oleh peningkatan pampasan VEGF glomerular di bawah keadaan antiangiogenik sistemik. Tambahan pula, isyarat endothelin mungkin terlibat dalam pengawalan trombomodulin glomerular. Tahap endothelin plasma meningkat pada wanita dengan pra-eklampsia30 dan dikaitkan dengan tahap sFlt-1 sistemik31,32. Dalam model tikus kami, kedua-dua rawatan dengan sitaxentan (antagonis ETAR) dan macitentan (antagonis ETA/BR dwi) menghasilkan normalisasi hipertensi yang disebabkan oleh sunitinib dalam tikus kami14. Walau bagaimanapun, hanya rawatan dengan sitaxentan (antagonis ETAR) menormalkan regulasi trombomodulin buah pinggang yang disebabkan oleh sunitinib dan menurunkan albuminuria. Ini menunjukkan bahawa peraturan ekspresi trombomodulin buah pinggang adalah bebas daripada kerosakan endothelial yang dimediasi hipertensi, yang juga disokong oleh kekurangan peningkatan ekspresi trombomodulin dalam pesakit kawalan hipertensi kami. Ia masih perlu disiasat sama ada ETAR mendorong ekspresi trombomodulin melalui kesan sistemik atau melalui isyarat dalam sel endothelial glomerular secara khusus. Menariknya, ekspresi thrombomodulin hanya dinormalisasi pada tahap mRNA selepas sekatan ETAR dalam tikus yang dirawat sunitinib, tetapi tidak pada tahap protein. Percanggahan ini boleh dijelaskan oleh kesan pasca translasi, separuh hayat protein, dan faktor yang mempengaruhi pembelahan trombomodulin daripada endothelium.
Thrombomodulin mempunyai sifat anti-radang yang penting, termasuk perencatan penyusupan leukosit dengan mengasingkan molekul proinflamasi seperti antigen Lewis y dan HMGB-133,34, mengurangkan aktiviti NF-κB35 dan menghalang pengaktifan pelengkap20. Sebelum ini, kami melaporkan bahawa dalam kes pra-eklampsia kami, pengaktifan komplemen glomerular meningkat berbanding kawalan hamil dan hipertensi36. Tis mencadangkan bahawa regulasi trombomodulin endothelial glomerular dalam pra-eklampsia berfungsi sebagai mekanisme anti-radang dan anti-pelengkap. Sebagai tambahan kepada kesan anti-radangnya yang terkenal, kajian baru-baru ini mendapati bahawa trombomodulin mempunyai sifat proinflamasi; thrombomodulin mengikat integrin leukosit LFA-1 dan Mac1, dengan itu menggalakkan lekatan leukosit pada endothelium secara in vitro37. Oleh itu, peningkatan dalam trombomodulin glomerular juga boleh menyumbang secara langsung kepada keradangan dan kerosakan glomerular. Kita mesti mengakui batasan kajian kita. Pertama, wanita dengan pra-eklampsia di mana kami menyiasat ekspresi trombomodulin glomerular semuanya mati kerana akibat pra-eklampsia. Ini menjadikan wanita ini subkumpulan khusus pesakit pra-eklampsia dan oleh itu keputusan kajian ini mungkin tidak boleh digunakan untuk semua wanita yang mengalami pra-eklampsia. Kedua, tikus jantan yang dirawat dengan sunitinib digunakan sebagai model untuk mengkaji peraturan trombomodulin di bawah keadaan antiangiogenik. Lebih-lebih lagi, sunitinib membawa kepada perencatan kinase tirosin reseptor pelbagai dan bukan perencat khusus VEGF. Jelas sekali, model ini tidak sepenuhnya meniru pra-eklampsia, bagaimanapun, rawatan sunitinib membawa kepada hipertensi dan proteinuria23. Oleh itu, kami dapat menggunakan model ini untuk mengkaji peraturan thrombomodulin di bawah keadaan antiangiogenik. Walaupun terdapat batasan kajian kami, ia mengemukakan pandangan yang menarik tentang mekanisme kerosakan buah pinggang dalam pra-eklampsia. Kesimpulannya, ekspresi trombomodulin buah pinggang meningkat dalam preeklampsia dan dalam model perencatan angiogenik yang disebabkan oleh sunitinib. Kami membuat spekulasi bahawa peningkatan tahap trombomodulin glomerular mencerminkan mekanisme pelindung reno sebagai tindak balas kepada tekanan antiangiogenik kepada penghalang flrasi glomerular. Tambahan pula, rawatan dengan antagonis ETAR menormalkan ekspresi mRNA trombomodulin buah pinggang secara serentak dengan mengurangkan proteinuria dalam tikus yang dirawat sunitinib. Lebih banyak penyelidikan diperlukan tentang peranan trombomodulin dalam halangan flrasi glomerular.
