Kesan Anti-radang Sinergis Laminaria Japonica Fucoidan Dan Ekstrak Cistanche Tubulosa
Mar 03, 2022
Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com
Abstrak
Theanti-radangkesan fucoidan danCistanche tubulosa (CT) telah disiasat dalam sistem kultur makrofaj Vitro dan model keradangan kantung udara yang disebabkan oleh karagenan vivo.Cistanche Tubulosaekstrak menghalang pengeluaran nitrik oksida daripada sel makrofaj RAW 264.7 yang diaktifkan, manakala fucoidan tidak aktif. Model keradangan kantung udara in vivo, eksudasi vaskular yang disebabkan oleh karagenan, dan peningkatan kepekatan oksida nitrik dan prostaglandin E2 dalam eksudat telah ditindas secara sinergi dengan penggunaan bersama fucoidan atauCistanche Ttubulosaekstrak. Lebih-lebih lagi, keradangan tisu telah dilemahkan dengan ketara oleh terapi kombinasi. Walau bagaimanapun, tiada kesan sinergistik terhadapradangpenyusupan sel, walaupun fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak setiap satu dengan ketara mengurangkan nombor sel. Oleh itu, adalah dicadangkan bahawa fucoidan menghalang penyusupanradangsel, manakala CT(Cistanche tubulosa) ekstrak menghalang pengaktifan sel, dan rawatan gabungan mereka boleh menjadi calon yang menjanjikan untuk melegakan pelbagai jenis keradangan.
Kata kunci: Karagenan, keradangan, fucoidan, ekstrak Cistanche tubulosa.
Sebagai tindak balas imun terhadap antigen asing, makrofaj mengeluarkan sitokin pro-radang seperti tumor-necrosis factor- (TNF- ), interleukin-1 (IL-1 ), IL-6 dan lain-lain [1,2]. Sitokin sedemikian mendorong kemasukan kemotaktik granulosit, monosit, limfosit, dan sel mast kepada tisu yang rosak yang menggalakkan penyingkiran antigen dan pemulihan tisu [3,4]. Walau bagaimanapun, penyusupan berlebihan dan pengaktifan sel memburukkan lagi kecederaan tisu, membawa kepada edema(eksudasi vaskular) dan kesakitan yang merupakan fenomena keradangan yang terkenal.
TNF- ialah faktor penting untuk mendorong ekspresi gen nitric oxide synthase (iNOS) dalam beberapa garisan sel. Pengaktifan iNOS membawa kepada penghasilan nitric oxide (NO)[5-7] yang bukan sahaja memodulasi beberapa fungsi fisiologi seperti bakteria dan vasodilatasi tetapi juga menyebabkan keradangan [8,9]. Selepas kecederaan tisu, degradasi oleh fosfolipase fosfolipid membran sel menghasilkan asid arakidonik. Asid arakidonik selanjutnya diuraikan oleh siklooksigenase (COX) kepada prostaglandin (PGs) [10]. Jumlah PGE2 yang berlebihan yang dibentuk oleh COX-II mendorong beberapa sitokin untuk keradangan. Oleh kerana kedua-dua NO dan PGE2 bertindak sebagai faktor utama untuk keradangan dan induksi kesakitan, laluan TNF- –dan COX-II-PGE2 adalah aliran utama proses keradangan, yang dihalang oleh kortikosteroid dan bukan steroid.anti-radangdadah (NSAIDs), masing-masing [10,11].
Walaupun terdapat beberapa steroid dan NSAID untuk terapi penyakit radang, ubat ini boleh menimbulkan kesan buruk pada sistem imun, saluran gastrousus, buah pinggang, hati, sistem saraf pusat, tekanan darah dan sistem kardiovaskular [12-14 ]. Oleh itu, adalah perlu untuk meminimumkan kesan buruk terapeutik kimia dengan menggantikannya atau menggunakannya dalam kombinasi dengan produk semula jadi.
