Kajian Mengenai Aktiviti Antioksidan Glikosida Phenylethanoid Daripada Cistanche Deserticola

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

LI Li et al ( Makmal Pusat Universiti Normal Changchun, Changchun, Jilin 130032)

Abstrak[ Objektif ] Penyelidikan ini bertujuan untuk mengkaji secara sistematik aktiviti antioksidan glikosida fenilethanoid daripadaCistanchedeserticola. [Kaedah ] Dua sistem model, ujian radikal bebas 2,2-diphenyl-l -picrylhydrazyl ( DPPH ' ) dan ujian photo chemiluminescence (PCL), digunakan untuk mengukur aktiviti antioksidan ekstrak C. deserticola, acteoside, isoacteoside, dan echinacoside. [ Keputusan] Keputusan menunjukkan bahawa jumlah kandungan fenolik (TPC) dalam echinacoside, acteoside, isoacteoside, dan 80 peratus ekstrak etanol C. deserticola ialah 753.95, 659.94, 356.14, dan 14.73 mg asid gallic /g sampel. Ekstrak C. deserticola menunjukkan aktiviti antiox记ant yang kuat dalam eksperimen PCL, diikuti oleh echinacoside, acteoside, dan isoacteoside. Walau bagaimanapun, echinacoside mempamerkan aktiviti antioksidan yang kuat dalam eksperimen DPPH, diikuti oleh acteoside, isoacteoside, dan ekstrak C. deserticola.

[ Kesimpulan ]Penyelidikan ini boleh memberi rujukan untuk kajian farmakologi dan aktiviti biologi glikosida phenylethanoid daripada C. deserticola.

Kata kunci Cistanche deserticola ; Acteoside ; Isoacteoside ; Echinacoside ; Aktiviti antioksidan; DPPH ; PCL

Cistanche (Cistanche deserticolaYC Ma.) ialah tumbuhan daripadaCistanchegenus (Oro-banehaeeeee) daripadaCistanchegenus (Cistanche). Batang berdaging kering Cistanche dengan daun bersisik. Sebilangan besar kajian mendapati bahawa bahan aktif utama tumbuhan Cistanche ialah sebatian phenethyl alcohol glycoside. . Sebatian phenylethanol glycoside tergolong dalam sejenis sebatian polifenol, yang diedarkan secara meluas dalam pelbagai jenis tumbuhan. Kajian ujian farmakologi telah menunjukkan bahawa sebatian ini mempunyai pelbagai aktiviti farmakologi dan biologi, seperti aktiviti anti-hepatotoxin, anti-radang, analgesik dan antioksidan. Antaranya, perkara yang paling menarik ialah sebatian phenoxyethanol glycoside mempunyai aktiviti antioksidan yang sangat baik. Penulis terutamanya menjalankan analisis sistematik aktiviti antioksidan sebatian glikosida phenethyl alkohol dalamCistanche, menggunakan dua kaedah penilaian in vitro anti-oksidan, iaitu Photoehemilumineseence (PCL) dan 2,2-diphenyl-1-pieryl-hydroxyl (DPPH') Dua sistem berbeza telah digunakan untuk mengukur aktiviti antioksidan 80 peratus ekstrak etanol daripadaCistanche, ergosterosida, isoergoside, danechinacoside.

1 Bahan dan kaedah

1.1 Sampel dan reagen

Cistanche (Cistanche deserticola)bahan ubatan telah dibeli dari Farmasi Tongrentang Beijing.Ergosteroside, isoergoside,echinacoside, Folin. Reagen Ciocalteu, asid gallic, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH.), dsb. telah dibeli daripada SigmaChemicalCo. Syarikat (St. Louis, Mo). Pelarut yang digunakan untuk analisis PCL telah disediakan oleh Analytic Jena AG (Berlin, Jerman). Reagen lain adalah semua reagen analitik (dihasilkan oleh Beijing Chemical Plant). Air itu adalah air ultratulen (18.2 nPa).

1.2 Pengekstrakan sampel

Timbang tepat 2.0005gCistancheserbuk sampel, gunakan 50rnl etanol 80 peratus untuk pengekstrakan ultrasonik pada suhu bilik selama 0.5j, ekstrak dua kali, tapis larutan sampel, sejat berputar hingga kering (<40oc), use="" 100ml="" of="" distilled="" water="" dissolve,="" degrease="" twice="" with="" 100ml="" n-hexane,="" discard="" the="" n-hexane="" solution,="" extract="" the="" water="" part="" with="" 100="" ml="" of="" water-saturated="" n-butanol="" 3="" times,="" combine="" the="" n-butanol="" extracts,="" rotary="" evaporate="" to=""><40oc), and="" use="" 4ml="" for="" the="" residue="" the="" volume="" of="" absolute="" ethanol="" is="" fixed="" to="" obtain="" a="" sample="" of="">Cistanche deserticola.

