Faedah acteoside - merawat glioblastoma

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

TAE WOONG HWANG;DONG HUN KIM; DA BI KIM1;TAE WON JANG;GUN‑HWA KIM;MINHO MOON;KYUNG AH YOON;DAE EUN CHO;JAE HO PARK;JWA‑JIN KIM

1. Pengenalan

Glioblastomaialah jenis tumor otak primer malignan yang paling biasa dan tumor otak primer yang paling invasif dan dahsyat (1,2), dengan kadar kelangsungan hidup median ~18 bulan dengan terapi multimodaliti yang agresif. Keputusan rawatan semasa adalah terhad dan termasuk radiasi, kemoterapi, dan pembedahan dalam kombinasi dengan agen alkilasi temozolomide (TMZ) (3,4). Walaupun terdapat terapi agresif, pesakit denganglioblastomaumumnya mempunyai prognosis yang buruk (5). TMZ adalah ubat kemoterapi utama yang digunakan dalam rawatan klinikal malignanglioblastoma(6-8); sebagai agen pengalkilasi dalam siri ini, ia mampu menembusi penghalang darah-otak (9-11). Semasa perkembangan glioblastoma malignan dan pencerobohan yang meluas di seluruh otak, peningkatan rintangan dadah secara berterusan terhadap TMZ mengurangkan keberkesanan terapeutiknya (12, 13). Sehubungan itu, ubat terapeutik baru untuk melawanglioblastomadicari dengan segera.

Kajian terdahulu telah melaporkan bahawa sel glioma mengalami kematian sel melalui autophagy, atau kematian sel yang diprogramkan jenis II, sebagai tindak balas kepada TMZ (14, 15). Autophagy boleh dihalang oleh 3‑methyladenine (3‑MA) melalui penukaran protein mikrotubulus 1 rantai ringan 3 (LC3)‑I kepada LC3‑II, dengan itu mengurangkanglioblastomakematian sel (16,17); bagaimanapun, peranan autophagy bergantung pada konteks selular. Dengan pengecualian peranan sitotoksik semasa tindakan TMZ, induksi autophagy oleh tekanan selular ialah proses sitoprotektif yang menghapuskan agregat sitoplasma yang disebabkan oleh tekanan, organel dan makromolekul dalam sel mamalia melalui sistem lisosom. Sebaliknya, sel yang terlibat dalam mengekalkan homeostasis menerima tenaga melalui proses katabolik ini (18, 19). Peranan kompleks autophagy mencadangkan bahawa pengaktif autophagy mungkin mempunyai kesan antikanser dalam kombinasi dengan rawatan TMZ dengan mendorongglioblastomaautophagy sel tanpa memberikan kesan buruk atau memberi manfaat kepada tisu normal. Daripada nota, TMZ telah mempamerkan kesan terapeutik sinergistik dalam kombinasi dengan vitamin D, termasuk daya tahan sel yang ditindas dan autophagy yang dipertingkatkan dalamglioblastomasel. Tambahan pula, gabungan TMZ dan vitamin D telah ditunjukkan untuk memberikan kesan antikanser dalam vivo, termasuk saiz tumor yang dikurangkan dan kadar kelangsungan hidup yang berpanjangan. Kajian ini mencadangkan bahawa rawatan gabungan mungkin mempunyai kesan antikanser sinergistik melalui mekanisme autofagik dalam berasaskan TMZ.glioblastomaterapi (15).

Acteosideadalah glikosida phenylethanoid yang diedarkan secara meluas dalam beberapa ubat herba tradisional Cina (20,21). Beberapa tindakan farmakologi, termasuk tindakan antioksidan, antikanser, anti-radang, antinephritik, dan antimetastatik, telah dikaitkan denganacteoside(22-24). Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawaacteosidemempunyai kesan perlindungan terhadap kecederaan hati yang disebabkan oleh karbon tetraklorida dan D-galactosamine. Mekanisme yang mendasari kesan perlindungan acteoside berkemungkinan berkaitan dengan kapasitinya untuk menghalang bioaktivasi pengantara P450 dan kesan penghapusan radikal bebas yang disebabkan oleh pendedahan karbon tetraklorida (25,26).

