Peranan Makrofaj Renal, AIM, Dan Ekspresi TGF-b1 dalam Perkembangan Fibrosis Renal dalam Pesakit IgAN

Untuk maklumat lanjut. kenalantina.xiang@wecistanche.com

Objektif: Untuk menganalisis ekspresi makrofaj, AlM dan TGF- 1 dalam buah pinggang pesakit lgAN dan untuk meneroka peranan makrofaj, AlM dan TGF- 1 dalam perkembangan fibrosis buah pinggang dalam pesakit lgAN .

Kaedah: Spesimen parafin tisu buah pinggang daripada 40 pesakit lgAN telah dipilih sebagai kumpulan pemerhatian. Pada masa yang sama, spesimen parafin tisu buah pinggang normal daripada 11 pesakit yang dirawat dengan nefrectomy telah dipilih sebagai kumpulan kawalan biasa. Kami memerhatikan taburan makrofaj dan ekspresi AlM dan TGF- 1 melalui pewarnaan imunohistokimia dan/atau imunofluoresensi.

Hasilnya: Bilangan makrofaj MO, M1 dan M2 didapati meningkat pada pesakit lgAN. M0 makrofaj terutamanya terpolarisasi ke arah makrofaj M2. Ekspresi AlM dan TGF- 1 adalah jauh lebih tinggi pada pesakit lgAN berbanding NC. Makrofaj M2, AlM dan TGF- 1 berkorelasi positif dengan kreatinin serum dan proteinuria 24-jam tetapi berkorelasi negatif dengan eGFR. Makrofaj M2, AlM dan TGF- 1 berkorelasi positif dengan kawasan fibrotik.

Kesimpulan: Makrofaj M2, AlM dan TGF- 1 memainkan peranan penting dalam proses fibrosis lgAN, dan ketiga-tiganya mempengaruhi satu sama lain.

Kata kunci: IgAN, fibrosis buah pinggang, makrofaj, AlM, TGF- 1

Kenali cistanche tempat beli dan kesan cistanche melalui pautan 

PENGENALAN

Nefropati IgA(IgAN) ialah glomerulonefritis imun sistemik biasa, yang dicirikan oleh pemendapan kompleks imun berasaskan IgA atau IgA di kawasan mesangial dengan percambahan sel mesangial dan pengembangan matriks mesangial(1,2). Walaupun IgAN berkembang dengan perlahan, sehingga 50 peratus pesakit berkembang ke peringkat akhir, dan ia adalah jenis utama yang menyebabkan ESRD(3).Fibrosis buah pinggangadalah laluan biasa dalam perkembanganpenyakit buah pinggang yang kronik(CKD)(4). Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, didapati bahawa makrofaj, Apoptosis inhibitor of macrophage(AIM) dan transforming growth factor- 1(TGF- 1) semuanya memainkan peranan penting dalam fibrosis buah pinggang.

Makrofaj terlibat dalam perkembangan banyak penyakit buah pinggang. Sesetengah sarjana percaya bahawa pemendapan makrofaj dalam buah pinggang boleh digunakan sebagai penunjuk penting untuk menilai perkembangan dan prognosis penyakit buah pinggang. Makrofaj dibahagikan kepada jenis M0, M1 dan M2(5). Ml makrofaj menggalakkan Jenis tindak balas keradangan dan membuang bakteria atau sel tumor dengan merembeskan faktor keradangan seperti IL-1, IL-6, IL-12, TNF- , Spesies oksigen reaktif (ROS), dan tidak. Walau bagaimanapun, jika keradangan berterusan, ia akan terus merebak dan akhirnya membawa kepada fibrosis tisu (6). Dengan menyatakan Arginase 1(Argl), protein 3 seperti Chitinase (Yml), dan faktor mitogenik yang disebabkan oleh hipoksia (HIMF) untuk menentang rangsangan mikroorganisma patogen dan alergen, makrofaj M2 mengehadkan tindak balas keradangan dan penyesuaian jenis I.imuniti, menghapuskan sisa, menggalakkan angiogenesis, memainkan peranan anti-radang, mengurangkan apoptosis sel, menggalakkan percambahan sel, dan menggalakkan pembaikan tisu(7,8). Tepat sekali, jenis makrofaj yang memainkan peranan utama dalam fibrosis buah pinggang IgAN masih menjadi kontroversi. . Kajian menunjukkan bahawa CD68 dan CD80 boleh digunakan sebagai penanda permukaan khusus makrofaj MO dan M1(9); CD163 adalah reseptor mannose yang sangat spesifik yang dinyatakan dalam makrofaj M2, yang tidak dinyatakan dalam makrofaj M1. Oleh itu CD68, CD80 dan CD163 boleh digunakan sebagai penanda untuk mewakili kehadiran pelbagai jenis makrofaj(10-12).

