Penerokaan Awal Kesan Menggalakkan Dan Mekanisme Polisakarida Daripada Cistanche Deserticola Pada Pembiakan Limfosit

Kaedah

Ujian MTT digunakan untuk mengesan percambahan limfosit splenik pada tikus. Cyclophosphamide (Cy) telah digunakan untuk meniru model haiwan haiwan immunocompromised, dan indeks limpa dan timus haiwan normal dan immunocompromised diukur. Aktiviti interleukin-2 (IL-2) diukur dengan ujian proliferasi thymocyte. Keputusan: Cistanche deserticola polysaccharide dengan ketara menggalakkan percambahan limfosit teraktif mitogen (ConA dan LPS) dan sel normal yang tidak diaktifkan, dan menggalakkan rembesan IL-2 dalam limfosit. Pentadbiran intraperitoneal menunjukkan bahawa Cistanche deserticola polysaccharide dengan ketara meningkatkan indeks limpa tikus normal dan imunokompromi, dan juga mempunyai kesan antagonis yang ketara terhadap pengurangan indeks timus yang disebabkan oleh Cy. Kesimpulan: Cistanche deserticola polysaccharide boleh menggalakkan pembiakan limfosit splenik dengan ketara dalam tikus, yang mungkin berkaitan dengan promosi rembesan IL-2nya.

cistanche hidup padang pasir

[Kata kunci]Cistanche deserticola polisakarida; Indeks limpa; Indeks timus; Pembiakan limfosit; Interleukin-2

Polisakarida tumbuhan telah menarik perhatian meluas kerana kesan imunomodulatornya yang meluas dan ketoksikan yang agak rendah [1]. Cistanche deserticola ma, dikenali sebagai "Ginseng Gurun", ialah batang bersisik, kering dan berisi bagi Cistanche deserticola, tumbuhan Orobaceae, yang mempunyai kesan farmakologi yang meluas. Rebusan airnya boleh meningkatkan peratusan fagositik dan indeks fagositik makrofaj dengan ketara. Kajian lanjut menunjukkan bahawa asas bahannya ialah jumlah polisakarida Cistanche deserticola [3]. Zeng Qunli et al. [4] telah mendapati bahawa satu komponen Cistanche deserticola polysaccharide mempunyai kesan proliferatif yang ketara pada limfosit timik tikus secara in vitro. Kesan Cistanche deserticola polysaccharide pada percambahan limfosit diperhatikan secara in vivo dan in vitro.

Formula molekul Cistanche deserticola

1Bahan dan Kaedah

1.1 Ubat dan reagen

Polisakarida daripada Cistanche deserticola disediakan oleh Jabatan Loji dan Kimia Institut Perubatan dan Penanaman, Kolej Perubatan. Ia diekstrak daripada serbuk ekstrak Cistanche, dan kandungan polisakarida adalah 87%.

Serbuk ekstrak cistanche

Sebelum menggunakan eksperimen in vivo, larutkan dan cairkan dengan garam fisiologi kepada kepekatan yang diperlukan, dan rebus untuk pensterilan. Sebelum penggunaan eksperimen in vitro, medium kultur RPMI-1640 telah dilarutkan dan dicairkan, dan pensterilan tekanan tinggi dilakukan. Lipopolysaccharide (LPS), concanavalin (ConA), dexamethasone (DEX), dan MTT adalah semua produk Sigma Corporation. Cyclophosphamide, syarikat usaha sama China-Amerika Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd., Fetal bovine serum, medium kultur RPMI1640, dan trypsin adalah semua produk Gibco. Reagen lain ialah reagen analisis domestik.

1.2 Haiwan

BALB c tikus muda (tahap SPF) disediakan oleh Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Beijing) 2002-2003]. Haiwan gred SPF dibesarkan di dalam bilik dan diberi makan dan minum secara bebas.

1.3 Radas

Penanda enzim Multikan Ascent, produk Syarikat Thermo Electron, Amerika Syarikat. Leici PHS-3B Meter pH Ketepatan, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., NAPCOo 5410 inkubator karbon dioksida, NAPCO, AS. BCN-1360 Meja Kerja Ultra Bersih, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Mikroskop Terbalik, Chongqing Optoelektronik Instrumen Co., Ltd.

