Kepentingan Ramalan Ekspresi Protein 8 Berkaitan Mieloid Buah Pinggang dalam Pesakit Obesiti- Atau Penyakit Buah Pinggang Berkaitan Diabetes Jenis 2

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Takashige Kuwabara¹, Kiyoshi Mori1,^2*, Masato Kasahara^1,3, Hideki Yokoi¹, Hirotaka Imamaki¹,Akira Ishii¹, Kenichi Koga¹, Akira Sugawara⁴, Shinji Yasuno³, Kenji Ueshima³, Takashi Morikawa⁵,Yoshio Konishi⁵, Masahito Imanishi⁵, Akira Nishiyama⁶, Kazuwa Nakao^1,2, Masashi Mukoyama¹

¹Jabatan Perubatan dan Sains Klinikal, Sekolah Siswazah Perubatan Universiti Kyoto, Kyoto, Jepun,

²Pusat Inovasi Perubatan, Siswazah Universiti KyotoSekolah Perubatan, Kyoto, Jepun,

³Jabatan Penyelidikan EBM, Institut Kemajuan Sains Klinikal dan Terjemahan, Hospital Universiti Kyoto, Kyoto, Jepun,

⁴Jabatan Nefrologi, Hospital Palang Merah Osaka, Osaka, Jepun,

5 Bahagian Nefrologi dan Hipertensi, Hospital Besar Bandar Osaka, Osaka, Jepun,

6 Jabatan Farmakologi, Sekolah Perubatan Universiti Kagawa, Kagawa, Jepun

Abstrak

Latar Belakang dan Objektif: Kami telah melaporkan bahawa reseptor seperti tol 4 (TLR4) dan salah satu ligan endogennya, protein berkaitan myeloid 8 (MRP8 atau S100A8), memainkan peranan penting dalam perkembangan nefropati diabetes pada tikus. Matlamat kajian ini adalah untuk menilai kepentinganbuah pinggangEkspresi MRP8 pada pesakit denganobesiti- atau berkaitan diabetes jenis 2penyakit buah pinggang. Kaedah: Dalam subjek diabetes, obes atau kawalan, tahap ekspresi mRNA dan protein MRP8 dalam sampel biopsi buah pinggang ditentukan oleh RT-PCR dan imunohistokimia masa nyata (masing-masing n=28 dan 65), dan perkaitannya dengan garis dasar dan parameter prognostik dianalisis. Kesan MRP8 terhadap ekspresi gen pro-radang telah diperiksa menggunakan makrofaj. Keputusan:buah pinggangTahap ekspresi gen dan protein MRP8 dinaikkan dalam kumpulan obes atau diabetes berbanding kumpulan kawalan. Di antara semua subjek, melalui analisis regresi linear univariate, kiraan sel positif MRP8-glomerular dan MRP tubulointerstitial8-kawasan positif pada garis dasar kedua-duanya, masing-masing, dikaitkan bukan sahaja dengan pelbagai faktor risiko yang diketahui untuk nefropati diabetes (seperti sebagai tekanan darah sistolik, proteinuria, dan kreatinin serum) tetapi juga dengan tahap glomerulosklerosis dan fibrosis tubulointerstitial. Faktor bebas yang meramalkan tahap protein kencing setahun kemudian telah diperiksa oleh analisis multivariate, dan ia termasuk MRP glomerular8-kiraan sel positif (b=0.59, P,0.001), proteinuria (b=0.37, P=0.002) dan tekanan darah sistolik (b=0.21, P=0.04) pada garis dasar, selepas pelarasan untuk risiko yang diketahui faktor. Ekspresi MRP8protein diperhatikan dalam CD{17}}makrofaj positif dan tubul atropik. Dalam makrofaj tetikus berbudaya, ekspresi sitokin proinflamasi yang disebabkan oleh protein MRP8 turut mencetuskan auto aruhan MRP8 dalam4-cara bergantung kepada TLR.

Kesimpulan: Ekspresi MRP8 glomerular nampaknya dikaitkan dengan perkembangan proteinuria dalam pesakit diabetes obes atau jenis 2, mungkin dengan mendorong perubahan keradangan dalam makrofaj melalui isyarat TLR4.

Kesan cistanche: merawat penyakit buah pinggang

pengenalan

Keradangan kronik memainkan peranan penting dalam patogenesis diabetes atauobesitidan komplikasi kardiovaskularnya [1]. Penglibatan reseptor imun semula jadi dan ligan endogen dalam proses keradangan kronik telah terlibat. Protein berkaitan myeloid 8 (MRP8, juga dikenali sebagai S100A8 atau calgranulin A) pada asalnya dikenal pasti sebagai protein pengikat kalsium sitoplasma dalam neutrofil dan monosit [2] dan telah diiktiraf secara meluas sebagai ligan endogen yang kuat untuk reseptor seperti tol 4 (TLR4). ) dalam pelbagai penyakit termasuk kejutan septik, gangguan vaskular dan autoimun [3,4,5]. Kami baru-baru ini mencadangkan bahawa isyarat MRP8/TLR4 memainkan peranan penting dalam perkembangan nefropati diabetes yang disebabkan oleh hiperlipidemia [6]. Makrofaj glomerular dan sel saluran pengumpul adalah sumber utama MRP8 dalam model tikus nefropati diabetik [6] dan fibrosis buah pinggang [7], masing-masing. Tahap plasma MRP8, yang biasanya membentuk kompleks heterodimerik dengan pasangan mengikat MRP14 dalam aliran darah, meningkat dalam subjek obes [8,9]. Walau bagaimanapun, tidak ada laporan yang menyiasat ekspresi buah pinggang MRP8 pada pesakit dengan obesiti atautaip2kencing manisdan kaitannya dengan prognosis buah pinggang.

Matlamat kajian ini adalah untuk menentukan tahap ekspresi mRNA dan protein MRP8 dalambuah pinggangpesakit Jepun dengan nefropati diabetik (DN),obesitiglomerulopati (ORG), sindrom nefrotik perubahan minimum (MCNS) atau kelainan glomerular kecil (MGA), yang semuanya didiagnosis dengan biopsi buah pinggang, dan untuk menilai sama ada ekspresi MRP8 buah pinggang boleh meramalkan hasil buah pinggang.

Cistanche boleh meningkatkan fungsi buah pinggang

Bahan dan Kaedah

Kenyataan etika

Kajian manusia dijalankan mengikut prinsip yang dinyatakan dalam Deklarasi Helsinki dan telah diluluskan oleh Jawatankuasa etika Penyelidikan Manusia Sekolah Perubatan Siswazah Universiti Kyoto dan Hospital Besar Bandar Osaka, masing-masing. Semua peserta memberi kebenaran bertulis secara bertulis. Protokol kajian haiwan telah diluluskan oleh Jawatankuasa Penyelidikan Haiwan Sekolah Siswazah Perubatan Universiti Kyoto (Nombor Permit: Med Kyo 13318). Semua pembedahan haiwan dilakukan di bawah anestesia natrium pentobarbital, dan semua usaha dilakukan untuk meminimumkan penderitaan.