Oleh itu, bukti menunjukkan bahawa kedua-duanyaacteosidedan TMZ mendorong kesan antikanser melalui kematian sel. Walau bagaimanapun, persatuan dan kesan antikanser mereka dalam konteksglioblastomamasih perlu dijelaskan. Oleh itu, objektif kajian ini adalah untuk mengesahkan kesan antikanser sinergistikacteosidedigabungkan dengan TMZ dalamglioblastomaterapi. Ujian daya maju sel telah dilakukan untuk menganalisis kesan antikanser rawatan gabungan dalam C6glioblastomasel (tikusglioblastomasel), dan hasilnya dibandingkan dengan rawatan yang mengikuti dengan TMZ sahaja. Untuk mengkaji lebih lanjut mekanisme kematian sel yang disebabkan oleh rawatan bersama denganacteosidedan TMZ, apoptosis dan gen berkaitan autophagy dalam sel C6 telah diperiksa.

acteoside anti-tumor

2. Bahan-bahan dan cara-cara

Kultur sel:

Tikus C6glioblastomatalian sel telah dibeli daripada American Type Culture Collection (Rockville, MD, USA). Sel-sel telah dibiakkan dalam keadaan steril pada suhu 37˚C dalam persekitaran lembap dengan 5 peratus CO2 dalam medium Eagle's Modified Eagle (DMEM) Dulbecco ditambah dengan 10 peratus serum lembu janin (FBS), dan 1 peratus antibiotik dan antimikotik (semua Welgene, Daegu , Korea).

Bahan Tumbuhan:

Abeliophyllum distichum Nakai [baucar no. Park1001(ANH)] telah dikumpulkan di taman Tema Misun‑hyang, Hutan Rekreasi Seongbul‑Mountain, Korea.

Induksi Kalus:

Untuk mendorong pembentukan kalus (27), eksplan daun 1‑cm2 telah diasingkan daripada tumbuhan segar. Eksplan telah dibiakkan pada medium Murachige dan Skoog (4 peratus sukrosa, 0.9 peratus agar ditambah dengan 1 mg/l asid naftalena asetik dan 1 mg/l asid asetik fenoksi 2,4‑dichloro, pH 5.7) pada 25˚C. Kalus diinduksi 20 hari kemudian. Kuantiti yang mencukupiacteosidediperoleh melalui subkultur untuk memisahkan dan memurnikanacteosidedaripada kalus (Rajah 1). Kumpulan berbeza yang disucikanacteosidedigunakan dalam setiap eksperimen. Setiap eksperimen dilakukan tiga kali menggunakan kumpulan yang berbeza.

Pengasingan dan pembersihan:

Fraksi etil asetat telah tertumpu dalam vakuo dan digunakan sebagai sampel untuk penulenan acteoside.Acteosidetelah diasingkan dan disucikan oleh sistem Pengasingan Kromatografi Dipercepat (Isolera™ Spektra, Biotage, Uppsala, Sweden) menggunakan SNAP KPHOSPHO‑SIL dan Kartrij Ultra SNAP (Biotaj). Theacteosidedisucikan daripada kalus dianalisis secara kuantitatif menggunakan acteoside standard oleh analisis HPLC‑PDA. Akhir sekali, acteoside of Greater daripada atau sama dengan 95 peratus ketulenan diperoleh daripada kalus dan digunakan sebagai sampel untuk kemoterapi berasaskan temozolomide.glioblastoma.