Fucoidan, kompleks polisakarida sulfat daripada rumpai laut seperti Laminaria japonica dan Cladosiphonokamuranus yang diedarkan secara meluas di banyak negara, telah digunakan sebagai terapeutik dalam perubatan Oriental untuk tempoh yang lama. Dalam kajian terdahulu, ia telah menunjukkan bahawa fucoidan mempunyai anti-oksidatif, anti-koagulatif, anti-kanser, dananti-radangaktiviti [15,16]. Sehubungan itu, kesan berfaedah fucoidan pada penyakit radang, iskemia, disfungsi imun, dan tumor menarik perhatian penyiasat [17,18]. Selain itu,Cistanche tubulosa(CT) juga telah digunakan secara meluas untuk ubat tradisional di China. Telah dilaporkan bahawa ekstrak CT merendahkan pengeluaran TNF-á dan IL-4 yang merupakan faktor utama pengeluaran NO dalam laluan keradangan [19].
Penemuan terdahulu seperti itu membawa kami untuk menyiasat keberkesanan gabungan fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak pada 2 laluan utama keradangan. Untuk menjelaskan mekanisme tindakan, kami menganalisis NO dan PGE2 dalam eksudat daripada keradangan kantung udara yang disebabkan oleh karagenan [20].
Bahan dan Kaedah
Bahan
Fucoidan separuh tulen dan ekstrak air CT(Cistanche tubulosa)diperoleh daripada Misuba RTech Co., Ltd. (Asan, Korea). Ekstrak Fucoidan dan CT disimpan pada suhu 4oC, dicampur (1:3) dan dilarutkan dalam air yang telah disucikan sebelum digunakan, dan diberikan secara lisan dalam jumlah 5 mL/kg
Kultur sel dan kuantiti NO
Barisan sel makrofaj murine RAW 264.7 telah dibeli daripada Koleksi Budaya Jenis Amerika (Manassas, Amerika Syarikat), dan dikultur dalam medium helang yang diubah suai Dulbecco (Sigma, St. Louis, Amerika Syarikat) yang mengandungi 10 peratus serum lembu janin dan antibiotik [100 U/mLpenicillin ( Sigma) dan 100 µg/mL streptomycin (Sigma)]. Sel-sel telah diinkubasi dalam atmosfera CO2 5 peratus yang dilembapkan pada suhu 37oC.
Untuk menilai kesan fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak pada rembesan NO, sel RAW 264.7 (1×106 sel/mL) diinkubasi dengan ekstrak fucoidan atau CT (1–320 µg/mL) selama 5 minit, diikuti dengan interferon- (IFN- , 10 U/mL) dan lipopolisakarida (LPS, 10 µg/mL) selama 24 jam. Dalam kajian awal kami, telah disahkan bahawa rawatan dengan IFN-plus LPS untuk pengaktifan sel RAW 264.7 tidak menjejaskan daya maju sel sehingga 24 jam dan ekstrak fucoidan dan CT bukan sitotoksik sehingga 1 mg/mL. Kepekatan nitrit(NO2–), hasil teroksida NO, diukur sebagai penunjuk NO. Medium kultur dicampurkan dengan jumlah reagen Griess yang sama (1 peratus sulfanilamide, 0.1 peratus naphthylethylenediamide dalam 2.5 peratus asid fosforik) [21], dan diinkubasi pada suhu bilik selama 10 minit. Kepekatan nitrit dianalisis pada 540 nm, di mana NaNO2 digunakan untuk menghasilkan lengkung piawai.
Haiwan dan rawatan
Tikus ICR jantan (7 minggu) telah dibeli daripada Daehan Biolink (Eumseong, Korea) dan ditempatkan di dalam bilik dengan keadaan persekitaran yang tetap (22±2ºC;40-70 peratus kelembapan relatif; 12-jam cahaya -kitaran gelap;150-300 kecerahan lux). Suapan pelet dan air tulen boleh didapati secara ad libitum. Semua eksperimen haiwan telah diluluskan oleh jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Institusi (IACUC) Universiti Kebangsaan Chungbuk (CBNU), Korea, dan dijalankan mengikut Prosedur Operasi Standard (SOP) Pusat Penyelidikan Haiwan Makmal, CBNU.