Di samping itu, AIM pada asalnya ditemui sebagai protein makrofaj yang dirembeskan dan dengan itu dinamakan Spa(13). Ia kemudiannya dinamakan AIM selepas kesan antiapoptosisnya pada sel darah putih ditemui(14), atau CD5L mengikut tatanama organisasi genom manusia. AIM mempunyai pelbagai fungsi dan memainkan peranan penting dalam mengawal keseimbangan migrasi leukosit, metabolisme, danradangtindak balas. Banyak jenis literatur telah menyebut bahawa AIM memainkan peranan dalam tindak balas keradangan imun(15), homeostasis lipid, bukan alkohol.penyakit hati(16), penyakit autoimun, aterosklerosis (17), dan penyakit lain. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, terdapat banyak kajian tentang peranan AIM dalam penyakit buah pinggang. Sebagai contoh, Tadashi Uramat et al. (18) ditemui dalam model tikus rawan hipertensi yang mengurangkan ekspresi AIM dan oxLDL (lipoprotein berketumpatan rendah teroksida, yang mempunyai kesan mengawal selia ekspresi AIM) dengan berkesan boleh mengurangkan fibrosis tisu buah pinggang. Begitu juga, Megumi Oshima et al. (19) mendapati bahawa kawasan pemendapan AIM dan makrofaj dalam tisu buah pinggang berkorelasi positif dengan keterukan proteinuria dan penurunan eGFR pada pesakit dengan CKD. Kesemua kajian di atas mencadangkan bahawa AIM juga memainkan peranan penting dalam proses fibrosis buah pinggang. Walau bagaimanapun, keputusan yang bertentangan wujud pada masa ini: Ia telah ditemui dalam model kecederaan buah pinggang akut bahawa AIM boleh menggalakkan penyingkiran serpihan sel apoptosis oleh sel epitelium tiub buah pinggang (20).

Pada masa ini, banyak kajian telah menghuraikan peranan makrofaj, AIM dan TGF- 1 dalam penyakit buah pinggang, tetapi terdapat beberapa kajian tentang peranan ketiga-tiganya dalam kemajuan IgAN, proses fibrosis dan korelasi antara ketiga-tiganya. Sekiranya patogenesis perkembangan fibrosis IgAN dapat dijelaskan, ia boleh membuka tetingkap baru untuk rawatan dan prognosis IgAN. Untuk menyiasat peranan makrofaj, AIM dan TGF- 1 dalam perkembangan fibrosis IgAN, kami mengesan penyusupan makrofaj dalam tisu buah pinggang pesakit IgAN dan tahap ekspresi serta ciri-ciri AIM dan TGF- 1 dan kemudian menganalisis hubungan antara tiga dan penunjuk berkaitan klinikal dan kawasan fibrosis buah pinggang pesakit IgAN.