Ujian 3‑(4,5‑Dimethylthiazol‑2‑l)‑,5‑diphenyltetrazolium bromide (MTT):

Untuk mengenal pasti kepekatan perencatan separuh maksimum TMZ (nilai IC50) terhadap sel C6, 1x104 sel dalam suspensi sel tunggal telah disemai ke dalam telaga individu plat 96-telaga dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37˚C sebelum rawatan TMZ pada tempat yang dinyatakan. kepekatan (1, 5, 10, dan 20 mM) pada 37˚C selama 24 jam. Berikutan penentuan nilai TMZ IC50 sebagai 5 mm, sel telah dirawat selama 24 jam dengan 5 mM TMZ, 50 μMacteoside, atau gabungan kedua-duanya (5 mM TMZ dan 50 µMacteoside). Larutan MTT (5 mg/ml) telah ditambahkan pada setiap telaga (10 µl) dan dikultur pada suhu 37˚C selama 2 jam. Selepas itu, medium dikeluarkan dan DMSO ditambah pada isipadu 200 µl setiap satu dan bertindak balas pada suhu bilik selama 30 minit. Penyerapan pada 595 nm diukur untuk menentukan daya maju sel.

Ujian penyembuhan luka:

Suspensi sel C6 dalam 1 ml telah dikultur dalam plat 12-telaga dan ditanam kepada pertemuan. Sel-sel telah dirawat dengan TMZ,acteoside, atau TMZ plusacteosidedan kemudian dicakar dengan hujung pipet steril 10‑µl untuk mencipta luka buatan. Pada 0 dan 24 jam selepas luka, imej digital proses penyembuhan luka telah ditangkap menggunakan mikroskop terbalik. Penghijrahan sel dikira dengan mengukur saiz parut pada 0 dan 24 jam menggunakan perisian penganalisis imej, perisian ImageJ 1.43u/Java1.6.0_22 (NIH, Bethesda, Maryland, Amerika Syarikat). Setiap eksperimen dilakukan tiga kali dan pengukuran dilakukan dalam tiga kali ganda.

Immunoblotting:

Sel C6 telah dirawat dengan TMZ,acteoside, atau TMZ plusacteosideselama 24 jam. Sel-sel telah dilisiskan pada ais oleh penimbal lisis RIPA (25 mM Tris‑HCl, pH 7.5, 15{8}} mM NaCl, 1 peratus Nonidet P‑40, 1 peratus natrium deoksikolat, 0.1 peratus SDS). ditambah dengan koktel perencat protease dan fosfatase (Roche, Basel, Switzerland) selama 30 minit. Selepas sentrifugasi pada 18,341 xg selama 15 minit pada 4˚C, supernatan diperolehi. Kepekatan protein ditentukan menggunakan Bradford Protein Assays (Bio-rad, Hercules, CA, USA). Jumlah protein yang sama (30 µg) telah dimuatkan ke dalam telaga tunggal dan difraksinasi melalui elektroforesis melalui 10-15 peratus SDS-PAGE. Protein telah dipindahkan ke membran polivinilidena difluorida (EMD Millipore, Bedford, MA, Amerika Syarikat). Selepas pengeraman dalam larutan penyekat yang mengandungi 5 peratus susu tanpa lemak dalam garam penimbal Tween/Tris selama 30 minit pada suhu bilik. Tompok telah disiasat dengan antibodi primer tercair 1:1,000 (kucing no. 9662, caspase 3; Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, USA), limfoma sel B0 2 (sc‑ 7382, Bcl‑2), protein X berkaitan Bcl‑2‑(kucing no. 2772, Bax), terfosforilasi (p‑)p53 (sc‑101762), jumlah‑p53 (sc‑6243), ‑aktin (kucing. no. 4970; semua; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, USA), LC‑3 (L8918, Sigma; Merck KGaA, Darmstadt, Jerman), Rab7 (cat. no. 9367, Cell Signaling Technology, Inc. ), p62 (cat. no. 114), p‑p38 (cat. no. 9211), jumlah‑p38 (cat. no. 9212), p‑c‑Jun N‑terminal kinase (cat. no. 9251, p ‑JNK), total‑JNK (cat. no. 9252), p‑extracellular signal‑regulated kinase (cat. no. 9101, p‑ERK), total‑ERK (cat. no. 9102; semua Cell Signaling Technology, Inc .) semalaman pada 4˚C. Ini diikuti dengan pengeraman dengan antibodi sekunder konjugasi peroksidase lobak pedas (1:2,000; LF‑SA8001A, Kambing Anti-Tikus IgG‑HRP) atau LF‑SA8002A (Kambing Anti-Arnab IgG‑HRP), Frontier, Seoul, Korea.) selama 2 jam pada suhu bilik. Protein kemudiannya divisualisasikan dengan pendedahan kepada Chemi-Doc (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, cA, USA).

