Pengasingan Persediaan Dan Pemurnian Empat Sebatian Daripada Cistanches Deserticola YC Ma Dengan Kromatografi Balas Arus Kelajuan Tinggi

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Abstrak:

Mengikuti langkah pengayaan juzuk pada lajur gel silika, empatglikosida fenilethanoidtelah berjaya diasingkan daripadaCistanches deserticoladan disucikan oleh kromatografi arus balas berkelajuan tinggi (HSCCC) persediaan dengan sistem pelarut dua fasa yang terdiri daripada etil asetat-n-butanol-etanol-air (40:6:6:50, v/v /v/v). Sejumlah 30.9 mg acteoside, 13.0 mg isoacteoside, 12.5 mg syringalide A 3'- -L-rhamnopyranoside dan 7.2 mg 2'-acetylacteoside dengan ketulenan lebih tinggi daripada 95 peratus , seperti yang ditentukan oleh HPLC-ELSD, telah diperolehi dalam pengasingan satu langkah daripada 297 mgEkstrak cistanche deserticola, masing-masing. Struktur mereka dikenal pasti oleh HR-MS, 1H-NMR, dan 13C-NMR.

Kata kunci: kromatografi lawan arus berkelajuan tinggi;Cistanches deserticola YC Ma;glikosida fenilethanoid; acteoside; isoacteoside; syringalide A 3'- -L-rhamnopyranoside; 2'-asetillakteosida.

pengenalan

Cistanches deserticolaYC Ma, sejenis spesiesCistanchesyang tergolong dalam keluarga Orobanchaceae, adalah Perubatan Tradisional Cina yang terkenal untuk rawatan kekurangan buah pinggang, kemandulan wanita, keputihan morbid, neurapraxia, dan sembelit nyanyuk [1]. Ia adalah tumbuhan parasit yang diedarkan secara meluas di barat laut China. Setakat ini, beberapa sebatian, termasuk phenylethanoid glycosides (PhGs), iridoid, dan lignan telah diasingkan daripada spesies ini [2]. Sesetengah PhG telah dilaporkan mempunyai aktiviti antioksidatif, hepatoprotektif, dan neuroprotektif [3-6]. Walau bagaimanapun, prosedur pengasingan dan penulenan PhG adalah sukar dan memakan masa. Selain itu, kaedah kromatografi berbilang klasik bukan sahaja menggunakan sejumlah besar pelarut organik tetapi juga memberikan pemulihan sampel yang lebih rendah. Kromatografi arus balas berkelajuan tinggi (HSCCC), teknik kromatografi partition cecair-cecair tanpa sokongan, menawarkan pemulihan sampel yang sangat baik berbanding beberapa kaedah konvensional dan telah digunakan secara meluas untuk pengasingan dan penulenan pelbagai produk semula jadi [7-9] . Walaupun beberapa PhG telah dimurnikan daripadaCistanchesgenus dan lain-lain oleh HSCCC [10–14], tiada kertas telah melaporkan penulenan acteoside, isoacteoside, syringalide A 3'- -L-rhamnopyranoside dan 2'-acetylacteoside dalam satu sistem dwifasa.

Dalam makalah ini, kami melaporkan kaedah mudah untuk pengasingan dan penulenan empat PhG daripada C. deserticola. Akhir sekali, 30.9 mg acteoside, 13.0 mg isoacteoside, 12.5 mg syringalide A 3'- -L-rhamnopyranoside, dan 7.2 mg 2'-acetylacteoside telah diperoleh dalam satu langkah. pemisahan daripada 297 mg pecahan dengan ketulenan 99 peratus, 95 peratus, 99 peratus dan 98 peratus, masing-masing. Struktur mereka dicirikan berdasarkan data spektrum 1H- dan 13C-NMR dan spektrum HR-MS. Struktur empat PhG yang dikenal pasti dalam penyiasatan ini ditunjukkan dalam Rajah 1.