KAEDAH

Mata pelajaran

Empat puluh pesakit dengan IgAN disahkan melalui biopsi buah pinggang telah diambil dari Hospital Rakyat Subei. Pesakit dengan penyakit sistemik kronik (systemic lupus erythematosus, diabetes mellitus, Henoch-Schönlein purpura, sirosis hati, dll.), (rawatan glucocorticoid, imunosupresi, ACEI, ARB, dll.), atau kegagalan buah pinggang lanjutan (anggaran kadar penapisan glomerular( eGFR) Kurang daripada atau sama dengan 15ml/min/1.73m2) dikecualikan. Tahap eGFR dikira menggunakan persamaan Modifikasi Diet dalam Penyakit Renal (MDRD).Maklumat klinikal (jantina, umur, berat, sejarah penyakit) dan data makmal ( albumin serum, kreatinin serum, sel darah merah air kencing, protein urin 24 jam dan paras eGFR) telah dikumpulkan semasa biopsi. Tisu buah pinggang normal secara histologi yang dibedah bersebelahan dengan tumor buah pinggang digunakan sebagai kawalan(n=11). Persetujuan termaklum bertulis diperoleh daripada semua subjek dan kajian itu telah diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Hospital Orang Ramai Subei.

Pewarnaan Imunofluoresen dan Imunohistokimia

Bahagian tisu buah pinggang manusia dianalisis dengan pewarnaan imunohistokimia dan imunofluoresen. Pewarnaan Masson dilakukan pada semua bahagian tisu buah pinggang manusia. Bahagian tersebut telah dinyahparafin dan dirawat dengan 3 peratus hidrogen dioksida. Selepas pengambilan dan penyekatan antigen, bahagian diinkubasi semalaman dengan antibodi CD68 manusia (dicairkan 1:600, Abcam), antibodi CD80 manusia (dicairkan 1:600, Abcam), antibodi CD163 manusia (dicairkan 1:600, Abcam), AIM manusia antibodi (dicairkan 1:150, Abcam) atau antibodi TGF{12}} manusia (dicairkan 1:500, Abcam). Selepas rawatan dengan antibodi sekunder biotin-konjugasi berlabel lobak pedas peroksidase (dicairkan 1:200, Biosintesis Bioteknologi, China) dan pewarnaan DAB (ZSGB-Bio, China), bahagian diperhatikan di bawah mikroskop. 10 medan yang dipilih secara rawak (400×) telah diimej setiap bahagian. Ekspresi makrofaj dalam glomeruli dan tubul dikira menggunakan Perisian Analisis Imej Image-Pro Plus (Meyer Instruments, Inc., Houston, TX, USA); ungkapan AIM dan TGF- 1 dalam glomeruli dikira dengan cara yang sama. Ketumpatan optik bersepadu (IOD) diukur untuk setiap imej oleh dua pakar patologi secara bebas. Purata IOD/kawasan bernoda positif (AIOD) kemudiannya dikira. Tahap ekspresi makrofaj, AIM dan TGF- 1 dalam biopsi buah pinggang IgAN dan biopsi buah pinggang normal dibandingkan dengan mengira AIOD. Nukleus diwarnai dengan DAPI pada suhu bilik selama 5 minit. Imej bahagian berlabel pendarfluor diperoleh menggunakan mikroskop pendarfluor (ZEISS, Axioimager.Z2).

Pewarnaan Masson untuk Penilaian Fibrosis

Kawasan fibrosis berwarna hijau, dan kami mengira peratusan kawasan hijau di kawasan medan visual untuk mencerminkan tahap fibrosis. Tiga medan pembesaran tinggi dipilih secara rawak untuk setiap bahagian (Semua spesimen diambil gambar dalam keadaan yang sama), mengelakkan kapal besar. IPP6.0 sistem analisis imej digunakan untuk menganalisis nisbah luas kawasan fibrosis secara statistik (Semua spesimen dianalisis dengan cara yang sama).