Tikus (n=8/kumpulan) telah dirawat secara lisan dengan fucoidan (18 atau 54 mg/kg), CT(Cistanche tubulosa)ekstrak (54 atau 162 mg/kg), atau campurannya (18 tambah 54, 54 tambah 162 atau 90 tambah 270 mg/kg) sekali sehari selama 7 hari. Dos rendah fucoidan (18 mg/kg) dan ekstrak CT (54 mg/kg) adalah daripada anggaran dos manusia sebanyak 100 mg/badan (70 kg) dan 300 mg/badan selepas terjemahan luas permukaan berat badan (Km{{14 }} untuk manusia/Km=3 untuk tetikus), masing-masing. Dos tinggi fucoidan dan ekstrak CT ditetapkan pada 3 kali ganda, secara bersendirian atau dalam campuran, dan campuran dos tertinggi ditetapkan pada 5 kali ganda untuk menilai kesan sinergistik maksimum.
Pada hari pertama fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)rawatan ekstrak, tikus disuntik secara subkutan dengan 10 mL udara steril ke bahagian belakang untuk membentuk kantung [22,23]. Selepas 2 dan 5 hari, kantung itu disuntik semula dengan 5 mL udara. Satu jam selepas rawatan terakhir, 1 mL karagenan (1 peratus dalam garam; Sigma) atau kenderaannya (salinan) disuntik ke dalam kantung.
Analisis eksudat
Kantung udara telah dibasuh dengan 1 mL garam sejuk 6 jam selepas suntikan karagenan, dan isipadu bersih cecair lavage direkodkan. Jumlah bilangan sel radang, neutrofil, monosit, dan limfosit, ditentukan menggunakan kaunter colter. Kepekatan NO dan PGE2 ditentukan oleh reagen Griess (Sigma) dan immunoassay enzim (EIA) menggunakan kit korelasi-EIA (Reka Bentuk Assay, Ann Arbor, AnnArboUSA), masing-masing.
Pemeriksaan histopatologi
Tisu pelapik kantung dikeluarkan dan diperbaiki dalam larutan formalin neutral. Slaid tisu tertanam parafin telah diwarnai dengan hematoxylin-eosin dan diperiksa di bawah mikroskop cahaya untuk lesi keradangan.
Analisis statistik
Keputusan dibentangkan sebagai min±SE. Perbandingan kumpulan eksperimen dibuat dengan analisis varians sehala diikuti dengan pembetulan ujian Tukey. Nilai-P<0.05 was="" considered="" statistically="">
Keputusan
Kultur sel RAW 264.7 in vitro, IFN-, dan LPtreatment telah meningkatkan pengeluaran NO (Rajah 1). Prarawatan dengan fucoidan (1–320 µg/mL) tidak menjejaskan pelepasan NO daripada garisan sel makrofaj (Rajah 1A). Sebagai perbandingan, CT(Cistanche tubulosa)ekstrak (32–320 µg/mL) dengan ketara menekan pengeluaran NO, menunjukkananti-radangaktiviti (Rajah 1B).
Suntikan karagenan ke dalam kantung udara tikus dengan ketara meningkatkan jumlah eksudat dalam kantung (Rajah 2). Eksudasi yang meningkat sedemikian telah dilemahkan oleh rawatan dengan fucoidan (18 mg/kg) dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak (54 dan 162mg/kg). Terutama, rawatan gabungan fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak seterusnya mengurangkan jumlah eksudat, berbanding dengan kesan individu, walaupun kombinasi dos yang lebih tinggi (54 tambah 162 mg/kg dan 90 tambah 270 mg/kg) tidak menunjukkan keberkesanan tambahan kepada kombinasi dos terendah (18 tambah 54 mg/kg) (Rajah 2A). TIADA kandungan dalam kantung juga meningkat secara drastik berikutan suntikan karagenan (Rajah 2B). Berbanding dengan kesan ringan fucoidan, CT(Cistanche tubulosa)ekstrak merendahkan kepekatan NO dengan ketara. Rawatan gabungan ekstrak fucoidan danCT mengurangkan lagi tahap NO dalam cara yang bergantung kepada dos. Begitu juga, kandungan PGE2 yang meningkat telah ditindas secara sinergi oleh terapi kombinasi fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak (Rajah 2C). Selari dengan mediator keradangan dalam kantung, bilangan sel radang meningkat secara drastik melalui suntikan karagenan: 37.8, 4.8, dan 24.1 kali ganda tahap kawalan untuk neutrofil, monosit dan limfosit, masing-masing (Jadual 1) . Walau bagaimanapun, fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak dengan ketara mengurangkan penyusupan sel radang, di mana fucoidan agak unggul daripada ekstrak CT. Tanpa diduga, tiada kesan sinergistik dalam penyusupan sel radang dicapai dengan pentadbiran bersama fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak.
