Tindakan Promitotik Oenothera Biennis Pada Fibroblas Dermal Manusia Senescent Bahagian 2

3. Perbincangan

Dalam kajian ini, kami menyiasat kesan ekstrak sel Oenothera biennis hidrofilik (ObHEx) pada penuaan selular, kerana ia menunjukkan sifat anti-penuaan kulit apabila diuji dalam model in vitro dan ex vivo [18]. Kami menggunakan model senescent serupa NHDF tertakluk kepada SIPS untuk rawatan dengan H2O2 [21,22].

Glikosida cistanche juga boleh meningkatkan aktiviti SOD dalam tisu jantung dan hati, dan dengan ketara mengurangkan kandungan lipofuscin dan MDA dalam setiap tisu, dengan berkesan menghilangkan pelbagai radikal oksigen reaktif (OH-, H₂O₂, dll.) dan melindungi daripada kerosakan DNA yang disebabkan oleh OH-radikal. Glikosida phenylethanoid cistanche mempunyai keupayaan penghapusan radikal bebas yang teguh, keupayaan pengurangan yang lebih tinggi daripada vitamin C, meningkatkan aktiviti SOD dalam penggantungan sperma, mengurangkan kandungan MDA, dan mempunyai kesan perlindungan tertentu pada fungsi membran sperma. Polisakarida cistanche boleh meningkatkan aktiviti SOD dan GSH-Px dalam eritrosit dan tisu paru-paru tikus senescent eksperimen yang disebabkan oleh D-galaktosa, serta mengurangkan kandungan MDA dan kolagen dalam paru-paru dan plasma, dan meningkatkan kandungan elastin, mempunyai kesan penghapusan yang baik pada DPPH, memanjangkan masa hipoksia pada tikus senescent, meningkatkan aktiviti SOD dalam serum, dan melambatkan degenerasi fisiologi paru-paru dalam tikus senescent secara eksperimen Dengan degenerasi morfologi selular, eksperimen telah menunjukkan bahawa Cistanche mempunyai keupayaan antioksidan yang baik. dan berpotensi menjadi ubat untuk mencegah dan merawat penyakit penuaan kulit. Pada masa yang sama, echinacoside dalam Cistanche mempunyai keupayaan yang ketara untuk menghilangkan radikal bebas DPPH dan keupayaan untuk mengais spesies oksigen reaktif dan mencegah radikal bebas-

degradasi kolagen yang disebabkan, dan juga mempunyai kesan pembaikan yang baik pada kerosakan anion radikal bebas timin.

Klik pada Di Mana Saya Boleh Beli Cistanche

【Untuk maklumat lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Untuk memahami mekanisme tindakan ObHEx pada fibroblas kulit manusia senescent, dengan pendedahan laluan biologi yang diubah oleh ekstrak, kami melakukan pendekatan proteomik ultra-dalam spektrometri jisim bebas data. Ia membolehkan kami mendapatkan analisis proteom paling lengkap bagi sel senescent setakat ini dan, buat pertama kalinya, kuantifikasi serentak pelbagai penanda penuaan.

Pertama sekali, untuk menilai induksi senescence oleh rawatan H2O2 pada sel NHFD, kami mengukur penanda senescence yang diketahui. Data proteomik kami mengesahkan induksi penuaan oleh tekanan oksidatif: sesungguhnya, kami melihat tahap perubahan penanda penuaan yang telah diketahui berkaitan dengan peningkatan kandungan lisosom (GLB1 dan FUCA1), kerosakan DNA (ATR, ATM, MACROH2A1, dan MACRO2A2) dan kitaran sel fasa G2 penangkapan (CDK1NA dan MKI67). Selain itu, analisis pengayaan laluan bagi protein yang paling terkawal dalam H2O2 yang dirawat berbanding sel kawalan menunjuk kepada mitosis, mencerminkan penangkapan percambahan senescent.