Mata pelajaran belajar

Pesakit proteinurik denganobesitiatau diabetes jenis 2 yang menjalani biopsi buah pinggang telah didaftarkan dalam kajian ini. Pesakit dengan penyakit berjangkit, kanser, penyakit hati atau penyakit kolagen dikecualikan. Proteinuria ditakrifkan sebagai protein urin lebih besar daripada0.5 g/g kreatinin atau albumin kencing lebih daripada 300 mg/g kreatinin dalam sekurang-kurangnya dua ukuran berturut-turut.Obesitiditakrifkan sebagai indeks jisim badan (BMI) lebih daripada 25.0 (kg/m²). Diabetes jenis2 didiagnosis mengikut kriteria Pertubuhan Kesihatan Sedunia. Pengukuran biokimia pada kemasukan untuk biopsi buah pinggang digunakan sebagai ciri asas untuk analisis keratan rentas. Anggaran kadar penapisan glomerular(eGFR) dikira menggunakan persamaan ramalan dipermudah yang dicadangkan oleh Persatuan Nefrologi Jepun: eGFR (ml/min/1.73 m²)=1946 [umur (tahun)]20.287 6 [kreatinin serum (mg perdl)]21.094 60.739 (untuk wanita), yang merupakan pengubahsuaian tempatan yang disahkan MDRD [ 10]. Kepekatan kreatinin serum diukur menggunakan kaedah enzimatik.

Untuk imunohistokimia, 65 pesakit Jepun yang menjalani biopsi buah pinggang di Jabatan Perubatan dan Sains Klinikal, Hospital Universiti Kyoto antara 2000 dan 2011 telah dianalisis. Diagnosis biopsi-terbukti semua pesakit dalam tempoh ini disenaraikan dalam Jadual S1 dalam Fail S1. Subjek yang diperiksa dalam kerja ini termasuk DN (n=19), ORG (n=10) dan subjek kawalan bukan obes, bukan diabetes yang didiagnosis sebagai MGA(n=19) atau MCNS (n=17). Sesetengah kes dalam kategori ini dikecualikan kerana sampel sisa yang ada mengandungi kurang daripada 10glomeruli. Definisi DN terdiri daripada (1) tempoh lebih daripada 5 tahun selepas permulaan diabetes, (2) kewujudan mikro- atau makro-albuminuria, (3) perubahan histopatologi yang serasi dengan DN seperti penebalan membran bawah tanah glomerular, pengembangan mesangial, nodular. sklerosis (nodul Kimmelstiel-Wilson) dan/atau hyalinosis arteriolar, dan (4) pengecualian punca lain untuk gangguan buah pinggang [11]. ORG ditakrifkan secara morfologi sebagai glomerulosklerosis segmental fokus dan/atau glomerulomegali dalam subjek yang mempunyai kedua-duanya.obesitidan proteinuria, yang definisinya telah diterangkan di atas [12,13].

Untuk analisis ekspresi mRNA, sampel berkualiti rendah, di mana tahap RNA ribosom 18S (rRNA) lebih rendah daripada had kepekaan pengesanan oleh RT-PCR masa nyata, dikecualikan. Subjek yang didaftarkan terdiri daripada 22 pesakit diabetes jenis 2 yang menjalani biopsi buah pinggang di Hospital Besar Osaka City antara tahun 2000 dan 2010, dan 6 subjek kawalan bukan diabetes, yang mempunyai MGA yang terbukti biopsi.

Jadual 1 dan 2 meringkaskan ciri klinikal asas bagi pesakit yang diperiksa oleh analisis imunohistokimia atau ekspresi gen, masing-masing. Untuk mikroskop cahaya, spesimen tisu diproses mengikut prosedur standard. Bahagian telah diwarnai dengan hematoxylin-eosin, asid berkala-Schiff, perak methenamine asid berkala atau trichrome Masson (Rajah S1). Nisbah bilangan glomeruli dengan sklerosis global antara jumlah glomeruli dan kawasan relatif fibrosis tubulointerstitial dinilai secara bebas oleh dua ahli patologi yang tidak mengetahui diagnosis dan data klinikal.

Kesan cistanche: merawat penyakit buah pinggang

Definisi hasil buah pinggang

Dua penunjuk prognostik berikut telah diperiksa oleh regresi linear dan analisis regresi logistik, masing-masing: (1) tahap proteinuria yang diukur pada satu tahun selepas biopsi, dan (2) kejadian buah pinggang yang ditakrifkan sebagai peningkatan tahunan kreatinin serum sebanyak .50 peratus daripada garis dasar atau permulaan dialisis kronik.

Imunohistokimia

Imunohistokimia MRP8 dan CD68 telah dijalankan menggunakanbuah pinggangbahagian (ketebalan 4 mm) tetap dengan 4 peratus paraformaldehid terbuffer. Selepas pengambilan antigen oleh penimbal sitrat, bahagian buah pinggang diinkubasi dengan 10 peratus serum kambing, diikuti oleh tikus anti-manusia MRP8 (1:100; bioperubatan BMA, Ogos, Switzerland)[14] atau antibodi CD68 anti-manusia tikus (1:50). ; DAKO, Ely, UK), masing-masing. Antibodi utama telah divisualisasikan dengan antibodi sekunder konjugasi peroksidase lobak pedas dan 3,3-diaminobenzidine tetrahydrochloride (Dako USA, Carpinteria, CA). Nukleus telah diwarnai balas dengan hematoxylin. MRP8-sel positif telah dikira dalam lebih daripada 10 glomeruli dan MRP{17}}kawasan positif dalam tubulointerstitium diukur secara kuantitatif untuk mendapatkan purata bagi setiap subjek menggunakan perisian MetaMorph 7.5 (Molecular Devices, Downingtown, PA, USA ). Penyetempatan sel CD68- dan MRP8-positif telah dinilai dengan bahagian bersiri. Tiada isyarat MRP8 atau CD68 dalam kawalan negatif yang diwarnakan tanpa antibodi pertama (Rajah S2). Dengan prainkubasi antibodi anti-MRP8 dengan lebihan 20 molar protein MRP8 manusia rekombinan (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) pada 4uC semalaman, pewarnaan telah berkurangan dengan ketara, jika tidak sepenuhnya, seterusnya menyokong kekhususan antibodi (Rajah S3) .

