Aktiviti Peningkatan Antidepresan Dan Kognitif Cistanche Herba Cina Tradisional I.
Jun 23, 2022
Abstrak
Lebih daripada sepuluh peratus orang mengalami sekurang-kurangnya satu episod kemurungan dan gangguan mental yang berkaitan dalam seumur hidup, dan kemurungan dan gangguan mental yang berkaitan adalah salah satu masalah kesihatan awam terbesar di dunia. Teori sistem berganda berpendapat bahawa disregulasi pelbagai sistem mendasari patogenesis kemurungan dan gangguan mental yang berkaitan, dan terapi baru berdasarkan teori disregulasi sistem berbilang sangat diperlukan. Dalam kajian ini, kesan antidepresan merebus dari herbaCistanche deserticolaY.C.Ma danCistanche tubulosatelah diperiksa. HerbaCistancherebusan mengurangkan tempoh imobilitas dengan ketara dalam ujian penggantungan ekor tetikus. Tikus yang dirawat dengan merebus herba menunjukkan keupayaan pembelajaran ruang dan ingatan yang lebih baik dalam ujian labirin air Morris. Kumpulan yang dirawat merebus herba memaparkan aktiviti monoamine oxidase (MAO) yang dikawal selia; kepekatan dopamin (DA) di dalam otak telah dikawal selia, menunjukkan herbaCistancherebusan meningkatkan keceriaan saraf; kepekatan serum kortikosteron (CORT) telah dikurangkan, menunjukkan bahawa tikus mendapat manfaat daripada tahap tekanan yang berkurangan. Oleh itu, keberkesanan antidepresan dan mekanismeherba tradisional CinaCistanchetelah diterokai dalam kajian ini. HerbaCistanchemenunjukkan potensi untuk dibangunkan sebagai terapi pelengkap dan alternatif untuk kemurungan.
1. Pengenalan
Kemurungan dan gangguan mood yang berkaitan, dengan anggaran 12 ~ 17% penduduk mengalami sekurang-kurangnya satu episod dalam seumur hidup, adalah antara penyebab utama kecacatan mental dan dianggap sebagai salah satu masalah kesihatan awam utama di seluruh dunia. Khususnya, sebahagian besar pesakit dengan kemurungan mengalami kehilangan ingatan, masalah tumpuan, penurunan tenaga atau keletihan, kehilangan minat atau keseronokan dalam hobi dan aktiviti, dan kesukaran tidur, dan kesukaran tidur, kebangkitan awal pagi, atau tidur berlebihan. Walaupun substrat saraf untuk keabnormalan dalam kemurungan dan sindrom yang berkaitan tidak jelas, secara amnya diterima bahawa kemerosotan neuroplastik dan daya tahan selular menimbulkan patofisiologi kemurungan dan rawatan yang berjaya mungkin bergantung kepada campur tangan tahap neurotransmitter. Pendekatan untuk ubat kemurungan pada dasarnya berdasarkan hipotesis sistem monoamine klasik, yang mendakwa bahawa disregulasi monoamine terutamanya serotonin (5-HT) dan norepinephrine (NE) menyumbang kepada patogenesis kemurungan, dan campur tangan sistem neurotransmitter dengan agonis dopamin dan modulator dopamin-noradrenergik akan mengurangkan gejala gangguan kemurungan utama. Walaupun diresepkan secara meluas, keberkesanan kuratif antidepresan boleh dipersoalkan dan kesan sampingan tidak boleh diabaikan kerana sebahagian besar pesakit tidak bertindak balas terhadap manipulasi sistem monoamine. Baru-baru ini, teori-teori baru patogen kemurungan menunjukkan bahawa pelbagai sistem, termasuk laluan keradangan, laluan tekanan oksidatif, paksi hipotalamik-pituitari-adrenal (HPA), sistem metabolik dan bioenergetik, laluan neurotropik, sistem glutamat, sistem opioid, dan sistem cholinergic, berkait rapat dengan kejadian kemurungan. Bukti menunjukkan bahawa pelbagai intervensi sasaran menghasilkan keberkesanan yang lebih baik daripada satu intervensi sasaran tunggal. Terapi baru berdasarkan teori disregulasi sistem berbilang sangat diperlukan.
