Penyelidikan mengenai kesan antidepresan dan mekanisme glikosida phenylethanol cistanche pada tikus ⅱ

2 Hasil dan Analisis

2.1 Kesan CPHG pada SPT dan 5- HT dan DA dalam serum tikus model kemurungan ditunjukkan dalam Jadual 1.

 

Berbanding dengan CON, kadar keutamaan air gula MOD, serum dan tisu hippocampal neurotransmitter 5- HT dan kandungan DA jauh lebih tinggi. Menurun dengan ketara (p<0.01 or P<0.05). It shows that Mod mice show depression-like behavior and the model is successfully established. Compared with Mod, CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L and FLX significantly increased the sugar water preference rate, neurotransmitter 5-HT and DA contents in serum and hippocampal tissue of mice (P<0.01 or P< 0.05), among which the sugar water preference rates increased by 72.91%, 46.59%, 23.43% and 87.93% respectively; the serum 5-HT levels increased by 31.77%, 25.24%, 20.44% and 37.59% respectively; the serum DA levels increased by 47.07% respectively. , 35.57%, 27.77% and 52.93%; the 5-HT content in hippocampal tissue increased by 31.77%, 25.24%, 20.44% and 37.59% respectively, and the DA content in hippocampal tissue increased by 47.07%, 35.57%, 27.77% and 52.93% respectively. This shows that CPhGs has an alleviating effect on the anhedonia of CUMS mice. CPhGs may restore the anhedonic ability of mice by regulating neurotransmitter transmission in the central nervous system, especially pathways related to reward and emotion regulation such as 5-HT and DA.

Bahan mentah herba cistanche untuk kemurungan

 

 

2.2 Kesan CPHGS pada Tikus Model Kemurungan

Mengikut ciri -ciri fisiologi tikus dan beberapa tingkah laku khas dalam persekitaran yang tidak dikenali, ia boleh digunakan untuk menilai tingkah laku penerokaan dan kecemasan dan kemurungan tikus dalam persekitaran baru. Eksperimen medan terbuka terutamanya meneliti aktiviti autonomi tikus, dan kemudian mencerminkan dalam keadaan kemurungannya, semakin lama jarak pergerakan tetikus per unit masa, semakin lama waktu aktiviti di kawasan pusat, dan semakin lama jarak pergerakan di kawasan pusat, lebih ringan tahap kemurungan tetikus [11]. Keputusan eksperimen ditunjukkan dalam Rajah 1. Berbanding dengan CON, tiga petunjuk mod di atas dikurangkan dengan ketara (p<0.01); compared with Mod, the above three indicators of CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L and FLX were significantly increased (P<0.01 or P<0.05), among which the total movement distance CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L and FLX increased by 46.63%, 29.86%, 23.92% and 52.65% respectively, and the central area activity time respectively The increases were 127.92%, 64.65%, 43.81% and 119.81%, and the exercise distance in the central area increased by 122.44%, 53.21%, 33.97% and 102.56% respectively. Experimental results show that CPhGs can regulate brain neural pathways and improve functions related to emotion regulation and behavioral drive, affecting the behavioral performance of OFT in depression model mice.

 

Rajah 1 Hasil daripada TOT dalam setiap kumpulan tikus (x ± s, n=10)

 

2.3 Kesan CPHG pada TST dan FST dalam Model Model Kemurungan

Keputusan TST dan FST ditunjukkan dalam Rajah 2. Berbanding dengan CON, masa imobilitas ujian TST MOD dan masa Immobility yang terapung ujian FST kedua -duanya lebih lama (p<0.01); compared with Mod, CPhGs- The total immobility time and floating immobility time of H, CPhGs-M, CPhGs-L and FLX were significantly shortened (P<0.01 or P<0.05). Among them, the immobility time of forced swimming was reduced by 34.67%, 30.71%, 20.78% and 44.97% respectively, and the immobility time of tail suspension was reduced by 35.91%, 27.88%, 23.30% and 42.14% respectively. This suggests that CPhGs improves the function of the central nervous system and restores the normal activity of neuronal functions and neural circuits. In desperate stress environments, the negative emotions of mice are significantly reduced, and the desire to survive becomes positive, thus improving the TST of depressed mice. and behavioral manifestations of FST.

