Kesan Terapeutik Cistanoside A Pada Metabolisme Tulang Tikus Ovariectomized

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Abstrak

Cistanoside A (Cis A), ialah glikosida fenilethanoid aktif yang diasingkan daripadaCistanche deserticola YC Matelah mendapat perhatian kami kerana kemungkinan peranannya dalam rawatanosteoporosis. Dalam kajian ini, kami menilai kesan Cis A pada model tikus ovariectomized (OVX) dan menyiasat mekanisme tindakan molekul yang mendasarinya. Selepas 12 minggu campur tangan yang ditadbir secara lisan, Cis A (20, 40, dan 80 mg/kg berat badan/hari) mempamerkan kesan antiosteoporotik yang ketara pada tikus OVX, dibuktikan dengan kekuatan tulang yang dipertingkatkan, ketumpatan mineral tulang, dan microarchitecture tulang trabekular yang lebih baik. Sementara itu, aktiviti penanda penyerapan tulang, termasuk fosfatase asid tahan tartrat (TRAP), deoxypyridinoline (DPD), dan cathepsin K, telah menurun, dan bioaktiviti penanda pembentukan tulang fosfatase alkali (ALP) telah meningkat. Secara mekanikal, Cis A menghalang ekspresi TNF-receptor associated factor 6 (TRAF6), molekul huluan yang dikongsi oleh kedua-dua faktor nuklear kappa light chain enhancer bagi sel B teraktif (NF-κB) dan phosphatidylinositol 3-kinase ( Laluan PI3K)/Akt dan seterusnya menindas tahap pengaktif reseptor ligan kappaB faktor nuklear (RANKL), menurunkan kawalan ekspresi NF-κB dan osteoprotegerin terkawal (OPG), PI3K dan Akt, yang bermaksud Cis A mempunyai aktiviti antiosteoporotik dalam tikus ovariectomized melalui TRAF6-pengantaraan penyahaktifan NF-kappaB dan pengaktifan PI3K/Akt. Disatukan, kami membentangkan penemuan baru bahawa Cis A, dengan merendahkan TRAF6, menyelaraskan perencatan NF-κB dan rangsangan laluan PI3K/Akt untuk menggalakkan pembentukan tulang dan mencegah penyerapan tulang. Data ini menunjukkan potensi Cis A sebagai agen yang menjanjikan untuk rawatanosteoporosispenyakit.

Kata kunci: cistanoside A; tikus ovariectomized; antiosteoporosis; TRAF6; PANGKAT

pengenalan

Osteoporosis, "pembunuh senyap" rangka sistemik, telah menjadi bahaya kesihatan utama yang melanda lebih 2000 juta orang di seluruh dunia dalam beberapa tahun kebelakangan ini [1]. Ia dicirikan oleh ketumpatan jisim tulang yang rendah (BMD) dan kemerosotan seni bina mikro, yang berpunca daripada lebihan penyerapan tulang ke atas pembentukan tulang dan, akhirnya, mengakibatkan patah tulang osteoporotik [2,3]. Pada masa kini, pengenalpastian agen untuk menyekat pembezaan dan penyerapan osteoklastik adalah strategi biasa dan berjaya untuk pembangunan ubat terapeutik untukosteoporosis[4], dan memang terdapat banyak agen sintetik, termasuk estradiol valerat dan natrium alendronate, yang boleh mencegah dan merawatosteoporosis. Walau bagaimanapun, ubat untuk penyakit itu jauh dari ideal; sesetengah ubat ini boleh meningkatkan risiko kanser endometrium dan payudara dan juga mempunyai tahap kesan sampingan, seperti hiperkalsemia, hiperkalsiuria, dll. [5], yang mengehadkan aplikasi klinikalnya. Oleh itu, selama lebih satu milenium, ubat-ubatan tradisional Cina (TCM), terutamanya TCM yang boleh dimakan dengan sebatian dan pecahan bioaktif terpencil, telah digunakan secara meluas dengan selamat dan berkesan di negara-negara Asia untuk mencegah dan merawat pelbagai penyakit, termasukosteoporosis[6,7].

