Kajian Mengenai Kesan Terapeutik Dan Mekanisme Monomer Perubatan Tradisional Cina Pada Model Tikus Hipogonadisme Bermula Lewat

 

Abstrak

Objektif
Untuk menilai kesan terapeutik dan mekanisme tiga monomer perubatan Cina tradisional (TCM)-icariin, verbascoside, danginsenoside Rg1-padahipogonadisme permulaan lewat (LOH)dalam model tikus, dan untuk meneroka potensi mereka sebagaicampur tangan semulajadi untuk penurunan testosteron yang berkaitan dengan usiapada lelaki pertengahan umur.

Kaedah
Model hipogonadisme permulaan lewat (LOH) telah ditubuhkan pada lelaki berumurTikus Sprague-Dawleymelalui suntikan intraperitoneal daripadasiklofosfamid, meniru kekurangan androgen. Tiga monomer TCM-icariin, verbascoside, danginsenoside Rg1-diberikan secara lisan selama 60 hari.

Pada akhir rawatan, berat badan dan berat organ pembiakan (testis, epididimis, vesikel mani, dll) diukur.Perubahan histopatologidalam tisu testis dinilai menggunakanpewarnaan hematoxylin-eosin (H&E).. Tahap serumFSH, LH, dantestosterontelah diuji melaluiELISA. Ungkapan daripadareseptor androgen (AR)protein dan mRNA dinilai menggunakantompok baratdanPCR masa nyata kuantitatif (qRT-PCR).

 

 

 

Keputusan

Ginsenoside Rg1menunjukkan peningkatan yang paling ketara dalamberat badandanberat organ pembiakan(P <0.01).

Icariinmeningkatkan berat badan dengan ketaratestis, epididimis, danvesikel mani(P <0.01).

Verbascosideberat vesikel mani bertambah baik secara sederhana (P <0.05).

Ketiga-tiga monomer TCM dengan berkesandegenerasi testis terbalikdalam tikus LOH, memulihkan struktur tubul seminiferus dan meningkatkan bilangansel spermatogenikdansperma matang.

Semua kumpulan monomer menunjukkan keupayaan untukmenurunkan paras FSH dan LH serumsementarameningkatkan testosteron serum. Thekumpulan icariinmenunjukkan peningkatan endokrin yang paling ketara (P <0.01).

Tahap ekspresireseptor androgen (AR)dalam kedua-dua protein dan mRNA telah dikawal dengan ketara dalam semua kumpulan yang dirawat. Kesan daripadaicariinadalahlebih ketara daripada testosteron propionat, menunjukkan akesan pengawalseliaan yang kuat pada isyarat AR.

 

Kesimpulan

Kajian ini mencadangkan bahawaginsenoside Rg1adalah paling berkesan dalam penambahbaikanberat badan dan organdalam tikus LOH, manakalaicariinmenunjukkan kesan paling kuat dalammeningkatkan pengeluaran testosterondanmeningkatkan ekspresi AR. Ketiga-tiga monomer-icariin, verbascoside, danginsenoside Rg1-ditunjukkankesan perlindungan terhadap degenerasi testisdanmenyokong fungsi endokrin pembiakan lelaki, menawarkan alternatif semula jadi yang menjanjikan untuk pengurusanhipogonadisme yang berkaitan dengan usia.

 

Kata kunci

Hipogonadisme permulaan lewat (LOH); Icariin; Verbascoside; Ginsenoside Rg1; Perubatan Tradisional Cina; Penggalak testosteron semulajadi; Sindrom lelaki penuaan; Ekspresi reseptor androgen; Terapi herba untuk kesihatan lelaki

Klik gambar untuk mengetahui lebih lanjut tentang herba TCM untuk kesihatan seksual

 

 

Latar belakang

Hipogonadisme permulaan lewat (LOH)pada lelaki pertengahan umur dan warga emas berkait rapat denganpenurunan yang berkaitan dengan usia dalam tahap androgen, terutamanya testosteron. Kajian epidemiologi berasaskan populasi 2021 dijalankan di enam wilayah perwakilan di China, melibatkan6,296 lelaki berumur 40–79, mendedahkan kadar kelaziman LOH berikut:

3.2%pada lelaki dalam lingkungan 50-an

11.2%dalam usia 60-an

24.0%dalam usia 70-an [1]

LOH dicirikan olehmengurangkan testosteron serumbersama-sama dengan burujgejala kekurangan androgenseperti:

Libido rendah

Disfungsi erektil

Kemurungan dan kerengsaan

Kemerosotan kognitif dan kehilangan ingatan

Gejala ini bolehmenjejaskan kesejahteraan fizikal dan mental dengan ketara, sertakualiti hidup [2–3].

Pada masa ini,terapi penggantian testosteron (TRT)adalah rawatan arus perdana untuk LOH dan boleh mengurangkan gejala buat sementara waktu. Walau bagaimanapun, kebimbangan mengenairisiko kardiovaskular, kesihatan prostat, dankeselamatan jangka panjangkekal [4]. Oleh itu, minat untuk meneroka semakin meningkatalternatif semula jadi, lebih selamat, terutamanya daripadaPerubatan Tradisional Cina (TCM).

Kajian ini bertujuan untuk menilaikesan dan mekanisme terapeutikdaripada tiga monomer TCM-icariin, verbascoside, danginsenoside Rg1-menggunakan amodel tikus LOH.

