Peranan Ujian Genetik dalam Proses Diagnostik Pesakit Pediatrik Dengan Penyakit Buah Pinggang: Pengalaman Satu Institusi Ⅱ

Kajian CES dan pengasingan keluarga membenarkan pengenalpastian varian penyebab dalam perkadaran pesakit yang ketara

Semua pesakit menjalani CES dan dianalisis untuk keutamaan varian dan anotasi mengikut kriteria yang diterangkan di atas (Rajah 1). Secara keseluruhan, varian dikesan dalam 154 pesakit (80.6%) dengan 37 pesakit (19.4%) tidak menunjukkan variasi. Pengesahan Sanger bagi varian yang dikenal pasti dan kajian pengasingan keluarga telah dilakukan setakat ini dalam 90 daripada 154 pesakit (58.4%). Pendekatan ini membolehkan kami (i) mengesahkan varian yang dikenal pasti oleh CES dalam semua kes, (ii) mengesahkan pengasingannya dengan fenotip, dan (iii) mengenal pasti varian de novo. Antara kumpulan pesakit di mana varian telah dikenal pasti oleh CES, laporan genetik konklusif diperolehi dalam 71 (46.1%; dalam 49 pesakit, varian telah disahkan oleh penjujukan Sanger dan kajian pengasingan keluarga), manakala 22 (14.3%) dan 61 ( 39.6%) pesakit kekal dengan diagnosis genetik yang tidak pasti atau masing-masing diklasifikasikan sebagai tidak konklusif (Rajah 3).

Secara keseluruhannya, penggunaan CES diikuti dengan, apabila boleh, kajian pengasingan keluarga membolehkan kami mencapai diagnosis genetik dalam perkadaran kes yang ketara. Hasil diagnostik adalah heterogen apabila mempertimbangkan kategori makro penyakit yang berbeza dengan ciliopati yang menunjukkan kadar diagnostik yang lebih tinggi (74.4% daripada pesakit yang didiagnosis), diikuti oleh nephrolithiasis dan tubulopathies (masing-masing 45.5% dan 45%), glomerulopati dan CAKUT (24.2 dan 20.6). %). "lain-lain" kategori makro adalah yang paling heterogen dan membentangkan hasil diagnostik paling rendah, dengan hanya 1 pesakit yang mempunyai diagnosis genetik daripada 14 (7.1%; Jadual 1). Tidak menghairankan, apabila mempertimbangkan cerita positif berbanding keluarga negatif, kumpulan bekas pesakit menunjukkan kadar diagnostik yang lebih tinggi dengan 59.5% pesakit didiagnosis (Jadual 1).

KLIK DI SINI UNTUK MENDAPATKAN CISTANCHE BERKUALITI TERBAIK UNTUKPENYAKIT GLOMERULAR

Taburan varian dan ciri dalam kohort pesakit yang didiagnosis

Melihat kepada pesakit dengan laporan genetik konklusif, 96 varian dalam 32 gen telah dikenal pasti dan disenaraikan dalam laporan genetik pesakit (Rajah 4a dan Fail Tambahan 1: Jadual S1–S6). Beberapa pertimbangan boleh diambil daripada menganalisis data: (i) Beberapa pesakit dibentangkan dengan lebih daripada satu varian sama ada dalam gen yang sama atau berbeza, tidak mengambil kira varian heterozigot kompaun dalam gen resesif (cth, #41, #43, # 109; Rajah 4a dan Fail tambahan 1: Jadual S2, S3). Sebilangan besar kes ini tergolong dalam kategori makro ciliopati dan khususnya kepadapenyakit buah pinggang polikistik, menimbulkan persoalan sama ada varian tambahan dalam gen PKD1 mungkin mempunyai kesan klinikal, yang membawa kepada diagnosis lebih awal (manuskrip sebagai persediaan). (ii) Gen yang paling kerap bermutasi dalam kohort ialah COL4A5 dan PKD1, selaras dengan Alport dan kekerapan penyakit buah pinggang polikistik (ADPKD) dominan autosomal. (iii) Kebanyakan varian yang dikenal pasti adalah mutasi missense (n=53; 55.2%), diikuti oleh frameshift (n=15; 15.6%), karut (n=14; 145.6%) , dan variasi penyambungan (n=9; 9.4%). Selain itu, 5 CNV berbeza dilaporkan melibatkan gen penyebab CAKUT atau penyakit glomerular (5.2%; Rajah 4a dan Tambahan fle 1: Jadual S1-S6). (iv) Nephrolithiasis dan tubulopathies menunjukkan bilangan varian C5 tertinggi (masing-masing n=6 dan n=4) dan bilangan mutasi C3 terendah (n=1 setiap satu), iaitu pada sebaliknya sangat diwakili dalam ciliopathies (n=20). Varian C4 mewakili paling banyak mutasi antara semua kategori makro penyakit (Rajah 4b).