Osteoporosisdicirikan sebagai penyerapan tulang yang dipertingkatkan akibat peningkatan osteoklastogenesis, dan proses ini melibatkan komitmen monosit hematopoietik ke dalam prekursor osteoklas, yang bergabung untuk membentuk osteoklas multinukleus yang menyasarkan tapak tulang yang menjalani pembentukan semula [4]. Pengaktif reseptor untuk ligan faktor-κB nuklear (RANKL), faktor utama yang dirembeskan daripada osteoblas, merangsang pembezaan monosit kepada osteoklas [8,9]. Interaksi RANKL dengan reseptornya RANK menghasilkan rangkaian peristiwa intraselular, termasuk NF-κB, PI3K/Akt, kinase yang bergantung kepada kalsium/calmodulin dengan merekrut protein isyarat penyesuai faktor berkaitan reseptor TNF (TRAF6). Akibatnya, beberapa gen penanda berkaitan osteoklas, termasuk TRAP, cathepsin K dan DPD, dikawal selia, dan proses penyerapan tulang dipercepatkan.

Glikosida phenylethanoid dicirikan oleh asid sinamat dan gugusan hidroksil fenil etil yang dilekatkan pada a -glucopyranose (apiose, galaktosa, rhamnose, xylose, dll.) melalui ikatan glikosidik, yang diedarkan secara meluas dalam tumbuhan ubatan [10]. Cistanoside A (Cis A) ialah glikosida phenylethanoid aktif dalamCistanche deserticola YC Ma. Menurut rekod farmakope Cina, C. deserticola secara tradisional digunakan untuk merawat kekurangan buah pinggang-yin, kelemahan otot, kelemahan lumbar, dan lain-lain, dan glikosida phenylethanoid adalah juzuk bioaktif utama dalam herba ini [11]. Berdasarkan teori 'buah pinggang' TCM, buah pinggang boleh mengawal sistem tulang, yang bermaksud perkembangan dan fungsi tulang bergantung kepada intipati buah pinggang, dan pati buah pinggang ini boleh berubah menjadi sumsum tulang untuk menyuburkan tulang, menggalakkan pertumbuhan dan pembaikan rangka dan menguatkan rangka [12]. Memandangkan C. deserticola boleh menguatkan buah pinggang, kami menganggap Cis A boleh mencegah dan merawatosteoporosis. Oleh itu, kajian ini direka untuk mengesahkan potensi Cis A dalam mencegahosteoporosisdengan menggunakan model tikus ovariectomized, dan penanda pembentukan tulang dan penyerapan, serta mekanisme potensi yang berkaitan, ditentukan untuk menganggarkan bioaktiviti antiosteoporotik agen ini.

Keputusan

Kesan Cis A pada Ujian Lenturan Tiga Titik Tulang

Untuk menganalisis sama ada rawatan dengan Cis A menjadikan tulang lebih kuat, kami tertakluk kepada ujian lenturan tiga mata tulang paha. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1, beban maksimum yang digunakan apabila patah tulang adalah 21.5 peratus dan 22.0 peratus lebih tinggi pada haiwan yang dirawat dengan 20 mg/kg dan 80 mg/ kg Cis A, masing-masing, berbanding haiwan dalam kumpulan ovariectomized (OVX) (p < 0.05).="" sementara="" itu,="" rawatan="" dengan="" cis="" a="" juga="" meningkatkan="" kekejangan="" tulang;="" semua="" tikus="" yang="" dirawat="" cis="" a="" menunjukkan="" peningkatan="" kekakuan="" yang="" ketara="" dengan="" data="" sebanyak="" 121.0="" ±="" 12.1="" (p="">< 0.05),="" 124.1="" ±="" 16.2="" (p="">< 0.05),="" dan="" 127.7="" ±="" 9.6="" (p="">< 0.01),="" masing-masing="" ,="" jika="" dibandingkan="" dengan="" 102.2="" ±="" 10.7="" daripada="" tikus="" ovx.="" keputusan="" menunjukkan="" bahawa="" peningkatan="" kekuatan="" tulang="" pada="" tikus="" ovx="" yang="" dirawat="" dengan="" cis="" a="" adalah="" disebabkan="" oleh="" peningkatan="" jumlah="" tulang="" dan="" peningkatan="" kualiti="">