Keputusan dan perbincangan

Analisis HPLC Ekstrak Mentah

Pecahan diperkaya konstituen bagi ekstrak n-butanoik daripada C. deserticola telah dianalisis oleh HPLC-UV. Lajur yang digunakan ialah Accurasil C18 (250 mm × 4.6 mm, id 5 μm) (Instrumen Saintifik Thermo-Fisher, bandar, singkatan negeri, Amerika Syarikat), fasa bergerak ialah air metanol (30:70, v/v). Kadar alir ialah 1 mL/min. Panjang gelombang pengesan ditetapkan pada 254 nm. Kromatogram HPLC ditunjukkan dalam Rajah 2. Puncak 1 hingga 4 sepadan dengan acteoside (1), isoacteoside (2), syringalide A 3'- -L-rhamnopyranoside (3), dan 2'-acetylacteoside (4), masing-masing.

Pemilihan Sistem Pelarut Dua Fasa

Pemisahan yang berjaya oleh HSCCC sebahagian besarnya bergantung kepada pemilihan sistem pelarut dua fasa yang sesuai, sistem pelarut dua fasa telah dipilih mengikut nilai pekali sekatan (K) setiap komponen sasaran dan julat optimum K hendaklah dari {{ 2}}.5 hingga 2.

Dalam eksperimen, nilai K untuk komponen sasaran beberapa sistem pelarut dua fasa ditunjukkan dalam Jadual 1 (walaupun lebih tinggi sedikit untuk puncak 4, keputusan ditunjukkan boleh diterima). Antaranya, etil asetat–n-butanol–etanol-air (40:6:6:50, v/v/v/v) memberikan pekali sekatan yang sesuai untuk sebatian sasaran. Akhirnya, sistem pelarut yang terdiri daripada etil asetat–n-butanol– etanol-air (40:6:6:50, v/v/v/v) telah digunakan untuk mengasingkan dan menulenkan empat sebatian C. deserticola, seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2, analisis HPLC bagi setiap pecahan HSCCC mendedahkan bahawa empat PhG tulen (acteoside, 99 peratus ; isoacteoside, 95 peratus ; syringalide A 3′- -L-rhamnopyranoside 99 peratus dan 2′- acetylacteoside 98 peratus ) boleh didapati daripada pecahan mentah.

Percubaan

radas

Peralatan HSCCC yang digunakan dalam kajian ini ialah sistem kromatografi arus balas berkelajuan tinggi TBE-300B (Shanghai Tauto Biotech Co., Shanghai, China) dengan tiga lajur pemisahan gegelung berbilang lapis persediaan disambung secara bersiri (diameter tiub=2.6 mm, jumlah volum=300 mL) dan gelung sampel 20 mL. Jejari revolusi atau jarak antara paksi pemegang dan pusatpaksi emparan (paksi emparan (R) ialah 5 cm, dan nilai berubah daripada 0.5 pada terminal dalaman kepada 0.8 pada terminal luaran (=r/R, di mana r ialah jarak dari gegelung ke aci pemegang). Alat edaran suhu malar HX 105 (Beijing Changliu Lab Instrument Company, Beijing, China) telah digunakan untuk mengawal suhu dalam percubaan. Sistem HSCCC dilengkapi dengan pam aliran malar tekanan tengah model TBP-5002, pengesan UV model TBP-2000 yang beroperasi pada 254 nm dan stesen kerja model V4.0 (Jinda Biochemistry Instrument Company, Shanghai, China).

Peralatan kromatografi cecair (HPLC) berprestasi tinggi yang digunakan ialah sistem Agilent 1200 yang terdiri daripada pam binari G1312A, autosampler G1329A, pengesan panjang gelombang berubah-ubah (VWD) G1314A, petak lajur termostat G1316A, G1379B delegasser. stesen kerja. Alltech 3300 ELSD telah digunakan untuk pengesanan ketulenan. Spektrometer Agilent 6520 Q-TOF dan Bruker AVANCE III 500-NMR telah digunakan untuk pengecaman struktur sebatian. Spektrum 1H dan 13C-NMR (masing-masing pada 500 dan 125 MHz) diukur pada suhu bilik (22 darjah /295.1 K).

Reagen dan Bahan

Etil asetat, n-butanol, dan etanol ialah gred analitik dan metanol ialah gred HPLC. Semua pelarut telah dibeli daripada Syarikat Teknologi Concord Tianjin (Tianjin, China). Air Milli-Q (18.2 MΩ) (Millipore, Bedford, MA, USA) telah digunakan untuk semua larutan dan pencairan. Rimpang C. deserticola dikumpul dari Wilayah Mongolia Dalam, Republik Rakyat China, pada Jun 2009. Kilang itu telah dikenal pasti oleh Prof. Lijuan Zhang, dan spesimen baucar (No. 20091001) telah disimpan di makmal kami.