v) Dalam laporan genetik konklusif, CES menghasilkan pengenalpastian varian C5 patogenik dalam 17 pesakit (24%), kemungkinan varian C4 patogenik dalam 34 (47.9%), varian yang tidak diketahui kepentingannya-VUS C3 dalam 16 subjek (22.5%). dan dalam 4 kes varian dikelaskan sebagai C3/C4 (5.6%). Apabila melihat jenis varian/ kekerapan dalam pesakit dan cara pewarisan, majoriti varian C5 adalah mutasi heterozigot (n=8), diikuti oleh homozigot (n=6) dan heterozigot kompaun (n =2) varian. C5 CNV adalah sebahagian daripada kategori ini. Corak pengedaran yang serupa muncul untuk varian C4 dan C3, dengan mutasi heterozigot adalah yang paling diwakili (masing-masing n=23 dan n=9; Rajah 4c).

(vi) Tiada perbezaan ketara dalam kadar diagnostik diserlahkan apabila mempertimbangkan subjek Eropah berbanding bukan Eropah, walaupun perlu diambil kira bahawa kumpulan terdahulu mewakili majoriti besar kohort. Akhir sekali, (vii) secara bebas daripada kategori penyakit yang dipertimbangkan, kebanyakan varian yang dikenal pasti telah pun diterbitkan dan dikaitkan dengan fenotip klinikal tertentu (Rajah 4d). Ciliopati, dan khususnya penyakit buah pinggang polikistik, adalah satu-satunya syak wasangka yang menunjukkan sejumlah besar varian yang tidak diterbitkan (13 daripada 46), mungkin disebabkan bilangan varian yang lebih tinggi yang dikenal pasti berbanding dengan kategori penyakit lain. Semua varian yang dikenal pasti diperincikan dalam Fail tambahan 1: Jadual S1–S6.

Perbincangan

Sukar jarang berlaku pada kanak-kanak,CKDmempunyai kesan negatif yang mendalam terhadap pertumbuhan dan perkembangan normal, menjejaskan kuantiti dan kualiti hidup. Analisis terkini ke atas pesakit dewasa dan kanak-kanak, yang telah menerima pemindahan buah pinggang atau termasuk dalam senarai menunggu pemindahan atau hadir dalam pendaftaran Persatuan Renal Eropah-Persatuan Dialisis dan Pemindahan Eropah (ERA-EDTA) menunjukkan bahawa sehingga 27% daripada mereka tidak didiagnosis pada masa pemindahan [7]. Selaras dengan data ini, dengan menganalisis Pendaftaran Pemindahan Pusat Pemindahan Kebangsaan Itali, kami baru-baru ini melaporkan bahawa kira-kira 17.2% daripada kohort pediatrik tanpa diagnosis klinikal yang jelas [6]. Di samping itu, apabila mempertimbangkan kategori penyakit yang berbeza, majoriti besar dipengaruhi oleh keadaan yang jarang berlaku dan sehingga 50% oleh penyakit monogenik [6]. Keputusan ini menunjukkan bahawa pemeriksaan genetik mungkin merupakan tambahan yang berharga untuk meningkatkan kadar diagnostik. Ia juga mewakili alat yang mujarab untuk mengesahkan diagnosis klinikal, serta memahami genetik yang menggariskan penyakit yang lebih kompleks atau sindromik, akhirnya memberi kesan kepada prognosis, pengurusan dan rawatan pesakit.