Kesan Cis A pada Microarchitecture Tulang

Arkitek mikro tulang trabekular tiga dimensi tikus yang diukur oleh mikro-CT (Rajah 2 dan Jadual 1) secara intuitif menunjukkan bahawa tikus dalam kumpulan OVX membentangkan pengurangan ketara dalam kawasan trabekular dan nombor trabekular jika dibandingkan dengan kumpulan palsu, menunjukkan bahawa ovariektomi. boleh menyebabkan penurunan ketara dalam ketumpatan jisim tulang (BMD, −46 peratus ), kandungan mineral tulang (BMC, −66 peratus ), kandungan mineral tisu (TMC, −85 peratus ), pecahan isipadu tulang (BVF, −82 peratus ), nombor trabekular (Tb. N, -76 peratus ) dan peningkatan dalam pemisahan trabekular (Tb. Sp, ditambah 80 peratus ) tanpa sebarang pengubahsuaian dalam jumlah ketumpatan mineral tisu (TMD) dan ketebalan trabekular (Tb. Th) selepas operasi 12 minggu.

Walau bagaimanapun, tikus OVX yang dirawat dengan Cis A mengakibatkan peningkatan BMD yang bergantung kepada dos (tambah 43 peratus ~57 peratus), BMC (tambah 65 peratus ~73 peratus), TMC (tambah 83 peratus ~90 peratus), BVF (tambah 80 peratus ~88 peratus ), pengurangan lebih besar dalam Tb. Sp (−79 peratus ~88 peratus ) dan Tb dipertingkatkan lagi. N ( tambah 73 peratus ~82 peratus ) berbanding kumpulan OVX. TMD nampaknya tidak dipengaruhi oleh ovariektomi tetapi telah meningkat dengan ketara oleh rawatan dengan estradiol valerate (EV).

Kesan Cis A pada Kedua-dua Pembentukan Tulang dan Penanda Penyerapan

Kesan Cis A pada penanda penyerapan tulang, termasuk TRAP, DPD, cathepsin K dan indeks pembentukan tulang ALP dan bone Gla-protein (BGP), ditunjukkan dalam Rajah 3. Selepas 12 minggu operasi ovariektomi, aktiviti TRAP, DPD , dan cathepsin K dalam kumpulan OVX telah meningkat dengan ketara, terutamanya DPD, yang meningkat hampir 55.6 peratus; TRAP dan cathepsin K masing-masing meningkat sebanyak 43.5 peratus dan 38.1 peratus, berbanding kumpulan palsu. Cis A, diberikan secara lisan selama 12 minggu, menunjukkan potensi yang ketara dalam menghalang semua penanda penyerapan tulang yang disebutkan di atas, terutamanya dos yang tinggi (80 mg/kg) yang mempamerkan kesan ketara ke atas menyekat aktiviti DPD. sebanyak 45.0 peratus , TRAP sebanyak 49.0 peratus dan cathepsin K sebanyak 44.0 peratus , masing-masing (p < 0.01),="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" ovx="" (rajah="" 3).="" walaupun="" trend="" peningkatan="" aktiviti="" alp="" dan="" bgp="" ditunjukkan="" dalam="" kumpulan="" ovx,="" tiada="" perubahan="" ketara="" secara="" statistik="" diperhatikan.="" walau="" bagaimanapun,="" peningkatan="" ketara="" aktiviti="" alp="" telah="" diperhatikan="" dalam="" kumpulan="" yang="" dirawat="" cis="" a="" yang="" rendah="" dan="" tinggi="" berbanding="" dengan="" kumpulan="" palsu="" (p=""><>