Penyediaan Sampel Mentah

Batang berdaging kering udara serbuk C. deserticola (1 Kg) direfluks dua kali dengan etanol berair (8 L, 60 peratus v/v) selama 2 jam setiap kali. Ekstrak telah disejat di bawah tekanan yang dikurangkan dan pada suhu 60 darjah sehingga jumlah penyejatan etanol. Sisa digantung di dalam air dan diekstrak berturut-turut tiga kali dengan kloroform, etil asetat, dan n-butanol, memberikan 5.16 g ekstrak n-butanoik selepas penyejatan kepada kekeringan di bawah tekanan yang dikurangkan. Ekstrak n-butanoik kemudiannya diasingkan pada lajur gel silika (200–300 mesh) menggunakan elusi kecerunan progresif (CHCl3–MeOH, 10:1→1:1) untuk memberikan lapan pecahan. Pecahan 6 (297 mg) digunakan untuk pengasingan dan pengasingan HSCCC selanjutnya.

Pemilihan Sistem Pelarut Dua Fasa

Sistem pelarut dua fasa telah dipilih mengikut pekali sekatan (K) komponen sasaran dalam pecahan C. deserticola. Nilai K ditentukan melalui analisis LC seperti berikut: Jumlah serbuk ekstrak mentah yang sesuai (pecahan 6) telah dibubarkan dalam fasa bawah sistem pelarut dan dianalisis oleh HPLC. Kawasan puncak direkodkan sebagai A1. Kemudian isipadu yang sama bagi fasa atas ditambah kepada larutan dan dicampur dengan teliti untuk mencapai keseimbangan partition. Fasa bawah kemudiannya dianalisis oleh HPLC sekali lagi. Kawasan puncak yang terakhir direkodkan sebagai A2. Nilai-K dikira mengikut persamaan berikut: K=(A1 − A2)/A2 [15,16].

Penyediaan Sistem Pelarut Dua Fasa dan Penyelesaian Sampel

Dalam kajian ini, sistem pelarut dua fasa yang terdiri daripada etil asetat-n-butanol-etanol-air (40:6:6:50, v/v/v/v) telah digunakan untuk pengasingan HSCCC. Setiap pelarut telah ditambahkan ke corong pemisah dan diseimbangkan sepenuhnya pada suhu bilik. Fasa atas dan fasa bawah dipisahkan dan dinyahgaskan dengan sonication selama 30 minit sejurus sebelum digunakan. Penyelesaian sampel disediakan dengan melarutkan 297 mg Pecahan 6 dalam 15 ml fasa bawah etil asetat–n-butanol–etanol-air (40:6:6:50, v/v/v/v).

Prosedur Pemisahan HSCCC

HSCCC telah dilakukan seperti berikut. Lajur bergelung berbilang lapisan pertama kali diisi dengan fasa pegun organik atas. Fasa mudah alih berair yang lebih rendah kemudiannya dipam ke hujung kepala lajur pada kadar aliran 1.5 mL/min, dan pada masa yang sama, radas HSCCC dijalankan pada kelajuan revolusi 900 rpm. Selepas keseimbangan hidrodinamik diwujudkan, seperti yang ditunjukkan oleh fasa mudah alih yang jelas mengelusi di alur keluar ekor (kira-kira dua jam kemudian), larutan sampel 15 mL yang mengandungi 297 mg ekstrak mentah (pecahan 6) disuntik melalui injap suntikan. Efluen lajur dipantau secara berterusan di bawah 254 nm. Empat pecahan puncak dikumpul mengikut kromatogram dan kemudian disejat di bawah tekanan yang dikurangkan. Suhu radas ditetapkan pada 25 darjah .

Analisis dan Pengenalpastian HPLC Pecahan Puncak HSCCC

Pecahan puncak dari HSCCC dianalisis oleh HPLC-ELSD. Lajur yang digunakan ialah Accurasil C18 (250 mm × 4.6 mm, id 5 μm), fasa bergerak ialah metanol-air (30:70, v/v). Kadar alir ialah 1 mL/min. ELSD telah dikendalikan di bawah keadaan berikut: Suhu 45 darjah , gas 1.6 L/min. Pengenalpastian struktur empat pecahan puncak HSCCC telah dijalankan oleh spektroskopi HR-ESI-MS, 1H, dan 13C-NMR.