Membandingkan proteom sel SIPS NHDF yang dirawat dengan ObHEx berbanding yang tidak dirawat, kami mendapati bahawa rawatan dengan ekstrak itu dapat memulihkan sebahagian tahap protein dan kompleks yang memainkan peranan penting dalam beberapa peringkat mitosis. Inkubasi ObHEx meningkatkan tahap CDK1, protein mitosis utama yang mencetuskan kemasukan ke dalam mitosis dengan membentuk kompleks dengan cyclin B [34]. Selain itu, kesemua lima subunit kompleks kondensin I telah dikawal selia. Kompleks ini terdiri daripada dua subunit penyelenggaraan struktur kromosom (SMC), SMC2 dan SMC4, dan tiga subunit bukan SMC, NCAPD2, NCAPH, dan NCAPG. Dalam prometaphase, fungsi kompleks kondensin I adalah untuk menggalakkan pemeluwapan jenis kromosom dengan pengenalan supergegelung positif ke dalam DNA dengan cara yang bergantung kepada ATP [35]. Di samping itu, ekstrak itu mengawal selia KNTC1, NUF2, dan TRIP13, yang merupakan tiga protein yang dikaitkan dengan kinetochore, kompleks besar yang, semasa prometaphase, menghubungkan kromatin centromeric kepada mikrotubul dari kutub gelendong bertentangan untuk memihak kepada pengasingan kromatid kakak [ 36,37]. Pemulihan separa tahap protein MCM juga telah dikesan. Protein ini adalah teras kompleks helikase replikasi yang melepaskan DNA untai dua untuk menyediakan untaian tunggal sebagai templat untuk polimerase DNA. Kompleks MCM ditukar menjadi helikase aktif semasa fasa S tetapi sudah dimuatkan ke kromatin semasa telofasa [38,39]. Ekstrak juga meningkatkan tahap IQGAP3, PBK dan DHFR. Yang pertama, IQGAP3, adalah pengawal selia penting perkembangan mitosis kerana ia menggalakkan aktiviti cdk7, penting untuk pengaktifan Cdc2 [40,41]; PBK ialah kinase yang aktif hanya dalam mitosis; apabila terfosforilasi, ia berinteraksi dengan p53, menstabilkannya dan melemahkan laluan kerosakan DNA [42]; dan DHFR ialah enzim utama dalam biosintesis DNA yang tahapnya dilemahkan dengan ketara dalam fibroblas manusia senescent [43].

Ujian bio-ortogon juga menunjukkan keupayaan ObHEx untuk mengembalikan sebahagian tanda penuaan, iaitu aktiviti lisosom dan penangkapan kitaran sel. Sesungguhnya, untuk mengesahkan sama ada pemulihan ekspresi protein mitosis oleh ObHEx diterjemahkan kepada pengaktifan semula kitaran sel, kami melakukan eksperimen FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting) pada sel SIPS NHDF yang dirawat atau tidak dengan ekstrak. Mereka menunjukkan bahawa ObHEx dapat mengurangkan pecahan sel yang disekat dalam fasa G2 dan menggalakkan kemasukan semula mereka ke dalam kitaran sel sel senescent.

4. Bahan dan Kaedah

4.1. Kultur sel

Fibroblas Kulit Manusia Normal (NHDF; Promocell) telah dikultur dalam Medium Helang Modified Dulbecco (DMEM; Gibco) ditambah dengan 10 peratus serum lembu janin (FBS; Gibco) dan 500 U/mL penicillin-streptomycin (Gibco) dalam 95 peratus udara , 5 peratus CO2 dan suasana lembap pada 37 ◦C.

4.2. Induksi Penuaan Pramatang Akibat Tekanan (SIPS)

Sebanyak 10 1200 000 sel NHDF telah disemai ke dalam setiap hidangan kultur sel 60 mm, sehari sebelum pengeramannya dengan 100 µM H2O2 pada suhu 37 ◦C selama 2 jam [21,22]. Selepas itu, H2O2 telah dibasuh dengan Phosphate Buffered Saline (PBS; Gibco) untuk menamatkan rawatan dan sel-sel tersebut ditanam dalam medium biasa selama 4 hari. Untuk sel tidak tua, digunakan sebagai kawalan, 2240 000 sel NHDF telah disemai ke dalam setiap hidangan kultur sel 60 mm. Eksperimen dilakukan dalam 5 replika biologi.

4.3. Penyediaan Ekstrak Hidrofilik Oenothera Biennis (ObHEx).

Ekstrak telah disediakan di makmal Arterra Bioscience SpA [18]. Kultur sel diperoleh daripada daun tumbuhan Oenothera biennis (disediakan oleh GEEL Floricultura ss) dengan mendorong pembiakan sel meristematik pada plat agar pepejal sehingga kalus yang diperolehi. Sel-sel telah dipindahkan ke medium pertumbuhan cecair (Gamborg B5, ditambah dengan 2.4 dichloro phenoxy acetic acid (1 mg/L), adenine (1 mg/L), dan kinetin (0.01 mg/L )) dan ditanam sebagai budaya ampaian di bawah goncangan orbital. Sebaik sahaja kultur kira-kira 150 g/L diperolehi, sel-sel telah dikumpulkan dan dilisiskan dalam PBS pada pH 7.4 untuk menyediakan ekstrak larut air. Selepas lyophilization, serbuk yang diperolehi telah dilarutkan dalam air atau media kultur sel pada kepekatan yang sesuai untuk ujian.