Kesan Cis A pada Tahap Ekspresi Protein TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG dan RANKL

Analisis Western blot mendedahkan bahawa berbanding kumpulan palsu, paras protein TRAF6, NF-κB, dan RANKL dalam kumpulan OVX meningkat dengan ketara (p < 0.05),="" manakala="" opg,="" pi3k,="" dan="" akt="" telah="" menurun="" dengan="" ketara="" (rajah="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" atau="" 80="" mg/kg)="" merendahkan="" ekspresi="" traf6="" dengan="" ketara="" (p="">< 0.05),="" diikuti="" dengan="" ungkapan="" rankl="" yang="" menurun="" dan="" opg="" meningkat,="" yang="" bermaksud="" nisbah="" opg/rankl="" telah="" dikawal="" selia.="" akibatnya,="" lata="" isyarat="" nf-κb="" telah="" dikurangkan="" dan="" pi3k="" akt="" dikawal="" oleh="" rawatan="" cis="" a="" (p=""><0.05). molekul="" 2017,="" 22,="" 197="" 5="" daripada="" 11="" 2.1.4.="" kesan="" cis="" a="" pada="" tahap="" ekspresi="" protein="" traf6,="" nf-κb="" pi3k,="" akt,="" opg,="" dan="" rankl="" analisis="" western="" blot="" mendedahkan="" bahawa="" berbanding="" kumpulan="" palsu,="" tahap="" protein="" traf6,="" nf-κb="" dan="" rankl="" dalam="" kumpulan="" ovx="" adalah="" meningkat="" dengan="" ketara="" (p=""><0.05), manakala="" opg,="" pi3k,="" dan="" akt="" menurun="" dengan="" ketara="" (rajah="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" atau="" 80="" mg/kg)="" mengecilkan="" ekspresi="" traf6="" dengan="" ketara="" (p=""><0.05), diikuti="" dengan="" ungkapan="" rankl="" dikurangkan="" dan="" opg="" meningkat,="" yang="" bermaksud="" nisbah="" opg/rankl="" telah="" dikawal="" selia.="" akibatnya,="" lata="" isyarat="" nf-κb="" telah="" dikurangkan="" dan="" pi3k/akt="" dikawal="" oleh="" rawatan="" cis="" a="" (p=""><>

Perbincangan

Memandangkan batasan pilihan terapeutik semasa untukosteoporosispenyakit, terdapat keperluan untuk alternatif daripada makanan atau tumbuhan ubatan semulajadi yang boleh dimakan. Sebagai sebahagian daripada usaha berterusan kami untuk menemui agen antiosteoporotik yang berkesan daripada TCM, kami menemui satu siri ekstrak, pecahan, dan sebatian yang mempunyai kesan sifat antiosteoporotik [13,14].Cistanche deserticolaialah TCM klasik yang penting, yang didapati mempunyai profil keselamatan yang menggalakkan [15] dan fungsi perubatan yang luas untuk rawatan kekurangan buah pinggang, dsb. [16]. Menurut teori TCM, TCM yang mempunyai kesan mencergaskan buah pinggang biasanya digunakan untuk merawatosteoporosis; glikosida phenylethanoid adalah juzuk bioaktif utama dalam herba ini, dengan itu membayangkan bahawa glikosida phenylethanoid yang terkandung dalam C. deserticola mungkin mempunyai sifat antiosteoporotik. Telah terbukti bahawa ekstrak C. deserticola boleh menghalang pengurangan BMD dengan ketara dan menghalang kemerosotan mikroarkitektur trabekular yang disebabkan oleh OVX [17]. Dalam percubaan in vitro, ia juga meningkatkan ALP, protein morfogenetik tulang-2 dan mRNA osteopontin dengan ketara, serta mineralisasi tulang osteoblas berbudaya [18]. Echinacoside, komponen bioaktif utama dalam C. deserticola yang direkodkan secara rasmi dalam farmakope Cina [11], mempamerkan aktiviti antiosteoporotik dengan dos yang tinggi 30~270 mg/kg berat badan/hari [19], dan selanjutnya keputusan in vitro menunjukkan bahawa ia boleh menggalakkan penjanaan semula tulang dengan meningkatkan nisbah OPG/RANKL dalam MC3T3-E1 Subclone 14 sel [20]. Cis A adalah salah satu daripada glikosida phenylethanoid yang diasingkan daripada C. deserticola, dan beberapa laporan mendedahkan bahawa sebatian ini mempunyai aktiviti antioksida [21] dan sifat anti-radang [22,23]. Kertas kerja yang diterbitkan baru-baru ini mendapati bahawa Cis A mempamerkan aktiviti perlindungan pada kedua-dua CCl4 dan hepatotoksisiti akibat alkohol pada tikus, dan ia juga menunjukkan sifat perlindungan pada kerosakan akibat etanol dalam hepatosit tikus kultur primer secara in vitro [24]. Dalam kajian kami sekarang, keputusan menunjukkan bahawa Cis A mempunyai aktiviti antiosteoporotik pada dos yang rendah (20 ~ 80 mg / kg berat badan / hari) dengan menggunakan model tikus yang diovariektomi, dan bioaktiviti ini dilakukan dengan merendahkan tahap TRAF6, menindas. ungkapan RANKL dan NF-κB serta merangsang OPG, PI3K dan Akt, yang bermaksud kesan terapeutik Cis A dalam tikus OVX adalah melalui mekanisme TRAF6-penyahaktifan NF-kappaB dan pengaktifan PI3K/Akt.