 

1. Bahan dan Kaedah

1.1 Haiwan Eksperimen

Enam puluhTikus Sprague-Dawley (SD) jantan berumur 15 bulan(700–800g) diperoleh pada Januari 2022 dari Pusat Eksperimen Haiwan Universiti Three Gorges China. Nombor lesen:

Sijil Haiwan: Tidak. 42010200007997

Lesen Pengeluaran: SCXK (E) 2022-0012

Tikus ditempatkan dalam persekitaran terkawal (suhu: 19–23 darjah, kelembapan relatif: 55%–65%), dengan kitaran terang-gelap semula jadi dan akses percuma kepada makanan dan air. Selepas1 minggu penyesuaian diri, percubaan bermula.

1.2 Reagen dan Instrumen

Cyclophosphamide(Nanjing Jiancheng)

Icariin(Bioteknologi Nanjing Guangrun)

Ginsenoside Rg1(Shanghai Macklin)

Verbascoside(Bioteknologi Shanghai Zhenzhun)

antibodi AR(Santa Cruz, Amerika Syarikat)

-antibodi aktin(Sigma, Amerika Syarikat)

Kit pewarnaan H&E(Perindustrian Shanghai Yiji)

Kit ELISA untuk serum FSH, LH, testosteron(Shanghai Meilian)

reagen qRT-PCR (SYBR Green I)(Shanghai Julu Biotech)

Instrumen: Pembaca plat mikro termo, mikroskop optik Olympus, sistem pengimejan LI-COR Odyssey, mesin ABI qRT-PCR

 

1.3 Pengelompokan Haiwan dan Induksi Model LOH

Tikus ditugaskan secara rawak6 kumpulan (n=10 setiap kumpulan):

Kumpulan kawalan:

Suntikan intraperitoneal (ip) 0.9% garam selama 5 hari

Garam oral (1 mL/100g) selama 60 hari

Kumpulan model:

ip cyclophosphamide 20 mg/kg/hari selama 5 hari

Diikuti dengan garam oral selama 60 hari

Testosteron propionat (kawalan positif):

ip cyclophosphamide (sama seperti di atas)

Suntikan subkutaneus testosteron propionat 5 mg/kg/hari selama 7 hari

Kumpulan Icariin:

ip cyclophosphamide (sama)

Icariin oral 200 mg/kg/hari selama 60 hari

Kumpulan Verbascoside:

ip cyclophosphamide (sama)

Verbascoside oral 200 mg/kg/hari selama 60 hari

Kumpulan Ginsenoside Rg1:

ip cyclophosphamide (sama)

Ginsenoside oral Rg1 200 mg/kg/hari selama 60 hari

Semua rawatan diberikan antara8:00–11:30 PG. Penilaian telah dilakukan24 jam selepas dos akhir.

 

1.4 Berat Badan dan Indeks Organ Pembiakan

Selepas ditimbang, tikus disingkirkan dengan dislokasi serviks. Thetestis, epididimis, dan vesikel manitelah dibedah dan ditimbang.

satutestis dari setiap tikustelah ditetapkan dalam4% paraformaldehidselama 72 jam, dehidrasi dengan alkohol gred, dibenamkan parafin, dipotong (5 μm), dan diwarnakan denganHematoxylin-Eosin (H&E). Perubahan morfologi diperhatikan di bawah mikroskop cahaya.

 

1.5 Ujian Hormon Serum

Tikus telah dibius dengan3% natrium pentobarbital, dan darah dikumpulkan melaluitusukan jantung. Serum dipisahkan olehsentrifugasi pada 3000 rpm selama 10 minit pada 4 darjah. Kit ELISA digunakan untuk mengukurFSH, LH, dan testosterontahap mengikut protokol pengeluar.

 

1.6 Ungkapan Protein AR (Western Blot)

Tisu testis dilisiskan dan kepekatan protein diukur. Jumlah protein yang sama telah diselesaikan oleh10% SDS-PAGE, dipindahkan ke membran PVDF, dan diinkubasi dengan antibodi utama terhadapARdan-aktin (1:1000)semalaman. Pengeraman antibodi sekunder diikuti oleh pengesanan chemiluminescent.ImejJdigunakan untuk analisis.

 

1.7 Ungkapan mRNA AR (qRT-PCR)

Jumlah RNA diekstrak daripada tisu testis. cDNA telah disintesis melalui transkripsi terbalik. qRT-PCR dilakukan menggunakan kaedah SYBR Green.

primer AR:

Hadapan: 5′-CAGGGACCA CGTTTTACCCA-3′

Terbalik: 5'-TTCCCTTCCGCAGCTCTTTT-3'

-aktin primer (kawalan dalaman):

Hadapan: 5′-CCACCATGTACCCAGGCATT-3′

Terbalik: 5'-CGGACTCATCGTACTCCTGC-3'

Kitaran terma: 95 darjah selama 15 minit (pra-pendenaturan), diikuti dengan 40 kitaran 95 darjah selama 15 s dan 60 darjah selama 1 minit. Data dianalisis menggunakan2^-ΔΔCtkaedah.

 

1.8 Analisis Statistik

Data dianalisis menggunakanSPSS 26.0.

Keputusan dibentangkan sebagaimin ± sisihan piawai (x̄ ± s)

ujian-tdigunakan untuk perbandingan dua kumpulan

ANOVA sehaladigunakan untuk perbandingan berbilang kumpulan

P < 0.05dianggap signifikan secara statistik