Pewarnaan imunofluoresensi:

Protein membran yang berkaitan dengan lisosom 1 (LAMP1) dan LC3 adalah penanda untuk lisosom dan autophagy. Sel-sel (1x105 sel/telaga) telah disediakan pada penutup kaca yang disterilkan (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, Amerika Syarikat) dalam tiga kali ganda. Selepas rawatan dengan TMZ,acteoside, atau TMZ plusacteosideselama 24 jam, sel telah ditetapkan dalam 4 peratus paraformaldehid selama 30 min, disekat dengan 5 peratus serum ayam biasa (S‑3000; Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA, USA), 0.1 peratus Triton X ‑100 dan kemudian diinkubasi 1 jam untuk permeabilisasi dan untuk menyekat interaksi protein-protein tidak spesifik. Sel-sel tersebut kemudiannya diinkubasi dengan anti-LAMP1 (1:200; sc‑19992, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) dan anti-LC3 (1:400; PM036, MBL International, Woburn, MA, USA) semalaman pada 4˚ C. Sel-sel itu kemudian dibasuh dua kali dengan PBS dan diinkubasi selama 2 jam tambahan dalam gelap dengan campuran Alexa Fluor 488 dan 594 antibodi sekunder (1:200; Alexa Fluor 488 (A-11008) dan 594 (A-11007), Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA) dan dibasuh semula dengan PBS. Nukleus telah diwarnai menggunakan 4,6-diamidino-2-phenylindole (Sigma; Merck KGaA), dan kemudian dibasuh dua kali dengan PBS. Slaid kemudiannya dipasang dan imej telah ditangkap di bawah mikroskop confocal laser LSM-700.

Rajah 1. Struktur kimia acteoside.

Sitometri aliran.

Sel-sel telah dianalisis untuk Mitotracker Green dan MitoSOX oleh sitometri aliran menggunakan sitometer aliran FACSCanto II, seperti yang ditunjukkan oleh pengilang (BD Biosciences). Selepas dua kali cucian dengan PBS, sel-sel telah ditetapkan dalam 4 peratus paraformaldehid selama 30 min pada suhu bilik dan telap dengan 0.25 peratus Triton X‑100 dalam PBS selama 20 minit. Sel-sel telah diwarnai dengan antibodi primer semalaman pada suhu 4˚C (1:200) dan kemudian dengan antibodi sekunder selama 1 jam di atas ais. Selepas dua kali cucian dengan PBS, sel-sel telah ditetapkan dalam 4 peratus paraformaldehid dan diuji serta-merta. Data sitometri aliran dikumpul menggunakan 10,000 sel dan dianalisis menggunakan perisian FlowJo 7.6.1 (Tree Star, Inc., Ashland, OR, USA).