Cistanche untuk merawat buah pinggang

Penilaian ekspresi mRNA

bekubuah pinggangbahagian telah dipisahkan kepada tisu glomeruli dan nonglomerulus oleh laser capture micro-dissection (LM200; Olympus, Tokyo, Jepun) seperti yang diterangkan sebelum ini [15]. Jumlah RNA diekstrak dengan kit mini RNeasy (Qiagen, Tokyo, Jepun). Tahap ekspresi mRNA ditentukan oleh PCR masa nyata TaqMan (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) [16,17]. Tahap ekspresi semua gen telah dinormalisasi oleh tahap 18S rRNA (kawalan dalaman). Lihat Jadual S2 dalam Fail S1 untuk urutan primer dan kuar. Eukariotik 18S rRNA telah dikesan dengan PreDeveloped TaqMan Assay Reagents (Applied Biosystems).

Jadual 1. Ciri klinikal asas pesakit pada biopsi buah pinggang yang dianalisis untuk ekspresi protein MRP8 oleh imunohistokimia.

MGA: kelainan glomerular kecil, MCNS: sindrom nefrotik perubahan minimum, ORG:obesiti-glomerulopati yang berkaitan, DN: nefropati diabetik, BMI: indeks jisim badan, BUN: nitrogen urea darah, CRP: protein C-reaktif. Data ialah min 6 SD. *Perbezaan keseluruhan antara kumpulan MGA, MCNS, ORG dan DN dibandingkan dengan ANOVA.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t001

Rawatan MRP8 terhadap makrofaj

Makrofaj yang berasal dari sumsum tulang dihasilkan daripada tikus kalah mati (KO) jenis liar atau TLR4 [18] pada latar belakang genetik C57BL/6J (Oriental BioService, Kyoto, Jepun) seperti yang diterangkan sebelum ini [6]. Secara ringkas, berikutan lisis sel darah merah, sel sumsum tulang digantung semula dalam medium yang mengandungi 20 peratus serum anak lembu janin dan 50 ng/ml faktor perangsang makrofaj-koloni manusia rekombinan (Peprotech, Rocky Hill, NJ, Amerika Syarikat), dan dikultur di 37uC dalam 5 peratus CO2 atmosfera. Pada hari ke-7, makrofaj diinkubasi dengan tetikus rekombinan MRP8 (Abnova, Taipei, Taiwan) atau kenderaan selama 4 jam. Polymyxin B (25 mg/ml, NacalaiTesque, Kyoto, Jepun) telah ditambah kepada setiap telaga untuk meminimumkan pencemaran endotoksin seperti yang diterangkan sebelum ini [3,19]. Noendotoxin dikesan pada mana-mana kepekatan MRP8 yang diuji selepas inkubasi dengan 25 mg/ml polimiksin B oleh ToxinSensorChromogenic LAL Endotoxin Assay Kit (GenScript, Piscataway, NJ, USA). Jumlah RNA daripada sel telah diekstrak dengan RNeasy MiniKit, dan tahap ekspresi mRNA interleukin-1 beta (IL-1b), tumor necrosis factor-alpha (TNFa) dan MRP8 ditentukan oleh TaqMan masa nyata RT-PCR. Tahap ekspresi semua gen telah dinormalisasi oleh tahap GAPDH tikus (kawalan dalaman, Pre-Developed TaqMan Assay Reagents). Urutan Primer dan Probe untuk PCR masa nyata disenaraikan dalam Jadual S2 dalam Fail S1.

Analisis statistik

Data dinyatakan sebagai min 6 SD, atau bermakna 695 peratus selang keyakinan (CI) apabila sesuai. Untuk perbandingan antara empat kumpulan, ANOVA sehala atau dua hala dengan analisis post-hoc Bonferroni digunakan, dan pembolehubah kategori dibandingkan menggunakan ujian x2. Ujian-t tidak berpasangan pelajar digunakan untuk perbandingan antara dua kumpulan mengikut kesesuaian. Pekali korelasi Spearman dianggarkan untuk menentukan perkaitan antara dua pembolehubah. Untuk mengkaji kesan kovariat asas yang menentukan tahap ekspresi MRP8 glomerular atau tubulointerstitial atau tahap protein kencing setahun selepas biopsi, analisis regresi linear univariat dan multivariat dilakukan. Analisis regresi logistik digunakan untuk menganalisis pembolehubah penjelasan yang meramalkan kejadian kejadian buah pinggang. Semua data dianalisis menggunakan perisian StatView 5.0 (SAS InstituteInc., Cary, NC, USA). Nilai P,0.05 dianggap signifikan secara statistik.

Kesan cistanche: merawat penyakit buah pinggang

Keputusan

Kami membandingkan tahap ekspresi protein MRP8 dalambuah pinggangantara kumpulan DN, ORG dan bukan obes, kawalan bukan diabetes (MGA dan CNS). Analisis imunohistokimia mendedahkan bahawa kedua-dua MRP glomerular8-kiraan sel positif (Rajah 1A) dan kawasan positif MRP8-tubulointerstitial (Rajah 1B) dalam DN adalah jauh lebih besar daripada kumpulan lain termasuk MGA, MCNS, dan ORG (P<0.01). org="" subjects="" also="" showed="" a="" tendency="" of="" elevated="" mrp8expression="" compared="" to="" mga="" and="" mcns="" (fig.="" 1a,="" 1b).="" furthermore,="" glomerular="" mrp8="" mrna="" expression="" levels="" in="" dn="" subjects="" were="" significantly="" higher="" compared="" to="" non-dm="" control="" subjects="" (p,0.01,="" fig.="" 1c).="" in="" non-glomerulus="" tissues,="" mrp8mrna="" expression="" levels="" were="" much="" lower="" than="" those="" in="" glomeruli,="" both="" in="" non-dm="" and="" dm="" groups.="" abundant="" mrp8="" protein="" expression="" in="" the="" tubulointerstitium="" of="" dn="" cases="" was="" not="" clearly="" reflected="" into="" increased="" mrna="" expression,="" which="" may="" be="" partly="" caused="" by="" deposition="" of="" blood-derived="" proteins="" in="" the="" tubulointerstitium="" as="" discussed="" in="" the="" next="" section.="" as="" shown="" in="" representative="" photos="" (fig.="" 1d–g,="" see="" fig.="" s4="" in="" detail),="" renal="" biopsy="" samples="" from="" mga="" and="" mcns="" subjects="" showed="" few="" mrp8-positive="" cells="" in="" glomeruli="" (fig.="" 1d,="" 1e="" and="" fig.="" s4).="" in="" org="" subjects,="" somemrp8-positive="" cells="" appeared="" in="" glomeruli="" and="" tubulointerstitium(fig.="" 1f="" and="" fig.="" s4).="" in="" dn="" subjects,="" a="" marked="" increase="" of="" mrp8-expressing="" cells="" in="" glomeruli="" and="" significant="" expansion="" of="" mrp8-positive="" areas="" in="" the="" tubulointerstitium="" were="" observed="" in="" a="" focal="" manner="" (fig.="" 1g="" and="" fig.="" s4).="" of="" note,="" mrp8-positive="" cells="" were="" absent="" in="" nodular="" sclerosing="" lesions="" of="" diabetic="" glomeruli="" (fig.="" s4:dn="" case="" 2,="" 3)="" as="" described="" previously="" for="" sclerotic="" lesions="" in="" anca-associated="" glomerulonephritis="" [20].="" paired="" immunohistochemistry="" for="" cd68="" and="" mrp8="" in="" serial="" sections="" suggested="" thatmrp8="" signals="" were,="" at="" least="" in="" part,="" observed="" in="" macrophages="" expressing="" cd68="" (fig.="" 2),="" as="" we="" reported="" in="" a="" mouse="" model="" of="" diabetic="" nephropathy="" [6].="" besides,="" focally="" injured="" atrophic="" tubular="" epithelial="" cells="" also="" strongly="" expressed="" mrp8,="" which="" were="" surrounded="" by="" mrp8(+)-,="" cd68(+)-positive="" macrophages="" (fig.="" 2,="" fig="" s4:="" dn="" case="" 3-5).="" in="" the="" cases="" with="" nephrotic="" range="" proteinuria,="" mrp8="" staining="" was="" also="" observed="" along="" brush="" borders="" of="" proximal="" tubules="" both="" in="" mcns="" and="" dn="" cases="" (fig.="" s4).="" since="" the="" sample="" number="" of="" mrna="" expression="" was="" too="" small="" for="" multivariate="" analysis,="" the="" following="" analyses="" were="" performed="" using="" data="" from="" patients="" studied="" by="">