Adalah diketahui bahawa ovariektomi boleh menyebabkanosteoporosisdengan penurunan ketara dalam BMD, kekuatan biomekanikal, kualiti tulang, dan mikroarkitek tulang trabekular, dan perubahan di atas sebahagiannya disebabkan oleh kekurangan estrogen [25]. Sekarang, dalam percubaan in vivo sekarang, kajian kami menunjukkan bahawa ovariektomi yang disebabkanosteoporosismengakibatkan pengurangan ketara dalam kekuatan biomekanikal dan parameter struktur trabekular, termasuk BMD, BMC, TMC, dan Tb. N, dan meningkatkan Tb. Sp; dan rawatan Cis A dengan ketara meningkatkan sifat mekanikal tulang termasuk beban maksimum dan kekakuan, meningkatkan BMD, dan meningkatkan kebanyakan parameter struktur mikroarkitektur trabekular tulang berbanding dengan tikus dalam kumpulan OVX, menunjukkan bahawa Cis A berkesan dalam meningkatkan kualiti tulang. dan mikroarkitektur trabekular dalam tikus OVX.

Selain jumlah BMD, ujian lenturan tiga mata dan pengukuran mikroarkitektur tulang trabekular boleh mendiagnosis secara langsungosteoporosis, penanda pembentukan tulang, termasuk ALP dan BGP, dan indeks penyerapan tulang, termasuk TRAP, DPD, dan cathepsin K, juga digunakan untuk menjelaskan mekanisme antiosteoporotik berkaitan Cis A. Dalam kajian kami, aktiviti ALP dalam tikus kumpulan OVX menunjukkan trend peningkatan yang tidak ketara, yang menunjukkan peningkatan kadar pusing ganti tulang [26,27] dalam tempoh menopaus.osteoporosis; dos tinggi (80 mg/kg berat badan/hari) dan rendah (20 mg/kg berat badan/hari) bagi rawatan Cis A menunjukkan peningkatan ketara pada aktiviti ALP berbanding kumpulan palsu, manakala aktiviti BGP nampaknya tidak dipengaruhi oleh ovariektomi dalam semua kumpulan yang dirawat; TRAP, DPD dan cathepsin K meningkat dengan ketara dalam kumpulan OVX, dan pentadbiran Cis A dengan ketara mengurangkan ketiga-tiga penanda penyerapan tulang. Data di atas menunjukkan bahawa Cis A mempunyai aktiviti antiosteoporotik yang berpotensi, dan kesan ini dilakukan oleh peraturan metabolisme tulang, termasuk kedua-dua menyekat penyerapan tulang dan meningkatkan pembentukan tulang.