2.4 Kesan CPHGS ke atas faktor keradangan dalam tikus model kemurungan

Untuk menilai kesan anti-radang CPHGs, kajian ini mengukur tahap ekspresi faktor keradangan utama dalam hippocampus, termasuk TNF, IL -1, IL -18, il -6, dan IFN- (lihat Rajah 3). Berbanding dengan CON, tahap TNF-, IL -1, IL -18, IL -6 dan IFN- dalam MOD meningkat dengan ketara sebanyak 132.92%, 107.32%, 69.13%, 62.32%dan 76.55%(P<0.01) . Compared with Mod, TNF-α in CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L and FLX mice decreased by 42.93%, 29.95%, 11.08% and 23.00% respectively (P<0.01 or P<0.05); IL-1β respectively decreased by 45.72%, 21.91%, 12.32% and 48.65% (P<0.01 or P<0.05); IL-18 decreased by 35.17%, 18.22%, 9.13% and 22.06% respectively (P<0.01 or P<0.05); IL- 6 were reduced by 34.67%, 11.47%, 9.06% and 19.47% respectively (P<0.01 or P<0.05); IFN-γ levels were reduced by 34.97%, 14.06%, 9.89% and 26.25% respectively (P<0.01 or P<0.05) .

 

Rajah 3 Perubahan dalam tahap faktor keradangan dalam tisu hippocampal setiap kumpulan tikus (x ± s, n=10)

 

2.5 Kesan CPHGS pada Mediator Radang dalam Model Model Kemurungan

Untuk menilai kesan CPHG pada mediator radang, kajian ini mengukur tahap ekspresi mediator keradangan utama (iNOS, Cox -2, dan PGE2) dalam hippocampus (lihat Rajah 4). Berbanding dengan tahap CON, INOS, COX -2 dan PGE2 meningkat dengan ketara dalam MOD sebanyak 278.34%, 147.45% dan 124.03% (p<0.01). Compared with Mod, the iNOS levels of CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGsL and FLX were reduced by 49.55%, 40.52%, 11.99% and 68.57% respectively (P<0.01 or P<0.05); the COX-2 levels were reduced by 39.58% respectively. , 26.87%, 17.96% and 48.39% (P<0.01 or P<0.05); PGE2 levels were reduced by 27.89%, 14.28%, 10.45% and 37.51% respectively (P<0.01 or P<0.05), among which the PGE2 of CPhGs-L The level is not statistically significant compared with Mod. The above results indicate that CUMS successfully induced the mouse depression model and caused significant inflammatory response and oxidative stress state. CPhGs can effectively reduce the levels of these inflammatory mediators after administration, showing good anti-inflammatory and antioxidant effects, and its effects are dose-dependent.

 

Rajah 4 Keputusan kandungan mediator keradangan dalam tisu hippocampal setiap kumpulan tikus (x ± s, n=10)

 

2.6 Kesan CPHG pada struktur tisu hippocampal dalam tikus model kemurungan

Dia pewarnaan digunakan untuk menganalisis perubahan patologi dalam tisu hippocampal tetikus (lihat Rajah 5). Berbanding dengan CON, tikus mod menunjukkan perubahan patologi yang jelas di rantau gyrus dentate hippocampus, termasuk susunan sel yang tidak teratur, pyknosis nuklear, dan pengekalan sitoplasma, menunjukkan kerosakan neuron yang signifikan. Berbanding dengan MOD, CPHGS-L tidak mempunyai kesan peningkatan yang jelas terhadap fenomena kerosakan di atas. CPHGSM dan CPHGS-H dengan ketara meningkatkan perubahan patologi ini. Kesan CPHGS-M adalah dekat dengan FLX, dan kesan CPHGS-H adalah lebih baik daripada FLX. Peningkatan morfologi neuron hippocampal adalah bergantung kepada dos, menunjukkan bahawa CPHG mempunyai kesan perlindungan pada hippocampus.