Seperti yang disimpulkan daripada penyusupan sel radang dalam eksudat, tisu subkutaneus di sekeliling kantung udara menunjukkan lesi keradangan yang teruk (Rajah 3). Banyak sel dalam tisu subkutaneus yang menebal yang terdedah kepada karagenan telah diperhatikan (Rajah3B), berbanding dengan ciri hampir normal dalam haiwan kawalan (Rajah 3A). Lesi keradangan sedemikian telah dilemahkan dengan ketara oleh rawatan dengan fucoidan (Rajah 3C dan 3D) atau CT(Cistanche tubulosa)ekstrak (Rajah 3E dan 3F). Terutama, kesan anti-radang yang lebih tinggi diperolehi dengan terapi kombinasi dengan fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak (Rajah 3G-3I)
Perbincangan
Menggunakan model keradangan kantung udara yang disebabkan oleh karagenan in vivo, suntikan udara ke belakang tikus mendorong percambahan sel yang berstrata pada permukaan rongga untuk membentuk struktur yang serupa dengan sinovium. Dalam model ini, suntikan penyusupan sel radang yang disebabkan oleh karagenan meningkatkan eksudat, yang menunjukkan kebocoran vaskular. Kantung udara berfungsi sebagai takungan sel radang dan mediator yang boleh diukur dengan mudah dalam cecair yang terkumpul secara tempatan.
Antara mediator keradangan yang pelbagai yang boleh mendorong kebolehtelapan vaskular, diketahui bahawa NO dan PGE2 adalah faktor utama yang terlibat dalam patogenesis banyak penyakit keradangan [24,25]. Mereka juga dikenali sebagai mediator induksi dan persepsi kesakitan [10,11]. iNOS, yang dinyatakan dan diaktifkan dalam pelbagai jenis sel melalui rangsangan dengan TNF- dan/atauLPS semasa keradangan, menghasilkan kepekatan NO yang tinggi dan berterusan [3,5-7]. NO ialah molekul pengawalseliaan yang penting dalam pelbagai fungsi fisiologi, seperti vasodilatasi yang membawa kepada kebocoran vaskular [8,9]. PGE2, yang dihasilkan daripada asid arakidonik melalui cox, menyumbang kepada perkembangan banyak penyakit radang [26,27], dan pengeluaran berlebihan PGE2 sebagai tindak balas kepada pelbagai rangsangan keradangan dikaitkan dengan pengawalseliaan tahap COX-II dan perkembangan keradangan [28]. Oleh itu, laluan TNF- -NO dan COX-II-PGE2 telah dianggap sebagai dua aliran utama proses keradangan, yang disekat oleh perencat iNOS (kortikosteroid) dan COX (NSAIDs), masing-masing [22,29].
Dalam kajian ini, pentadbiran bersama fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak mengurangkan jumlah eksudat dalam kantung, menunjukkan bahawa ia mempunyai aktiviti menindas terhadap kebocoran vaskular (Rajah 2A). Berbanding dengan kesan individu setiap fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak, rawatan gabungan terus meningkat, membayangkan bahawa tindakan kedua-dua sebatian secara sinergistik. Kesan sinergistik sedemikian antara ekstrak fucoidan dan CT disokong oleh aktiviti mereka pada tahap NO dan PGE2 dalam eksudat (Rajah 3B dan 2C).