Analisis Statistik

Analisis statistik telah dilakukan menggunakan SPSS 22.0. Data dinyatakan sebagai min ± SD atau sebagai median (julat). Perbezaan yang ketara dinilai menggunakan sama ada pada ujian atau ANOVA sehala. Ujian Mann-Whitney U bukan parametrik telah dilakukan untuk membandingkan ketumpatan optik bersepadu antara kumpulan eksperimen. P dua ekor<0.05 was="" considered="" statistically="">

KEPUTUSAN

Taburan Makrofaj dalam Imunofluoresensi Buah Pinggang dan imunohistokimia (Rajah 1,2) menunjukkan bahawa makrofaj dalam kumpulan IgAN terutamanya diedarkan dalam celahan tiub renal, dan kadang-kadang dalam plexus kapilari glomerular dan lumen tiub buah pinggang, manakala makrofaj tidak diedarkan dalam normal. tisu buah pinggang.

Selain itu, bilangan makrofaj M{{0}}, Ml, dan M2 dalam interstitium buah pinggang IgAN adalah berbeza, dan terdapat lebih banyak polarisasi M0 terhadap M2(P<0.05, figure="">

Ekspresi AIM, TGF- 1 dalam Tisu Renal Dalam kumpulan IgAN, AIM terutamanya dinyatakan dalam gelung kapilari glomerular dan sel epitelium tubular renal, serta dalam lumen tubular renal; TGF- 1 dinyatakan terutamanya dalam sel epitelium tubular renal, tetapi juga dalam interstitium renal. Walau bagaimanapun, ekspresi AIM dan TGF- 1 adalah jarang atau tiada dalam tisu buah pinggang normal (Rajah 4,5).

Ungkapan Makrofaj, AlM, TGF- 1 Dengan Manifestasi Klinikal lgAN

The infiltration of MO and M1 macrophages in the renal tissue of the IgAN group was not significantly correlated with age, sex, urinary red blood cell count,24-hour proteinuria, and eGFR (P>{{0}}.05). Bilangan penyusupan makrofaj M2 dikaitkan secara positif dengan kreatinin serum dan 24-jam proteinuria(r=0.447, P=0.004; r=0.436, P{ {10}}.005), dan berkorelasi negatif dengan eGFR(r=-0.332, P=0.004)(Rajah 6).24-protein kencing jam, kreatinin serum dan eGFR dikaitkan dengan AIM dan TGF- 1, antaranya 24-protein urin jam dan kreatinin serum dikaitkan secara positif dengan AIM dan TGF- 1, manakala eGFR dikaitkan secara negatif dengan AIM dan TGF-B1 (Jadual 1). Oleh kerana tiada korelasi yang ketara antara makrofaj M0 dan M1 dan penunjuk klinikal, data seterusnya hanya mengira makrofaj M2. Analisis statistik selanjutnya menunjukkan bahawa ekspresi makrofaj M2, AIM dan TGF-B1 adalah berbeza dalam jenis patologi yang berbeza, dan terdapat korelasi antara makrofaj M2, AIM dan TGF- 1(Jadual 2).

Korelasi Makrofaj M2, AlM, TGF- 1 dan Kawasan Fibrotik

Analisis statistik korelasi antara kawasan fibrotik dan M2-makrofaj jenis, AIM dan TGF- 1 dalam tisu pesakit IgAN menunjukkan bahawa makrofaj M2 berkorelasi positif dengan kawasan fibrotik (Rajah 7,r{ {4}}.777, P<0.01);aim was="" positively="" correlated="" with="" the="" fibrotic="" area(figure="" 8,r="0.768,"><0.01); tgf-β1="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" fibrotic="" area="" (figure="" 9,="" r="0.853,"><>