Penyelarasan antara osteoblas dan osteoklas merupakan faktor kritikal dalam mengekalkan integriti rangka. Osteoklas, mengekspresikan TRAP, melekat pada permukaan tulang melalui pembentukan zon pengedap terikat aktin, di mana enzim proteolitik, seperti cathepsin K, dilepaskan, yang membawa kepada pembentukan lubang resorpsi. Modulasi osteoklastogenesis oleh sel-sel belum matang dari keturunan osteoblastik dimediasi oleh RANKL dan OPG [28]. OPG ialah reseptor umpan yang menghalang pengaktifan RANKL osteoklastogenesis, dengan itu mengurangkan penyerapan tulang. RANKL, yang memberikan isyarat penting kepada progenitor osteoklas, adalah molekul terikat membran bagi keluarga ligan faktor nekrosis tumor yang menggalakkan pembentukan osteoklas. Nisbah ekspresi OPG/RANKL dipercayai sebagai parameter utama aktiviti osteoklastogenik, dan lata isyarat yang diaktifkan oleh RANKL termasuk laluan NF-κB dan PI3K [29]. Kepentingan laluan NF-κB kepada osteoklastogenesis ditunjukkan oleh fakta bahawa penghapusan NF-κB pada tikus mengakibatkan ketiadaan osteoklas matang [30]. TRAF6 telah terbukti sebagai sasaran yang menjanjikan untuk ubat anti-osteoporotik novel. TRAF{11}}tikus yang kekurangan menunjukkan osteoklastogenesis yang rosak dan osteopetrosis yang teruk sekali gus menunjukkan kepentingan TRAF6 dalam metabolisme tulang. Bukti yang muncul menunjukkan fungsi pengawalseliaan kritikal untuk TRAF6 dalam lata isyarat pengantara RANKL/RANK [4,31]. Data kajian semasa menunjukkan bahawa rawatan Cis A pada tikus OVX mengakibatkan pengurangan tahap ekspresi protein TRAF6, menurunkan RANKL, dan meningkatkan ekspresi OPG dan dengan itu menghalang pengaktifan RANKL NF-κB hiliran dan mengaktifkan laluan isyarat PI3K / Akt. , mencadangkan bahawa Cis A menghalang pembezaan osteoklas melalui penyahaktifan NF-kappaB pengantara TRAF6-dan pengaktifan PI3K/Akt dan meningkatkan nisbah OPG/RANKL, seterusnya menghalang osteoklastogenesis dan menggalakkan pembentukan tulang.

Rujukan

1. Lane, NE Epidemiologi, etiologi, dan diagnosisosteoporosis. Am. J. Obstet. Gynecol 2006, 194 (Bekalan S2), S3–S11. [CrossRef] [PubMed]

2. Kanis, JA; McCloskey, EV; Harvey, NC; Johansson, H.; Leslie, Ambang Intervensi WD dan DiagnosisOsteoporosis. J. Penambang Tulang. Res. 2015, 30, 1747–1753. [CrossRef] [PubMed]

3. Jiang, J.; Li, J.; Jia, X. Aktiviti antiosteoporotik pusat-icaridin (CIT) pada metabolisme tulang tikus ovariectomized. Molekul 2014, 19, 18690–18704. [CrossRef] [PubMed]

4. Li, J.; Zeng, L.; Xie, J.; Yue, Z.; Deng, H.; Ma, X.; Zheng, C.; Wu, X.; Luo, J.; Liu, M. Perencatan Osteoklastogenesis dan Penyerapan Tulang secara in vitro dan in vivo oleh xanthohumol flavonoid prenyl daripada hop. Sci. Rep. 2015, 5, 1–14.