4.4. Rawatan Ekstrak Hidrofilik Oenothera Biennis (ObHEx).

Sel NHDF telah diinkubasi selama 24 jam dengan 0.01 peratus (p/v) ObHEx dalam medium yang lengkap. Selepas itu, sel-sel telah dibasuh tiga kali dengan PBS dan dirawat selama 24 jam tambahan dengan 0.01 peratus (p/v) ObHEx dalam medium bebas serum. Mereka kemudiannya, ditanggalkan dengan trypsinization, disentrifugasi pada 500 g selama 10 minit pada 4 ◦C, dan dibasuh dua kali dengan PBS. Sel kawalan yang tidak dirawat menjalani inkubasi yang sama tanpa ObHEx.

4.5. Persediaan Sampel untuk Analisis Proteomik

Pelet telah digantung semula dalam 60µL penimbal Radioimmunoprecipitation assay (RIPA) dan disalurkan melalui sonication. Kepekatan protein lisat selular dikira menggunakan Kit Ujian Protein DC™ (Biorad; #5000112). Lajur putaran mikro S-TrapTM (Protifi, Huntington, CA, USA) pencernaan dilakukan pada 50 µg lisat sel mengikut arahan pengilang. Secara ringkas, sampel telah dikurangkan dengan 20 mM tris(2- carboxyethyl)phosphine (TCEP) dan dialkilasi dengan 50 mM thioacetamide (CAA) selama 15 minit pada suhu bilik. Asid fosforik akueus kemudiannya ditambah kepada kepekatan akhir sebanyak 2.5 peratus diikuti dengan penambahan penimbal pengikat S-Trap (90 peratus metanol akueus, 100 mM TEAB, pH 7.1). Campuran kemudiannya dimuatkan ke lajur S-Trap. Lima langkah pencucian tambahan telah dilakukan untuk penghapusan SDS yang menyeluruh. Kemudian, lisat selular dicerna dengan 2.5 µg trypsin (Promega) pada suhu 47 ◦C selama 1 jam. Selepas elusi, peptida telah dikeringkan dengan vakum, digantung semula dalam 2 peratus ACN, 0.1 peratus FA dan dikira oleh Nanodrop.

4.6. nanoLC-MS/MS Protein Pengenalpastian dan Kuantifikasi

Sebanyak 400 ng setiap sampel telah disuntik pada plat nano (Bruker Daltonics, Bremen, Jerman) sistem kromatografi cecair (HPLC) berprestasi tinggi yang digabungkan dengan timsTOF Pro (Bruker Daltonics, Bremen , Jerman) spektrometer jisim. Pengasingan HPLC (Pelarut A: {{30}}.1 peratus asid format dalam air; Pelarut B: 0.1 peratus asid formik dalam asetonitril) telah dijalankan pada 250 L/min menggunakan lajur pemancar yang dibungkus (C18, 25 cm × 75 µm 1.6 µm) (Ion Optik, Fitzroy, Australia) menggunakan elusi kecerunan (2 hingga 13 peratus pelarut B selama 41 minit; 13 hingga 20 peratus selama 23 minit; 20 peratus hingga 30 peratus selama 5 minit; 30 peratus hingga 85 peratus selama 5 minit, dan, akhirnya, 85 peratus selama 5 minit untuk mencuci lajur). Data spektrometri jisim diperoleh menggunakan kaedah pemerolehan pemecahan siri pengumpulan selari (diaPASEF) analisis bebas data. Tetapan lampin ialah: julat jisim dari 400 hingga 1200 Da, julat mobiliti dari 0.60 hingga 1.43 1/k0, bilangan tetingkap mobiliti 1, anggaran masa kitaran 1.79 s, langkah jisim setiap kitaran 32.