Menariknya, bagaimanapun, telah disahkan bahawa fucoidan tidak secara langsung menghalang pengaktifan ujian invitro makrofaj (Rajah 1A). Begitu juga, potensi perencatan fucoidan pada pengumpulan NO dan PGE2 dalam bioassay secara relatifnya lebih rendah daripada CT.(Cistanche tubulosa)ekstrak (Rajah 2B dan 2C). Mekanisme tindakan fucoidan sedemikian adalah berbeza daripada penyahaktifan langsung sel oleh ekstrak CT (Rajah 1B). Sebagai perbandingan, fucoidan memberikan keberkesanan yang tinggi terhadap perencatan penyusupan sel radang dalam kantung (Jadual 1). Fucoidan lebih unggul daripada ekstrak CT dalam menyekat penghijrahan neutrofil, monosit, dan limfosit ke tapak kecederaan tisu yang disebabkan oleh karagenan. Menariknya, tiada kesan anti-migrasi sinergistik, menunjukkan mekanisme tindakan yang berbeza antara ekstrak fucoidan dan CT: iaitu, fucoidan menghalang penyusupan sel-sel radang, manakala CT(Cistanche tubulosa)ekstrak menghalang pengaktifan sel.
Sel polimorfonuklear, terutamanya neutrofil, adalah komponen selular utama yang direkrut ke tapak keradangan akut yang disebabkan oleh karagenan. Di samping itu, sel-sel keradangan seterusnya seperti makrofaj dan limfosit juga memainkan peranan utama dalam proses keradangan dengan merembeskan sitokin [22,30,31]. Apabila prarawatan dengan fucoidan atau CT(Cistanche tubulosa)ekstrak, bilangan sel darah putih yang berhijrah ke dalam kantung udara yang disuntik karagenan telah ditindas dengan ketara. Keputusan ini konsisten dengan kesan yang akan diperolehi oleh kortikosteroid seperti dexamethasone, tetapi bukan oleh NSAID termasuk indomethacin [23,30]. Oleh itu, diandaikan bahawa fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak mempunyai sebahagian daripada sifat steroid.
Sebagai tambahan kepada tindakan menyekat pada chemotaxis sel radang, CT(Cistanche tubulosa)ekstrak kelihatan menyekat pengaktifan makrofaj. Ini disahkan oleh tindakan perencatannya pada NO in vitro dan in vivo, yang merupakan pengantara keradangan utama yang dihasilkan oleh makrofaj. Oleh itu, kesan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak pada makrofaj mungkin disebabkan oleh penindasan ekspresi mRNA dan/atau perencatan langsung aktiviti iNOS dalam sel-sel ini.
PGE2 juga merupakan salah satu mediator keradangan utama. Ia meningkat selari dengan edema tisu, yang ditindas oleh NSAID, perencat COX [21,22]. Karagenan boleh meningkatkan pengeluaran PGE2 dengan mendorong COX-II mRNA dan protein COX-II dalam eksudat kantung [32]. Dalam model ini, karagenan meningkatkan jumlah PGE2 dengan ketara dan ia telah ditindas dengan ketara oleh CT(Cistanche tubulosa)ekstrak. Adalah menarik untuk diperhatikan bahawa keputusan ini konsisten dengan kesan yang akan diperolehi oleh indomethacin NSAID [23]. Oleh itu, disimpulkan daripada keputusan bahawa ekstrak CT mempunyai sifat tambahan NSAID. Diambil bersama, dipercayai bahawa CT(Cistanche tubulosa)ekstrak memberikan kedua-dua kortikosteroid dan kesan seperti NSAID dalam model keradangan yang disebabkan oleh karagenan, dan fucoidan itu meningkatkananti-radangkesan ekstrak CT dengan menyekat penyusupan sel radang.
Walaupun mentakrifkan mekanisme tindakan yang tepat memerlukan kajian lanjut, campuran fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa) ekstrak dengan ketara melemahkan tanda-tanda keradangan dengan menyekat laluan TNF- –NO dan COX-II–PGE2 dalam keradangan kantung udara yang disebabkan oleh karagenan. Penemuan ini memberikan bukti bahawa rawatan gabungan fucoidan dan CT(Cistanche tubulosa)ekstrak mungkin merupakan calon yang menjanjikan untuk melegakan pelbagai jenis keradangan yang responsif kepada kortikosteroid atau NSAID.