1.3 Penentuan jumlah kandungan polifenol sampel

Jumlah kandungan fenol sampel ditentukan menggunakan kaedah F{{0}}lin-Ciocaheu, dan hasilnya dinyatakan sebagai miligram asid gallik setiap gram ekstrak. Ambil larutan sampel dengan kepekatan tertentu 0.2rnI (untuk membuat penyerapan jatuh pada lengkung piawai), tambah 1ml reagen Folin-Ciocaheu dengan kepekatan 0.5mol/L, dan kemudian tambah 0.8ml larutan natrium karbonat dengan kepekatan 7.5 peratus untuk dicampur dengan baik, Diletakkan pada suhu bilik selama 0.5j, dan kemudian diukur penyerapan pada 765nm (spektrofotometer boleh dilihat ultraungu: DU800, Beckman Couher, Inc. USA). Gunakan larutan asid gallik (julat kepekatan jisim ialah 0.02-0.20me,/m1) untuk membuat lengkung piawai dan semua ujian diulang dua kali.

1.4 Aktiviti antioksidan dalam analisis vitro

1.4.1 Penentuan kaedah PCL.

Ujian itu menggunakan Photochem@(Berlin, Ger-many) antioksidan ultra-pantas dan penganalisis automatik radikal bebas. Prinsipnya adalah untuk menjana radikal bebas dengan kaedah fotokimia dan menggunakan kaedah chemiluminescence untuk mengesan radikal bebas. Dalam percubaan, fotosensitizer dengan kesan pengujaan fotokimia telah digunakan untuk merangsang molekul tindak balas, supaya di bawah tindakan lampu ultraungu, tindak balas pengoksidaan berlaku 1000 kali lebih cepat daripada keadaan biasa, dan radikal bebas cepat dihasilkan." Pilih kaedah PCL-ACW-Kit Ukur aktiviti antioksidan komponen larut air sub-sampel psyllium. Pipet 1.0ml penimbal tindak balas (termasuk kepekatan 0.1moL/L SodiumCarbonate, nilai pH 10.5 dan kepekatan 0.1mmol/LNA, satu EDTA, 1.5ml ACW- pelarut (air ), kepekatan 1mmol/LLumino1) bertindak sebagai fotosensitizer untuk merangsang molekul tindak balas, supaya radikal bebas cepat dihasilkan, dan pada masa yang sama sebagai bahan photochemiluminescent. Kedua-dua sampel dan piawai adalah 10 "l. Dengan mengukur kepekatan yang berbeza (0.5, 1.0, 2.0 dan 3.0 nmol/L) L. Persamaan lengkung piawai untuk asid askorbik ialah Y=24.640Ox campur 2.9311, R²=0.9969. Ia adalah perlu untuk mencairkan sampel atau larutan piawai dalam ujian supaya selang masa ketinggalan berada dalam julat linear lengkung piawai. Photochem menjana lengkung piawai dan menguji aktiviti antioksidan sampel secara automatik, dan aktiviti antioksidan sampel adalah bersamaan dengan L． Dikira dengan bilangan nanomol asid askorbik.