Mencari lebih banyak maklumat mengenai Faedah Cistanche
Produk herba dilaporkan memakan lebih daripada separuh penduduk AS; minat dan permintaan untuk herba atau produk herba sebagai cara tambahan untuk merawat kemurungan semakin meningkat di seluruh dunia. Pelbagai tumbuhan perubatan didapati menunjukkan kesan yang melegakan kemurungan. Herba yang dilaporkan mempunyai kesan menekan kemurungan dan meningkatkan fungsi kognitif termasuk buckthorn laut,Ginkgo biloba,Piper nigrum,Hypericum perforatum,Griffonia simplicifolia. Pentadbiran gabungan asid ferulik dan piperine memaparkan kesan seperti antidepresan sinergistik pada tikus dengan memanipulasi sistem monoaminergik. Albiflorin dicirikan oleh pertalian selektif yang tinggi kepada reseptor dan pengangkut neurotransmitter dan dengan ketara meningkatkan kepekatan extracellular 5-HT dan NE dalam hipotalamus tikus yang bergerak bebas. Herba perubatanMelissa officinalisL. melegakan tingkah laku kemurungan tikus dengan memberi pengaruh pada tahap neurotransmitter serotonergik. Herba atau decoctions ini, dibangunkan sebagai ubat alternatif untuk kemurungan, membantu mengurangkan gejala kemurungan dan menyediakan sumber baru untuk ubat antidepresan yang berkembang. HerbaCistanchespesies, yang diedarkan di tanah gersang dan padang pasir di bahagian utara China, adalah herba perubatan tradisional Cina dan digunakan secara meluas untuk merawat pelbagai penyakit selama lebih dari 1,000 tahun di China. Keberkesanan pelbagai herbaCistanchemerebus berkisar antara aphrodisiac [14], mempromosikan imun [15], antioksidatif [16], dan hepatoprotective [17] hartanah.C. deserticoladecoctions mendorong enzim steroidogenik testis [18], menggalakkan tindak balas erektil zakar, dan memendekkan tempoh kependaman tindak balas erektil dalam tikus yang dikebiri [19]. HerbaCistanchetelah dilaporkan untuk menghalang aktiviti neuron dopaminergik dengan mengawal selia gen apoptosis yang menghalang dan faktor neurotropik [20].C. tubulosadecoctions meminda disfungsi kognitif yang disebabkan oleh Aβ1-42 melalui menyekat pemendapan amiloid dan menghidupkan semula fungsi neuron dopaminergik cholinergic dan hippocampal [21]. Sifat neuroprotektif herbaCistanchemembayangkan potensi terapeutik dalam penyakit yang berkaitan dengan kognitif. Kemurungan adalah cara tindak balas emosi campuran biasa dengan kealpaan dan penurunan kognitif sebagai gejala biasa [22]. HerbaCistanchebiasanya digunakan sebagai ubat tradisional Cina untuk merawat kealpaan; lebih-lebih lagi, laporan baru-baru ini menunjukkan bahawa pentadbiran awal dewasa awal tepung jagung ditambah denganC. tubulosaadalah bermanfaat untuk promosi umur panjang dan pembelajaran yang berkaitan dengan penciuman dan peningkatan ingatan dalam nonvertebrataDrosophilamodel [23]. Fakta-fakta ini menunjukkan sifat kognitif herba yang bertambah baikCistanche; di sini dalam penyelidikan ini, buat kali pertama kami mencirikan sifat antidepresan dan hubungannya dengan aktiviti peningkatan kognitif dalam model mamalia dengan mengawal selia sistem monoamine dan paksi HPA. Menggambarkan harta antidepresan dan mekanisme awal herbaCistancheboleh mengembangkan spektrum aplikasi herbaCistanche, yang boleh dibangunkan sebagai ubat alternatif untuk kemurungan.