Jadual 2. Ciri klinikal asas pesakit pada biopsi buah pinggang yang dianalisis untuk ekspresi mRNA MRP8 oleh RT-PCR masa nyata.

Persatuan antarabuah pinggangIsyarat MRP8 dan parameter klinikal asas pada masa biopsi buah pinggang dianalisis secara keratan rentas (Jadual 3). Dengan analisis univariat, ekspresi protein MRP8 glomerular dan/atau tubulointerstitial dikaitkan dengan umur, tekanan darah sistolik dan diastolik, protein kencing, tahap serum kreatinin, kolesterol BUN dan HDL, eGFR, dan tahap glomerulosklerosis global dan fibrosis tubulointerstitial. Parameter ini selanjutnya diperiksa oleh analisis multivariate selepas mengecualikan tekanan darah diastolik, eGFR dan BUN kerana kolineariti. Peratusan fibrosis tubulointerstitial dikaitkan secara bebas dengan isyarat glomerularMRP8 (b=0.62, P diselaraskan=0.02) dan isyarat tubulointerstitialMRP8 (b=0.85, P diselaraskan ,0.001), masing-masing. Selain itu, isyarat MRP8 tubulointerstitial juga dikaitkan secara bebas dengan proteinuria garis dasar (b=0.20, P dilaraskan=0.01).Analisis plot bertaburan antara isyarat MRP8 dalam glomeruli atau tubulointerstitium dan parameter klinikal menunjukkan bahawa MCNSgroup mempunyai corak pengedaran yang berbeza daripada kumpulan lain, terutamanya mengenai protein air kencing dan paras kolesterol LDL serum (Rajah S5A–D, S6A–D). Pengecualian kumpulan MCNS meningkatkan korelasi antara isyarat MRP8 dan protein kencing atau paras kolesterol LDL serum (Rajah S5E–F, S6E–F). Oleh itu, kami menjalankan sub-analisis tidak termasuk pesakit MCNS dan mendapati bahawa protein kencing adalah faktor bebas yang dikaitkan dengan isyarat glomerularMRP8 melalui analisis multivariate (Jadual 4; b=0.36, P diselaraskan=0.03 ).

Seterusnya, kami melakukan analisis regresi linear atau regresi logistik untuk mengenal pasti faktor penjelasan yang meramalkan hasil buah pinggang iaitu tahap proteinuria setahun kemudian dan kejadian buah pinggang dalam tempoh setahun. Memandangkan terdapat perkaitan yang baik antara isyarat MRP8 glomerular dan tubulointerstitial (Rajah S7; R=0.67,P,0.001), parameter ini secara alternatif didaftarkan dalam analisis lanjut . Kami menilai persatuan antara parameter asas dan protein kencing pada 1 tahun selepas biopsi buah pinggang dengan analisis regresi berganda. Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 5, isyarat MRP8 glomerular (b=0.59, P,0.001 diselaraskan) adalah faktor ramalan untuk tahap proteinuria setahun kemudian, serta tekanan darah sistolik asas (b {{13} }.21, P terlaras=0.04) dan proteinuria garis dasar(b=0.37, P=0.002 dilaraskan). Parameter ini adalah bebas daripada faktor risiko nefropati diabetik lain yang diketahui termasuk disfungsi buah pinggang (kreatinin serum) dan tahap sklerosis global dan fibrosis tubulointerstitial [11,21-24]. Sebaliknya, isyarat MRP8 tubulointerstitial (b=0.34, P dilaraskan=0.09) bukanlah faktor ramalan bebas untuk tahap protein kencing setahun kemudian. Kejadian buah pinggang berlaku dalam 7 pesakit (6 dalam DN dan 1 dalam kes ORG) dalam tempoh setahun selepas biopsi buah pinggang. Dengan analisis univariat, bukan sahaja tahap glomerulosklerosis dan fibrosis tubulointerstitial, dan isyarat MRP8 glomerular dan tubulointerstitial, tetapi juga tekanan darah, disfungsi buah pinggang, dan paras protein kencing pada peringkat awal adalah faktor ramalan yang penting untuk berlakunya kejadian buah pinggang. Walau bagaimanapun, dengan analisis multivariat, kovariat mereka telah dibatalkan oleh satu sama lain (Jadual S3 dalam Fail S1), mungkin disebabkan oleh korelasi yang tinggi antara parameter ini.

Akhirnya, kami mengkaji potensi MRP8 sebagai ligan endogen untuk TLR4 menggunakan makrofaj berbudaya. Dalam makrofaj yang berasal dari sumsum tulang daripada tikus jenis liar, regulasi gen sitokin proinflamasi yang disebabkan oleh protein MRP8 seperti IL-1b danTNFa dan juga mencetuskan auto aruhan MRP8, dalam cara yang bergantung kepada dos antara 1{{ 15}}–1000 ng/ml. Kesan MRP8 ini telah ditindas kira-kira dua pertiga dalam makrofaj yang diperoleh daripada tikus TLR4 KO (P,0.01) (Rajah 3).