Di sini, kami melaporkan keputusan penggunaan sistematik ujian genetik yang berkuasa, seperti CES dalam kerja diagnostik pesakit kanak-kanak yang terjejas oleh nefropati. Secara keseluruhannya, ujian genetik konklusif, berdasarkan CES diikuti oleh kajian pengasingan berasaskan Sanger, diperoleh dalam 37.1% pesakit, dengan tahap heterogen tertentu apabila mempertimbangkan kategori makro penyakit yang berbeza. Seperti yang dijangka, berdasarkan persembahan klinikal, kadar pengesanan tertinggi diperolehi untuk ciliopati (74.4%), diikuti oleh nefrolitiasis (45.5%) dan penyakit tiub (45%), manakala kebanyakan penyakit glomerular dan CAKUT kekal tidak didiagnosis. Dalam kes penyakit glomerular, ujian genetik negatif adalah penting kerana ia menolak punca struktur penyakit itu, dengan implikasi yang ketara untuk pengurusan klinikal dan hasil pemindahan.

Data ini adalah selaras dengan keputusan yang diterbitkan sebelum ini, walaupun beberapa perbezaan mungkin didaftarkan berdasarkan kumpulan pesakit yang dipertimbangkan, terutamanya untuk kohort yang sangat homogen terutamanya berdasarkan kumpulan etnik yang sama (Jadual 2). Perlu diingatkan bahawa kebanyakan keluarga di mana VUS dikenal pasti sedang disiasat untuk pengasingan varian, kemungkinan besar meningkatkan prestasi ini.

Keputusan ini menggariskan kepentingan ujian genetik berasaskan NGS bersama-sama dengan kajian pengasingan keluarga dan/atau ujian pelengkap (cth, MLPA, tatasusunan-CGH) sebagai sebahagian daripada aliran kerja diagnostik rutin. Sebagai tambahan kepada perkaitan mempunyai diagnosis, ujian ini membolehkan kami mengenal pasti ahli keluarga lain yang mungkin membawa varian patogen yang sama serta menganggarkan risiko penyakit berulang. Lebih-lebih lagi, memandangkan bahawa peratusan yang ketara daripada inipesakit memerlukan pemindahan buah pinggangpada satu ketika, ketersediaan ujian genetik untuk menyaring ahli keluarga membawa implikasi penting dalam pemilihan penderma hidup dalam keluarga.

Perkara kedua yang perlu dibincangkan ialah kepentingan membezakan antara punca genetik dan bukan genetik bagi sesetengah penyakit. Sebagai contoh, dengan kehadiran kanak-kanak dengan sindrom nefrotik tahan steroid (SRNS), adalah penting untuk menolak keadaan yang disebabkan oleh mutasi dalam pengekodan gen untuk protein struktur podosit. Ini boleh membantu untuk memperhalusi terapi, kerana kanak-kanak yang membawa varian patogenik dalam gen podocyte secara amnya tidak mendapat manfaat daripada terapi imunosupresif atau meramalkan prognosis, kerana SRNS "imunologi" lebih berkemungkinan untuk berulang selepas pemindahan. Diagnosis genetik juga mungkin mengakibatkan lebih sedikitbiopsi buah pinggang, terutamanya untuk pesakit dengan glomerulopati.

Pertimbangan ketiga yang relevan memihak kepada ujian genetik dalam aliran kerja diagnostik klinikal pesakit kanak-kanak ialah kesan translasi pengecaman varian genetik. Sesungguhnya, terdapat gen yang boleh diambil tindakan bermakna keadaan penyakit yang sepadan boleh dirawat berdasarkan kehadiran varian patogenik, seperti dalam kes sekatan renin-angiotensin untuk pesakit yang membawa varian patogenik dalam gen COL4A3/COL4A4/ COL4A5. Pada baris yang sama, mempunyai laporan genetik boleh mengelakkan rawatan yang tidak berguna atau bahkan merosakkan, seperti terapi imunosupresif untuk pesakit yang membawa mutasi dalam gen pengekodan kolagen [5]. Selain itu, ia boleh berguna untuk stratifikasi pesakit dan untuk menilai potensi risiko berulang selepas pemindahan buah pinggang. Sebagai contoh, pesakit yang didiagnosis dengan Sindrom Uremik Hemolitik atipikal dan dengan laporan genetik positif mengenal pasti varian patogenik dalam gen CFH, C3 atau CFB, berada pada risiko sederhana hingga tinggi untuk berulang selepas pemindahan [28]. Bagi mereka, pentadbiran eculizumab menunjukkan hasil positif yang ketara tanpa kambuh atau kambuh dalam minoriti kes, manakala pentadbirannya boleh dielakkan untuk pesakit berisiko rendah [28-30].