Analisis statistik:

Semua data telah dianalisis menggunakan GraphPad Prism 5.0 dan dibentangkan sebagai min ± ralat standard bagi min. Data dianalisis dengan analisis varians sehala dengan ujian post hoc perbandingan berbilang Tukey untuk perbandingan nilai min antara berbilang kumpulan. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Cistanche Echinacoside: Anti-apoptosis

3. Keputusan

3.1 Rawatan bersama dengan TMZ dan penindasan acteosideglioblastomapercambahan dan penghijrahan sel.

Rawatan gabungan dengan TMZ danacteosidemenghalang daya maju sel C6. TMZ mengurangkan daya maju sel dalam cara yang bergantung kepada dos (Rajah 2A), manakala acteoside sahaja tidak mempunyai kesan ketara pada mana-mana tahap rawatan (Rajah 2B). Berikutan pengeraman dalam medium kultur yang mengandungi TMZ dengan atau tanpa acteoside selama 24 jam, ujian MTT dilakukan untuk membandingkan sitotoksisiti tahap rawatan yang berbeza. TMZ menekan daya maju sel dengan ketara, manakala acteoside tidak menyekat pertumbuhan sel dengan ketara. Rawatan gabungan dengan TMZ dan acteoside mengurangkan daya maju sel dengan ketara (Rajah 2C). Rawatan dengan TMZ atau acteoside digunakan sahaja mengurangkan keupayaan penyembuhan luka (Rajah 3A). Jarak luka ( peratus ) diukur menggunakan keputusan yang ditunjukkan dalam Rajah 3A dengan perisian ImageJ. Jarak luka meningkat dengan ketara selepas rawatan gabungan (Rajah 3B), berbanding dengan rawatan individu. Keputusan ini menunjukkan bahawa rawatan bersama dengan TMZ dan acteoside adalah perencat yang berkesanglioblastomapercambahan dan penghijrahan sel.

3.2 Acteoside dan TMZ menjejaskan apoptosis secara sinergistik dalam sel C6.

Keputusan analisis western blot mendedahkan bahawa tahap cleaved caspase‑3, Bax, dan p53 terfosforilasi adalah lebih tinggi dan tahap Bcl‑2 lebih rendah berikutan rawatan gabungan dengan TMZ danacteosidedaripada mengikuti rawatan dengan TMZ sahaja (Rajah 4A).ActeosideFungsi mitokondria yang dimediasi dan penjanaan spesies oksigen reaktif (ROS), yang merupakan pengantara utama isyarat apoptosis, kemudian diperhatikan dalam sel C6 yang dirawat TMZ. Untuk mengesahkan jisim mitokondria, analisis pengisihan sel yang diaktifkan pendarfluor dilakukan menggunakan MitoTracker Green. Rawatan bersama dengan TMZ danacteosidemenghasilkan jisim mitokondria yang lebih tinggi daripada rawatan dengan TMZ sahaja (Rajah 4B). Penjanaan ROS adalah jauh lebih tinggi selepas rawatan bersama dengan TMZ dan acteoside daripada rawatan dengan TMZ sahaja (Rajah 4C). Keputusan ini menunjukkan bahawa penjanaan ROS dan fungsi mitokondria adalah penting dalam apoptosis yang disebabkan oleh rawatan dengan TMZ ditambah acteoside. Rawatan bersama dengan TMZ dan acteoside mendorong autophagy dalam sel C6. TMZ telah dilaporkan menyebabkan autophagy (28,29); Oleh itu, kajian ini mengkaji sejauh mana autophagy didorong oleh rawatan TMZ plus acteoside. Sel C6 telah dirawat dengan TMZ dengan atau tanpa acteoside; selepas 24 jam, dan sel-sel telah diwarnai untuk imunofluoresensi untuk mengesan LAMP1 dan LC3 sebagai penanda autophagy. Tahap ekspresi LAMP1 dan LC3 yang lebih tinggi diperhatikan selepas rawatan gabungan (Rajah 5A). Ekspresi protein yang berkaitan dengan autophagy juga diperiksa, dan didapati bahawa TMZ mendorong penukaran LC3‑I kepada LC3‑II, yang merupakan tandatangan penjanaan autophagosome. Kadar penukaran LC3‑I kepada LC3‑II yang lebih tinggi diperhatikan selepas rawatan bersama dengan TMZ dan acteoside daripada rawatan dengan TMZ sahaja. Tahap ekspresi Rab7 dan p62 menunjukkan induksi autophagy dalam sel yang dirawat TMZ (Rajah 5B). Penemuan ini menunjukkan bahawa rawatan bersama dengan TMZ dan acteoside meningkatkan proses autofagik dalamglioblastomasel.

