Phenylethanoid Glycosides Daripada Cistanche Tubulosa (Schenk) Wight: Kajian Komprehensif Terhadap Farmakologi, Mekanisme, Farmakokinetik Dan Keselamatan

Abstrak:Cistanche tubulosa (Schenk) Wight, tumbuhan parasit dari keluarga Orobanchaceae, diedarkan terutamanya di selatan Xinjiang, China, dan merupakan salah satu daripada dua sumber botani Cistanches Herba yang disenaraikan secara rasmi dalam Pharmacopoeia Cina. Ia telah lama dihormati sebagai ginseng padang pasir. Phenylethanoid glycosides (PhGs), yang diwakili oleh echinacoside (ECH), verbascoside/acteoside (ACT), isoacteoside (IAT), dan tubuloside A (TA), adalah juzuk bioaktif utamanya. Kajian ini secara sistematik meringkaskan komposisi kimia dan variasi kandungan PhG dalam C. tubulosa, pengekstrakan, pemisahan, dan strategi kawalan kualiti, tingkah laku farmakokinetik, dan aktiviti farmakologi dan mekanisme molekul yang dilaporkan setakat ini, termasuk neuroprotection dan peningkatan kognitif, kesan anti-penuaan dan antioksidan, anti-osteoporotik dan pengawalseliaan metabolik endokrin, modulasi endokrin dan metabolik. nefroproteksi, tindakan anti-radang dan imunomodulator, kesan julap dan peraturan mikrobiota usus, dan aktiviti anti-keletihan. Penemuan toksikologi, bukti klinikal, dan perkembangan translasi juga dibincangkan. Bukti semasa menunjukkan bahawa PhG daripada C. tubulosa bertindak ke atas berbilang sasaran dan laluan, antaranya paksi antioksidan Nrf2/HO-1, isyarat anti-fibrotik TGF-beta1/Smad, peraturan steroidogenik CYP450-3beta-HSD, perencatan inflammasom NLRP3, CK2 alpha-prime-prime fusion dan perencatan inflamasi-media mitokondria. yang melibatkan asid lemak rantaian pendek telah disiasat secara intensif. Ketersediaan hayati oral yang lemah (ketersediaan bio mutlak echinacoside dalam tikus adalah lebih kurang 0.83%) kekal sebagai penghalang utama kepada pembangunan dadah, dan bukti manusia yang berkualiti tinggi masih terhad. Kerja masa hadapan harus mengutamakan piawaian rujukan yang diselaraskan dan pelaporan dos, penjelasan metabolisme mikrob usus dan hubungan tindak balas pendedahan, sistem penyampaian yang meningkatkan pendedahan sistemik, dan ujian terkawal rawak yang direka dengan teliti.

ginseng padang pasir

Kata kunci: Cistanche tubulosa; glikosida fenilethanoid; echinacoside; verbascoside; farmakologi; mekanisme molekul; farmakokinetik; keselamatan

1. Pengenalan

Cistanche (Cistanches Herba) terdiri daripada herba parasit saka genus Cistanche (Orobanchaceae) yang tumbuh pada akar tumbuhan padang pasir seperti spesies Tamarix dan Haloxylon. Ia telah digunakan secara perubatan di China selama lebih daripada dua ribu tahun, berada di antara herba tonik yang paling kerap ditetapkan dalam preskripsi tradisional, dan kedua selepas ginseng dalam formula anti-penuaan, yang menjelaskan reputasinya sebagai ginseng padang pasir. Sejak edisi 2005, Chinese Pharmacopoeia telah menerima batang berair kering dengan daun bersisik kedua-dua Cistanche deserticola YC Ma dan Cistanche tubulosa (Schenk) Wight sebagai sumber botani rasmi Cistanches Herba, dan susunan ini dikekalkan pada edisi 2020 dan 2025.

C. tubulosa diedarkan terutamanya di sekitar Lembangan Tarim di selatan Xinjiang, dengan kawasan penanaman terbesar di Hotan dan Bayingolin, di mana ia memparasit spesies Tamarix. Berbanding dengan C. deserticola, C. tubulosa mengandungi paras glikosida phenylethanoid yang lebih tinggi, itulah sebabnya farmakope menetapkan had yang berbeza untuk kedua-dua sumber: dikira pada asas kering, kandungan gabungan echinacoside dan verbascoside mestilah tidak kurang daripada 0.30 peratus untuk C. deserticola tetapi tidak kurang daripada C. deserticola. Perbezaan ini telah menjadikan C. tubulosa sebagai bahan mentah utama untuk pengekstrakan dan pembangunan industri PhGs.

Phenylethanol glycoside adalah komponen aktif utama Cistanche tubulosa

Dalam perubatan tradisional Cina, Cistanches Herba berperisa manis dan masin serta bersifat hangat, bertindak pada meridian buah pinggang dan usus besar. Ia menguatkan buah pinggang yang, menyuburkan pati dan darah, dan melembapkan usus untuk melegakan sembelit, dan ditunjukkan untuk kekurangan buah pinggang yang, pati dan kekurangan darah, kelemahan bahagian bawah belakang dan lutut, dan sembelit usus kering. Kajian farmakologi moden telah menunjukkan bahawa Cistanche mengandungi glikosida phenylethanoid, iridoid, lignan, dan polisakarida, antaranya PhG adalah juzuk yang paling banyak dan paling banyak dikaji dan berfungsi sebagai sebatian penanda untuk pengenalpastian dan ujian dalam farmakope.

Oleh kerana genus terdedah kepada kekeliruan botani dan kerana spesies yang berbeza berbeza dengan ketara dalam komposisi kimia, ulasan ini menggunakan peraturan bukti berikut. Kajian yang dilakukan secara eksplisit dengan Cistanche tubulosa (Schenk) Wight dianggap sebagai bukti utama. Kajian mekanistik menggunakan PhG terpencil digunakan sebagai bukti sokongan, dengan sumber tumbuhan dan tahap bukti dinyatakan dengan jelas. Kajian menggunakan spesies Cistanche lain, seperti C. deserticola atau C. salsa, dipetik hanya untuk perbandingan dan tidak digunakan untuk menyokong tuntutan keberkesanan untuk C. tubulosa.

2. Asas Kimia

2.1 Ciri-ciri Struktur dan Konstituen Utama

Glikosida phenylethanoid dibina daripada tiga unsur: aglikon hidroksifenilethanol, glukosa pusat dengan gula tambahan seperti rhamnose, dan kumpulan caffeoyl atau kumarayl yang melekat pada bahagian gula melalui ikatan ester. Kepelbagaian struktur timbul daripada bilangan dan kedudukan kaitan unit gula, jenis dan kedudukan penggantian kumpulan asil, dan asetilasi. Kumpulan fenolik hidroksil dan caffeoyl menyediakan kapasiti pendermaan hidrogen dan pemindahan elektron tunggal yang kuat, yang mendasari aktiviti antioksidan kelas ini, manakala pelbagai sisa gula memberikan kekutuban dan berat molekul yang tinggi, yang seterusnya menentukan penyerapan oral yang lemah dan bioavailabiliti rendah yang diperhatikan dalam vivo.