5. Barzel, US Estrogens dalam pencegahan dan rawatan selepas menopausosteoporosis: Kajian semula. Am. J. Med. 1988, 85, 847–850. [CrossRef]

6. Zhu, Z.; Xue, LM; Han, T.; Jiao, L.; Qin, LP; Li, YS; Zheng, HC; Zhang, QY Kesan antiosteoporotik dan pencirian proteomik sasaran dan mekanisme Rebusan Er-Xian pada Osteoblastik UMR-106 dan osteoklas teraruh daripada RAW264.7. Molekul 2010, 15, 4695–4710. [CrossRef] [PubMed]

7. Wu, YB; Zheng, CJ; Qin, LP; Matahari, LN; Han, T.; Jiao, L.; Zhang, QY; Wu, JZ Aktiviti antiosteoporotik antrakuinon daripada Morinda Officinalis pada osteoblas dan osteoklas. Molekul 2009, 14, 573–583. [CrossRef] [PubMed]

8. Bonewald, LF Osteosit yang menakjubkan. J. Penambang Tulang. Res. 2011, 26, 229–238. [CrossRef] [PubMed]

9. Banin Hirata, BK; Oda, JM; Losi Guembarovski, R.; Ariza, CB; de Oliveira, CE; Watanabe, MA Penanda molekul untuk kanser payudara: ramalan mengenai tingkah laku tumor. Dis. Penanda 2014, 2014, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

10. Alipieva, K.; Korkina, L.; Orhan, IE; Georgiev, MI Verbascoside—Tinjauan tentang kejadiannya, (bio)sintesis dan kepentingan farmakologi. Bioteknol. Adv. 2014, 32, 1065–1076. [CrossRef] [PubMed]

11. Farmakope, Jawatankuasa Editorial Farmakope Cina. Farmakope Republik Rakyat China; Akhbar Sains dan Teknologi Perubatan China: Beijing, China, 2015.

12. Zhang, H.; Xing, WW; Li, YS; Zhu, Z.; Wu, JZ; Zhang, QY; Zhang, W.; Qin, LP Kesan penyediaan herba tradisional Cina pada osteoblas dan osteoklas. Maturitas 2008, 61, 334–339. [CrossRef] [PubMed]

13. Ma, X.-Q.; Zheng, C.-J.; Zhang, Y.; Hu, C.-L.; Bing, L.; Fu, X.-Y.; Han, L.-Y.; Xu, L.-S.; Rahman, K.; Qin, L.-P. Fflavonoid antiosteoporotik daripada Podocarpium podocarpum. Phytochem. Lett. 2013, 6, 118–122. [CrossRef]

14. Ye, Q.; Ma, XQ; Hu, CL; Lin, B.; Xu, LS; Zheng, CJ; Qin, LP Aktiviti antiosteoporotik dan konstituen Podocarpium podocarpus. Phytomedicine 2015, 22, 94–102. [CrossRef] [PubMed]

15. Gao, Y.; Qin, G.; Wen, P.; Wang, Y.; Fu, W.; Dia, L.; Yao, S.; Zhao, P. Penilaian keselamatan serbukCistanche deserticola YCMadengan 90-ujian makan sehari dalam tikus Sprague-Dawley. Kimia Dadah. Toksik. 2016, 1–7. [CrossRef] [PubMed]

16. Huang, ZX; Chen, GM; Zhao, KT; Chen, R.; Lin, CF Kajian tentang ketoksikanCistanche Deserticola. Dagu. J. Makmal Kesihatan. Technol. 2014, 24, 1098–1100.

17. Zhang, L.; Yue, X.; Zhang, L.; Zhao, J.; Chen, Y.; Cao, Z.; Liu, Y. Kesan anti-osteoporosis daripadaEkstrak Cistanche deserticola Madalam tikus ovariectomized. Trop. J. Pharm. Res. 2016, 15, 1929–1933. [CrossRef]

18. Li, TM; Huang, HC; Su, CM; Ho, TY; Wu, CM; Chen, tandas; Fong, YC; Tang, CHEkstrak cistanche deserticolameningkatkan pembentukan tulang dalam osteoblas. J. Pharm. Pharmacol. 2012, 64, 897–907. [CrossRef] [PubMed]