1.4 Kaedah

1.4.1 Kesan ke atas pembiakan limfosit [5]:

Penyediaan rutin limfosit limpa daripada tikus BALB/c, menggunakan RPMI-1640 untuk melaraskan kepekatan sel kepada 1 × 107 mL, diinokulasi pada plat kultur 96 perigi, dengan 100 penggantungan sel ditambahkan pada setiap telaga μL-50. Ia dikultur bersama dengan kepekatan polisakarida Cistanche deserticola yang berbeza (kepekatan akhir polisakarida Cistanche deserticola untuk pembiakan limfosit yang tidak diaktifkan ialah 6.25, 12.5, 25, 50, dan 100 mg/L mengikut urutan; kepekatan akhir Cistanche deserticola polysaccharide untuk proliferasi T untuk proliferasi Cistanche deserticola. limfosit ialah 3.9, 7.8, 15.6, 31.2, dan 62.5 mg/L mengikut tertib; dan kepekatan akhir polisakarida Cistanche deserticola untuk pembiakan limfosit B diaktifkan LPS ialah 1.56, 3.13, 6.25, 12.5, dan LPS) RPMI-1640 medium telah digunakan sebagai kawalan. Jumlah isipadu setiap lubang ialah 200 μL. Apabila menambahkan mitogen ConA dan LPS (kawalan ialah RPMI-1640 mengandungi kepekatan ConA atau LPS yang sepadan), kepekatan akhir kedua-duanya ialah 2.5 mg/L dan 10 mg/L, masing-masing. Tiga lubang selari telah dibuat untuk pelbagai rawatan. Letakkan plat kultur dalam inkubator kelembapan tepu 37 darjah 5% CO2 selama 68 jam, tambah MTT, dan teruskan kultur selama 4 jam. Ukur nilai A540 nm dengan penanda enzim menggunakan kaedah MTT untuk mengesan percambahan. Apabila membandingkan setiap kumpulan, tukar nilai A540nm kepada kadar percambahan limfosit mengikut formula berikut:kadar percambahan limfosit=sampel AA kawalan A × 100 %.

Kesan Cistanche-Meningkatkan imuniti

1.4.2 Kesan ke atas berat organ imun dalam tikus normal [6,7]:

Tikus BALB c muda (jantan, berumur 4 minggu, dengan berat badan 10-15 g) dibahagikan secara rawak kepada kumpulan kawalan kosong (saline) dan kumpulan dos yang berbeza (125 mg (kg · bw) dan 250 mg (kg · bw)), dengan 11 tikus dalam setiap kumpulan. Ubat ini diberikan secara intraperitoneal sekali sehari selama 7 hari berturut-turut. Tikus-tikus itu dibunuh selepas dislokasi serviks. Limpa dan timus diambil, lemak dan tisu fascia dikeluarkan, dan cecair permukaan dikeringkan dengan kertas penapis. Selepas ditimbang, indeks limpa=100 × Berat limpa (mg) Berat badan (mg); Indeks hthymus=100 × Berat Timus (mg) Berat Badan (mg). Kira indeks limpa dan indeks timus untuk setiap 100 mg berat badan, masing-masing.

1.4.3 Kesan ke atas berat organ imun dalam tikus imunokompromi [7,8]:

Tikus BALB c muda (jantan, berumur 6 minggu, berat badan 15-20 g) dibahagikan secara rawak kepada 12 kumpulan mengikut berat badan. Kecuali bagi kumpulan kawalan biasa (suntikan intraperitoneal isipadu garam fisiologi yang setara), kumpulan lain disuntik dengan Cy 50 mg (kg · bw) setiap hari secara intraperitoneal, dan larutan ubat ujian diberikan secara intraperitoneal [125 dan 250Mg (kg · bw)], kumpulan kawalan normal, kumpulan 3 hari saline fisiologi diberi aselin yang sama. hari. Perubahan dalam berat haiwan diperhatikan semasa percubaan. 24 jam selepas pentadbiran terakhir, indeks limpa dan timus diukur dan dikira menggunakan kaedah yang sama seperti dalam 1.4.2.