Pengenalan Struktur

Pecahan I: HR-ESI-MS diperhatikan pada m/z 623.2001 (M−H)−, dikira untuk C29H35O15, 623.1981. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1.09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 daripada rhamnose), 2.79 (2H, t, J=7.5 Hz, Ar-CH 2-), 4.37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukosa), 5.18 (1H, d, J=1 Hz, H{{34} } daripada rhamnose), 6.27 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 7.59 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar -CH=CH-), 6.5–7.1 (6H, H aromatik).13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131.5 (C-1), 117.2 (C{{65} }), 146.2 (C-3), 144.7 (C-4), 116.4 (C-5), 121.3 (C-6), 72.4 (C- ), 36.6 (C- ), 127.7 (Caf-1), 115.3 (Caf-2), 146.9 (Caf-3), 149.8 (Caf-4), 116.6 (Caf{{ 98}}), 123.2 (Caf-6), 168.3 (Caf- ), 114.8 (Caf- ), 148.1 (Caf- ), 104.3 (G-1), 76.1 (Glc{{116} }), 81.7 (Glc-3), 70.5 (Glc-4), 76.3 (Glc-5), 62.4 (Glc-6), 103.1 (Rha{{131} }), 72.3 (Rha-2), 72.1 (Rha-3), 73.9 (Rha-4), 70.7 (Rha-5), 18.5 (Rha{{146} }). Berbanding dengan data yang diberikan dalam kesusasteraan [17], pecahan Icorresponded kepada acteoside.

Pecahan II: HR-ESI-MS diperhatikan pada m/z 623.1987 (M−H)−, dikira untuk C29H35O15, 623.1981. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1.25 (3H, d, J=6.5 Hz, CH3 rhamnose), 2.78 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4.33 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukosa), 5.17 (1H, d, J {{ 33}} Hz, H-1 rhamnose), 6.28 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 7.56 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 6.5–7.0 (6H, H aromatik). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131.5 (C-1), 117.2 (C-2), 146.2 (C-3), 144.7 (C-4 ), 116.5 (C-5), 121.3 (C-6), 72.4 (C- ), 36.7 (C- ), 127.8 (Caf-1), 115.2 (Caf{{89 }}), 146.8 (Caf-3), 149.7 (Caf-4), 116.6 (Caf-5), 123.2 (Caf-6), 169.2 (Caf- ), 115.0 (Caf- ), 147.3 (Caf- ), 104.5 (G-1), 75.5 (Glc-2), 84.2 (Glc-3), 70.1 (Glc-4 ), 75.7 (Glc-5), 64.7 (Glc-6), 102.8 (Rha-1), 72.4 (Rha-2), 72.4 (Rha-3 ), 74.1 (Rha-4), 70.5 (Rha-5), 17.9 (Rha-6). Data spektrum 1H-NMR dan 13C-NMR adalah selaras dengan isoacteoside seperti yang dilaporkan dalam kesusasteraan [18].

Pecahan III: HR-ESI-MS diperhatikan pada m/z 6{{108}}7.2032 (M−H)−, dikira untuk C29H35O14, 607.2032. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1.09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 rhamnose), 2.84 (2H, t, J=7.5 Hz, Ar-CH 2-), 4.37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukosa), 5.19 (1H, d, J=1.5 Hz, H{{ 35}} daripada rhamnose), 6.27 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 7.59 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.6–7.1 (7H, H aromatik). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 130.8 (C-1), 116.2 (C-2), 130.9 (C-3), 156.8 (C-4 ), 130.8 (C-5), 116.2 (C-6), 72.4 (C- ), 36.4 (C- ), 127.8 (Caf-1), 114.8 (Caf{{88 }}), 149.8 (Caf-3), 146.9 (Caf-4), 116.6 (Caf-5), 123.2 (Caf-6), 168.3 (Caf- ), 115.4 (Caf- ), 148.0 (Caf- ), 104.3 (G-1), 76.3 (Glc-2), 81.7 (Glc-3), 70.4 (Glc-4 ), 76.1 (Glc-5), 62.5 (Glc-6), 103.0 (Rha-1), 72.3 (Rha-2), 72.2 (Rha-3 ), 73.9 (Rha-4), 70.7 (Rha-5), 18.4 (Rha-6). Menurut literatur [18], pecahan III sepadan dengan syringalide A 3'- -L-rhamnopyranoside.