2. Bahan dan Kaedah Fungsi Anti-Kemurungan Cistanche
2.1. Bahan Tumbuhan dan Penyediaan Decoction Cistanche
C. deserticolaY.C.Ma diperolehi dari Wilayah Autonomi Nei Mongol, China;C. tubulosadiperolehi dari Wilayah Autonomi Xinjiang Uygur, China. Sebelum merebus, herba (C. deserticolaY.C.Ma atauC. tubulosa) telah diperiksa untuk mengesan kandungan echinacoside dan verbascoside menggunakan HPLC (kromatografi cecair berprestasi tinggi) (Milford, MA, Waters, Amerika Syarikat), dan produk yang layak (menurut Pharmacopoeia dari Republik Rakyat China) telah digunakan untuk eksperimen haiwan. Merebus itu diperoleh berdasarkan kaedah pengewapan air yang dibangunkan oleh Pusat Penyelidikan Kejuruteraan Makanan dan Kesihatan Kementerian Pendidikan Negeri, Universiti Sun Yat-sen. KeringCistanche deserticolaY.C.Ma 125 g dihancurkan dan ditapis oleh skrin 120-mesh dan kemudian serbuk dibubarkan dalam air ultrapure 3 L, dipanaskan pada 100 ° C selama 2 jam, kemudian disejukkan ke suhu bilik, dan ditapis; supernatant telah dikitar semula. Sedimen kemudian dibubarkan dalam air ultrapure 2 L dan kemudian dipanaskan selama 1.5 h dan disejukkan seperti yang dinyatakan di atas untuk mengitar semula supernatant; sedimen kemudian digunakan untuk mengitar semula supernatant. Kandungan semua supernatant diperkaya oleh penyejat vakum berputar pada 60 °C; akhirnya kepekatan ubat mentah ditetapkan sebagai 0.5 g / ml dan produk disimpan pada −20 ° C.
2.2. Echinacoside dan Verbascoside Assay oleh Analisis HPLC
HPLC (kromatografi cecair prestasi tinggi) digunakan untuk mengukur ujian kualitatif dan kuantitatif echinacoside dan verbascoside; verbascoside (kesucian > 93%) dan echinacoside (kesucian > 93%) dibeli dari Institut Nasional untuk Kawalan Makanan dan Dadah (Beijing, China) dan digunakan sebagai kawalan standard.
2.3. Penjagaan Haiwan dan Kelakuan Eksperimen di Cistanche
Subjeknya adalah tikus Kunming lelaki SPF (bebas patogen tertentu) seberat 21 ~ 25 gram, yang dibekalkan oleh Pusat Haiwan Eksperimen Perubatan Wilayah Guangdong. Haiwan itu ditempatkan di dalam sangkar plastik (sepuluh setiap sangkar); keadaan persekitaran ditetapkan seperti berikut: kelembapan 40 ~ 70%, suhu bilik 21 ± 1 ° C, dan 12 h : 12 h tempoh gelap cahaya. Semua eksperimen haiwan telah diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Haiwan Universiti Sun Yat-sen.
2.4. Ujian Penggantungan Ekor pada Cistanche
Ujian penggantungan ekor dilakukan mengikut protokol yang diterangkan oleh Cryan et al. [24] dengan perubahan sederhana. Secara ringkas, pada hari ke-21, tikus digantung oleh ekor menggunakan tali gantung logam yang ditambat oleh kateter nilon, dengan kepala pada ketinggian 50 mm dari lantai. Tikus digantung pada cangkuk pada pita pelekat 10 ~ 20 mm dari hujung ekornya dan diasingkan secara akustik dan visual terpencil oleh clapboards. Pergerakan badan tetikus telah direkodkan dan pergerakan pernafasan tidak diendahkan. Sebelum hari percubaan, tikus digantung selama 8 minit untuk penyesuaian.