19. Li, F.; Yang, X.; Yang, Y.; Guo, C.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Aktiviti antiosteoporotik echinacoside dalam tikus ovariectomized. Phytomedicine 2013,

20, 549–557. [CrossRef] [PubMed] 20. Li, F.; Yang, Y.; Zhu, P.; Chen, W.; Qi, D.; Shi, X.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Echinacoside menggalakkan penjanaan semula tulang dengan meningkatkan nisbah OPG/RANKL dalam sel MC3T3-E1. Fitoterapia 2012, 83, 1443–1450. [CrossRef] [PubMed]

21. Xiong, Q.; Kadota, S.; Tani, T.; Namba, T. Kesan antioksidan feniletanoid daripadaCistanche deserticola. biol. Pharm. lembu jantan. 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

22. Nan, ZD; Zeng, KW; Shi, SP; Zhao, MB; Jiang, Y.; Tu, PF Phenylethanoid glycosides dengan aktiviti anti-radang daripada batangCistanche deserticolaberbudaya di padang pasir Tarim. Fitoterapia 2013, 89, 167–174. [CrossRef] [PubMed]

23. Xiong, Q.; Tezuka, Y.; Kaneko, T.; Li, H.; Tran, LQ; Hase, K.; Namba, T.; Kadota, S. Perencatan nitrik oksida oleh phenylethanoids dalam makrofaj diaktifkan. Eur. J. Pharmacol. 2000, 400, 137–144. [CrossRef]. Luo, H.; Cao, R.; Wang, L.; Zhu, L. Kesan perlindungan Cistanchis A pada kerosakan akibat etanol dalam hepatosit tikus kultur primer. Berbiomed. Farmakother. 2016, 83, 1071–1079. [CrossRef] [PubMed]

25. Nian, H.; Ma, MH; Nian, SS; Xu, LL Aktiviti antiosteoporotik icariin dalam tikus ovariectomized. Phytomedicine 2009, 16, 320–326. [CrossRef] [PubMed]

26. Swaminathan, R. Penanda biokimia bagi pusing ganti tulang. Clin. Chim. Acta 2001, 313, 95–105. [CrossRef]

27. Lim, DW; Kim, JG; Lee, Y.; Cha, SH; Kim, YT Kesan pencegahan ekstrak kulit kayu Eleutherococcus senticosus dalam akibat OVXosteoporosisdalam tikus. Molekul 2013, 18, 7998–8008. [CrossRef] [PubMed]

28. Bord, S.; Ireland, DC; Beavan, SR; Compston, JE Kesan estrogen pada osteoprotegerin, RANKL, dan ekspresi reseptor estrogen dalam osteoblas manusia. Bone 2003, 32, 136–141. [CrossRef]

29. Takayanagi, H. Osteoimmunology: berkongsi mekanisme dan crosstalk antara sistem imun dan tulang. Nat. Rev. Immunol. 2007, 7, 292–304. [CrossRef] [PubMed]

30. Franzoso, G.; Carlson, L.; Xing, L.; Poljak, L.; Shores, EW; Brown, KD; Leonardi, A.; Tran, T.; Boyce, BF; Siebenlist, U. Keperluan untuk NF-kappaB dalam pembangunan osteoklas dan sel B. Gene Dev. 1997, 11, 3482–3496. [CrossRef] [PubMed]

31. Tan, EM; Li, L.; Indran, IR; Chew, N.; Yong, EL TRAF6 mengantara penindasan osteoklastogenesis dan pencegahan kehilangan tulang yang disebabkan oleh ovariektomi oleh flavonoid prenyl novel. J. Penambang Tulang. Res. 2016. [CrossRef] [PubMed]

32. Jiao, L.; Cao, DP; Qin, LP; Han, T.; Zhang, QY; Zhu, Z.; Yan, F. Aktiviti antiosteoporotik sebatian fenolik daripada Curculigo orchioides. Phytomedicine 2009, 16, 874–881. [CrossRef] [PubMed]