3.3 Acteoside mendorong ekspresi gen laluan MAPK dalam rawatan berasaskan TMZ.

Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa TMZ mengawal laluan MAPK, termasuk p38, JNK, dan ERK (30). Oleh itu, kajian ini menyiasat sama adaacteosidemempengaruhi ekspresi gen MAPK yang berkaitan dengan TMZ. Sel C6 telah dirawat dengan TMZ dengan atau tanpaacteoside. Selepas 24 jam, rawatan TMZ menghasilkan tahap ekspresi p‑p38, p‑JNK dan p‑ERK yang lebih tinggi. Ekspresi gen terkawal TMZ adalah jauh lebih tinggi selepas rawatan TMZ ditambah acteoside daripada rawatan dengan TMZ sahaja (Rajah 6). Pemerhatian ini mencadangkan bahawaacteosidemenjejaskan mekanisme terapeutik berasaskan TMZ melalui laluan MAPK.

Acteoside anti-glioblastoma

Perbincangan

Keputusan kajian ini membuktikan bahawa rawatan gabungan dengan TMZ denganacteosidemenawarkan potensi terapeutik untukglioblastomarawatan, dan memberikan bukti bahawa kemosensitisasi kepada gabungan TMZ danacteosideboleh berlaku melalui peningkatan autophagy. Sebagai mutasi daripadaglioblastomasel boleh membawa kepada ketidakaktifan laluan apoptosis, induksi autophagy oleh TMZ plusacteosiderawatan bersama mungkin mewakili kaedah alternatif untukglioblastomaterapi. Walau bagaimanapun, sama ada autophagy adalah mekanisme tunggal untukglioblastomaterapi dengan TMZ plusacteosiderawatan bersama masih perlu dijelaskan.

Autophagy adalah mekanisme selular penting untuk degradasi protein dan organel sitoplasma. Kelebihan katabolik autophagy teraruh mungkin penting dalam keadaan tekanan; oleh itu, induksi autophagy mungkin merupakan mekanisme penyesuaian untuk pencegahan kematian sel (31-33). Kajian terdahulu telah melaporkan bahawa autophagy yang berkurangan dikaitkan dengan kanser (34-36). Di samping itu, beberapa protein dan laluan isyarat yang dikaitkan dengan autophagy dinyahkawal selia semasa transformasi malignan, mengakibatkan pengurangan aktiviti autofagik. Tahap ekspresi tinggi LC3 juga telah dikaitkan dengan peningkatan kadar survival pada pesakit denganglioblastomadengan skor prestasi yang lemah (37,38). Begitu juga, keputusan kajian ini menunjukkan bahawa pemulihan autophagy normal mungkin merupakan strategi terpendam untukglioblastomaterapi, dan boleh berfungsi sebagai mekanisme untuk menyekat pertumbuhan sel tumor yang tidak normal.

Dalam autophagy biasa, komponen sitoplasma tertentu diasingkan dalam autofagosom yang kemudiannya bergabung dengan lisosom untuk didegradasi dan dikitar semula (39, 40). Apabila autophagy dikawal selia, kadar pembentukan autofagosom mengatasi kadar degradasi lisosom; keadaan ini dipanggil tekanan autofagik. Jika tekanan atau autofagi yang tidak normal berterusan, kematian sel boleh berlaku melalui pengurangan tenaga atau perubahan dalam keseimbangan beclin‑1/Bcl‑2. Apoptosis juga boleh dicetuskan oleh hiperaktiviti autofagosom, menelan organel sitoplasma termasuk mitokondria atau retikulum endoplasma (41). Telah dicadangkan bahawa autophagy umum boleh menyebabkan kematian sel semasa pusing ganti sitoplasma dan organel normal dalam sel yang sihat. Dalam proses ini, sel 'mengkanibal' dirinya dari dalam, ciri utama kematian sel terprogram jenis II. Walaupun mekanisme yangacteosidemeningkatkan kesan terapeutik berasaskan TMZglioblastomaterapi masih belum dijelaskan sepenuhnya, kesan antikanser yang ditunjukkan oleh rawatan gabungan yang diperiksa dalam kajian ini mungkin dikaitkan dengan mekanisme autofagik ini.