PERBINCANGAN

IgAN ialah glomerulonefritis primer yang paling biasa dan kira-kira 40 peratus pesakit akan mengalami penyakit buah pinggang peringkat akhir (ESRD) dalam masa 20-30 tahun (21). Fibrosis buah pinggang adalah proses yang diperlukan untuk semua CKD untuk berkembang menjadi ESRD. Manifestasi patologi adalah pembentukan sejumlah besar fibroblas dan myofibroblas dan pengumpulan sejumlah besar matriks ekstraselular, yang membawa kepada glomerulosklerosis dan fibrosis interstisial tiub renal. Akhirnya, fungsi buah pinggang hilang kerana kehilangan sejumlah besar nefron normal(4). Pada masa ini, fibrosis buah pinggang terutamanya dibahagikan kepada empat peringkat:1. Pengaktifan sel epitelium tubular renal dan penyusupan monosit/makrofaj disebabkan oleh keradangan. 2. Pembebasan sitokin, faktor pertumbuhan, dan faktor pro-fibrogenik yang lain.3. Pembentukan fibrosis terutamanya ditunjukkan dalam pemendapan protein matriks. 4. Pemendapan matriks ekstraselular (ECM), adalah peringkat utama kerosakan struktur dan fungsi buah pinggang (pengurangan ketara nefron berkesan dan penurunan selanjutnya kadar penapisan glomerular).

Sel stem myeloid membezakan kepada monosit dan memasuki peredaran dari sumsum tulang. Monosit dalam peredaran berhijrah dan menyusup ke dalam tisu di bawah rangsangan yang berbeza seperti keradangan dan trauma, dan kemudian dibezakan menjadi makrofaj. Makrofaj ialah sel heterogen dalam sistem imun semula jadi, yang boleh mengawal selia fenotipnya secara dinamik untuk menyesuaikan diri dengan persekitaran mikro tempatan. Monosit dalam peredaran, didorong oleh isyarat keradangan, memasuki buah pinggang dan melekat pada sel endothelial vaskular, mendorong pembebasan kemokin dan faktor keradangan kronik pada masa yang sama. Ini menghasilkan pengagregatan tempatan yang meluas bagi monosit dalam interstisial buah pinggang, yang membezakan kepada makrofaj yang diaktifkan secara klasik (M1) atau makrofaj yang diaktifkan secara terpilih (M2) melalui laluan yang berbeza. Pada mulanya, patogen dan sel nekrotik mengaktifkan reseptor seperti Tol dan reseptor imun semula jadi yang lain, menggalakkan polarisasi makrofaj M0 kepada makrofaj M1. Makrofaj M1 memendap melalui membran bawah tanah pada peringkat awal kecederaan buah pinggang, menggalakkan satu siri tindak balas keradangan dan membawa kepada kecederaan buah pinggang selanjutnya. Sebagai perkembangan kecederaan, sel apoptosis dan nekrotik difagositosis oleh makrofaj, serta faktor anti-radang generasi berikutnya, menggalakkan polarisasi makrofaj ke arah makrofaj M2. Makrofaj M2 terutamanya memainkan peranan anti-radang, menggalakkan pembaikan buah pinggang dan menyebabkan fibrosis(6,22-26). Oleh itu, keseimbangan dinamik makrofaj M1 dan M2 menunjukkan proses keradangan dan pembaikan tisu, yang menentukan prognosis buah pinggang dan mendorong usaha untuk terapi yang menyasarkan makrofaj.

Dalam kajian ini, kami memilih tisu patologi buah pinggang pesakit yang didiagnosis dengan IgAN dan memerhatikan polarisasi makrofaj yang berbeza. Kami memilih CD68 untuk mewakili M0, CD80 untuk mewakili M1 dan CD163 untuk mewakili M2. Keputusan kami menunjukkan bahawa bilangan makrofaj M0(CD68*), makrofaj M1(CD80*) dan M2(CD163*) masing-masing meningkat dengan ketara berbanding dengan buah pinggang biasa, menunjukkan bahawa terdapat penyusupan makrofaj yang agak jelas dalam tisu buah pinggang pesakit lgAN.