Konstituen Kimia Utama Cistanche tubulosa

Echinacoside ialah PhG yang paling banyak dalam C. tubulosa dan biasanya menyumbang sebahagian besar daripada jumlah PhG, diikuti oleh isoacteoside, verbascoside, tubuloside A dan 2-prime-acetylacteoside. Kerja fitokimia awal mengasingkan tubulosida A hingga D, echinacoside, acteoside, isomer acteoside, dan 2-prime-acetylacteoside daripada seluruh tumbuhan C. tubulosa, mewujudkan asas struktur kelas ini. Pemprofilan berasaskan spektrometri jisim kromatografi cecair telah mengembangkan lagi spektrum PhG, dan kajian terbaru melaporkan bahawa hampir seratus glikosida phenylethanoid telah diasingkan dan dikenal pasti daripada spesies Cistanche.

Jadual 1. Glikosida fenilethanoid utama dilaporkan dalam Cistanche tubulosa

Nama biasa	nama Inggeris	Formula	Nota
Echinacoside	echinacoside (ECH)	C35H46O20	Trisaccharide dengan dua kumpulan caffeoyl; konstituen dominan dan penanda utama, dan subjek kebanyakan kerja mekanistik
Verbascoside	verbascoside / acteoside (ACT)	C29H36O15	Disakarida glukosa-rhamnose dengan satu kumpulan caffeoyl; penanda farmakope kedua dan antioksidan yang kuat
Isoacteoside	isoacteoside (IAT)	Tidak ditugaskan	Isomer kedudukan acteoside; hadir pada paras yang ketara dalam jumlah ekstrak glikosida piawai
Tubuloside A	tubuloside A (TA)	Tidak ditugaskan	Satu juzuk ciri C. tubulosa; aktif dalam ujian rembesan hormon pertumbuhan
2-prima-Acetylacteoside	2-prime-acetylacteoside	Tidak ditugaskan	Terbitan asetilasi; asetilasi boleh mengubah lipofilisiti dan kestabilan metabolik
Tubulosida B, C, D	tubuloside B/C/D	Tidak ditugaskan	Diasingkan dalam kerja fitokimia awal; data kuantitatif adalah terhad
Cistanosides	cistanoside AF dan lain-lain	Tidak ditugaskan	Diedarkan secara meluas dalam genus dan juga dilaporkan dalam C. tubulosa

Nota: Formula diberikan hanya apabila ditetapkan secara rasmi; entri yang ditanda tidak ditetapkan menunjukkan bahawa tiada formula yang boleh dipercayai tersedia dalam sumber yang boleh disahkan dan tiada yang disimpulkan di sini.

2.2 Tahap Kandungan dan Faktor Yang Mempengaruhi

Kandungan PhG C. tubulosa sangat sensitif terhadap germplasma, asal geografi, tumbuhan perumah, masa menuai, bahagian dan pemprosesan ubat, dan magnitud variasi adalah jauh lebih besar daripada kebanyakan tumbuhan ubatan. Analisis ke atas tujuh capaian plasma nutfah C. tubulosa melaporkan kandungan echinacoside antara 21.09 hingga 50.86 peratus dan kandungan verbascoside dari 2.08 hingga 3.28 peratus, dengan perbezaan ketara dalam berat kering tumbuhan tunggal dan kadar percambahan benih juga. Penemuan ini mencadangkan bahawa pembiakan dan penggredan bahan mentah mungkin lebih menentukan untuk bekalan PhG daripada sekadar menukar kawasan pengeluaran.

Pemprosesan juga banyak mengubah komposisi yang jelas. Dalam satu kajian perbandingan, serbuk C. tubulosa mengandungi 19.81 tambah atau tolak 0.66 peratus echinacoside dan 2.45 tambah atau tolak 0.12 peratus verbascoside, manakala rebusan yang sepadan mengandungi hanya 5.90 tambah atau tolak 0.12 peratus dan 0.54 tambah atau tolak 0.54 peratus bagi pemulihan tradisional, yang masing-masing menunjukkan pemulihan 0.54 peratus atau tolak 0. rebusan sangat bergantung pada keadaan pengekstrakan dan kepekatan. Pada tahap ekstrak piawai, jumlah penyediaan glikosida TGCT yang digunakan dalam kajian diabetes dikira oleh HPLC-DAD sebagai mengandungi 500.19 tambah atau tolak 11.52 mg/g echinacoside, 19.13 tambah atau tolak 1.44 mg/g verbascoside dan 141.82 tambah atau tolak/5. perbezaan tertib magnitud antara ekstrak dan dadah mentah.

Jadual 2. Data perwakilan tentang kandungan PhG dan komposisi Cistanche tubulosa

juzuk	kandungan	Bahan dan rawatan	Kaedah dan nota
Echinacoside	21.09-50.86 peratus	Tujuh aksesi plasma nutfah, dikeringkan	HPLC; saringan plasma nutfah mencerminkan variasi antara aksesi
Verbascoside	2.08-3.28 peratus	Tujuh aksesi plasma nutfah, dikeringkan	HPLC; tiada data serentak pada bahagian tumbuhan atau bulan penuaian
Echinacoside	19.81 tambah atau tolak 0.66 peratus	C. serbuk tubulosa	HPLC; sumber botani, perumah, dan masa penuaian dilaporkan tidak lengkap
Verbascoside	2.45 tambah atau tolak 0.12 peratus	C. serbuk tubulosa	HPLC
Echinacoside	5.90 tambah atau tolak 0.12 peratus	Merebus serbuk C. tubulosa	HPLC; pemulihan sangat dipengaruhi oleh keadaan pengekstrakan
Verbascoside	0.54 tambah atau tolak 0.05 peratus	Merebus serbuk C. tubulosa	HPLC
ECH/ACT/IAT dalam TGCT	500.19 / 19.13 / 141.82 mg/g	Jumlah ekstrak glikosida TGCT	Kuantifikasi HPLC-DAD dengan pencirian HPLC-Q-TOF-MS
Had farmakope	ECH tambah ACT tidak kurang daripada 1.5 peratus	Kering C. tubulosa	HPLC pada 330 nm; plat teori tidak kurang daripada 3000 untuk puncak echinacoside

Data ini mempunyai tiga implikasi langsung. Pertama, kenyataan umum seperti C. tubulosa secara semula jadi mengandungi kira-kira satu hingga tiga peratus PhGs tidak mewakili plasma nutfah hasil tinggi dan tidak boleh berfungsi sebagai sasaran untuk reka bentuk produk. Kedua, minimum farmakope ialah lantai berkualiti yang bertujuan untuk mengecualikan bahan yang lebih rendah atau tercemar, bukan panduan kepada dos optimum. Ketiga, tiada faktor penukaran tetap wujud antara ubat mentah, ekstrak dan kompaun tunggal, jadi sebarang pengiraan dos mestilah berdasarkan kandungan terukur kumpulan sebenar dan mesti melaporkan jisim ekstrak, kandungan penanda dan toleransi kelompok ke kelompok yang dibenarkan.

2.3 Pengekstrakan, Pengasingan dan Pengayaan

Teknologi pengekstrakan untuk PhGs sedang beralih daripada memaksimumkan hasil ke arah mengawal komposisi sasaran. Pengekstrakan refluks haba konvensional adalah mudah dan berskala, dengan keadaan optimum untuk C. tubulosa PhGs sebanyak dua puluh jilid empat puluh peratus etanol, satu pengekstrakan selama dua jam. Pengekstrakan berbantukan ultrabunyi mengeksploitasi peronggaan untuk mencapai kecekapan tinggi pada suhu yang lebih rendah: untuk bahan potong segar, enam puluh peratus metanol pada empat puluh darjah Celsius selama tiga puluh minit memberikan pemulihan yang memuaskan, dan pengukusan singkat selama lima hingga tujuh minit sebelum sonikasi meningkatkan lagi kedua-dua kandungan dan aktiviti antioksidan. Pengekstrakan tekanan hidrostatik tinggi mengganggu struktur sel pada suhu ambien atau bahkan rendah dan oleh itu membantu mengekalkan juzuk termolabile.