Neuron kuda, meningkatkan gejala depresi. Hasil ini selaras dengan penambahbaikan yang diperhatikan sebelum ini dalam penanda tingkah laku dan biokimia dan seterusnya menyokong nilai potensi CPHG dalam rawatan kemurungan.
Badan NISSL dalam pewarnaan NISSL (lihat Rajah 5) adalah struktur sitoplasma yang unik untuk neuron dan terutamanya bertanggungjawab untuk sintesis protein. Ia berlimpah dalam neuron aktif yang sihat dan metabolik tetapi dikurangkan atau dibongkar apabila rosak. Oleh itu, keadaan badan NISSL secara langsung mencerminkan fungsi dan kesihatan neuron dan merupakan penunjuk penting untuk menilai aktiviti sel saraf. Berbanding dengan CON, susunan neuron di rantau gyrus dentate hippocampus tikus MOD tidak teratur dan NISSL corpuscles dikurangkan dengan ketara, menunjukkan aktiviti neuron yang dikurangkan. CPHGS-L, CPHGS-M, dan CPHGS-H semuanya meningkatkan bilangan badan NISSL berbanding MOD. Antaranya, CPHGS-H mempunyai kesan yang paling penting, dengan susunan neuron cenderung tetap dan bilangan badan NISSL menghampiri tahap CON. FLX juga menunjukkan peningkatan yang ketara kepada tahap yang setanding seperti CPHGS-H. Keputusan ini menunjukkan bahawa CPHGs boleh bergantung kepada dos yang bergantung kepada kerosakan neuron hippocampal yang disebabkan oleh cums dan meningkatkan daya maju neuron.

 

Rajah 5 Hasilnya pewarnaan dan Nissl pewarnaan dalam tisu hippocampal setiap kumpulan tikus

 

2.7 Kesan CPHG pada sel glial dalam hippocampus tikus model kemurungan

Astrocytes adalah jenis sel glial yang paling banyak di dalam otak dan memainkan peranan penting dalam mengekalkan penghantaran neurotransmitter dan mewujudkan halangan darah-otak [12]. Untuk menganalisis ketumpatan astrocytes dalam tisu hippocampal tetikus, IHC digunakan untuk mengesan ekspresi GFAP penanda astrocyte dalam tisu hippocampal (lihat Rajah 6A dan Rajah 7A). Berbanding dengan CON, ekspresi GFAP dalam hippocampus tikus mod dikurangkan dengan ketara sebanyak 47.47% (p<0.01), showing significant astrocyte damage. Compared with Mod, CPhGs-L increased by 18.48%, but did not reach statistical significance; the GFAP expression of CPhGs-H, CPhGs-M and FLX significantly increased by 64.23%, 40.07% and 57.45% respectively (P< 0.01 or P<0.05), among which the effect of CPhGs-M is close to FLX, and the effect of CPhGs-H is even better than FLX. Changes in the number of astrocytes in the hippocampus of the CPhGs administration group
Kesannya bergantung kepada dos, menunjukkan bahawa CPHG dapat melindungi astrocytes dan meningkatkan gejala depresi.
Microglia adalah sel -sel imun sistem saraf pusat, yang memainkan peranan penting dalam pengawasan imun otak, neurogenesis, pemangkasan sinaptik dan proses lain [13]. Kajian klinikal mendapati bahawa microglia terlalu aktif dalam otak pesakit yang tertekan. Kajian haiwan juga mendapati bahawa tekanan kronik mendorong tingkah laku seperti kemurungan pada haiwan dan juga boleh menyebabkan keabnormalan struktur dan fungsi dan lebihan mikroglia di otak (lobus prefrontal, hippocampus dan kawasan otak lain). Aktifkan [14]. Untuk menganalisis ketumpatan astrocytes dalam tisu hippocampal tetikus, IHC digunakan untuk mengesan ekspresi penanda astrocyte IBA -1 dalam tisu hippocampal (lihat Rajah 6B dan Rajah 7B). Ekspresi IBA -1 meningkat dengan ketara dalam mod sebanyak 72.34% berbanding dengan CON (P<0.01). Compared with Mod, Iba-1 expression of CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L, and FLX was significantly reduced by 23.73%, 18.87%, 14.89%, and 29.67%, respectively (P<0.05 or P<0.01). Description CPhGs
Ia dapat mengurangkan pelepasan sitokin pro-inflamasi dan mediator keradangan yang disebabkan oleh pengaktifan mikroglial, dengan itu keradangan sistem saraf pusat yang disebabkan oleh cums.