1.4.4 Kesan pada IL-2 aktiviti:

① Induksi IL-2 [9]: Tambahkan 50 pada setiap telaga dalam plat sel 96-telaga μ L Kepekatan yang berbeza bagi polisakarida Cistanche deserticola (kepekatan akhir mengikut urutan: 3.91, 7.82, 15.63, 31.25, 62.5, 125 mg kultur L ke dalam medium kawalan) dan 50 μ L ConA (kepekatan akhir 5 mg/L), tambah 1 lagi setiap telaga × 106 sel limpa. Inkubasi dalam inkubator kelembapan tepu 37 darjah , 5% CO2 selama 24 jam, sentrifuge selama 20 minit pada 2500 r min, dan ambil supernatan sel dan simpannya pada - 20 darjah untuk siap sedia. ② IL-2 pengesanan aktiviti [9,10]: Kaedah asas adalah berdasarkan literatur [9], dan pelarasan yang sesuai dibuat mengikut literatur [10]. Penyediaan konvensional penggantungan thymocytes tikus BALB c, plat kultur sel telaga 96, 1 inokulasi setiap telaga × 106 timosit, sambil menambah 50 sel setiap telaga μ L ConA (kepekatan akhir 2.5 mg/L), dan kemudian tambahkan supernatan IL-2 yang disediakan 50 μ L (tambah 50 μ L ke dalam larutan kawalan kosong), tambah 50 μ ke dalam larutan kawalan kosong. MTT, teruskan pengeraman selama 4 jam, sentrifuge selama 10 hingga 15 minit pada 1000 r min, buang supernatan, dan tambah DMSO 100 setiap telaga μ L, goncang dengan pengayun mikro selama 8 minit, dan ukur nilai A540 nm dengan penanda enzim.

1.5 Analisis Statistik

Data dinyatakan sebagai min dan sisihan piawai (x ± s). Perisian Microsoft Excel digunakan untuk menyusun data, dan ujian-t telah dijalankan. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2. Keputusan

2.1 Kesan ke atas pembiakan limfosit

Seperti yang dapat dilihat daripada Jadual 1, menambah polisakarida Cistanche deserticola kepada medium kultur limfosit limpa tikus yang dikultur secara in vitro pada kepekatan melebihi 25 mg/L dengan ketara boleh merangsang percambahan limfosit, menunjukkan bahawa polisakarida Cistanche deserticola itu sendiri mempunyai kesan mitosis. Pada masa yang sama,ia boleh dilihat daripada Jadual 2 dan Jadual 3 bahawa CDPS mempunyai kesan menggalakkan yang ketara terhadap percambahan limfosit T yang disebabkan oleh ConA atau limfosit B yang disebabkan oleh LPS..

Tab.1 Pengaruh polisakarida Cistanche deserticola pada pembiakan limfosit yang tidak diaktifkan (x ±s, n =3)

Tidak: berbanding dengan kumpulan kawalan, ＊P<0.05.

Tab.2 Pengaruh polisakarida Cistanche deserticola pada pembiakan limfosit T yang disebabkan oleh ConA (x ±s, n =3)

 

Nota: berbanding dengan kumpulan ConA, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 Pengaruh polisakarida Cistanche deserticola pada pembiakan limfosit B yang disebabkan oleh LPS (x ±s, n =3)

Nota: berbanding dengan kumpulan LPS, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

2.2 Kesan ke atas berat organ imun pada tikus normal

Seperti yang dapat dilihat daripada Jadual 4,Cistanche deserticola polysaccharide boleh meningkatkan indeks limpa tikus muda normalBALB/cc tetapi tidak menjejaskan kelenjar timus.

2.3 Kesan ke atas berat organ imun dalam tikus immunocompromised

Daripada Jadual 5,dapat dilihat bahawa indeks limpa dan organ timus tikus dalam kumpulan imunosupresif Cy adalah lebih rendah daripada kumpulan kawalan, dan polisakarida Cistanche deserticola (125, 250 mg/kg) boleh meningkatkan indeks limpa dan timus dengan ketara.

2.4 Kesan pada IL-2 aktiviti

Seperti yang dapat dilihat daripada Jadual 6,apabila dos Cistanche deserticola polysaccharide mencapai 7.82 mg/L, ia boleh meningkatkan pembebasan IL-2 dengan ketara daripada sel limpa tikus.