Pelarut hijau mewakili arah penting terkini. Pelarut eutektik dalam semulajadi (NADES), yang terdiri daripada garam kolin, poliol, dan asid organik asal semula jadi, mempunyai ketoksikan yang rendah dan boleh terbiodegradasi. Menggunakan sistem kolin klorida-propilena glikol (nisbah molar 1:3, tiga puluh peratus air) dalam keadaan nisbah pepejal-ke-cecair 1:24, dua puluh minit sonication, dan empat puluh lapan darjah Celsius, hasil pengekstrakan echinacoside dan verbascoside adalah 1.97 hingga 3.98 kali ganda pelarut konvensional.

Resin penjerapan makroporous ialah teknik pengayaan arus perdana, menumpukan juzuk sasaran secara selektif melalui penjerapan-desorpsi sambil kekal mudah untuk ditingkatkan. Verbascoside menunjukkan pertalian yang lebih tinggi daripada echinacoside untuk resin HPD300; elusi dengan etanol lima puluh peratus meningkatkan kandungan echinacoside dan verbascoside masing-masing sebanyak 9.31 dan 10.61 kali ganda, memberikan jumlah pecahan jisim PhG sebanyak 76.58 peratus. Resin AB-8 dan D101 juga biasa digunakan untuk menyediakan jumlah pecahan glikosida daripada C. tubulosa. Pemisahan halus sebatian tunggal bergantung pada kromatografi cecair persediaan, dan perlu diperhatikan bahawa kumpulan hidroksil fenolik PhGs yang banyak menyebabkannya terdedah kepada penjerapan tidak boleh balik pada gel silika konvensional atau lajur Sephadex, mengurangkan pemulihan.

Yang penting, penilaian proses harus beralih daripada penunjuk hasil tunggal kepada rangka kerja komposit komposisi sasaran, pemulihan dan kestabilan kelompok-ke-kelompok, dengan keseimbangan jisim serentak menyumbang echinacoside, verbascoside, isoacteoside dan tubuloside A. Di samping itu, residu selepas pengekstrakan akueus mengekalkan sejumlah PhGs dan nilai sisa antioksida yang tertentu, tetapi ini sepatutnya tidak menggunakan semula aktiviti antioksida, tetapi ini seharusnya tidak menggunakan semula aktiviti antioksidan. aktif: dalam perbandingan sebelas kelompok ubat mentah, ekstrak akueus dan sisa, ubat dan ekstrak mentah menunjukkan aktiviti antioksidan yang setanding manakala sisa adalah yang paling lemah.

Eksperimen cistanche tubulosa

3. Farmakokinetik dan In Vivo Fate

3.1 Penyerapan dan Ketersediaan Bio

Penyerapan oral yang lemah adalah had farmakokinetik PhG yang paling menonjol. Selepas pemberian oral echinacoside pada 100 mg/kg pada tikus, masa untuk kepekatan maksimum adalah kira-kira lima belas minit; kepekatan maksimum ialah 612.2 tambah atau tolak 320.4 ng/mL, separuh hayat adalah kira-kira 74.4 minit; data dipasang model satu petak; dan bioavailabiliti mutlak hanya kira-kira 0.83 peratus. Dalam tikus oklusi arteri serebrum tengah yang diberi 50 mg/kg secara lisan, kepekatan plasma antara lima dan seratus dua puluh minit adalah antara 29.83 ng/mL hingga di bawah had pengesanan, menunjukkan pendedahan keseluruhan yang rendah dan penyingkiran pantas. Dalam model Parkinson, pemberian oral 20 mg/kg memberikan separuh hayat 73.9 minit dan kepekatan maksimum 403.6 tambah atau tolak 52.3 ng/mL, berbanding dengan 121.6 minit dan 365.2 tambah atau tolak 46.4 ng/mL dalam tikus normal, menunjukkan bahawa keadaan farmakokintik boleh mengubah tingkah laku. Pada peringkat selular, monolayers Caco-2 menunjukkan pekali kebolehtelapan jelas hampir kepada sifar atau pada susunan sepuluh hingga tolak tujuh cm/s, dengan pengambilan hampir sifar pada sembilan puluh minit, membayangkan penyebaran transselular pasif yang sangat terhad. Satu kajian melaporkan bahawa selepas sukarelawan yang sihat mengambil tablet echinacoside yang dihasilkan daripada ekstrak Echinacea, echinacoside yang tidak berubah tidak dapat dikenal pasti dalam mana-mana sampel plasma pada bila-bila masa.

3.2 Metabolisme oleh Mikrobiota Usus

Mikrobiota usus adalah penentu utama nasib in vivo PhG yang diberikan secara lisan. Selepas pentadbiran intragastrik jumlah PhG pada 3 g/kg pada tikus, kandungan relatif echinacoside dalam kandungan usus jatuh daripada 48 kepada 16 peratus, dengan sebahagian daripadanya ditukar kepada acteoside. Acteoside, decaffeoylacteoside, lugrandoside, dan 3,4-dihydroxyphenylethanol telah dikesan dalam najis, menunjukkan deglycosylation dan decaffeoylation sebagai laluan metabolik utama. Oleh kerana metabolit ini lebih kecil dan kurang polar, ia secara teorinya diserap dengan lebih baik, supaya sebatian induk dan metabolit bersama-sama membentuk pendedahan sistemik sebenar.

3.3 Taburan Tisu dan Hipotesis Prodrug

Bukti semakan mencadangkan pengedaran PhG yang agak tinggi ke hati dan buah pinggang, selaras dengan peranannya dalam metabolisme dan perkumuhan. Lebih banyak dipertikaikan ialah pendedahan otak: beberapa kajian memerhatikan kesan perlindungan pusat yang jelas walaupun pendedahan rendah kepada sebatian induk, menghasilkan paradoks ketara bioavailabiliti rendah dengan keberkesanan yang tinggi. Tiga penjelasan adalah munasabah: sejumlah kecil kompaun induk yang sampai ke otak mungkin mencukupi untuk bertindak pada sasaran pertalian tinggi; metabolit boleh menyumbang sebahagian daripada pendedahan sistemik dan melintasi penghalang darah-otak; atau kesan distal tidak langsung mungkin timbul melalui paksi mikrobiota-metabolit-imun atau saraf usus. Belum ada kajian yang mengukur pendedahan induk dan metabolit utama, kepekatan otak yang tidak terikat, dan penghunian sasaran secara serentak, jadi penjelasan ini kekal sebagai hipotesis dan memerlukan pengesanan isotop dan pemodelan tindak balas pendedahan.

Ekstrak cistanche tubulosa

Klik di sini untuk melihat Serbuk Tambahan Asli Ekstrak Cistanche Tubulosa

【Minta lebih lanjut】 E-mel:cindy.xue@wecistanche.com / WhatsApp: 0086 18599088692 / WeChat: 18599088692

3.4 Strategi untuk Meningkatkan Ketersediaan Bio

Pendekatan yang rasional adalah untuk meningkatkan kestabilan dan pengangkutan membran daripada hanya meningkatkan dos yang diberikan. Strategi calon termasuk nanoemulsion, nanopartikel lipid pepejal, liposom, kompleks fosfolipid, kemasukan siklodekstrin, reka bentuk aglikon atau prodrug, dan penghantaran sasaran enterik atau kolon. Perlu ditekankan bahawa kajian yang hanya meningkatkan kawasan puncak sebatian sasaran dalam cap jari kromatografi, tanpa mengukur pendedahan in vivo, tidak boleh menuntut untuk meningkatkan bioavailabiliti; sama, menunjukkan bahawa metabolit mempunyai aktiviti antioksidan tanpa pengesahan in situ dalam mikrobiota usus tidak membuktikan bahawa metabolit adalah pemacu utama kesan keseluruhan.