 

2.8 Kesan CPHG pada neuroinflammation dalam tisu hippocampal tikus model kemurungan

Laluan inflammasom NLRP3 memainkan peranan penting dalam tindak balas keradangan dalam sistem saraf pusat dan berkait rapat dengan proses patologi kemurungan. NLRP3 dan caspase -1, sebagai teras inflammasome, diaktifkan apabila terdedah kepada rangsangan luar, memangkinkan faktor keradangan prekursor dan mencetuskan siri tindak balas keradangan [15]. Untuk menganalisis keterukan neuroinflammation dalam tisu hippocampal tetikus, IHC digunakan untuk mengesan ekspresi protein utama NLRP3 NLRP3 dan caspase -1 dalam tisu hippocampal (lihat Rajah 6C, 6D dan Rajah 7C, 7D). Berbanding dengan CON, tahap mod NLRP3 meningkat dengan ketara sebanyak 121.62% (p<0.05), and the Caspase1 level was significantly increased by 172.65% (P<0.01). Compared with Mod, the NLRP3 levels of CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L and FLX were reduced by 50.00%, 40.24%, 32.93% and 71.95% respectively (P<0.05), and the Caspase-1 levels were reduced by 57.65% and 37.99 respectively. %, 31.91% and 60.59% (P<0.05 or P<0.01). This shows that CPhGs can effectively inhibit the activation of NLRP3 inflammasome, thereby reducing neuroinflammatory response.

 

Rajah 6 IHC Hasil GFAP, IBA -1, NLRP3, dan caspase -1 dalam tisu hippocampal setiap kumpulan tikus (200

 

Rajah 7 Hasil analisis kuantitatif IHC untuk GFAP, IBA -1, NLRP3, dan caspase -1 dalam tisu hippocampal tikus dari setiap kumpulan (x ± s, n=10)

 

2.9 Kesan CPHGS pada ungkapan TLR4 dan P-NFκB p65 dalam hippocampus tetikus

Isyarat TLR4/NF-κB adalah pengantara utama dalam mendorong pengaktifan inflammasom NLRP3 dan memulakan tindak balas keradangan hiliran. Ekspresi NLRP3 didorong oleh pengaktifan NF-κB dan pemindahan nuklear subunit p65, dan keseluruhan lata isyarat keradangan didorong oleh dimediasi oleh laluan isyarat TLR4 [16]. Untuk menganalisis perubahan dalam ekspresi protein hulu nlrp3 dalam tisu hippocampal tetikus, pewarnaan immunofluorescence berganda digunakan untuk mengesan ekspresi TLR4 dan P-NF-κB p65 dalam tisu hippocampal (lihat Rajah 8 dan 9). Berbanding dengan CON, tahap mod TLR4 meningkat dengan ketara sebanyak 111.17% (p<0.01), and the p-NF-κB p65 level was significantly increased by 184.51% (P<0.01).
Berbanding dengan MOD, tahap TLR4 CPHGS-H, CPHGS-M, CPHGS-L dan FLX dikurangkan sebanyak 15.24%, 27.12%, 39.40% dan 33.51% (p masing-masing (p masing-masing (p<0.01 or P<0.05), p-NF-κB p65 The levels were reduced by 19.46%, 33.61%, 48.82% and 41.54% respectively (P<0.01 or P<0.05). The above results, combined with pathological examination and inflammatory indicators, indicate that CPhGs can effectively inhibit the activation of the TLR4/NF-κB signaling pathway, thereby reducing the activation of the NLRP3 inflammasome and the resulting inflammatory response.