Tab.4 Kesan Cistanche deserticola polysaccharide pada berat organ imun dalam tikus normal (x ±s, n =11)

Nota: berbanding dengan kumpulan kawalan, ＊＊P<0.01.

Tab.5 Kesan Cistanche deserticola polysaccharide pada berat organ imun dalam tikus immunodepressed ( x ±s, n =12)

Nota: berbanding dengan kumpulan kawalan, ## P < 0.01; berbanding dengan kumpulan model, ＊＊P<0.01.

Tab.6 Pengaruh polisakarida Cistanche deserticola pada pengeluaran IL-2 oleh limfosit splenik dalam tikus( x ±s, n =3)

Nota: berbanding dengan kumpulan kawalan, ＊＊P<0.01.

3. Perbincangan

Percambahan limfosit splenik yang disebabkan oleh ConA dan LPS pada tikus adalah eksperimen in vitro untuk mengesan fungsi limfosit T dan B dan merupakan penunjuk penting keupayaan imun khusus. Kajian telah menunjukkan bahawa apabila kepekatan akhir Cistanche deserticola polysaccharide melebihi 25 mg/L, ia boleh menggalakkan percambahan limfosit dengan ketara, menunjukkan bahawa ia mempunyai kesan mitosis tertentu. Dengan kehadiran mitogen (ConA atau LPS), dos Cistanche deserticola polysaccharide yang lebih kecil boleh bertambah baik jika badan, memaparkan aktiviti proliferatif yang ketara. Kami tahu bahawa ConA dan LPS terutamanya mendorong percambahan limfosit T atau limfosit B, masing-masing. Kajian telah menunjukkanFaedah kesihatan serbuk cistanche: Cistanche deserticola polysaccharide boleh menggalakkan kedua-dua pembiakan limfosit T dan percambahan limfosit B, tetapi kesan proliferatifnya pada limfosit B adalah lebih kuat daripada limfosit T.

Faedah kesihatan serbuk cistanche-Improve imuniti

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Improve Immunity

【Minta lebih lanjut】 E-mel: xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692

Timus dan limpa adalah organ imun utama dalam haiwan. Sel-sel imun dalam limpa terutamanya adalah limfosit B matang, manakala timus terutamanya limfosit T yang belum matang. Indeks timus dan limpa boleh mencerminkan perkembangan organ imun dan status fungsi sel imun. Suntikan intraperitoneal Cistanche deserticola polysaccharide boleh meningkatkan dengan ketara indeks limpa tikus normal dan imunosupresi dan mempunyai kesan antagonis yang ketara pada atrofi thymic yang disebabkan oleh Cy pada tikus.

Cistanche deserticola polysaccharide tidak mempunyai kesan ketara ke atas indeks timik dalam haiwan normal, yang konsisten dengan keputusan eksperimen in vitro di mana polisakarida Cistanche deserticola menggalakkan pembiakan limfosit B dan bukannya limfosit T.

Csuplemen istanche berhampiran saya-Improveimuniti

IL-2 ialah sitokin yang dihasilkan oleh limfosit T daripada fasa G1 kitaran sel ke fasa S. Ia adalah faktor pertumbuhan sel T utama yang bertindak sebagai faktor pertumbuhan autokrin. Selain itu, IL-2 boleh menggalakkan percambahan sel B dan sintesis antibodi [11,12]. Cistanche deserticola polysaccharide menggalakkan pembebasan IL-2 daripada limfosit, yang jelas berkaitan dengan Cistanche deserticola polysaccharide yang menggalakkan percambahan limfosit splenik.

Penyelidikan perubatan menunjukkan bahawa Cistanche mengandungi polisakarida, Echinacosides, dan Acteoside, yang boleh mengaktifkan limfosit dan bertambah baik jika badan; komponen berfungsi cistanche Phenylethanoid Glycosides mempunyai kesan yang ketara ke atas pemulihan sel selepas kerosakan 60 Co gamma ray, dan juga boleh meningkatkan fungsi imun terhadap kerosakan sinaran. Mengambil suplemen Cistanche deserticola setiap hari boleh mencapai kesan meningkatkan imuniti.