It was not only found that the infiltration of macrophages in the renal tissue of IgAN patients increased significantly, but also found that there were differences in the number of M0, Ml, and M2 macrophages in the interstitium of lgAN patients, with more polarization of M0 towards M2. In other words, the infiltration of M2 macrophages is mainly found in the renal tissue of IgAN patients. There was a positive correlation between M2 macrophages and fibrotic area; The distribution of M0 and M1 macrophages in the lgAN group had no significant correlation with age, sex, urinary red blood cell count, 24-hour proteinuria, and eGFR(P>0.05); Walau bagaimanapun, bilangan penyusupan makrofaj M2 berkorelasi positif dengan kreatinin serum dan proteinuria 24-jam; Dibuktikan bahawa makrofaj M2 memainkan peranan yang lebih penting dalam perkembangan fibrosis IgAN.

AIM juga memainkan peranan penting dalam banyak penyakit, seperti aterosklerosis, penyakit hati bukan alkohol(16), rintangan insulin (27), penyakit autoimun, dll. Pada masa yang sama, AIM berkait rapat dengan fibrosis buah pinggang. Megumi Oshima et al.(19) mengambil tisu buah pinggang daripada 43 pesakit biopsi buah pinggang dan mendapati kawasan pemendapan AIM dan makrofaj berkorelasi positif dengan keterukan proteinuria dan penurunan eGFR pada pesakit. Ia mencadangkan bahawa AIM mungkin mengalami kerosakan buah pinggang yang lebih teruk. Tadashi Uramat et al.(18) mewujudkan hipertensi yang teruk dan menyebabkan kerosakan buah pinggang dengan menggunakan model kecenderungan hipertensi spontan (SHRsp) pada tikus. Selepas rawatan hipertensi dengan ubat-ubatan yang berkaitan, didapati bahawa bilangan makrofaj yang menyusup ke glomeruli dan interstitium telah berkurangan dengan ketara. Berbanding dengan kumpulan kawalan, ekspresi AIM dan oxLDL dikurangkan dengan ketara. Selain itu, tahap fibrosis dalam tisu buah pinggang adalah kurang daripada kumpulan yang tidak dirawat.

Dalam kajian kami, terdapat perbezaan ketara dalam ekspresi AIM dalam setiap gred patologi, dan ekspresinya secara signifikan berkorelasi positif dengan makrofaj M2, TGF- 1, dan tahap fibrosis buah pinggang. Eksperimen ini dan keadaan di atas semuanya menunjukkan bahawa AIM berkaitan dengan proses fibrosis buah pinggang CKD, yang mungkin berkaitan dengan kesan anti-apoptosis AIM pada makrofaj, dan kemudian isyarat keradangan berterusan menggalakkan perkembangan selanjutnya fibrosis. Takako Tomita et al.(28) mengekstrak sel nekrotik daripada tikus dengan peritonitis yang disebabkan oleh polisakarida yis secara in vitro dan mendapati bahawa AIM boleh menggalakkan fagositosis makrofaj Ml dan M2a kepada sel nekrotik. Ia juga ditemui dalam model IgAN dan model kecederaan renal akut iskemia-reperfusi (IRI) bahawa AIM boleh menggalakkan pembersihan IgAl dan sel apoptosis yang menyebabkan nefritis oleh makrofaj. Daripada kajian di atas, didapati bahawa AIM, seperti makrofaj, mungkin memainkan peranan yang berbeza dalam pelbagai peringkat penyakit, manakala peranan AIM dalam penyakit buah pinggang mungkin serupa dengan makrofaj.