Perkara keempat mengenai perancangan keluarga, kerana kami berurusan dengan populasi kanak-kanak dengan ibu bapa yang mungkin ingin mempunyai anak tambahan. Ketersediaan diagnosis genetik mungkin sangat berguna untuk kaunseling genetik yang mencadangkan kepada pasangan semua pilihan yang tersedia untuk kehamilan masa depan. Selaras dengan perkara ini, memandangkan kohort sekarang, dalam 2 kes berbeza, diagnosis pranatal dilakukan melalui penjujukan Sanger, menyaring janin untuk varian khusus yang asalnya ditemui oleh CES dalam proband.

Perkara keempat yang perlu ditekankan ialah mengenai bilangan varian C3-VUS yang dikenal pasti oleh NGS, sentiasa menimbulkan dilema yang serius tentang peranan mereka dalam permulaan dan perkembangan penyakit dan cara ia boleh dikomunikasikan semasa kaunseling genetik. Pada tahun-tahun kebelakangan ini, topik ini telah ditangani dengan menyediakan dan mereka bentuk metodologi pengiraan baru yang mengambil kira bukan sahaja pemuliharaan nukleotida, dan kesan protein tetapi juga rangkaian persatuan gen dan sambungan laluan. Petunjuk tambahan dalam mentafsir makna sebenar varian C3 mungkin datang daripada analisis transkriptom melalui pengesanan ekspresi menyimpang atau mekanisme penyambungan menyimpang, serta kajian pengesahan berfungsi [31, 32]. Akhir sekali, adalah penting untuk menekankan perkaitan analisis semula berkala bagi laporan genetik negatif atau tidak konklusif dan penilaian semula berkala bagi varian C3. Pendekatan jenis ini bergantung pada (i) penemuan persatuan penyakit gen/varian-penyakit baharu, (ii) maklumat terkini daripada pangkalan data yang tersedia secara umum, (iii) klasifikasi varian genetik berdasarkan bukti berfungsi, (iv) peningkatan dalam alat silico yang digunakan untuk penjajaran data dan anotasi varian [33]. Sehingga kini, tiada petunjuk jelas tentang selang masa selepas kes negatif/tidak meyakinkan atau varian C3 mesti dianalisis semula telah disediakan oleh Persatuan Genetik Manusia Itali (SIGU) atau oleh garis panduan American College of Medical Genetics dan Genomik. Walau bagaimanapun, kedua-dua institusi ini mencadangkan untuk mengkaji semula kes negatif atau klasifikasi varian sama ada berdasarkan penemuan baru oleh makmal atau oleh sumber luaran (cth, kesusasteraan atau pangkalan data) atau mengikut permintaan doktor [34-36]. Selaras dengan perkara akhir perbincangan ini, adalah wajar diperhatikan bahawa dalam beberapa kes, satu varian dalam gen resesif yang sangat serasi dengan fenotip klinikal telah dijumpai. Walaupun per se, varian ini tidak dapat menjelaskan persembahan klinikal, adalah penting untuk menganalisis semula dan mungkin untuk menyelaraskan semula data penjujukan asal untuk menentukan sama ada varian penyebab kedua boleh ditemui.

Perkara terakhir yang perlu dibincangkan ialah kesan kewangan ujian ini ke atas sistem Penjagaan Kesihatan Kebangsaan. Dalam sistem Itali, CES diikuti dengan analisis bilangan gen yang terhad (<8) is in the range of 1200 euros, all included, while larger panels are approximately double the amount. While these costs may seem elevated, a timely diagnosis may avoid unnecessary additional tests, including biopsies and may lead to optimized patient care and to early identification of family members with the same disease or at risk of developing the same disease. Family segregation studies are in the range of 150 euros per variant tested per person. In our view, to make this diagnostic work efficient and sustainable, it is necessary to identify local/ regional "reference hubs" that can centralize these analyses, reducing costs and accumulating essential experience in variant calling and interpretation.