Jadual 3. Titik akhir minimum disyorkan untuk menilai strategi penyampaian

Tahap penilaian	Titik akhir minimum yang disyorkan
Pelepasan dan resapan in vitro	Kebolehtelapan jelas dalam lapisan tunggal Caco-2, rintangan elektrik transepithelial, nisbah pengangkutan dua arah
Farmakokinetik in vivo	AUC0-t, Cmax, separuh hayat, bioavailabiliti mutlak, nisbah kepekatan otak-ke-plasma
Pendedahan-tindak balas	Hubungan sepadan masa antara penanda farmakodinamik dan AUC kompaun induk dan metabolit utama
Keselamatan	Dos yang boleh diterima maksimum, ketoksikan organ, hemolisis, kesan buruk imun dan endokrin

4. Aktiviti dan Mekanisme Farmakologi

4.1 Neuroprotection dan Peningkatan Kognitif

4.1.1 Model penyakit Alzheimer dan paksi usus-otak

Dalam kajian yang diterbitkan pada tahun 2025, tikus transgenik berganda APP/PS1 enam bulan menerima jumlah glikosida C. tubulosa (GCT) secara lisan pada tiga dos, atau donepezil sebagai kawalan positif, selama enam puluh hari. Fungsi kognitif dinilai dengan maze air Morris, mikrobiota usus diprofilkan oleh penjujukan rRNA 16S, dan metabolom serum dan otak dianalisis oleh metabolomik yang disasarkan, membolehkan kuantiti serentak 306 metabolit. Kumpulan dos tinggi (400 mg/kg sehari) memendekkan kependaman melarikan diri dengan ketara pada hari kelima dan meningkatkan masa dalam kuadran sasaran dan lintasan platform, sambil mengurangkan amiloid beta 1-40 dan 1-42 larut dan tidak larut serta faktor pro-radang dalam hippocampus. Analisis multi-omics mendedahkan bahawa dari hari ketujuh campur tangan, GCT dengan pantas memperkaya taksonomi berfaedah seperti Akkermansia dan menindas pengembangan abnormal Firmicutes, yang membawa kepada peningkatan asid lemak rantai pendek neuroprotektif seperti beta-hydroxybutyrate dan menurunkan asid lemak rantai panjang pro-radang dalam kedua-dua serum dan otak. Eksperimen in vitro selanjutnya menunjukkan bahawa GCT secara langsung mempromosikan percambahan Akkermansia muciniphila.

Kepentingan kerja ini terletak pada menyediakan laluan yang boleh diuji, paksi metabolisme-neuroinflammation-neuroinflammation usus mikrobiota-asid lemak, yang melaluinya fitokimia yang tidak tersedia secara biologi boleh bertindak. Hadnya adalah sama jelas: jumlah pecahan glikosida dan bukannya sebatian tunggal telah digunakan, jadi kesannya tidak boleh dikaitkan dengan mana-mana satu juzuk; persatuan mikrobiota dan metabolisme tidak mewujudkan arah sebab akibat; enam minggu campur tangan tidak dapat mewujudkan pengubahsuaian penyakit jangka panjang; dan data farmakokinetik yang menghubungkan haiwan kepada manusia adalah kurang. Sehubungan itu, usaha translasi harus menumpukan pada ujian kausaliti menggunakan tikus bebas kuman, pengurangan antibiotik, monokolonisasi dan campur tangan metabolit, dan bukannya mendakwa bahawa C. tubulosa boleh merawat penyakit Alzheimer.

4.1.2 Model penyakit Parkinson dan faktor neurotropik

Dalam model tetikus MPTP subakut, echinacoside oral pada 30 mg/kg sehari selama empat belas hari, bermula selepas sistem nigrostriatal telah rosak, memulihkan neuron dopaminergik nigral, gentian striatal, kandungan dopamin, dan pengangkut dopamin kepada 134.24, 203.17, 1727 peratus daripada nilai nilai. Haiwan berlesi MPTP, masing-masing. Ekspresi RNA Messenger bagi faktor neurotropik (GDNF) yang berasal dari sel glial dan faktor neurotropik yang berasal dari otak (BDNF) meningkat 2.94- dan 3.75 kali ganda, dan tahap protein meningkat kepada 184.34 dan 185.93 peratus. Apoptosis dan peningkatan nisbah Bax/Bcl-2 telah dihalang dengan ketara, dan gangguan gaya berjalan bertambah baik dengan ketara pada hari tujuh dan empat belas. Kerja ini meletakkan echinacoside sebagai inducer bukan peptida aktif secara lisan bagi faktor neurotropik dan perencat apoptosis.

Kajian seterusnya menambah mekanisme anti-radang dan anti-piroptotik. Dalam model MPTP, echinacoside menghalang pengaktifan mikroglial dan astrocytic, menurunkan kawalan IBA-1, caspase-3 terbelah, dan TNF-alpha, GDNF terkawal dan menurunkan serum TNF-alpha dan gamma interferon. Satu lagi kajian melaporkan perlindungan neuron dopaminergik melalui perencatan laluan isyarat NLRP3/Caspase-1/IL-1beta. Perlu diingatkan bahawa dalam beberapa kajian awal, echinacoside yang digunakan diperoleh daripada spesies Cistanche lain atau sumber botani tidak dinyatakan, jadi berhati-hati diperlukan apabila memindahkan kesimpulan tersebut kepada C. tubulosa.

Herba Cina cistanche-Anti penyakit Parkinson

4.1.3 Iskemia serebrum, demensia vaskular dan pengenalan sasaran langsung

Pada peringkat sasaran, kumpulan penyelidikan di Universiti Peking menggunakan echinacoside sebagai probe molekul untuk memancing sasaran dan mengenal pasti subunit alfa-prima pemangkin kasein kinase 2 (CK2 alpha-prime) sebagai protein sasaran langsung yang mendasari perlindungannya terhadap kecederaan neuron iskemia. Secara mekanikal, echinacoside secara khusus mengubah suai lisin 171 alfa-prima CK2, mendorong perubahan konformasi, mengaktifkan isyarat Wnt, dan menggalakkan gabungan mitokondria dengan cara yang bebas daripada aktiviti kinase konvensional CK2, dengan itu melemahkan kecederaan reperfusi iskemia serebrum. Kerja ini juga menyediakan sasaran baharu untuk penemuan ubat dalam strok iskemia dan demensia vaskular.

Dari segi terjemahan, kapsul Congrong Zonggan, yang pecahan aktif utamanya ialah Cistanche PhGs, telah diluluskan pada 2005 untuk demensia vaskular ringan hingga sederhana, dan echinacoside sebagai ubat baharu kelas 1 menerima kelulusan percubaan klinikal pada 2017 dan telah menyelesaikan percubaan fasa I menurut laporan awam. Perkembangan ini menunjukkan bahawa C. tubulosa PhGs telah beralih daripada ubat mentah tradisional ke arah pembangunan ubat moden, walaupun bukti fasa II dan III masih diperlukan untuk menentukan kedudukan terapeutik mereka.