Rajah 1. Analisis imunohistokimia dan mRNA untuk MRP8 dalambuah pinggangsampel biopsi. Kuantifikasi MRP glomerular{{0}}bilangan sel positif (A) dan kawasan positif MRP8-tubulointerstitial (B). Ekspresi mRNA MRP8 dalam pecahan glomerular dan bukan glomerular (C). Bar terbuka: kawalan bukan obes, bukan diabetes iaitu MGA atau MCNS, bar tertutup: ORG atau DN (A–C). Gambar perwakilan MGA, MCNS, ORG dan kumpulan DN (D–G). MGA: kelainan glomerular kecil, MCNS: sindrom nefrotik perubahan minimum, ORG: glomerulopati berkaitan obesiti, DN: nefropati diabetik. *P,0.01.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g001

Perbincangan

Kajian ini telah menunjukkan bahawa MRP8 banyak dinyatakan dalam glomeruli dan tubulointerstitium pesakit dengan DNas berbanding ORG dan kawalan bukan obes, bukan diabetes (MGA dan MCNS). Tambahan pula, dalam subjek ORG, tahap ekspresi MRP8 cenderung lebih tinggi daripada subjek MGA atau MCNS. Dalam penyiasatan keratan rentas asas termasuk semua subjek, melalui analisis regresi linear univariat, MRP glomerular8-kiraan sel positif dan MRP tubulointerstitial8-kawasan positif kedua-duanya, berkait bukan sahaja dengan pelbagai faktor risiko yang diketahui untuk nefropati diabetik (seperti tekanan darah sistolik, proteinuria, dan kreatinin serum) tetapi juga dengan tahap glomerulosklerosis dan fibrosis tubulointerstitial. Dengan analisis multivariat, kawasan positif MRP8-tubulointerstitial berkorelasi dengan ketara dengan proteinuria dan fibrosis tubulointerstitial. Kiraan sel positif MRP glomerular8-berkorelasi dengan ketara dengan fibrosis tubulointerstitial dalam analisis primer dan dengan proteinuria dalam sub-analisis tidak termasuk kumpulan MCNS. Imunohistokimia menunjukkan bahawa MRP8 telah dinyatakan, sekurang-kurangnya sebahagiannya, oleh makrofaj pengekspres CD68(tambah) dan tubul atropik. Penemuan ini menimbulkan kemungkinan bahawabuah pinggangIsyarat MRP8 dalam glomeruli atau tubulointerstitium boleh berfungsi sebagai penanda baru nefropati diabetik.

Rajah 2. Penyetempatan ekspresi protein CD68 dan MRP8 dalam bahagian bersiri kes nefropati diabetik. Ungkapan CD68(A, B) dan ekspresi MRP8 (C, D) dalam spesimen buah pinggang berpasangan (A dan C, atauB dan D). Anak panah menunjukkan kolokalisasi isyarat CD68 dan MRP8.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g002

Dalam kajian prognostik, analisis multivariate mendedahkan bahawa paras protein kencing pada setahun selepas biopsi buah pinggang dikaitkan secara bebas dengan kiraan sel positif MRP{0}}glomerular, protein kencing dan tekanan darah sistolik pada peringkat awal. Daripada perhatian, ungkapan MRP8 glomerular menunjukkan korelasi paling kuat dengan protein kencing setahun kemudian (b= 0.87), malah lebih kuat daripada protein kencing garis asas (b=0.78), melalui analisis univariat. Ini adalah sebahagiannya kerana ekspresi MRP8 glomerular tidak sebahagian besarnya dinaikkan dalam bentuk proteinuria 'jinak' seperti yang diperhatikan dalam pesakit MCNS, yang tahap proteinurianya sangat tinggi pada diagnosis melalui biopsi buah pinggang tetapi biasanya diselesaikan dalam tempoh setahun selepas memulakan terapi imunosupresif. Penemuan ini menunjukkan bahawa ekspresi MRP8 glomerular mungkin mempunyai sifat ramalan yang unik sebagai penanda penyakit, yang tidak boleh digantikan oleh proteinuria asas atau analisis patologi rutin yang menilai glomerulosklerosis global dan fibrosis tubulointerstitial. Selain itu, kami membuat spekulasi bahawa ekspresi MRP8 glomerular bukanlah penanda atau pemerhati mudah tetapi pemain aktif dalam kecederaan glomerular seperti yang dibincangkan di bawah.

Pekali penentuan (R2) yang dikira dengan parameter penjelasan yang didaftarkan dalam analisis regresi berbilang ialah 0.52* dan 0.74#, masing-masing. y, tahun; BP, tekanan darah; gCr, g kreatinin; T-chol, jumlah kolesterol; HDL-Chol, kolesterol HDL; LDL-chol, kolesterol LDL; GS, glomerulosklerosis; TI, tubulointerstitial.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t003

Jadual 4. Sub-analisis hubungan antara parameter klinikal garis dasar dan isyarat MRP8, selepas pengecualian kumpulan MCNS.

Jadual 5. Analisis regresi berbilang untuk mengenal pasti faktor yang meramalkan tahap protein kencing 1 tahun selepas biopsi buah pinggang

Rajah 3. Kesan MRP8 ke atas makrofaj yang berasal dari sumsum tulang. Makrofaj yang berasal dari sumsum tulang (BMDM) telah dirangsang dengan tetikus rekombinan MRP8 selama 4 jam. Bar ralat menunjukkan 95 peratus CI dan analisis statistik dilakukan dengan nilai diubah log. ANOVA dua hala mendedahkan kesan ketara genotip, kepekatan MRP8 dan interaksinya untuk ekspresi kesemua 3 gen (P,0.001 untuk semua perbandingan). n=4. WT, jenis liar; KO, kalah mati; IL-1b, interleukin 1 beta; TNFa, faktor nekrosis tumor-alfa. *P,0.01 antara kepekatan berbeza, #P,0.01 antara genotip.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g003

Dalam satu lagi percubaan kajian membujur, analisis regresi logistik gagal untuk mengetahui sebarang peramal bebas untuk berlakunya kejadian buah pinggang dalam tempoh setahun. Kami membuat spekulasi bahawa ini adalah sebahagiannya kerana ekspresi MRP8 tubulointerstitial dan fibrosis tubulointerstitial adalah dua peramal yang kuat untuk kejadian buah pinggang dalam analisis univariat tetapi kepentingannya telah dibatalkan oleh satu sama lain dalam analisis multivariate. Kedua-dua parameter ini menunjukkan korelasi yang kuat (R=0.68, P,0.001) (Gamb. S8), menunjukkan bahawa kedua-dua parameter ini mungkin bersamaan dengan meramalkan kejadian buah pinggang. Sesungguhnya, ekspresi MRP8 interstisial menunjukkan corak yang agak serupa dengan fibrosis interstisial yang dinilai oleh pewarnaan trichrome Masson. Kuantiti MRP8 interstisial sebahagian besarnya bergantung pada isyarat positif dalam tubul atropik dan bukannya dalam makrofaj, yang cirinya berbeza daripada MRP8 glomerular dalam taburan punctate. Tambahan pula, saiz sampel yang kecil, tempoh pemerhatian yang singkat, dan beberapa subjek yang mengalami kejadian buah pinggang mungkin telah mengurangkan kuasa pengesanan. Oleh kerana ekspresi MRP8 dalam sel epitelium tiub memainkan peranan penyebab dalam perkembangan keradangan tubulointerstitial dalam model tetikus fibrosis buah pinggang [7], analisis lanjut akan diperlukan untuk menjelaskan peranan MRP8 tubulointerstitial dalam DN.