4.7. Pemprosesan Data MS dan Analisis Bioinformatik

Analisis data dilakukan menggunakan perisian DIA-NN (versi 1.8) [44]. Carian terhadap pangkalan data UniProtKB/Swiss-Prot Homo sapiens manusia (keluaran Februari 2021, 20,408 entri) telah dilakukan menggunakan aliran kerja tanpa perpustakaan. Untuk tujuan ini, pilihan "FASTA digest untuk carian/penjanaan perpustakaan percuma perpustakaan" dan "Spektra pembelajaran mendalam, RT dan ramalan IM" telah disemak untuk penjanaan ion prekursor. Maksimum 2 trypsin terlepas belahan dibenarkan dan pengubahsuaian pembolehubah maksimum ditetapkan kepada 5. Carbamidometilasi (Cys) ditetapkan sebagai pengubahsuaian tetap, manakala pengasingan metionin terminal-N protein, pengoksidaan metionin dan asetilasi N-terminal ditetapkan sebagai pembolehubah pengubahsuaian. Julat panjang peptida ditetapkan kepada 7–30 asid amino, julat cas prekursor 2–4, julat m/z prekursor 300–1800, dan julat m/z serpihan 200–1800. Untuk mencari jisim induk dan ion serpihan, ketepatan telah disimpulkan secara automatik oleh DIA-NN dan ditetapkan sekitar 13 ppm untuk setiap analisis. Kadar penemuan palsu (FDR) pada tahap protein dan peptida ditetapkan kepada 1 peratus . Perlawanan antara larian dibenarkan. Untuk strategi kuantifikasi, Robust LC (kepersisan tinggi) digunakan seperti yang dinasihatkan dalam dokumentasi perisian, manakala tetapan lalai disimpan untuk parameter algoritma yang lain.

Analisis statistik dan bioinformatik telah dilakukan dengan perisian Perseus (versi 1.6.15) tersedia secara percuma di tapak web (diakses pada 22 Jun 2021) [45] dan R/R Studio dan RStudio versi 20 21.09.1 30 (diakses pada 12 November 2021). Semua analisis statistik R dilakukan menggunakan pakej statistik R. Output matriks laporan pg oleh DIA-NN telah digunakan dan keamatan telah diubah log2 untuk analisis statistik. Untuk perbandingan statistik, kami menetapkan empat kumpulan, setiap satu mengandungi 5 replika biologi. Kami kemudian menapis data untuk menyimpan hanya protein dengan sekurang-kurangnya 3 nilai sah dalam sekurang-kurangnya satu kumpulan. Seterusnya, data telah dikira untuk mengisi titik data yang hilang dengan mencipta taburan Gaussian nombor rawak dengan sisihan piawai 33 peratus berbanding sisihan piawai bagi nilai yang diukur dan sisihan piawai 1.8 anjakan ke bawah bagi min untuk mensimulasikan taburan rendah. nilai isyarat. Ujian-t pelajar telah dilakukan antara SEN dan CTRL FDR < 0.05, S0=0.1 untuk mengesahkan kehadiran penanda khusus untuk penuaan. Kemudian, untuk menyiasat sama ada perbezaan dalam saiz kesan antara ketiadaan atau kehadiran rawatan adalah sama untuk sel di mana penuaan telah diinduksi atau tidak, interaksi antara kedua-dua faktor (iaitu, Induksi dan Rawatan) telah disiasat menggunakan ANOVA Dua hala. dalam R. Kemudian, nilai-p yang diperoleh untuk interaksi kedua-dua faktor telah diselaraskan untuk ujian berbilang menggunakan kaedah Benjamini-Hochberg [46] untuk mengawal Kadar Penemuan Palsu (FDR). Akhir sekali, analisis post hoc Tukey HSD dilakukan pada protein yang menunjukkan nilai q <0.05. Data proteomik spektrometri jisim telah didepositkan ke Konsortium ProteomeXchange melalui repositori rakan kongsi PRIDE [47] dengan pengecam set data PXD034222.

4.8. Pewarnaan ß-Galactosidase Berkaitan Senescence

Aktiviti ß-galactosidase (SA-ß-gal) berkaitan senescence telah dinilai menggunakan kit pewarnaan Teknologi Isyarat Sel (#9860). Sebanyak 1250 000 sel/telaga NHDF telah disemai ke dalam plat telaga 6-sehari sebelum SIPS; sedangkan, sebagai kawalan, 250 000 sel/telaga. Selepas 4 hari dalam medium biasa, sel telah diinkubasi atau tidak dengan 0.01 peratus (p/v) ObHEx selama 48 jam. Selepas itu, mereka dibasuh dengan PBS dan dirawat dengan larutan penetapan selama 15 minit. Selepas dua kali cucian dengan PBS, sel tersebut diinkubasi dengan larutan pewarna ß-gal (pH akhir 6.0) yang mengandungi 5-bromo-4-chloro-3-indolyl- -D-galacto -pyranoside (X-Gal) pada 37 ◦C dalam inkubator kering selama 20 jam. Sel positif berwarna biru. Warna ini disebabkan oleh pembelahan X-Gal dalam galaktosa dan 5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl (X) oleh SA-ß-gal. Indoksil dioksidakan kepada 5,50 -dibromo-4,40 -dichloro-indigo yang membentuk mendakan biru pekat. Peratusan sel positif dalam jumlah sel telah dinilai dengan mengira 100-150 sel dalam 5 imej yang dipilih secara rawak yang ditangkap oleh mikroskop, untuk setiap keadaan. Sel dikira menggunakan perisian ImageJ. Eksperimen dilakukan dalam tiga kali ganda.