4.1.4 Aktiviti seperti antidepresan, pembelajaran dan ingatan

Pemberian rebusan Cistanche intragastrik setiap hari selama dua puluh satu hari telah mengurangkan masa imobilitas dengan ketara dalam ujian penggantungan ekor dan meningkatkan pembelajaran dan ingatan spatial dalam labirin air Morris dalam tikus yang ditekankan, disertai dengan aktiviti monoamine oksidase otak yang dikurangkan, peningkatan kepekatan dopamin otak, dan mengurangkan kortikosteron serum. Kajian yang sama mengkuantifikasi echinacoside dan verbascoside dalam kedua-dua serbuk dan rebusan C. tubulosa, menyediakan data asas untuk surat-menyurat komposisi dos.

4.2 Anti-penuaan, Antioksidan dan Perlindungan Mitokondria

Dalam Caenorhabditis elegans, echinacoside memanjangkan jangka hayat cacing jenis liar dan meningkatkan toleransi terhadap kejutan haba dan tekanan oksidatif tanpa menjejaskan kadar pengepaman faring atau pengeluaran keturunan, menunjukkan bahawa kesan jangka hayat bukanlah akibat daripada sekatan diet atau penindasan pembiakan. Secara mekanikal, echinacoside meningkatkan tahap transkrip daf-16 dan memodulasi penyetempatan nuklear dan aktiviti transkrip daf-16, dengan itu memperhalusi ekspresi gen sasarannya. daf-16 ialah ortolog nematod bagi faktor transkripsi forkhead FOXO, pengesan hiliran bagi laluan isyarat insulin/IGF-1 yang sangat dipelihara daripada cacing kepada mamalia dalam pengawalan jangka hayat dan tindak balas tekanan.

Dalam model mamalia, kesan antioksidan PhG dimanifestasikan terutamanya sebagai peningkatan aktiviti superoksida dismutase dan glutation peroksidase bersama-sama dengan malondialdehid dan spesies oksigen reaktif yang dikurangkan, dengan peraturan huluan yang melibatkan laluan Nrf2/HO-1. Dalam kecederaan hati yang disebabkan oleh etanol, echinacoside melemahkan tekanan oksidatif dan apoptosis hepatosit dengan meningkatkan aktiviti Nrf2. Di peringkat mitokondria, sebagai tambahan kepada promosi gabungan mitokondria CK2 alpha-prime/Wnt-mediated yang diterangkan di atas, kerja baru-baru ini menunjukkan bahawa echinacoside meningkatkan fungsi mitokondria dan homeostasis selular dalam oosit tua melalui laluan GJA1/SIRT1. Secara keseluruhan, bukti anti-penuaan agak lengkap dalam organisma model tetapi kekal berdasarkan titik akhir pengganti dalam mamalia.

Faedah Cistanche tubulosa: menghalang ekspresi tyrosinase

4.3 Aktiviti Anti-osteoporotik dan Pembentukan Tulang

In vitro, echinacoside yang diasingkan daripada batang C. tubulosa meningkatkan pertumbuhan semula tulang dalam sel osteoblastik MC3T3-E1. Dalam vivo, tikus yang diovariectomized menerima echinacoside oral pada 30, 90, atau 270 mg/kg sehari selama dua belas minggu. Semua kumpulan dos dengan ketara membalikkan peningkatan berat badan akibat ovariektomi dan hidroksiprolin serum dan penurunan berat basah rahim dan ketumpatan mineral tulang, dan membetulkan sepenuhnya perkumuhan kalsium, fosforus tak organik dan hidroksiprolin melalui air kencing. Tomografi pengiraan mikro femur distal menunjukkan kualiti tulang yang lebih baik, dan jumlah ketumpatan mineral tulang femoral dan kekuatan biomekanik tibial meningkat dengan ketara selepas dua belas minggu. Penemuan histologi menunjukkan kedua-dua promosi pembentukan tulang dan penindasan penyerapan tulang, dan imunohistokimia menunjukkan ekspresi reseptor estrogen rahim yang dipertingkatkan. Atas dasar ini, echinacoside dicadangkan sebagai kelas baru fitoestrogen yang berpotensi untuk menguruskan osteoporosis selepas menopaus yang disebabkan oleh kekurangan estrogen. Perlu diingatkan bahawa ekspresi reseptor estrogen rahim yang dikawal selia juga memerlukan perhatian kepada kesan endometrium jangka panjang yang berpotensi.

4.4 Pengawalseliaan Metabolisme Glukosa dan Lipid

Dalam model diabetes jenis 2 yang disebabkan oleh diet tinggi lemak, tinggi sukrosa digabungkan dengan streptozotocin pada 30 mg/kg, jumlah glikosida C. tubulosa (TGCT) diberikan secara lisan pada 50, 100, atau 200 mg/kg sehari, atau metformin pada 200 mg/kg, selama enam minggu. Pada 200 mg/kg sehari, TGCT membalikkan penurunan berat badan sebanyak 11.1 peratus dan mengurangkan glukosa plasma puasa sebanyak 56.4 peratus dan hemoglobin terglikasi sebanyak 37.4 peratus. Kandungan glikogen meningkat sebanyak 40.8 peratus dalam hati dan 52.6 peratus dalam otot, dan toleransi glukosa oral, kawasan di bawah lengkung glukosa, dan sensitiviti insulin bertambah baik. Profil lipid serum, aktiviti enzim antioksidan, dan penanda keradangan bertambah baik secara selari, dan histologi pankreas dipelihara dengan lebih baik. Secara mekanikal, perubahan dalam fosforilasi protein kinase B dan glikogen sintase kinase 3 beta dan dalam aktiviti heksokinase dan piruvat kinase telah dikesan, mencadangkan penglibatan metabolisme glikogen berkaitan PI3K/Akt dan GSK3 beta, dengan tindakan antioksidan dan anti-radang sebagai asas biasa.

Oleh kerana TGCT mengandungi 500.19 mg/g echinacoside, 141.82 mg/g isoacteoside, dan 19.13 mg/g verbascoside, adalah munasabah untuk menganggap jumlah glikosida sebagai sumber utama pendedahan kimia, tetapi keseluruhan kesan tidak boleh dikaitkan dengan echinacoside, dan sumbangan isoacteoside tidak boleh diabaikan. Selain itu, peningkatan metabolik dalam model diabetes mewakili peraturan metabolik dan bukannya menunjukkan keberkesanan penurun glukosa klinikal.

4.5 Modulasi Pembiakan dan Endokrin

Kesan cistanche-meningkatkan fungsi buah pinggang

Dalam model tikus kecederaan pembiakan yang disebabkan oleh hidrokortison, phenylethanol glycosides C. tubulosa (CPhGs) diberikan secara intragastrik pada 72, 145, atau 289 mg/kg selama empat belas hari, dengan testosteron propionat sebagai kawalan positif. Dos rendah 72 mg/kg tidak menghasilkan perlindungan yang ketara, manakala 145 mg/kg meningkatkan kapasiti pembiakan terjejas dan penurunan tahap hormon lutein dan testosteron. Dos yang tinggi iaitu 289 mg/kg adalah paling berkesan: ia meningkatkan berat badan, memendekkan tempoh inkubasi ereksi, penangkapan, dan ejakulasi, meningkatkan bilangan tangkapan dan ejakulasi, meningkatkan berat testis, epididimis, vesikel mani dan zakar, dan mengawal serum luteinizing hormon dan testosteron bersama-sama dengan testis ARV steroidogenik pengawal selia. enzim (CYP11A1), dan 3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase (3 beta-HSD). Penemuan ini menyokong kesimpulan bahawa CPhG menggalakkan steroidogenesis testis melalui laluan beta-HSD CYP450-3 dan dengan itu meningkatkan fungsi pembiakan lelaki.