Selaras dengan kajian terdahulu kami [6], mRNA MRP8 dikawal selia terutamanya dalam pecahan glomerular subjek DN manusia berbanding subjek kawalan dengan MGA. Sebaliknya, ekspresi protein MRP8 diperhatikan bukan sahaja dalam glomerulus tetapi juga dalam tubulointerstitium. Dalam hal ini, perlu diperhatikan bahawa terdapat dua corak pewarnaan MRP8 yang berbeza dalam tubulointerstitium DN. Satu adalah pewarnaan sengit dan fokus dalam tubul atropik yang teruk. Satu lagi adalah pewarnaan ringan yang diedarkan di sepanjang sempadan berus tubul proksimal, yang juga ditemui dalam ORG dan MCNS. Isyarat terakhir mungkin mewakili protein MRP8 yang diperoleh daripada darah dan diserap semula oleh tubul proksimal, yang tidak boleh disertai dengan peningkatan ekspresi mRNA MRP8. Mengenai protein selain daripada MRP8, kami dan yang lain baru-baru ini melaporkan fenomena serupa pengesanan protein imunoreaktif dalam tubul proksimal yang disebabkan oleh penyerapan semula tetapi bukan oleh sintesis buah pinggang [25,26]. Sebaliknya, oleh kerana sedikit pewarnaan MRP8 kekal dalam ujian penyerapan antibodi, terutamanya dalam lesi eksudatif glomerular dan parut teruk, lesi fibrotik di sekeliling tubul atropik, kehadiran isyarat tidak spesifik tidak boleh dinafikan sepenuhnya (Rajah S3).

Isyarat MRP8 glomerular terutamanya menunjukkan corak tanda baca dalam subjek DN (Rajah 1, Rajah S4). Oleh kerana kedua-dua CD68 dan MRP8 dikesan oleh antibodi monoklonal tetikus, penyetempatan molekul ini dinilai oleh bahagian bersiri, bukan dengan imunostaining berganda. Corak pewarnaan MRP8 adalah serasi dengan gangguan buah pinggang radang lain termasuk IgAnephritis [27], glomerulonephritis membranoproliferatif [14], dan glomerulonephritis berkaitan ANCA [20], di mana makrofaj dicadangkan sebagai sumber utama MRP8, seperti yang kami laporkan dalam model tikus [6]. Di samping itu, neutrofil boleh dianggap sebagai satu lagi sumber MRP8 yang mempengaruhi komplikasi vaskular [28]. Pada masa ini, kami sedang menyiasat mekanisme molekul mengapa MRP8 kebanyakannya dikawal dalam sel-sel keturunan myeloid yang menyusup glomeruli. Kajian in vitro mendedahkan bahawa MRP8 mendorong ekspresi sitokin radang dan juga mempotensikan ekspresi MRP8 itu sendiri dalam makrofaj dalam{18}cara bergantung kepada TLR. Selain itu, sel-sel positif MRP{19}}tidak terdapat dalam lesi sclerosing nodular, menunjukkan bahawa MRP8 glomerular mungkin mencerminkan kerosakan glomerular yang berterusan [20]. Yang penting, kajian manusia berskala terbesar melaporkan bahawa ekspresi gen MRP8 dalam sel mononuklear darah pesakit diabetes jenis 1 meningkat dengan ketara dalam subjek dengan komplikasi diabetes termasuk nefropati [29].

Oleh kerana perencatan sistem renin-angiotensin (RAS) adalah penentu penting hasil buah pinggang, kami mengkaji kesan RASblockade padabuah pinggangUngkapan MRP8. Kami mendapati tiada perbezaan ketara dalam ekspresi mRNA MRP8 buah pinggang antara pesakit DN yang dirawat dengan atau tanpa sekatan RAS (Rajah S9), mungkin kerana kes yang dirawat dengan sekatan RAS cenderung mempunyai hipertensi dan proteinuria yang lebih teruk berbanding kes tanpa sekatan RAS.

Pada manusia dan tikus yang gemuk, peningkatan plasma MRP8/14complex mungkin mencerminkan tahapobesitidan berasal daripada adiposit serta leukosit [8,9]. Kes ORG kami mempunyai pewarnaan ringan MRP8 dalam tubul proksimal, mencadangkan peningkatan tahap plasma MRP8. Sebaliknya, tidak terdapat korelasi yang signifikan antara ekspresi MRP8 tubulointerstitial dan indeks jisim badan (Rajah S6G). Oleh itu, ungkapan MRP8 tempatan dalambuah pinggangboleh berfungsi lebih baik sebagai penanda untuk kecederaan buah pinggang dan bukannya untukobesiti[8,9].

Cistanche untuk memperbaiki disfungsi buah pinggang

Kajian kami mempunyai beberapa batasan. Bilangan sampel setiap kumpulan yang dikaji adalah kecil. Subjek yang tidak serupa telah didaftarkan dalam mRNA dan analisis imunohistokimia. Oleh kerana kami hanya menganalisis pesakit yang menjalani biopsi buah pinggang, komposisi pesakit yang disiasat di sini mungkin tidak mencerminkan pesakit diabetes jenis 2 umum atau secara umum kronik.buah pinggangsubjek penyakit. Walaupun umur tidak dikekalkan sebagai faktor bebas yang dikaitkan dengan isyarat MRP8 dalam data kami (Jadual 3), diketahui bahawa penuaan dikaitkan dengan keradangan kronik [30]. Kesan usia tidak boleh diabaikan sepenuhnya. Walaupun kebanyakan isyarat MRP8 telah hilang dalam ujian penyerapan antibodi, terdapat beberapa isyarat positif yang tinggal, yang mungkin disebabkan oleh pengikatan bukan spesifik antibodi pertama. Seperti yang dibincangkan di atas, penyiasatan ekspresi MRP8 buah pinggang melalui biopsi buah pinggang membantu kita memahami patofisiologi dan prognosis penyakit buah pinggang kronik, terutamanya yang berkaitan denganobesitidan diabetes, tetapi mempunyai kelemahan untuk penggunaan rutin dan berulang di klinik pesakit luar