Rujukan
1. Hari R. Reaksi buruk terhadap perencat TNF dalam arthritis rheumatoid. Lancet 2002; 359(9306): 540-541.
2. Feldmann M, Brennan FM, Maini RN. Peranan sitokin dalam arthritis rheumatoid. Annu Rev Immunol 1996; 14: 397-400.
3. Eigler A, Sinha B, Hartmann G, Endres S. Taming TNF: strategi untuk menghalang sitokin proinflamasi ini. Immunol Today 1997;18(10): 487-492.
4. Ershler WB, Keller ET. Peningkatan ekspresi gen interleukin-6berkaitan usia, penyakit lewat hayat dan kelemahan. Annu Rev Med2000; 51: 245-270.
5. Adams V, Nehrhoff B, Späte U, Linke A, Schulze PC, Baur A, Gielen S, Hambrecht R, Schuler G. Induksi ekspresi iNOS dalam otot rangka oleh IL-1 dan pengaktifan NFκB: an in vitro andin kajian vivo. Cardiovasc Res 2002; 54(1): 95-104.
6. Xie QW, Whisnant R, Nathan C. Penganjur gen tetikus pengekodan sintase nitrik oksida bebas kalsium memberikan kebolehdorongan oleh interferon dan lipopolisakarida bakteria. J ExpMed 1993; 177(6): 1779-1784.
7. Yui Y, Hattori R, Kosuga K, Aizawa H, Hiki K, Kawai C.Pemurnian sintase nitrik oksida daripada makrofaj tikus. J BiolChem 1991; 266(19): 12544-12547.
8. Marletta MA, Yoon PS, Iyengar R, Leaf CD, Wishnok JS. Pengoksidaan makrofaj L-arginine kepada nitrit dan nitrat: oksida nitrik ialah perantaraan. Biokimia 1998; 27(24): 8706-8711.
9. Moncada S, Palmer RM, Higgs EA. Nitrik oksida: fisiologi, patofisiologi, dan farmakologi. Pharmacol Rev 1991; 43(2):109-142.
10. Pang L, Hoult JR. Sitotoksisiti kepada makrofaj tetrandrine, alkaloid anti-silikosis, disertai dengan pengeluaran berlebihan prostaglandin. Biochem Pharmacol 1997; 53(6): 773-782.
11. Hunskaar S, Hole K. Ujian formalin pada tikus: pemisahan antara sakit radang dan bukan radang. Sakit 1987; 30:103-114.
12. Lester RS, Knowles SR, Shear NH. Risiko penggunaan kortikosteroid sistemik. Dermatol Clin 1998; 16(2): 277-288.
13. Lichtenstein DR, Syngal S, Wolfe MM. bukan steroidanti-radangdadah dan saluran gastrousus. Pedang bermata dua. Arthritis Rheum 1995; 38(1): 5-18.
14. Mukherjee D, Nissen SE, Topol EJ. Risiko kejadian kardiovaskular yang dikaitkan dengan perencat COX{1}} terpilih. JAMA 2001; 286(8):954-959.
15. Feldman SC, Reynaldi S, Stortz CA, Cerezo AS, Damont EB.Ciri-ciri antivirus pecahan fucoidan daripada Leathesiadifformis. Phytomedicine 1999; 6(5): 335-340.
16. Wang J, Zhang Q, Zhang Z, Song H, Li P. Kapasiti antioksidan dan antikoagulan yang berpotensi bagi pecahan fucoidan berat molekul rendah yang diekstrak daripada Laminaria japonica. Int J Biol Macromol2010; 46(1): 6-12.
17. Bojakowski K, Abramczyk P, Bojakowska M, Zwoliñska A, Przybylski J, Gaciong Z. Fucoidan memperbaiki aliran darah buah pinggang pada peringkat awal iskemia/kecederaan reperfusi buah pinggang pada tikus. JPhysiol Pharmacol 2001; 52(1): 137-143.