Berkenaan dengan paksi hormon pertumbuhan, echinacoside, tubuloside A dan acteoside telah dikesan dalam ekstrak akueus C. tubulosa dan diuji dalam sel pituitari tikus. Echinacoside pada kepekatan di atas sepuluh hingga tolak enam molar secara ketara merangsang rembesan hormon pertumbuhan, dengan pergantungan dos diperhatikan dalam julat sepuluh hingga tolak lapan hingga sepuluh hingga tolak lima molar pada kedua-dua lima belas dan tiga puluh minit. Kesannya telah dihalang oleh [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11]-bahan P, agonis songsang reseptor secretagogue hormon pertumbuhan GHS-R1a, dan dok molekul menunjukkan bahawa ketiga-tiga PhG boleh memasuki poket pengikat GHS-R, dengan mengikat echinacoside sedikit lebih baik. Ini menyediakan titik permulaan mekanistik yang boleh diuji untuk tuntutan tradisional mengenai anti-penuaan dan pengukuhan fizikal, tetapi bukti kekal pada tahap selular: tiada data tentang GH atau IGF-1 perubahan dalam haiwan atau manusia utuh diberikan dan penemuan itu tidak boleh diekstrapolasi kepada kesan anti-keletihan atau peningkatan prestasi senaman.

4.6 Hepatoprotection

Echinacoside telah menunjukkan kesan perlindungan dalam beberapa model kecederaan hati akibat bahan kimia dan dadah. Dalam kecederaan yang disebabkan oleh etanol, dos oral 10, 30, atau 60 mg/kg sehari selama sepuluh hari mengurangkan tekanan oksidatif dan apoptosis hepatosit dengan meningkatkan aktiviti Nrf2, dan laporan lain menunjukkan bahawa pada 50 atau 100 mikromolar in vitro dan 100 mg/kg setiap hari dalam vivo, tekanan modulasi oksidatif, ia. Laluan SREBP-1c/FASN melalui PPAR-alpha. Dalam hepatotoksisiti asetaminofen, dos oral 25, 50, atau 100 mg/kg sehari selama tujuh hari melemahkan tekanan oksidatif, menyekat ekspresi sitokin pro-radang dan mengurangkan ekspresi protein sitokrom P450 2E1. Dalam model D-galactosamine/lipopolysaccharide, dos 25 dan 100 mg/kg menurunkan AST dan ALT serum dan mengurangkan sensitiviti hepatosit kepada TNF-alpha. Di samping itu, perlindungan pada 20 mg/kg sehari selama tujuh hari ditunjukkan bergantung pada perencatan laluan TLR4/NF-kappaB.

Dalam penyakit hati kronik, echinacoside menyekat isyarat TGF-beta1/Smad dan menghalang pengaktifan sel stellate hepatik, menunjukkan potensi anti-fibrotik, dan dalam tikus transgenik hepatitis B, dos 50 mg/kg menghalang ekspresi HBsAg dan HBeAg dan mengurangkan serum HBV DNA tanpa menjejaskan DNA HBV hepatik dengan ketara. Perlu diingatkan bahawa kebanyakan kajian hepatoproteksi menggunakan echinacoside terpencil dan ada yang tidak menyatakan sumber tumbuhan, jadi mereka paling baik dianggap sebagai bukti mekanistik menyokong C. tubulosa PhGs.

4.7 Nefroproteksi

Dalam tikus nefropati diabetes db/db, echinacoside meningkatkan hiperglikemia dan protein kencing 24 jam, dan pemendapan kolagen yang dilemahkan, sel mesangial dan percambahan matriks, penebalan membran bawah tanah, dan kehilangan podosit. Pada peringkat molekul, ia menurunkan TGF-beta1/Smad, fibronektin, kolagen IV, dan aktin otot licin alfa sambil meningkatkan E-cadherin, menunjukkan penindasan peralihan epitelium-mesenchymal. Penemuan ini menyokong mekanisme calon echinacoside yang bertindak melalui TGF-beta1/Smad untuk mengehadkan EMT dan fibrosis dalam nefropati diabetik, tetapi abstrak yang ada tidak memberikan dos, tempoh rawatan, atau magnitud tepat perubahan dalam penanda protein, jadi hasilnya tidak boleh diletakkan pada asas dos yang sama seperti jumlah kajian diabetes glikosida yang diterangkan di atas. Kerja masa depan harus mengukur pendedahan buah pinggang kepada sebatian induk dan metabolitnya di bawah kedua-dua dos tunggal dan berulang untuk menentukan sama ada nefroproteksi dimediasi oleh sebatian induk, oleh metabolit, atau oleh kedua-duanya.

4.8 Kesan Anti-radang dan Imunomodulator

Desert ginseng-Meningkatkan imuniti

Dalam ujian imunomodulasi, jumlah glikosida C. tubulosa digunakan pada RAW264.7 makrofaj pada 75, 100, atau 125 g/L meningkatkan daya maju sel dan tahap nitrik oksida, iNOS, TNF-alfa dan IL-6, dengan 100 g/L adalah optimum. Dalam eksperimen haiwan menggunakan tablet yang juga mengandungi Angelica sinensis dan Astragalus, dos 0.4 dan 1.2 g/kg sehari menggalakkan percambahan limfosit, hipersensitiviti jenis tertunda, pengeluaran antibodi dan pembersihan zarah karbon. Beberapa had perlu diiktiraf: kepekatan in vitro yang dinyatakan dalam g/L tidak boleh ditukar terus kepada dos mg/kg dalam haiwan; tablet adalah rumusan komposit, jadi kesannya tidak boleh dikaitkan semata-mata kepada jumlah glikosida C. tubulosa; dan haiwan itu adalah tikus biasa, jadi hasilnya tidak boleh diekstrapolasi kepada pemulihan imun klinikal dalam pesakit imunokompromi.

Berkenaan dengan keradangan, PhG menghalang pengaktifan NF-kappaB dan protein pengaktif-1 dan mengurangkan ekspresi sintase nitrik oksida yang boleh diinduksi. Dalam model kecederaan saraf tunjang, echinacoside meningkatkan skor lokomotor Basso-Beattie-Bresnahan, mengurangkan kehilangan neuron, dan meningkatkan seni bina tisu, sambil menghalang pengaktifan inflammasom NLRP3 dengan ketara. Dalam BV-2 mikroglia yang dirangsang dengan lipopolysaccharide dan ATP, ia mengurangkan spesies oksigen reaktif, meningkatkan potensi membran mitokondria, menyekat pengaktifan NF-kappaB dan menghalang isyarat inflammasom NLRP3, kesan yang sebahagiannya dikawal oleh penindasan penjanaan spesies oksigen reaktif dan pengaktifan NF-kappaB.