Pecahan IV: HR-ESI-MS diperhatikan pada m/z 665.21{{20}} (M−H)−, dikira untuk C31H37O16, 665.2087. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1.09 (3H, d, J=6.5 Hz, CH3 rhamnose), 2.00 (3H, s, OAc), 2.72 (2H, t, J { {25}}.5 Hz, Ar-CH2-), 4.55 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukosa), 4.90 (1H, d, J { {37}} Hz, H-1 rhamnose), 6.29 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 7.62 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 6.5–7.0 (6H, H aromatik). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131.9 (C-1), 117.3 (C-2), 146.1 (C-3), 144.7 (C-4 ), 116.4(C-5), 121.4 (C-6), 72.7 (C- ), 36.4 (C- ), 127.7 (Caf-1), 115.4 (Caf{{93 }}), 146.9 (Caf-3), 149.9 (Caf-4), 116.6 (Caf-5), 123.2 (Caf-6), 168.1 (Caf- ), 114.7 (Caf- ), 148.2 (Caf- ), 101.8 (G-1), 75.3 (Glc-2), 80.3 (Glc-3), 70.8 (Glc-4 ), 76.2 (Glc-5), 62.3 (Glc-6), 103.3 (Rha-1), 72.0 (Rha-2), 71.8 (Rha-3 ), 73.7 (Rha-4), 70.8 (Rha-5), 18.5 (Rha-6), 171.5 (C=O), 20.9 (OAC). Data spektrum 1H-NMR dan 13C-NMR adalah selaras dengan data 2'-acetylacteoside [17].

Kesimpulan

Kaedah HSCCC untuk pengasingan persediaan dan penulenan acteoside, isoacteoside, syringalide A 3'- -L-rhamnopyranoside dan 2'-acetylacteoside daripadaCistanches deserticola YC Matelah ditubuhkan. Kajian ini menunjukkan bahawa HSCCC adalah teknik yang sangat berkuasa untuk pengasingan persediaan dan penulenan komponen bioaktif daripada bahan tumbuhan. Selain itu, sebatian boleh diasingkan pada skala yang cukup besar dengan ketulenan tinggi dan kemudian boleh digunakan sebagai bahan rujukan untuk kromatografi atau kajian bioaktiviti. Kaedah ini adalah teknik yang boleh dilaksanakan, menjimatkan dan cekap untuk pengasingan persediaan pantas produk semula jadi yang rumit.

Ucapan terima kasih

Kerja ini disokong oleh Program untuk Ulama Changjiang dan Pasukan Penyelidikan Inovatif di Universiti (PCSIRT), Projek Pelan Kerjasama Antarabangsa daripada Kementerian Sains dan Teknologi China (2008DFB30070), dan Program Saintifik Sepanduk Kiri Alashan ({{2 }}).

Rujukan

1. Suruhanjaya Farmakope Cina. Farmakope Republik Rakyat China; Rumah Penerbitan Perubatan Rakyat: Beijing, China, 2010; Jilid 1, hlm. 126.

2. Jiang, Y.; Tu, PF Analisis juzuk kimia dalam spesies Cistanche. J. Chromatogr. 2009, 1216, 1970–1979.

3. Morikawa, T.; Pan, Y.; Ninomiya, K.; Imura, K.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M.; Yuan, D.; Muraoka, O. Aminoglycosides phenylethanoid berasilat dengan aktiviti hepatoprotektif daripada tumbuhan padang pasir Cistanche tubulosa. Bioorg. Med. Kimia. 2010, 18, 1882–1890.

4. Chen, H.; Jing, FC; Li, CL; Tu, PF; Zhang, QS; Wang, ZH Echinacoside menghalang paras ekstraselular striatal neurotransmitter monoamine daripada pengurangan dalam 6-tikus lesi hidroksidopamin. J. Ethnopharmacol. 2007, 114, 285–289.