4.9. Analisis Isih Sel Diaktifkan Pendarfluor

Sebanyak {{0}} sel/telaga NHDF telah disemai ke dalam 6-plat perigi sehari sebelum SIPS; sedangkan, sebagai kawalan, 50 000 sel/telaga. Selepas 4 hari dalam medium biasa, kawalan dan sel senescent telah dirawat atau tidak dengan 0.01 peratus (p/v) ObHEx selama 72 jam. Kemudian, sel-sel telah diinkubasi dengan kehadiran 5 µg/mL Hoechst 33342 selama 30 minit pada suhu 37 ◦C. Selepas trypsinization dan sentrifugasi pada 500 g selama 2 minit, mereka digantung semula dalam 200 μL PBS. Akhirnya, pendarfluor sel diukur oleh Penganalisis Sel BD LSRFortessa. Data dianalisis menggunakan perisian FlowJo v10.8.1. Eksperimen dilakukan dalam tiga kali ganda.

5. Kesimpulan

Pemprofilan proteom global berkaitan penuaan mendalam yang diperoleh di sini menyediakan beratus-ratus protein yang dinyahkawalselia oleh SIPS yang boleh dieksploitasi oleh komuniti saintifik untuk lebih memahami penuaan dan menilai kesan modulator berpotensi baharu. Selain itu, kerja kami membuktikan mekanisme pro-mitotik tindakan ObHEx pada fibroblas dermal manusia senescent: melalui peningkatan dalam ekspresi protein mitosis, ia menggalakkan pemulihan percambahan sel senescent. Oleh itu, berdasarkan keputusan ini, kami mencadangkan ObHEx sebagai adjuvant yang kuat terhadap penuaan yang berkaitan dengan penuaan kulit.

Sumbangan Pengarang:Pengkonsepan, SC, MCM dan ICG; metodologi, SC, KR, IM, CC (Cerina Chhuon) dan ICG; perisian, KR; penyiasatan, SC, IM, CC (Cerina Chhuon), KT, SF, ADL, IP dan CC (Corinne Cordier); sumber, MCM dan ICG; penulisan—penyediaan draf asal, SC dan ICG; penulisan—semakan dan penyuntingan, SC, MCM, dan ICG Semua pengarang telah membaca dan bersetuju menerima versi manuskrip yang diterbitkan.

Penyata Ketersediaan Data:Data proteomik spektrometri jisim telah didepositkan ke Konsortium ProteomeXchange melalui repositori rakan kongsi PRIDE [47] dengan pengecam set data PXD034222 (Butiran akaun penyemak: Nama pengguna: pengulas_pxd034222@ebi.ac.uk; Kata laluan: fK9Pjv90) .

Ucapan terima kasih: Kajian ini disokong oleh Programma Operativo Complementare Ricerca e Innovazione 2014–2020, Asse I "Capitale Umano", Azione I.1 "Dottorati Innovativi con caratterizzazione Industriale". Kami berterima kasih kepada ahli platform Proteomics yang lain, Necker Vincent Jung dan Joanna Lipecka atas sokongan saintifik yang tidak ternilai dan cadangan yang bermanfaat.

Rujukan

1. Di Micco, R.; Krizhanovsky, V.; Baker, D.; d'Adda di Fagagna, F. Senescence Selular dalam Penuaan: Daripada Mekanisme kepada Peluang Terapeutik. Nat. Rev. Mol. Biol Sel. 2021, 22, 75–95. [CrossRef] [PubMed]

2. González-Gualda, E.; Baker, AG; Fruk, L.; Muñoz-Espín, D. Panduan untuk Menilai Senescence Selular dalam Vitro dan dalam Vivo. FEBS J. 2021, 288, 56–80. [CrossRef] [PubMed]

3. Sikora, E.; Bielak- ˙Zmijewska, A.; Mosieniak, G. Apa Itu dan Apa Bukan Sel Senescence. Postepy Biochem. 2018, 64, 110–118. [CrossRef] [PubMed]

4. Choi, E.-J.; Kil, IS; Cho, E.-G. Vesikel Ekstraselular Terhasil daripada Fibroblas Senescent Melemahkan Kesan Dermal pada Pembezaan Keratinosit. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1022. [CrossRef] [PubMed]

5. Krtolica, A.; Parrinello, S.; Lockett, S.; Desprez, PY; Campisi, J. Senescent Fibroblasts Menggalakkan Pertumbuhan Sel Epitelium dan Tumorigenesis: Pautan antara Kanser dan Penuaan. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001, 98, 12072–12077. [CrossRef]