Dalam model CKD yang disebabkan oleh IRI, makrofaj M2 berkait rapat dengan proses fibrosis buah pinggang, yang disebabkan terutamanya oleh merembeskan TGF- 1 (29). TGF- 1 tergolong dalam keluarga super TGF dan memainkan peranan penting dalam pembangunan CKD(30). Transdifferentiation myofibroblast epithelial tiub (TEMT) juga merupakan mekanisme penting fibrosis interstisial buah pinggang, dan TGF- 1 ialah sitokin penting yang mengawal TEMT (31). Dengan menggunakan antibodi peneutralan TGF- 1, perencat, kalah mati gen dan kaedah lain untuk mengambil TGF- 1, tahap fibrosis buah pinggang boleh dikurangkan dengan berkesan (32). Sehingga kini, mekanisme TGF{11}} menyebabkan fibrosis buah pinggang terutamanya termasuk perkara berikut: 1. Mendorong sintesis matriks ekstraselular, seperti kolagen I dan fibronektin(33). 2. Matriks metalloproteinase (MMPs) dan perencat tisu metalloproteinase (TIMPs) tidak seimbang, sekali gus mengurangkan degradasi matriks ekstraselular.3. Menggalakkan percambahan sel mesangial, dan rembesan kolagen dan menyebabkan kerosakan pada sel epitelium dan podosit, dengan itu menggalakkan keradangan dan fibrosis tisu selanjutnya (34).4. Menggalakkan transdifferentiasi dan percambahan myofibroblas daripada pelbagai sumber (seperti pericytes, sel epitelium, sel endothelial, fibroblas, makrofaj, dll.), dengan itu menjadi pengantara perkembangan fibrosis(35). Kajian terdahulu mendapati bahawa mRNA dan ekspresi protein TGF-B1 dalam IgAN dan tahap penyusupan makrofaj M2 dalam tisu buah pinggang meningkat dengan ketara berbanding dengan tisu buah pinggang biasa(31), TGF- 1 diekspresikan bersama dengan makrofaj M2 dalam tisu biopsi buah pinggang hipertensi yang disebabkan oleh CKD. Semua ini mencadangkan bahawa makrofaj M2 mungkin memainkan peranan dalam fibrosis buah pinggang melalui TGF- 1.

Dalam percubaan ini, kami mendapati bahawa dengan peningkatan gred patologi, penyusupan makrofaj M2 dan tahap ekspresi AIM dan TGF- 1 juga meningkat. Terdapat perbezaan yang ketara antara kumpulan patologi yang berbeza. Ketiga-tiganya berkait rapat dengan 24-protein urin jam, kreatinin serum, eGFR dan penunjuk klinikal lain pesakit IgAN, dan terdapat korelasi positif yang ketara antara ketiga-tiga dan kawasan fibrosis buah pinggang, yang menunjukkan bahawa M2 makrofaj, AIM, dan TGF-B1 semuanya terlibat dalam kejadian dan perkembangan lgAN dan berkait rapat dengan proses fibrosis IgAN. Keputusan eksperimen ini adalah konsisten dengan kajian Braga et al. (36,37), yang mendapati bahawa makrofaj M2 terlibat dalam fibrosis buah pinggang halangan ureter unilateral (UUO) dalam laluan isyarat MyD88. Sebaliknya, kajian mendapati bahawa makrofaj memainkan peranan anti-heroik dalam fasa pemulihan nefropati obstruktif. Nishida et al. (38) menunjukkan bahawa reseptor jenis 1 angiotensin II (Agtr1) pada makrofaj interstisial berfungsi untuk mengurangkan fibrosis buah pinggang pada peringkat akhir UUO. Lopez-Guisa et al.(39) mengesahkan bahawa makrofaj menunjukkan peranan pelemahan fibrosis melalui pengaktifan laluan pusing ganti kolagen lisosom dengan menyatakan reseptor mannose 2 (Mrc2) dalam UUO.

Makrofaj M2, AIM dan TGF{1}} memainkan peranan penting dalam proses fibrosis IgAN dan ketiga-tiganya mempengaruhi satu sama lain. Walau bagaimanapun, disebabkan saiz sampel yang kecil bagi eksperimen ini dan mekanisme interaksi serta hubungan antara ketiga-tiganya, pengesahan lanjut terhadap eksperimen haiwan yang berkaitan akan diperlukan.