Acteosideialah glikosida phenylethanoid yang berasal daripada tumbuhan (22,26). Kajian terdahulu telah melaporkan tentang pelbagai aktiviti biologi acteoside. Perubahan dalam tahap ekspresi caspase-3 dan LC3 yang dibelah dalam kajian ini menunjukkan bahawa rawatan dengan gabungan TMZ danacteosideapoptosis teraruh dan autophagy dalam sel C6 (Rajah 4 dan 5). Rawatan gabungan telah ditunjukkan mempunyai kesan sinergistik padaglioblastomasel. Walaupun mekanisme lain yang mungkin bagi kesan sinergistik ini masih belum dijelaskan, kajian ini mengenal pasti induksi autophagy sebagai mekanisme tumorisid yang pentingacteosidekemosensitisasi semasa berasaskan TMZglioblastomaterapi.

Acteoside merawat glioblastoma

Rujukan

1. Friedman HS, Kerby T, dan Calvert H: Temozolomide dan rawatan glioma malignan. Clin Cancer Res 6: 2585‑2597, 2000.

2. Mrugala MM dan Chamberlain MC: Mekanisme penyakit: Temozolomide danglioblastoma‑pandang ke masa depan. Nat Clin Pract Oncol 5: 476‑486, 2008.

3. Agarwala SS dan Kirkwood JM: Temozolomide, agen pengalkilasi novel dengan aktiviti dalam sistem saraf pusat, boleh meningkatkan rawatan melanoma metastatik lanjutan. Pakar onkologi 5: 144-151, 2000.

4.Stevens MF, Hickman JA, Stone R, Gibson NW, Baig GU, Lunt E dan Newton cG: Antitumor imidazotetrazines. 1. Sintesis dan kimia 8‑carbamoyl‑3‑(2‑chloroethyl)imidazo[5,1‑d]‑1,2,3, 5‑tetrazine‑4(3 H)‑one, antitumor spektrum luas novel ejen. J Med Chem 27: 196‑201, 1984.

5. Fulda S: Rawatan berasaskan kematian sel bagiglioblastoma. Kematian Sel pada 9: 121, 2018.

6. Chen PH, Shen WL, Shih CM, Ho KH, Cheng CH, Lin CW, Lee CC, Liu AJ dan Chen KC: Laluan Notch3 yang dihalang CHAC1 terlibat dalam sitotoksisiti glioma yang disebabkan oleh temozolomide. Neuropharmacology 116: 300‑314, 2017.

7. Oshiro S, Tsugu H, Komatsu F, Ohmura T, Ohta M, Sakamoto S, Fukushima T dan Inoue T: Keberkesanan rawatan temozolomide pada pesakit dengan glioma gred tinggi. Antikanser Res 29: 911‑917, 2009.

8. Van den Bent MJ: Rawatan adjuvant glioma gred tinggi. Ann Oncol 17 (Bekalan 10): x186‑x190, 2006.

9. Shen W, Hu JA, dan Zheng JS: Mekanisme kesan antitumor yang disebabkan oleh temozolomide pada sel glioma. J Int Med Res 42: 164-172, 2014.

10.Barciszewska AM, Gurda D, Głodowicz P, Nowak S dan Naskręt‑Barciszewska MZ: Mekanisme epigenetik baharu tindakan temozolomide dalam sel glioma. PLoS One 10: e0136669, 2015.