6. Wlaschek, M.; Maity, P.; Makrantonaki, E.; Scharffetter-Kochanek, K. Tisu Penghubung dan Penuaan Fibroblast dalam Penuaan Kulit. J. Melabur. Dermatol. 2021, 141, 985–992. [CrossRef]

7. Paez-Ribes, M.; González-Gualda, E.; Doherty, GJ; Muñoz-Espín, D. Menyasarkan Sel Senescent dalam Perubatan Translasi. EMBO Mol. Med. 2019, 11, e10234. [CrossRef]

8. Soto-Gamez, A.; Demaria, M. Intervensi Terapeutik untuk Penuaan: Kes Senescence Selular. Discov dadah. Hari ini 2017, 22, 786–795. [CrossRef]

9. Latorre, E.; Birar, VC; Sheerin, AN; Jeynes, JCC; Hooper, A.; Dawe, HR; Melzer, D.; Cox, LS; Faragher, RGA; Ostler, EL; et al. Modulasi Molekul Kecil bagi Ungkapan Faktor Penyambungan Dikaitkan dengan Penyelamatan daripada Senescence Selular. Biol Sel BMC. 2017, 18, 31. [CrossRef]

10. Munir, R.; Semmar, N.; Farman, M.; Ahmad, NS Kajian Terkini mengenai Aktiviti Farmakologi dan Kandungan Fitokimia Primrose Petang (Genus Oenothera). Pac Asia. J. Trop. Berbiomed. 2017, 7, 1046–1054. [CrossRef]

11. Timoszuk, M.; Bielawska, K.; Skrzydlewska, E. Evening Primrose (Oenothera biennis) Aktiviti Biologi Bergantung kepada Komposisi Kimia. Antioksidan 2018, 7, 108. [CrossRef]

12. Lee, SY; Kim, CH; Hwang, BS; Choi, K.-M.; Yang, I.-J.; Kim, G.-Y.; Choi, YH; Park, C.; Jeong, J.-W. Kesan Perlindungan Oenothera Biennis terhadap Tekanan Oksidatif Akibat Hidrogen Peroksida dan Kematian Sel dalam Keratinosit Kulit. Kehidupan 2020, 10, 255. [CrossRef]

13. Granica, S.; Czerwi ´nska, SAYA; Piwowarski, JP; Ziaja, M.; Kiss, Komposisi Kimia AK, Aktiviti Antioksidatif dan Anti-Radang Ekstrak Disediakan daripada Bahagian Udara Oenothera Biennis L. dan Oenothera Paradoxa Hudziok Diperolehi selepas Penanaman Benih. J. Agric. Kimia Makanan. 2013, 61, 801–810. [CrossRef]

14. Fecker, R.; Buda, V.; Alexa, E.; Avram, S.; Pavel, IZ; Muntean, D.; Cocan, I.; Watz, C.; Minda, D.; Dehelean, CA; et al. Pemeriksaan Fitokimia dan Biologi Ekstrak Hidroalkohol Oenothera Biennis L. Biomolekul 2020, 10, 818. [CrossRef]

15. Schäfer, L.; Kragballe, K. Suplemen dengan Minyak Evening Primrose dalam Dermatitis Atopik: Kesan ke atas Asid Lemak dalam Neutrofil dan Epidermis. Lipid 1991, 26, 557–560. [CrossRef]

16. Barbulova, A.; Apone, F.; Colucci, G. Kultur Sel Tumbuhan sebagai Sumber Bahan Aktif Kosmetik. Kosmetik 2014, 1, 94–104. [CrossRef]

17. Caesar, LK; Cech, NB Synergy dan Antagonisme dalam Ekstrak Produk Asli: Apabila 1 tambah 1 Tidak Sama 2. Nat. Prod. Rep. 2019, 36, 869–888. [CrossRef]

18. Ceccacci, S.; De Lucia, A.; Tito, A.; Tortora, A.; Falanga, D.; Arciello, S.; Ausanio, G.; Di Cicco, C.; Monti, MC; Apone, F. Ekstrak Kultur Sel Oenothera Biennis Dikurniakan Aktiviti Anti-Penuaan Kulit Meningkatkan Sifat Mekanikal Sel. Metabolit 2021, 11, 527. [CrossRef]

19. Farwick, M.; Köhler, T.; Schild, J.; Mentel, M.; Maczkiewitz, U.; Pagani, V.; Bonfigli, A.; Rigano, L.; Bureik, D.; Gauglitz, GG Pentacyclic Triterpenes daripada Terminalia Arjuna Menunjukkan Pelbagai Kebaikan pada Kulit Tua dan Kering. Farmakol Kulit. Fisiol. 2014, 27, 71–81. [CrossRef]