Ringkasnya, kajian ini mencadangkan bahawa ungkapan MRP8 dalambuah pinggangmencerminkan status patologi semasa dan juga meramalkan hasil buah pinggang pada pesakit denganobesitiataudiabetes jenis 2. Siasatan lanjut mengkaji tahap MRP8 kencing di kalangan pesakit obes atau diabetes secara besar-besaran mungkin diperlukan

maklumat sokongan

Rajah S1 Foto wakil menunjukkan bahagian biopsi buah pinggang pesakit DN yang diwarnai dengan (A) asid berkala Schiff, (B) perak methenamine asid berkala atau (C) Masson trichrome. Nisbah bilangan glomeruli dengan sklerosis global (anak panah) di antara jumlah glomeruli dan kawasan relatif fibrosis tubulointerstitial ialah 33 peratus dan 65 peratus, dalam pesakit ini. (TIFF)

Rajah S2 Imunohistokimia untuk protein MRP8 dan CD68 dalam pesakit DN. Foto di lajur kanan menunjukkan eksperimen kawalan negatif tanpa antibodi pertama. (TIF)

Rajah S3 Ujian penyerapan antibodi untuk pewarnaan MRP8.PBS: garam penimbal fosfat, rhMRP8: manusia rekombinanMRP8.(TIF)

Rajah S4 Foto wakil ekspresi MRP8 dalam kumpulan MGA, MCNS, ORG dan DN.(TIF)

Rajah S5 Korelasi antara bilangan sel positif8-glomerular MRP dan parameter klinikal. Nilai log-transformasi isyarat MRP8 telah digunakan. Korelasi dianalisis menggunakan kesemua 4 kumpulan (A–D, G) atau 3 kumpulan tidak termasuk kumpulan MCNS (E, F). Bulatan terbuka: kelainan glomerular kecil (MGA), bulatan tertutup: sindrom nefrotik perubahan minimum (MCNS), segitiga terbuka:obesiti-Glomerulopati yang berkaitan (ORG), segitiga tertutup: nefropati diabetik (DN).(TIF)

Rajah S6 Korelasi antara kawasan positif MRP8-tubulointerstitial dan parameter klinikal. Nilai log-transformasi isyarat MRP8 telah digunakan. Korelasi ini dianalisis menggunakan kesemua 4 kumpulan (A–D, G) atau 3 kumpulan tidak termasuk kumpulan MCNS (E, F).(TIF)

Rajah S7 Korelasi antara ekspresi MRP8 glomerular dan tubulointerstitial. Nilai diubah log bagi isyarat MRP8 telah digunakan.(TIF)

Rajah S8 Korelasi antara kawasan positif MRP8-tubulointerstitial dan fibrosis tubulointerstitial. Nilai diubah log bagi isyarat MRP8 telah digunakan.(TIF)

Rajah S9 Ekspresi mRNA buah pinggang MRP8 dalam pesakit DN dengan atau tanpa sekatan renin-angiotensin.NS: tidak ketara. n=15 (Ya), 6 (Tidak). Antara 22 kes DN, maklumat tentang ubat tidak tersedia dalam satu pesakit.(TIF)

Fail S1 Jadual Sokongan.

Jadual S1, Diagnosis patologi bagi semua kes yang menjalani biopsi buah pinggang di Jabatan Perubatan dan Sains Klinikal, Hospital Universiti Kyoto antara 2000 dan 2011. Jadual S2, Primer dan urutan siasatan untuk RT-PCR masa nyata TaqMan. Jadual S3, Analisis regresi logistik untuk kejadian kejadian buah pinggang dalam tempoh setahun. (DOC)PenghargaanKami amat berterima kasih kepada S. Tanaka atas nasihat statistik, Y. Ogawa, N.Igarashi, dan C. Kimura untuk bantuan teknikal, dan A. Yamamoto dan SOgino untuk bantuan setiausaha. Sumbangan PengarangMengandung dan mereka bentuk eksperimen: TK KM MK HY MI AN KNMM. Menjalankan eksperimen: TK HI AI KK TM YK MI AN. Menganalisis data: TK KM MK HY AS SY KU KN MM. Sumbangan reagen/bahan/alat analisis: TK KM. Menulis kertas: TK KMMM.

Kesan cistanche: merawat penyakit buah pinggang

Rujukan

1. Donath MY, Shoelson SE (2011) Diabetes jenis 2 sebagai penyakit radang.Nat Rev Immunol 11: 98–107.

2. Odink K, Cerletti N, Bruggen J, Clerc RG, Tarcsay L, et al. (1987) Dua protein pengikat kalsium dalam makrofaj yang menyusup bagi artritis reumatoid.Alam 330: 80–82.

3. Vogl T, Tenbrock K, Ludwig S, Leukert N, Ehrhardt C, et al. (2007) Mrp8 danMrp14 ialah pengaktif endogen bagi reseptor 4 seperti Tol, menggalakkan renjatan maut akibat endotoksin. Nat Med 13: 1042–1049.

4. Croce K, Gao H, Wang Y, Mooroka T, Sakuma M, et al. (2009) Protein berkaitan myeloid-8/14 adalah penting untuk tindak balas biologi kepada kecederaan vaskular. Peredaran 120: 427–436.

5. Loser K, Vogl T, Voskort M, Lueken A, Kupas V, et al. (2010) Reseptor seperti Tol 4 ligan Mrp8 dan Mrp14 adalah penting dalam pembangunan sel T CD8 plus autoreaktif. Nat Med 16: 713–717.

6. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H, et al. (2012) Keterukan nefropati diabetik oleh hiperlipidemia dimediasi oleh reseptor 4 seperti Toll pada tikus. Diabetologia 55: 2256–2266.

7. Fujiu K, Manabe I, Nagai R (2011) Sel epitelium saluran pengumpul buah pinggang mengawal keradangan dalam kerosakan tubulointerstitial pada tikus. J Clin Invest 121: 3425–3441.

8. Sekimoto R, Kishida K, Nakatsuji H, Nakagawa T, Funahashi T, et al. (2012) Tahap pengedaran tinggi kompleks S100A8/A9 (calprotectin) dalam lelaki Jepun dengan adipositi perut dan ekspresi tidak terkawal S100A8 dan S100A9 dalam tisu adipos tikus obes. Biochem Biophys Res Commun 419: 782–789.

9. Mortensen OH, Nielsen AR, Erikstrup C, Plomgaard P, Fischer CP, et al. (2009) Calprotectin—penanda novel bagiobesiti. PLoS One 4: e7419.

10. Matsuo S, Imai E, Horio M, Yasuda Y, Tomita K, et al. (2009) Persamaan yang disemak untuk anggaran GFR daripada kreatinin serum di Jepun. Am Jbuah pinggangDis53: 982–992.

11. JL Kasar, de Azevedo MJ, Silveiro SP, Canani LH, Caramori ML, et al. (2005)Nefropati diabetes: diagnosis, pencegahan dan rawatan. Penjagaan Diabetes 28:164–176.

12. Kambham N, Markowitz GS, Valeri AM, Lin J, D'Agati VD (2001)Obesiti-Glomerulopati yang berkaitan: wabak yang baru muncul.buah pinggangInt 59: 1498–1509.