Secara keseluruhan, keputusan ini mengesahkan perkaitan memasukkan ujian dan kaunseling genetik rutin dalam aliran kerja diagnostik pesakit kanak-kanak yang terjejas oleh nefropati di mana keadaan monogenik disyaki atau dengan sejarah keluarga yang positif. Bagi pesakit ini ujian genetik harus dipertimbangkan pada permulaan perjalanan diagnostik mereka, kerana ia boleh meningkatkan pengurusan klinikal, menggantikan rawatan yang tidak perlu, atau prosedur diagnostik, mengenal pasti ahli keluarga lain yang berpotensi berisiko mempunyai varian genetik yang sama dan, sekiranya berlakupemindahan buah pinggang, membawa kepada pemilihan penderma hidup yang optimum.

Rujukan

1. Singh P, Harris PC, Sas DJ, Lieske JC. Genetik penyakit batu karang

2. dan nefrokalsinosis. Nat Rev Nephrol. 2022;18(4):224–40. Raina R, Vijayvargiya N, Khooblall A, Melachuri M, Deshpande S, Sharma D, Mathur K, Arora M, Sethi SK, Sandhu S. Hemolitik atipikal pediatrik

3. kemajuan sindrom uremik. sel. 2021;10(12):3580. Kagan M, Pleniceanu O, Vivante A. Asas genetik anomali kongenital buah pinggang dan saluran kencing. Pediatr Nephrol. 2022;37:2231. 4. Torra R, Furlano M, Ortiz A, Ars E. Penyakit buah pinggang genetik sebagai punca penyakit buah pinggang kronik yang kurang diiktiraf: peranan utama laporan pendaftaran antarabangsa. Clin Kidney J. 2021;14(8):1879–85.

5. Peserta KC. Genetik dalam penyakit buah pinggang kronik: kesimpulan daripada Persidangan Kontroversi Penyakit Buah Pinggang: Meningkatkan Hasil Global (KDIGO). Buah Pinggang Int. 2022;101(6):1126–41.

6. Vaisitti T, Peritore D, Magistroni P, Ricci A, Lombardini L, Gringeri E, Catalano S, Spada M, Sciveres M, Di Giorgio A, et al. Kekerapan penyakit jarang dan monogenik dalam penerima pemindahan organ pediatrik di Itali. Orphanet J Rare Dis. 2021;16(1):374.

7. Kramer A, Boenink R, Stel VS, Santiuste de Pablos C, Tomovic F, Golan E, Kerschbaum J, Seyahi N, Ioanou K, Beltran P, et al. Laporan Tahunan Pendaftaran ERA-EDTA 2018: ringkasan. Clin Kidney J. 2021;14(1):107–23.

8. Domingo-Gallego A, Pybus M, Bullich G, Furlano M, Ejarque-Vila L, Lor ente-Grandoso L, Ruiz P, Fraga G, Lopez Gonzalez M, Pinero-Fernandez JA, et al. Utiliti klinikal ujian genetik dalam penyakit buah pinggang awal: tujuh gen adalah pemain utama. Pemindahan Dail Nephrol. 2022;37(4):687–96.

9. Tullus K, Webb H, Bagga A. Pengurusan sindrom nefrotik tahan steroid pada kanak-kanak dan remaja. Kesihatan Remaja Kanak-kanak Lancet. 2018;2(12):880–90. 10. Kienzl-Wagner K, Waldegger S, Schneeberger S. Penyakit berulang-pedang damocles dalam pemindahan buah pinggang untuk glomerulosklerosis segmental fokus primer. Imunol hadapan. 2019;10:1669

Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-Pengeksport cistanche terbesar di China:

E-mel:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Beli Untuk Butiran Spesifikasi Lebih Lanjut:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

KLIK DI SINI UNTUK MENDAPATKAN EKSTRAK CISTANCHE ORGANIK SEMULAJADI DENGAN 25% ECHINACOSIDE DAN 9% ACTEOSIDE UNTUK JANGKITAN BUAH PINGGANG