5. Muraoka, O.; Ninomiya, K.; Morikawa, T.; Wakayama, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Konstituen hepatoprotective daripada batang Cistanche tubulosa. Yakugaku Zasshi 2007, 127, 49–51.

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, OH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Aktiviti neuroprotektif in vitro glikosida phenylethanoid daripada Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778–780.

7. Li, M.; Liu, RM; Matahari, AL; Wu, SJ; Liu, NN Pemisahan dan Pemurnian Rutin dan Acaciin daripada Herba Perubatan Cina Herba Cirsii dengan Gabungan Resin Penjerapan Makroporous dan Kromatografi Balas Arus Kelajuan Tinggi. J. Chromatogr. Sci. 2009, 47, 329–332.

8. Yin, H.; Zhang, S.; Luo, XM; Liu, YH Pengasingan persediaan dan penulenan dua glukosida benzoxazinoid daripada Acanthus ilicifolius L. oleh kromatografi arus balas berkelajuan tinggi. J. Chromatogr. 2008, 1205, 177–181.

9. Peng, AH; Li, R.; Hu, J.; Chen, LJ; Zhao, X.; Luo, HD; Ye, HY; Yuan, Y.; Wei, YQ Kecerunan kadar alir pemisahan kromatografi arus balas berkelajuan tinggi bagi lima diterpenoid daripada Triperygium wilfordii dan penskalaan. J. Chromatogr. 2008, 1200, 129–135.

10. Xie, J.; Deng, J.; Tan, F.; Su, J. Pengasingan dan penulenan echinacoside daripada Penstemon barbatus (Can.) Roth dengan mengitar semula kromatografi arus balas berkelajuan tinggi. J. Chromatogr. B2010, 878, 2665–2668.

11. Li, L.; Tsao, R.; Yang, R.; Liu, C.; Muda, JC; Zhu, H. Pengasingan dan penulenan glikosida phenylethanoid daripadaCistanche deserticoladengan kromatografi arus balas berkelajuan tinggi. Kimia Makanan. 2008, 108, 702–710.

12. Li, L.; Tsao, R.; Liu, ZQ; Liu, SY; Yang, R.; Muda, JC; Zhu, HH; Deng, ZY; Xie, SAYA; Fu, ZH Pengasingan dan penulenan acteoside dan isoacteoside daripada Plantago psyllium L. oleh kromatografi arus balas berkelajuan tinggi. J. Chromatogr. 2005, 1063, 161–169. Molekul 2012, 17 8284

13. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Ito, Y. Pengasingan persediaan dan penulenan acteoside dan 2'-acetyl acteoside daripada Cistanches salsa (CA Mey.) G. Beck oleh kromatografi arus balas berkelajuan tinggi. J. Chromatogr. 2001, 912, 181–185.

14. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Chen, FK; Ito, Y. Pengasingan persediaan dan penulenan glikosida phenylethanoid daripada ekstrak najis anjing beagle oleh kromatografi arus balas berkelajuan tinggi. J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 2001, 24, 2187–2195.

15. Gao, SY; Feng, B.; Zhu, RN; Ma, JK; Wang, W. Pengasingan Persediaan Tiga Antrakuinon daripada Rumex japonicus oleh Kromatografi Balas Arus Kelajuan Tinggi. Molekul 2011, 16, 1201–1210.

16. Dia, F.; Bai, YH; Wang, J.; Wei, J.; Yu, CY; Li, S.; Yang, WL; Han, CH Pengasingan dan Pemurnian Oridonin daripada Keseluruhan Tumbuhan Isodon rubescens oleh Kromatografi Balas Arus Kelajuan Tinggi. Molekul 2011, 16, 7949–7957.

17. Kobayashi, H.; Oguchi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Glikosida phenylethanoid baru daripada cangkuk cistanche tubulosa (Schrenk). f. I. Chem. Pharm. lembu jantan. 1987, 35, 3309–3314.

18. Yoshizawa, F.; Deyama, T.; Takizawa, N.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. The constituents of cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. f. II. Pengasingan dan struktur glikosida fenilethanoid baharu dan glikosida neolignan baharu. Kimia. Pharm. lembu jantan. 1990, 38, 1927–1930.