1.4.2 Penentuan kaedah DPPH.

Radikal diphenylpicrylhydrazino [DPPH ·] ialah radikal berpusat nitrogen yang stabil dengan penyerapan maksimum pada panjang gelombang 515nm. [DPPH ·] larutan metanol berwarna ungu, dan kepekatannya mempunyai hubungan linear dengan penyerapan." Selepas menambah antioksidan kepada [DPPH ·] larutan metanol, antioksidan boleh bergabung dengan [DPPH ·] radikal bebas atau menggantikannya untuk membuat [DPPH ·] ] Bilangan radikal bebas berkurangan, dan warna larutan menjadi lebih cerah, yang ditunjukkan oleh penurunan berterusan dalam penyerapan pada panjang gelombang 515 nm sehingga mencapai kestabilan." Dalam ujian, etanol digunakan sebagai ganti metanol. Timbang [DPPH ·] dengan tepat dan konfigurasikan kepekatan kepada 0. [DPPH ·] larutan etanol 0.040 76mg/ml, lengkung piawai [DPPH ·] diperoleh: Y: 18.032x-0.0016 , R=0.9993. Kaedah untuk mengukur kadar sisa radikal bebas merujuk kepada literatur [16]. Menggunakan etanol sebagai pelarut, sediakan kepekatan sampel dan larutan piawai yang berbeza, ambil sampel 0.1ml atau larutan piawai masing-masing, dan tambahkan larutan piawai 3.9ml [DPPH·] dengan kepekatan jisim 2.5mg/L (yang digunakan sekarang) ), gantikan larutan sampel dengan etanol sebagai kosong. Goncang larutan campuran, gunakan kuvet untuk mengukur penyerapannya pada masa yang berbeza pada panjang gelombang 515nm, dan tukarkannya kepada kepekatan jisim [DPPH·] mengikut lengkung piawai untuk mengira kadar baki [DPPH·]. Mengikut kadar baki [DPPH ·] dan jumlah sampel yang sama ditambah, lengkung untuk membuang [DPPH -] radikal bebas daripada sampel boleh dibuat. Mengikut keluk hubungan antara kepekatan jisim [DPPH ·] dan penyerapan, penyerapan yang diukur selepas penambahan pemusnah radikal bebas boleh ditukar kepada kepekatan jisim [DPPH ·] untuk mengira [DPPH ·] selepas penambahan pemusnah radikal bebas. Formula pengiraan untuk kadar baki adalah seperti berikut: [DPPH ·]REM=[DPPH·]/[DPPH·]r=0×100 peratus dengan [DPPH·] ialah kepekatan jisim DPPH · pada saat tertentu dalam proses penghapusan radikal bebas, [DPPH·]:. Adakah kepekatan jisim asal DPPH·. Mengikut bilangan antioksidan yang ditambah dan kadar baki [DPPH ·], keluk hubungan antara kedua-duanya dibuat, dan persamaan regresi boleh diperoleh melalui analisis regresi linear. Mengikut persamaan regresi, dos antioksidan apabila kadar baki [DPPH ·] ialah 50 peratus boleh dikira. Separuh perencatan. Menurut keluk penghapusan radikal bebas [DPPH·] bagi kepekatan sampel atau piawai yang berbeza, hitung jumlah EC sampel apabila kepekatan jisim asal [DPPH·] dikurangkan kepada 50 peratus (keadaan mantap). Lebih kecil EC, keupayaan penghapusan radikal bebas Lebih kuat". Uji 3 kali secara selari.

cistanche

2 Keputusan dan analisis

2.1 Penentuan jumlah kandungan polifenol sampel Dalam penentuan jumlah kandungan polifenol, jumlah kandungan polifenol bagiechinacosideadalah yang tertinggi, iaitu 753.95 mg asid gallik/g. Diikuti oleh glikosida ergosteroid, glikosida isoergosteroid, dan ekstrak mentah daripadaCistanche, iaitu 468.3, 356.14, dan 14.73 mg asid gallik/g, masing-masing.

2.2 Penentuan aktiviti antioksidan sampel

2.2.1 Keputusan penentuan kaedah PCL- ACW. Dalam ujian antioksidan PCL-ACW, kapasiti antioksidan 1txgCistanchebahan perubatan adalah bersamaan dengan kapasiti antioksidan 15.68nmol L-asid askorbik; 1 gechinacosideadalah bersamaan dengan kapasiti antioksidan 14.03nmol asid askorbik Aktiviti: 1txgergosterosidabersamaan dengan 11.44nmolL kapasiti antioksidan asid askorbik; Isomergosteroside 1Ixg adalah bersamaan dengan aktiviti antioksidan 8.24nmol asid askorbik.

2.2.2 Keputusan pengukuran kaedah DPPH. Ia boleh dilihat daripada Jadual 1 bahawa ia telah dibersihkan. Urutan keupayaan radikal bebas ialahergosterosida, echinacoside, isoergoside dan ekstrak mentah daripadaCistanche, antaranya sisi ergo danechinacosidemempunyai kapasiti antioksidan yang sama dalam ujian DPPH. Ia boleh dilihat daripada ini. Oleh kerana sistem ujian antioksidan in vitro yang berbeza digunakan untuk mengukur sampel, mekanisme kesan antioksidan adalah berbeza, dan hasilnya mungkin tidak konsisten. Ini juga telah disahkan dalam ujian. Oleh itu, adalah perlu untuk memilih sistem analisis antioksidan lain untuk pengesahan selanjutnya.

echinacosie

rujukan

[1] Yang Cuiping, Su Weiwei. Kemajuan penyelidikan sup daging[J]·Bahan Perubatan Cina, 2001, 24(12): 907-909.