 

 

Rajah 8 Immunofluorescence Hasil Hasil TLR4 dan P-NF-κB p65 dalam tisu hippocampal setiap kumpulan tikus

 

Pendarfluor hijau mewakili hasil pewarnaan P-NF-κB; Pendarfluor merah mewakili hasil pewarnaan TLR4; Pendarfluor biru mewakili pewarnaan nuklear DAPI.

Rajah 9 Purata intensiti pendarfluor TLR4 dan P-NF-κB p65 dalam tisu hippocampal setiap kumpulan tikus (x ± s, n=10)

 

3 Perbincangan dan Kesimpulan

Kajian ini secara sistematik menilai kesan terapeutik dan mekanisme asas CPHG pada model tetikus kemurungan yang disebabkan oleh cums.
Hasil penyelidikan menunjukkan bahawa CPHGs dapat meningkatkan tingkah laku seperti kemurungan yang disebabkan oleh CUMS, dan kesan peningkatan ini berkait rapat dengan mengawal sistem neurotransmitter, menghalang tindak balas neuroinflamasi, dan mempengaruhi laluan yang berkaitan dengan inflammasom NLRP3. Di peringkat tingkah laku, CPHGs berkesan meningkatkan pelbagai petunjuk tingkah laku tikus model cums. CPHGs dengan ketara meningkatkan kadar keutamaan air gula, memendekkan masa immobility dalam ujian berenang dan ujian ekor paksa, dan mengurangkan tingkah laku kecemasan dalam eksperimen lapangan terbuka. Keputusan ini mengesahkan bahawa CPHGs mempunyai kesan antidepresan dan anxiolytic yang signifikan, dan kesannya adalah setanding dengan fluoxetine ubat kawalan positif. Dalam air neurobiokimia secara purata, CPHGs meningkatkan tahap 5- HT dan DA dalam serum tikus model. Ia menunjukkan bahawa CPHG boleh meningkatkan gejala depresi dengan melindungi sel -sel saraf dan mengawal sistem neurotransmitter.

 

Faktor keradangan memainkan peranan penting dalam kejadian dan perkembangan kemurungan, yang telah disahkan dalam model haiwan kemurungan dan kajian klinikal [17]. Kajian ini mendapati bahawa cums dengan ketara meningkatkan ekspresi pelbagai faktor keradangan dalam tisu hippocampal tetikus, termasuk TNF, IL -1, il -18, il -6, dan IFN-. Rawatan CPHGS dapat mengurangkan tahap faktor keradangan ini, dengan itu meningkatkan tingkah laku seperti kemurungan dalam tikus cums. Kajian mendapati bahawa tahap corak molekul yang berkaitan dengan patogen seperti iNOS dan NO dan corak molekul yang berkaitan dengan risiko seperti IL -1 dan IL -18 meningkat dalam hippocampus pesakit dengan kemurungan. Selepas molekul -molekul ini memasuki sitoplasma microglia, mereka dikesan oleh reseptor pengiktirafan corak. NLRP3 mengiktiraf dan merangsang tindak balas imun [18]. Inflammasom NLRP3 adalah kompleks protein utama yang mengawal tindak balas keradangan imun yang semula jadi dan termasuk LRP3, ASC, dan caspase protein effector -1. Apabila diaktifkan, NLRP3 merekrut ASC dan Pro-Caspase -1 untuk melengkapkan pemasangan inflammasome NLRP3 yang tidak aktif [19]. At the same time, PAMPs and DAMPs can also cause mitochondrial damage and lysosome rupture, leading to the release or exposure of mitochondrial contents, cathepsin B release from lysosomes, promoting the binding of NEK7 to the NLRP3 inflammasome and activating it, and inducing IL-1 and IL-18 matures and dilepaskan secara ekstraselular, dengan itu mendorong neuroinflammation [20]. CPHGs dapat mengurangkan tahap iNOS, Cox -2 dan PGE2, mengurangkan pengaktifan inflammasom NLRP3 dengan menghalang pengeluaran PAMP dan DAMP, dengan itu mengurangkan pematangan dan pelepasan faktor-faktor yang tidak diingini seperti IL -1 Tikus cums.