4.9 Kesan Laksatif dan Peraturan Mikrobiota Usus

Melembabkan usus untuk melegakan sembelit adalah petunjuk tradisional Cistanche, dan kajian moden telah mula memberikan sokongan mekanistik. Dalam model tikus sembelit transit yang perlahan, ekstrak akueus herba Cistanche meningkatkan ekspresi protein dan mRNA c-kit dalam kolon, pelabelan sel interstisial Cajal (ICC) yang dipertingkatkan, dan mengawal tahap faktor sel stem, ligan c-kit, mencadangkan fungsi ICC yang lebih baik dan motilitas kolon yang dipertingkatkan melalui laluan isyarat dan c-Kit PI3. Dari segi mikrobiota, ekstrak C. tubulosa meningkatkan Weissella dan Bacteroides, mengurangkan Ruminococcus dan Deinococcus, dan membalikkan kepekatan asid asetik dan kaproik yang tidak teratur ke arah paras normal. Asid lemak rantai pendek, sebagai mediator penting motilitas kolon dan kesihatan mukosa, menyokong penemuan metabolik dalam model Alzheimer yang diterangkan di atas.

Perlu diakui bahawa belum ada kajian manusia yang menggunakan C. tubulosa PhGs sahaja sambil mengukur masa transit usus, ciri-ciri najis, mikrobiota usus dan asid lemak rantaian pendek. Oleh itu, petunjuk julap kekal sebagai rekod penggunaan tradisional dan arahan untuk pembangunan formulasi, dan tidak boleh disenaraikan sebagai petunjuk manusia yang telah ditetapkan.

4.10 Aktiviti Anti-keletihan dan Ketahanan Senaman

Dalam ujian renang yang dimuatkan, teh formula C. tubulosa yang diberikan pada 4.50 g/kg memanjangkan masa berenang tikus yang dimuatkan dengan ketara, meningkatkan rizab glikogen hepatik dan mengurangkan tahap urea darah selepas senaman. Mekanisme ini dianggap melibatkan peningkatan rizab glikogen, pembersihan dipercepatkan produk metabolik, dan pengurangan tekanan oksidatif, dengan kemungkinan penyertaan paksi hormon pertumbuhan. Kajian bahasa Cina yang sedia ada dalam bidang ini kebanyakannya menggunakan produk kompaun atau formulasi, dan data tindak balas dos untuk sebatian tunggal dan jumlah glikosida terpiawai masih tidak mencukupi. Setakat tarikh carian, tiada percubaan manusia dua-buta rawak yang boleh disahkan bagi ekstrak C. tubulosa sahaja untuk anti-keletihan telah dikenal pasti.

Kesan cistanche-anti keletihan

4.11 Perlindungan Kardiovaskular, Aktiviti Antitumor dan Arah Lain

Dalam model infarksi miokardium tikus yang disebabkan oleh pengikatan arteri koronari menurun anterior kiri, echinacoside oral pada 50 atau 100 mg/kg sehari selama dua puluh lapan hari mengurangkan saiz infark dengan cara yang responsif dos (15 peratus dalam kumpulan dos tinggi berbanding 38 peratus dalam kawalan infark kiri dan 0.00, e00 lebih baik dalam kawalan ventrikel kiri). pecahan (64.7 peratus berbanding 40.3 peratus, p kurang daripada 0.05). Pemprofilan proteomik mengenal pasti 1105 protein yang dinyatakan secara berbeza; echinacoside membalikkan regulasi yang disebabkan oleh infarksi kolagen jenis I alpha 1 dan aktin otot licin alfa, penanda polarisasi makrofaj yang dinormalkan dan mengurangkan TNF-alfa, IL-6 dan faktor keradangan lain, dengan kesan yang dikaitkan dengan penindasan fosforilasi PI3K/AKT dan sebahagiannya diterbalikkan oleh agonist YP74K. Pelabuhan molekul, simulasi dinamik molekul, ujian tarik-turun, dan resonans plasmon permukaan mengesahkan pengikatan langsung echinacoside kepada Mrc1.

Dalam onkologi, ulasan telah meringkaskan bukti bahawa echinacoside menghalang percambahan sel tumor, pencerobohan, dan metastasis melalui isyarat PI3K / AKT dan TGF-beta1 / Smad, tetapi kajian asas adalah terutamanya eksperimen selular dan haiwan dengan tahap bukti yang terhad. Laporan bercanggah yang tersebar wujud untuk perlindungan terhadap penuaan foto kulit, tetapi ini tidak mencukupi untuk kesimpulan kuantitatif.

Jadual 4. Ringkasan aktiviti dan mekanisme farmakologi utama Cistanche tubulosa PhGs

Aktiviti	Model	Dos dan tempoh	Penemuan utama	Mekanisme atau perkara utama
Peningkatan kognitif	APP/PS1 tikus	GCT secara lisan selama 60 hari; dos tinggi 400 mg/kg sehari	Prestasi maze air yang lebih baik; mengurangkan beta amiloid hippocampal 1-40 dan 1-42	Mikrobiota usus-metabolisme asid lemak-paksi keradangan neuro
Kesan Anti-Parkinson	Tikus MPTP subakut	Echinacoside 30 mg/kg sehari selama 14 hari	Pemulihan neuron dopaminergik, dopamin, dan pengangkut dopamin; gaya berjalan yang lebih baik	Penyelarasan GDNF dan BDNF; perencatan apoptosis dan neuroinflammation
Iskemia anti-cerebral	Model reperfusi MCAO	Kajian sasaran dan mekanisme	Skor neurologi yang lebih baik	Pengubahsuaian CK2 alpha-prime Lys171; Pengaktifan Wnt; gabungan mitokondria
Anti-penuaan	Jenis liar C. elegans	Penambahan dalam medium kultur	Jangka hayat lanjutan; peningkatan haba dan toleransi tekanan oksidatif	Peraturan transkripsi daf-16/FOXO dan penyetempatan nuklear
Anti-osteoporosis	Tikus ovariectomized	30, 90, 270 mg/kg sehari selama 12 minggu	Ketumpatan mineral tulang yang lebih baik, seni bina mikro dan kekuatan biomekanikal	Tindakan seperti fitoestrogen; peningkatan pembentukan dan pengurangan penyerapan
Peraturan glukosa dan lipid	Diet ditambah streptozotocin tikus diabetes	TGCT 50, 100, 200 mg/kg sehari selama 6 minggu	Glukosa puasa berkurangan sebanyak 56.4 peratus; HbA1c sebanyak 37.4 peratus; glikogen meningkat	Antioksidan dan anti-radang; Metabolisme glikogen berkaitan PI3K/Akt dan GSK3 beta
Peningkatan pembiakan	Tikus yang dirawat hidrokortison	CPhGs 72, 145, 289 mg/kg selama 14 hari	Tingkah laku seksual yang lebih baik dan berat organ aksesori; peningkatan testosteron	Peningkatan peraturan StAR, CYP11A1 dan 3 beta-HSD
Rembesan hormon pertumbuhan	Sel pituitari tikus	Echinacoside 10-8 hingga 10-5 molar	Peningkatan yang bergantung kepada dos dalam rembesan GH; berkesan dari kira-kira 10-6 molar	Reseptor GHS-R1a; disekat oleh agonis songsang
Hepatoproteksi	Etanol, acetaminophen dan model lain	10-100 mg/kg sehari selama 7-10 hari	ALT, AST dan malondialdehid yang dikurangkan; memulihkan SOD dan glutathione	Nrf2/HO-1; TLR4/NF-kappaB; Penindasan CYP2E1
Nefroprotection	db/db tikus nefropati diabetik	Dos tidak dilaporkan dengan jelas	Mengurangkan proteinuria dan pemendapan kolagen; perlindungan podosit	Perencatan TGF-beta1 / Smad dan peralihan epitelium-mesenchymal
Anti-radang dan imun	RAW264.7, BV-2, tikus biasa	In vitro 75-125 g/L; dalam vivo 0.4 dan 1.2 g/kg	Pengaktifan makrofaj; indeks imun yang lebih baik	Perencatan NLRP3 inflammasome dan NF-kappaB
Kesan pencahar	Tikus sembelit transit lambat	Ekstrak akueus secara intragastrik	Fungsi c-kit dan ICC yang lebih baik; motilitas kolon dipertingkatkan	Laluan SCF/c-kit/PI3K
Anti-keletihan	Ujian renang tetikus dimuatkan	Teh formula 4.50 g/kg	Masa berenang yang berpanjangan; peningkatan glikogen hepatik; urea darah berkurangan	Rizab glikogen dan pelepasan metabolit
Perlindungan kardiovaskular	Model infarksi miokardium tikus	50, 100 mg/kg sehari selama 28 hari	Saiz infark 15 berbanding 38 peratus; pecahan lontar 64.7 berbanding 40.3 peratus	Modulasi polarisasi makrofaj dan pemendapan kolagen; Penglibatan PI3K/Akt