18. Li N, Zhang Q, Song J. Penilaian toksikologi fucoidan yang diekstrak daripada Laminaria japonica dalam tikus Wistar. Makanan ChemToxicol 2005; 43(3): 421-426.
19. Yamada P, Iijima R, Han J, Shigemori H, Yokota S, Isoda H. Kesan perencatan acteoside yang diasingkan daripada Cistanche tubulosa pada pelepasan mediator kimia dan pengeluaran sitokin radang oleh sel RBL-2H3 dan KU812. Planta Med 2010; 76(14): 1512-1518.
20. Shin S, Jeon JH, Park D, Jang JY, Joo SS, Hwang BY, Choe SY, Kim YB.Anti-radangkesan ekstrak etanol angelica gigas dalam model keradangan kantung udara karagenan.Exp Anim 2009; 58(4): 431-436.
21. Hevel JM, Marletta MA. Ujian sintase nitrik-oksida. KaedahEnzymol 1994; 233: 250-258.
22. Romano M, Faggioni R, Sironi M, Sacco S, Echtenacher B, DiSanto E, Salmona M, Ghezzi P. Carrageenan disebabkan keradangan akut dalam model sinovial kantung udara tetikus. Peranan faktor nekrosis tumor. Mediators Inflamm 1997; 6(1): 32-38.
23. Wallace JL, Chapman K, McKnight W. Limitedanti-radangkeberkesanan perencatan siklo-oksigenase-2 dalam keradangan kantung udara karagenan. Br J Pharmacol 1999; 126(5): 1200-1204.
24. Guslandi M. Nitrik oksida dan penyakit radang usus. Eur J Clin Invest 1998; 28(11): 904-907.
25. Ritchlin CT, Haas-Smith SA, Li P, Hicks DG, Schwarz EM. Mekanisme TNF- - dan osteoklastogenesis dan penyerapan tulang pengantaraan RANKL dalam arthritis psoriatik. J Clin Invest 2003;111(6): 821-831.
26. Minghetti L. Cyclooxygenase-2 (COX-2) dalam penyakit otak radang dan degeneratif. J Neuropathol Exp Neurol 2004;63(9): 901-910.
27. St-Onge M, Flamand N, Biarc J, Picard S, Bouchard L, DussaultAA, Laflamme C, James MJ, Caughey GE, Cleland LG, BorgeatP, Pouliot M. Pencirian generasi prostaglandin E2 melalui siklooksigenase (COX){ {3}} laluan dalam neutrofil manusia.Biochim Biophys Acta 2007; 1771(9): 1235-1245.
28. Choi YH, Park HY.Anti-radangkesan spermidine dalam sel mikroglial BV2 yang dirangsang lipopolysaccharide. J Biomed Sci2012; 19:31.
29. Wallace JL, Chapman K, McKnight W. Limitedanti-radangkeberkesanan perencatan siklo-oksigenase-2 dalam keradangan kantung udara karagenan. Br J Pharmacol 1999; 126(5): 1200-1204.
30. Oliveira de Melo J, da Conceição Torrado Truiti M, Muscará MN,Bolonheis SM, Dantas JA, Caparroz-Assef SM, Cuman RK,Bersani-Amado CA.Anti-radangaktiviti ekstrak mentahdan pecahan daun Nectandra falcifolia. Biol Pharm Bull2006; 29(11): 2241-2245.
31. Zanardo RC, Brancaleone V, Distrutti E, Fiorucci S, Cirino G, Wallace JL. Hidrogen sulfida ialah modulator endogen bagi keradangan yang dimediasi oleh leukosit. FASEB J 2006; 20(12): 2118-2120.
32. Masferrer JL, Zweifel BS, Manning PT, Hauser SD, Leahy KM, Smith WG, Isakson PC, Seibert K. Perencatan terpilih cyclooxygenase 2 induksi dalam vivo ialahanti-radangdan bukan nulk erogenik. Proc Natl Acad Sci USA 1994; 91(8): 3228-3232.