Kajian telah menunjukkan bahawa inflammasom NLRP3 terlibat dalam patogenesis kemurungan dan kebimbangan dan merupakan mediator utama yang menghubungkan tekanan kronik dan keadaan depresi. Pengaktifan inflammasom NLRP3 adalah proses yang kompleks yang memerlukan penerimaan isyarat memulakan, seperti pengaktifan isyarat TLR4/NF-κB. Diaktifkan NF-κB seterusnya mengimbangi tahap transkripsi mRNA NLRP3 dan pro-il -1, mengaktifkan inflammasomes, dan memulakan tindak balas keradangan hiliran [21]. Hasil kajian ini menunjukkan bahawa isyarat TLR4/NF-κB dan NLRP3 menunjukkan ekspresi tinggi yang konsisten selepas rangsangan cums, yang konsisten dengan penemuan sebelumnya dalam model tetikus kemurungan [22]. Rawatan CPHGS boleh membalikkan keadaan ekspresi yang tinggi ini, menunjukkan bahawa CPHGs boleh menjejaskan pengaktifan inflammasom NLRP3 dengan mengawal isyarat TLR4/NF-κB. Dengan menghalang laluan isyarat TLR4/NF-κB, CPHG menghalang isyarat permulaan pengaktifan inflamasi NLRP3, dengan itu mengurangkan pengeluaran dan pembebasan faktor keradangan hiliran. Kajian ini juga mengamati kesan pengawalseliaan CPHG pada sel glial. CPHGs ketara meningkatkan bilangan astrocytes positif GFAP sambil mengurangkan bilangan IBA -1- microglia positif. Temuan ini mungkin berkaitan dengan perencatan laluan isyarat TLR4/NF-κB. Kajian telah menunjukkan bahawa pengaktifan laluan isyarat TLR4/NF-κB boleh menggalakkan pembentukan astrocytes A1 neurotoksik [23], dan CPHGs dapat membantu mengekalkan astrocytes dengan menghalang laluan ini. Fungsi normal dan mengurangkan neuroinflammation dan kerosakan neuron.
Ringkasnya, kajian ini secara sistematik menjelaskan kesan CPHG dalam memperbaiki tingkah laku seperti kemurungan yang disebabkan oleh cums dan mekanisme asasnya. CPHGs mempamerkan potensi sebagai antidepresan dengan memodulasi sistem neurotransmitter, menghalang tindak balas neuroinflamasi, dan menjejaskan laluan yang berkaitan dengan inflammasom NLRP3.

 

Rujukan

1 Ren L, Shao YT, Qin SH, et al. Kajian mengenai pengenalan sasaran dan kesan saponin A pada gangguan kemurungan [J]. Nat Prod Res Dev (Penyelidikan dan Pembangunan Produk Semulajadi), 2024, 36: 44-51.
2 Laporan mengenai pemakanan dan penyakit kronik Status penduduk Cina (2020) [J]. Acta Nutr Sin (Jurnal Sains Pemakanan), 2020, 42, 521-521.
3 Qin TT, Hu JW, Ceng JS, et al. Kesan antidepresan minyak pati dari Schizonepeta tenuifolia briq. pada tikus model kemurungan yang disebabkan oleh lipopolysaccharide [J]. Nat Prod Res Dev (Penyelidikan dan Pembangunan Produk Semulajadi), 2023, 35: 1480-1485.
4 Yin Ys, Ju T, Zeng DY, et al. Kemurungan "meradang": Kajian semula interaksi antara kemurungan dan keradangan dan strategi anti-radang semasa untuk kemurungan [J] .Pharmacol Res, 2024,207: 107322. 5 Xiong TW, Zhang J, Shi JS. Kemajuan penyelidikan mengenai echanism kesan antidepresan perubatan tradisional Cina [J]. Trad Chin Med J (Buletin Perubatan Cina), 2024, 23: 65-69. 6 Fan L, Peng Y, Chen XN, et al. Analisis bersepadu komposisi hytochemical, farmakokinetik, dan farmakologi rangkaian untuk menyiasat perbezaan antara batang cistanche desiden dan c. tubulosa berdasarkan aktiviti onantidepresan [j].