20. Bonte, F.; Dumas, M.; Chaudagne, C.; Meybeck, A. Pengaruh Asid Asiatik, Asid Madecassic, dan Asiaticoside terhadap Sintesis Kolagen I Manusia. Planta Med. 1994, 60, 133–135. [CrossRef]

21. Chowdhary, S. Kesan Tekanan Oksidatif ke atas Mendorong Penuaan dalam Fibroblas Manusia. J. Carol Selatan. Acad. Sci. 2018, 16, 2.

22. Wang, Z.; Wei, D.; Xiao, H. Kaedah Induksi Senescence Selular Menggunakan Tekanan Oksidatif. Kaedah Mol. biol. 2013, 1048, 135–144. [PubMed]

23. Hildebrand, DG; Lehle, S.; Borst, A.; Haferkamp, ​​S.; Essmann, F.; Schulze-Osthoff, K. -Fucosidase sebagai Biomarker Mudah Novel untuk Senescence Selular. Kitaran Sel 2013, 12, 1922–1927. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, OLEH; Han, JA; Saya, JS; Morrone, A.; Johan, K.; Goodwin, EC; Kleijer, WJ; DiMaio, D.; Hwang, ES Senescence-Associated Beta-Galactosidase ialah Lysosomal Beta-Galactosidase. Sel Penuaan 2006, 5, 187–195. [CrossRef] [PubMed]

25. Gorgoulis, V.; Adams, PD; Alimonti, A.; Bennett, DC; Bischof, O.; Bishop, C.; Campisi, J.; Collado, M.; Evangelou, K.; Ferbeyre, G.; et al. Senescence Selular: Menentukan Laluan Ke Hadapan. Sel 2019, 179, 813–827. [CrossRef]

26. Matsuoka, S.; Ballif, BA; Smogorzewska, A.; McDonald, ER; Hurov, KE; Luo, J.; Bakalarski, CE; Zhao, Z.; Solimini, N.; Lerenthal, Y.; et al. Analisis Substrat ATM dan ATR Mendedahkan Rangkaian Protein Luas Responsif kepada Kerosakan DNA. Sains 2007, 316, 1160–1166. [CrossRef]

27. Zhang, R.; Chen, W.; Adams, PD Pembedahan Molekul Pembentukan Fokus Heterochromatin Berkaitan Senescence. Mol. Biol Sel. 2007, 27, 2343–2358. [CrossRef]

28. LaBaer, ​​J.; Garrett, MD; Stevenson, LF; Slingerland, JM; Sandhu, C.; Chou, HS; Fattaey, A.; Harlow, E. Aktiviti Fungsian Baharu untuk Keluarga P21 Perencat CDK. Genes Dev. 1997, 11, 847–862. [CrossRef]

29. Scholzen, T.; Gerdes, J. The Ki-67 Protein: Daripada Yang Diketahui dan Yang Tidak Diketahui. J. Fisiol Sel. 2000, 182, 311–322. [CrossRef]

30. Passos, JF; von Zglinicki, T. Kaedah Pengisihan Sel Sel Muda dan Sel Tua. Kaedah Mol. biol. 2007, 371, 33–44.

31. Dai, Y.; Tang, H.; Pang, S. Peranan Penting Fosfolipid dalam Penuaan dan Peraturan Jangka Hayat. Depan. Fisiol. 2021, 12, 1998. [CrossRef]

32. Dashty, M. Laluan Isyarat Landak Dikaitkan dengan Penyakit Berkaitan Umur. J. Metab Diabetes. 2014, 5, 2. [CrossRef]

33. Wang, D.; Lu, P.; Liu, Y.; Chen, L.; Zhang, R.; Sui, W.; Dumitru, AG; Chen, X.; Wen, F.; Ouyang, H.-W.; et al. Pengasingan Sel Senescent Pramatang Hidup Menggunakan Teknologi FUCCI. Sci. Rep. 2016, 6, 30705. [CrossRef]

34. Qian, J.; Beullens, M.; Huang, J.; De Munter, S.; Lesage, B.; Bollen, M. Cdk1 Memesan Peristiwa Mitosis melalui Penyelarasan Suis Fosfatase Berkaitan Kromosom. Nat. Commun. 2015, 6, 10215. [CrossRef]