13. Praga M, Morales E (2006)Obesiti, proteinuria, dan perkembangan kegagalan buah pinggang. Curr Opin Nephrol Hypertens 15: 481–486.

14. Kawasaki Y, Hosoya M, Takahashi A, Isome M, Tanji M, et al. (2005) Ekspresi protein 8 berkaitan myeloid pada makrofaj adalah penanda prognostik yang berguna untuk disfungsi buah pinggang pada kanak-kanak dengan jenis MPGN 1. Am Jbuah pinggangDis 45: 510–518.

15. Nishiyama A, Konishi Y, Ohashi N, Morikawa T, Urushihara M, et al. (2011)Angiotensinogen urin mencerminkan aktiviti sistem renin-angiotensin intrarenal pada pesakit dengan nefropati IgA. Pemindahan Dail Nephrol 26: 170–177.

16. Ogawa Y, Mukoyama M, Yokoi H, Kasahara M, Mori K, et al. (2012) Reseptor peptida natriuretik guanylyl cyclase-A melindungi podosit daripada kecederaan glomerular akibat aldosteron. J Am Soc Nephrol 23: 1198–1209.

17. Yokoi H, Mukoyama M, Mori K, Kasahara M, Suganami T, et al. (2008) Ekspresi berlebihan faktor pertumbuhan tisu penghubung dalam podosit memburukkan nefropati diabetik pada tikus.buah pinggangInt 73: 446–455.

18. Hoshino K, Takeuchi O, Kawai T, Sanjo H, Ogawa T, et al. (1999) Kelebihan: Tol-like receptor 4 (TLR4) -tikus kurang responsif kepada lipopolisakarida: bukti untuk TLR4 sebagai produk gen Lps. J Immunol162: 3749–3752.

19. Suganami T, Tanimoto-Koyama K, Nishida J, Itoh M, Yuan X, et al. (2007) Peranan laluan reseptor 4/NF-kappaB seperti Toll dalam perubahan keradangan yang disebabkan oleh asid lemak tepu dalam interaksi antara adiposit dan makrofaj. Arterioscler Thromb Vasc Biol 27: 84–91.

20. Lada RJ, Hamour S, Chavele KM, Todd SK, Rasmussen N, et al. (2013) Ekspresi leukosit dan serum S100A8/S100A9 mencerminkan aktiviti penyakit dalam vaskulitis dan glomerulonefritis yang berkaitan dengan ANCA.buah pinggangInt 83: 1150–1158.

21. Ravid M, Brosh D, Ravid-Safran D, Levy Z, Rachmani R (1998) Faktor risiko utama untuk nefropati dalam diabetes mellitus jenis 2 ialah paras kolesterol plasma, tekanan darah min, dan hiperglisemia. Arch Intern Med 158: 998–1004.

22. Adler AI, Stratton IM, Neil HA, Yudkin JS, Matthews DR, et al. (2000)Perkaitan tekanan darah sistolik dengan komplikasi makrovaskular dan mikrovaskular diabetes jenis 2 (UKPDS 36): kajian pemerhatian prospektif.BMJ 321: 412–419.

23. Ruggenenti P, Remuzzi G (1998) Nefropati jenis-2 diabetes mellitus. J Assoc Nephrol 9: 2157–2169.

24. Taft JL, Nolan CJ, Yeung SP, Hewitson TD, Martin FI (1994) Korelasi klinikal dan histologi penurunan fungsi buah pinggang dalam pesakit diabetes dengan proteinuria. Diabetes 43: 1046–1051.

25. Matsusaka T, Niimura F, Shimizu A, Pastan I, Saito A, et al. (2012) Liverangiotensinogen ialah sumber utama angiotensin II buah pinggang. J Am Soc Nephrol23: 1181–1189.

26. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H, et al. (2009) Tahap lipocalin yang berkaitan dengan gelatinase neutrofil kencing mencerminkan kerosakan pada glomeruli, tubul proksimal dan nefron distal.buah pinggangInt 75: 285–294.

27. Kawasaki Y, Suyama K, Go H, Imamura T, Ushijima Y, et al. (2009) Pengumpulan makrofaj yang menyatakan protein berkaitan myeloid 8 dikaitkan dengan perkembangan perubahan sklerotik pada kanak-kanak dengan nefropati IgA. Tohoku J Exp Med 218: 49–55.

28. Nagareddy PR, Murphy AJ, Stirzaker RA, Hu Y, Yu S, et al. (2013)Hyperglycemia menggalakkan myelopoiesis dan menjejaskan penyelesaian aterosklerosis. Metab Sel 17: 695–708.

29. Jin Y, Sharma A, Carey C, Hopkins D, Wang X, et al. (2013) Ekspresi Gen radang Dikawal dalam Darah Periferi Pesakit dengan Diabetes Jenis 1. Penjagaan Diabetes.

30. Longo VD, Finch CE (2003) Perubatan evolusi: dari sistem model kerdil kepada centenarians yang sihat? Sains 299: 1342–1346.

Petikan: Kuwabara T, Mori K, Kasahara M, Yokoi H, Imamaki H, et al. (2014) Kepentingan Ramalan bagibuah pinggangEkspresi Protein 8 Berkaitan Myeloid dalam Pesakit denganObesiti- atau Penyakit Buah Pinggang Berkaitan Diabetes Jenis 2. PLoS ONE 9(2): e88942. doi:10.1371/journal.pone.0088942

Editor: Utpal Sen, Universiti Louisville, Amerika Syarikat

Diterima pada 11 September 2013; Diterima 14 Januari 2014; Diterbitkan pada 18 Februari 2014

Hak Cipta: 2014 Kuwabara et al. Ini ialah artikel akses terbuka yang diedarkan di bawah syarat Lesen Atribusi Creative Commons, yang membenarkan penggunaan, pengedaran dan pengeluaran semula tanpa had dalam mana-mana medium, dengan syarat pengarang dan sumber asal dikreditkan.

Pembiayaan: Kerja ini disokong sebahagiannya oleh Geran Bantuan untuk Nefropati Diabetik dan Penyelidikan Nefrosklerosis daripada Kementerian Kesihatan, Buruh dan Kebajikan Jepun (kepada KM), geran penyelidikan daripada Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Sukan, Sains Jepun , dan Teknologi (kepada TK, KM dan MM), daripada Japan Foundation for Applied Enzymology (kepada TK) dan daripada Yayasan Penyelidikan Merokok (kepada MM). Pembiaya tidak mempunyai peranan dalam reka bentuk kajian, pengumpulan data, dan analisis, keputusan untuk menerbitkan, atau penyediaan manuskrip.

Minat Bersaing: Penulis telah mengisytiharkan bahawa tiada kepentingan bersaing wujud.

* E-mel: keyem@kuhp.kyoto-u.ac.jp