[2]Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei Kemajuan penyelidikan tentang juzuk kimia tumbuhan Cistanche[J].Perubatan Herba Cina,2003,34(5):473 -476.

[3]HIROMI KOBAYASHI,HIROKO KARASAWA JOSHIO MIYASE. Kajian tentang Konstituen Cistanchis Herba. HI. Pengasingan dan struktur glikosida fenilpropanoid baharu, Cistanosides A dan B[J]. Kimia. Pharm Bull, 19^,32(10):3009 -3014.

[4]LI LI, RONG TSAO, RAYMOND YANG, et al. Pengasingan dan penulenan glikosida phenylethanoid daripadaCistanche deserticolaoleh kromatografi arus balas berkelajuan tinggi [ J ]. Kimia Makanan,2008,1(^:702-710.

[5]LI LI, RONG TSAO, LIU ZQ, et al. Pengasingan dan penulenan actec^ide dan isoacteoside daripada Plantago psyllium L. oleh kromatografi lawan arus kelajuan hi南 [J]. Jurnal Kromatografi A,2005,1063: 161-169.

[6]RAVN H, NISHIBE S, SASAHARA M, et al. Sebatian fenolik daripada Plantago Asiatica [J]. Fitokimia, 1990, 29: 3627-3631.

[7]TOYAMA Y, MATSUMOTO M, NISHIOKA I. Glikosida fenolik daripada akar berpenyakit Rehmannia gluiinosa var. purpurea [J]. Fitokimia, 1987, 26: 983-986.

[8] Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Wu Ji J Ya, et al. Jumlah glikosida cistanche cistanche dalam Vitro menghilangkan radikal bebas dan kesan perlindungan terhadap kerosakan DNA yang disebabkan oleh OH [J]. Jurnal Farmaseutikal Cina, 2001, 36(1): 29-31.

[9]XIONG Q, HASE K, TEZUKA Y, et al. Aktiviti hepatoprotektif feniletanoid daripadaCistanche deserticola[J ]. Planta Med, 1998,64:120.

[10]SCHAPOVAL EES, WINTER DE VARGAS MR, CHAVES CG, et al. Aktiviti anti-radang dan antinociceptive ekstrak dan sebatian terpencil daripada Stachytarpheta cayeunensis [J]. J Ethnopharmacol, 1998, 60: 53.

[11] LI J, WANG PF, ZHENG RL, et al. Perlindungan glikosida fenilpropanoid daripada Pedicularies terhadap hemolisis oksidatif secara in vitro [J]. Planta Med, 1993,59:315—317.

[12] HE ZD, LAU KM, Xu HX, et al. Aktiviti antioksidan glikosida phenylethanoid daripada kanser Brandisia [J]. Etnofarmakologi, 2000, 71:483-486.

[13]XIONG Q, KADOTA S, TANI T, et al. Kesan antioksidan phenylethanoid daripadaCistanche deserticola[J]. Biol Pharm Bull, 1996,19: 1580-1585.

[14]TSAO R, YANG R, XIE S, et al. Sebatian polifenol yang manakah menyumbang kepada jumlah aktiviti antioksidan epal? [J]. J Agric Food Chem, 2005,53:4989-4995.

[15] POPOV IN, LEWIN G. Pengesanan hiotochemiluminescent aktiviti antiradikal: U. ujian antioksida larut air bukan enzim [J ]. Free Rad Biol Med, 1994, 17: 267-271.

[16]JENAMA-WILLIAMS W, CUVEHER ME, BERGET C. Penggunaan kaedah radikal bebas untuk menilai aktiviti antioksidan [J ]. Lebensm Wiss Technol, 1995,28:25-30.

[17] Li Chunyang, Xu Shiying, Wang Zhang. Kaedah DPPH untuk menentukan keupayaan proanthocyanidins biji anggur untuk menghilangkan radikal bebas [J]. Jurnal Makanan dan Bioteknologi, 2006, 25(2)" 02-106.

SCHLESIER K, HARWICH M, BOHM V, et al. Penilaian aktiviti antioksidan dengan menggunakan kaedah in vitro yang berbeza [J ]. Penyelidikan Radikal Bebas,2002,36(2):177-187.