35. Kong, M.; Cutts, EE; Pan, D.; Beuron, F.; Kaliyappan, T.; Xue, C.; Morris, EP; Musacchio, A.; Vannini, A.; Greene, EC Human Condensin I dan II Memacu Pemadatan Bergantung ATP yang meluas bagi DNA Terikat Nukleosom. Mol. Sel 2020, 79, 99–114.e9. [CrossRef]

36. Kops, GJPL; Gassmann, R. Memahkotai Kinetochore: Korona Berserabut dalam Pengasingan Kromosom. Trends Cell Biol. 2020, 30, 653–667. [CrossRef]

37. Ma, HT; Poon, RYC TRIP13 Berfungsi dalam Penubuhan Pusat Pemeriksaan Pemasangan Spindle dengan Menambahkan O-MAD2. Sel Rep. 2018, 22, 1439–1450. [CrossRef]

38. Kuipers, MA; Stasevich, TJ; Sasaki, T.; Wilson, KA; Hazelwood, KL; McNally, JG; Davidson, MW; Gilbert, DM Pemuatan Mcm Protein yang Sangat Stabil pada Kromatin dalam Sel Hidup Memerlukan Replikasi untuk Memunggah. J. Biol Sel. 2011, 192, 29–41. [CrossRef]

39. Meng, Q.; Gao, J.; Zhu, H.; Beliau, H.; Lu, Z.; Hong, M.; Zhou, H. Kajian Proteomik Sel Fibroblas Kulit Manusia yang Dilalui Bersiri Mendedahkan Regulasi Turun Protein Kompleks Kondensin Kromosom yang Terlibat dalam Penuaan Replikatif. Biokim. Biophys. Res. Commun. 2018, 505, 1112–1120. [CrossRef]

40. Larochelle, S.; Pandur, J.; Fisher, RP; Salz, HK; Suter, B. Cdk7 Penting untuk Mitosis dan untuk Aktiviti Kinase Pengaktifan Cdk Vivo. Genes Dev. 1998, 12, 370–381. [CrossRef]

41. Leone, M.; Cazorla-Vázquez, S.; Ferrazzi, F.; Wiederstein, JL; Gründl, M.; Weinstock, G.; Vergarajauregui, S.; Eckstein, M.; Krüger, M.; Gaubatz, S.; et al. IQGAP3, Sasaran YAP, Diperlukan untuk Kemajuan Kitaran Sel yang Betul dan Kestabilan Genom. Mol. Kanser Re. 2021, 19, 1712–1726. [CrossRef] [PubMed]

42. Nandi, AK; Ford, T.; Fleksher, D.; Neuman, B.; Rapoport, AP Pengecilan Pusat Pemeriksaan Kerosakan DNA oleh PBK, Novel Mitotic Kinase, Melibatkan Interaksi Protein-Protein dengan Penekan Tumor P53. Biokim. Biophys. Res. Commun. 2007, 358, 181–188. [CrossRef] [PubMed]

43. Baik, L.; Dimri, GP; Campisi, J.; Chen, Peraturan KY Ekspresi Gen Dihydrofolate Reductase dan Komponen E2F dalam Fibroblas Diploid Manusia semasa Pertumbuhan dan Penuaan. J. Fisiol Sel. 1996, 168, 580–588. [CrossRef]

44. Demichev, V.; Messenger, CB; Vernardis, SI; Lilley, KS; Ralser, M. DIA-NN: Rangkaian Neural dan Pembetulan Gangguan Mendayakan Liputan Proteome Mendalam dalam Throughput Tinggi. Nat. Kaedah 2020, 17, 41–44. [CrossRef]

45. Tyanova, S.; Temu, T.; Sinitcyn, P.; Carlson, A.; Hein, SAYA; Geiger, T.; Mann, M.; Cox, J. Platform Pengiraan Perseus untuk Analisis Komprehensif Data Omics (Prote). Nat. Kaedah 2016, 13, 731–740. [CrossRef]

46. ​​Benjamini, Y.; Hochberg, Y. Mengawal Kadar Penemuan Palsu: Pendekatan Praktikal dan Berkuasa untuk Ujian Berbilang. JR Stat. Soc. Ser. B (Kaedah.) 1995, 57, 289–300. [CrossRef]

47. Perez-Riverol, Y.; Bai, J.; Bandla, C.; García-Seisdedos, D.; Hewapathirana, S.; Kamatchinathan, S.; Kundu, DJ; Prakash, A.; Frericks-Zipper, A.; Eisenacher, M.; et al. Sumber Pangkalan Data PRIDE pada 2022: Hab untuk Bukti Proteomik Berasaskan Spektrometri Jisim. Asid Nukleik Res. 2021, 50, D543–D552. [CrossRef]

【Untuk maklumat lanjut:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】