2.5. Ujian Maze Air Morris di Cistanche
Ujian maze air dilakukan mengikut perihalan Vorhees et al. [25–27] menggunakan peranti yang dibangunkan oleh Akademi Sains Perubatan Cina. Kolam bulat (diameter 150 cm) dipenuhi dengan air (26 ± 1°C; ketinggian rim (jarak permukaan air ke rim dinding): 10 cm) digunakan, platform penyelamat bulat (diameter: 11 cm; jarak antara titik pusat platform dan dinding kolam: 27 cm) tenggelam 1-1.5 cm di bawah permukaan air, dan kawasan ujian diterangi dengan pencahayaan tidak langsung (50 ± 10 lux) untuk mengelakkan pantulan. Empat lokasi mula digunakan, N, S, E, dan W. Untuk ujian pembelajaran spatial, haiwan dilatih setiap hari pada hari 9-11 di lokasi permulaan tetap. Tempoh kependaman melarikan diri diukur untuk memaparkan memori ruang dan keupayaan pembelajaran tikus. Sekiranya tikus tidak dapat mencari atau memanjat ke platform, tikus akan dibawa ke platform dan tinggal selama 10 s. Selepas berehat selama 60-an, maka sesi latihan seterusnya akan dimulakan. Data yang diperolehi daripada ujian pembelajaran spatial terakhir digunakan sebagai nilai asas untuk acuan. Pada hari 23-28, ujian navigasi tempat dan siasatan ruang telah dilakukan. Ujian navigasi tempat berlangsung selama 6 hari dan diambil pada pukul 1 petang, haiwan diletakkan di dalam air dengan kepala mereka menghadap dinding kolam mengikut arah jam, dan tempoh kependaman (dalam masa 2 minit) direkodkan. Selepas ujian navigasi tempat selesai, platform telah dikeluarkan. Tikus diletakkan ke dalam air dengan kepala mereka menghadap dinding kolam di lokasi rawak, dan jejak gerakan dan kekerapan tikus berenang di mana platform berada dalam masa 2 minit direkodkan. Jejak gerakan itu dirakam oleh perakam autonomi pelbagai fungsi gerakan tikus (YLS-1A, Yiyan Technology, Jinan, China).
2.6. Pengesanan Aktiviti MAO
Aktiviti MAO diukur menggunakan kit pengesanan MAO (A034, Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China) dan pengesanan dilakukan mengikut protokol pembuatan. Homogenate dari tisu otak diperolehi; 500μSaya bercampur dengan 300μl dari Agen 1 dan 300μl dari Agen 2, diinkubasi untuk 3 h pada 37 ° C, dan kemudian berturut-turut ditambahkan dengan 300μl, dari Agen 3, 3 ml Agen 4, dan vorteks selama 2 menit. Campuran tindak balas adalah sentrifuged 3,000 rpm selama 10 minit, dan ketumpatan optik supernatant ditentukan oleh ultraviolet dan spektrum yang kelihatan spectrophotometer (Lambda 25, PerkinElmer, Amerika Syarikat) menggunakan cahaya pengujaan 242 nm.
2.7. Ujian Immunosorbent Berkaitan Enzim Neurotransmitter dan ACTH dan CORT
Kit pengesanan Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) untuk dopamin (DA), norepinephrine (NE), dan 5-hydroxytryptamine (5-HT) dibeli dari BLUE GENE, Shanghai. Kit pengesanan ELISA dibeli dari Qiyun Biotech, Guangzhou.
Prosedur adalah seperti berikut: percubaan dijalankan pada suhu bilik. Kot telaga plat microtiter PVC dengan antibodi tangkapan pada 1-10μkepekatan g/mL dalam penimbal karbonat/bikarbonat (pH 9.6). Tutup pinggan dan mengeram semalaman 4°C; basuh pinggan dengan PBS/tween 3 kali, dan tapak mengikat tidak spesifik disekat oleh Penyelesaian Blok; kemudian basuh pinggan dengan PBS / tween 3 kali. Piawaian dan sampel dicairkan dalam Penyelesaian Menyekat dan 100μl ditambah dalam telaga plat, dan plat dimeteraikan dan diinkubasi pada 37°C untuk 1 h. Tambah 100μl mencairkan antibodi pengesanan dan mengeram plat pada 37 ° C untuk 1 h; basuh pinggan dengan PBS / Tween 3 kali. Tambah 50μl penyelesaian pembangunan warna dan jauhkan plat dari cahaya dan mengeramnya pada suhu bilik selama 15 minit; 50μSaya berhenti penimbal ditambah untuk menghentikan reaksi. Ukur ketumpatan optik (OD) untuk setiap telaga dengan pembaca mikroplate ditetapkan kepada 405 nm dalam 30 min.
2.8. Analisis Statistik
Semua data diwakili sebagai min ± SEM (ralat standard min), perbezaan yang ketara dianalisis oleht-test atau ANOVA sehala diikuti dengan ujian julat berbilang Duncan menggunakan SPSS 16.0, dan perbezaan antara kumpulan denganP < 0.05="" were="" considered="" statistically="">