5. Toksikologi dan Keselamatan

Data keselamatan paling sistematik yang tersedia pada masa ini adalah daripada produk ekstrak C. tubulosa Memoregain. Untuk genotoksisiti, ujian Ames tidak menunjukkan peningkatan dalam koloni berbalik sehingga 5 mg setiap plat menggunakan lima strain Salmonella typhimurium; tiada peningkatan dalam penyimpangan kromosom dilihat dalam sel ovari hamster Cina (CHO-K1) sehingga 2.5 mg/mL; dan tiada peningkatan dalam mikronukleus diperhatikan dalam sumsum tulang tikus ICR sehingga 500 mg/kg. Untuk ketoksikan dos berulang, tikus menerima dos oral 0, 0.15, 0.3, dan 0.5 g/kg sehari selama dua puluh lapan hari, dan tiada kesan buruk yang boleh diperhatikan ditemui, memberikan tahap kesan buruk yang tidak diperhatikan lebih daripada 500 mg/kg sehari. Kajian domestik juga telah melaporkan bahawa ekstrak C. tubulosa PhG pada 0.5 hingga 2.0 g/kg tidak menunjukkan kemutagenan atau genotoksisiti.

Jadual 5. Penilaian toksikologi bagi ekstrak Cistanche tubulosa

Ujian	Syarat dan keputusan
Ujian Ames	Lima strain Salmonella typhimurium; tiada peningkatan kemutagenan sehingga 5 mg setiap plat
CHO-K1 penyimpangan kromosom	Tiada peningkatan dalam penyimpangan kromosom sehingga 2.5 mg/mL
Mikronukleus sumsum tulang tikus	Tiada peningkatan dalam mikronukleus sehingga 500 mg/kg
Ketoksikan dos berulang 28 hari	0, 0.15, 0.3 dan 0.5 g/kg sehari dalam tikus; tiada kesan buruk yang boleh diperhatikan
Kesimpulan	NOAEL lebih besar daripada 500 mg/kg sehari
Data domestik tambahan	Ekstrak PhG pada 0.5 hingga 2.0 g/kg tidak menunjukkan kemutagenan atau genotoksisiti

Keputusan ini memberikan titik permulaan yang boleh digunakan untuk keselamatan ekstrak khusus di bawah dos berulang jangka pendek, tetapi ia tidak boleh diekstrapolasi kepada semua ekstrak C. tubulosa. Proses pengekstrakan dan nisbah juzuk yang berbeza, tumbuhan perumah yang berbeza, dan kehadiran logam berat, sisa racun perosak, mikotoksin, atau sisa pelarut semuanya boleh mengubah profil toksikologi. Bagi wanita hamil, kanak-kanak, pesakit dengan penyakit autoimun, individu yang menerima terapi hormon atau antikoagulan, dan orang yang mengalami masalah hepatik atau buah pinggang, data haiwan di atas tidak boleh digunakan untuk mengetepikan risiko. Data mengenai ketoksikan dos berulang jangka panjang (sembilan puluh hari atau lebih), ketoksikan pembiakan dan perkembangan, kejadian buruk endokrin dan imun, gangguan jangka panjang mikrobiota usus, dan interaksi ubat-ubatan masih kurang.

6. Kawalan Kualiti dan Piawaian Analitikal

Dari segi piawaian rasmi, Pharmacopoeia Cina menggunakan echinacoside dan verbascoside sebagai sebatian penanda untuk Cistanches Herba, ditentukan oleh kromatografi cecair berprestasi tinggi dengan pengesanan pada 330 nm, dengan bilangan plat teori dikira pada puncak echinacoside yang diperlukan tidak kurang daripada 3000. Dikira pada asas gabungan dua kandungan yang tidak dikeringkan. 0.30 peratus untuk C. deserticola dan tidak kurang daripada 1.5 peratus untuk C. tubulosa. Had ini ialah lantai berkualiti untuk mengecualikan bahan yang lebih rendah atau tercemar, bukan panduan kepada dos terapeutik yang optimum.

Pada peringkat metodologi, HPLC-DAD ialah alat rutin untuk mengukur juzuk utama, manakala UPLC-Q-TOF-MS dan kaedah spektrometri jisim resolusi tinggi lain digunakan untuk pencirian berbilang komponen dan pengenalpastian puncak yang tidak diketahui. Sebagai contoh, kajian perhubungan kesan spektrum menggunakan sistem kromatografi cecair ultra-tinggi berprestasi tinggi Vanquish Horizon dengan lajur ACQUITY UPLC BEH C18, elusi kecerunan dengan 0.1 peratus asid fosforik dan asetonitril pada 0.3 mL/min, dan pengesanan pada 238 nm untuk membandingkan asid geniposidik, verbasida, verbachina, verbasida. isoacteoside antara ubat mentah, ekstrak akueus, dan sisa C. tubulosa. Regresi kuasa dua terkecil separa, analisis korelasi bivariat, dan analisis redundansi digunakan untuk mewujudkan hubungan kesan spektrum, dan farmakologi rangkaian meramalkan 159 gen sasaran yang dikongsi oleh konstituen aktif dan penyakit berkaitan antioksidan.

Jadual 6. Tahap dan kaedah yang disyorkan untuk kawalan kualiti

Objektif	Kaedah yang disyorkan
Kandungan konstituen utama	HPLC-DAD untuk echinacoside dan verbascoside; UPLC-MS/MS jika perlu
Puncak berbilang komponen dan tidak diketahui	LC-MS/MS dan spektrometri jisim resolusi tinggi
Pengenalan botani dan pemalsuan	Pengekodan bar DNA digabungkan dengan cap jari morfologi dan kimia
Konsistensi cap jari kelompok ke kelompok	Analisis komponen utama, OPLS-DA dan kawalan nisbah puncak utama
Kekotoran berkaitan keselamatan	Logam berat, sisa racun perosak, mikotoksin, sisa pelarut dan produk pengoksidaan

Kawalan kualiti hanya berdasarkan echinacoside dan verbascoside mungkin terlepas tubuloside A, isoacteoside, 2-prime-acetylacteoside dan produk degradasi berkaitan pemprosesan, dan tidak dapat mengesan anjakan komposisi yang disebabkan oleh plasma nutfah yang berbeza atau oleh pengayaan sisa. Untuk penukaran dos, mengambil ekstrak yang mengandungi 500 mg/g echinacoside sebagai contoh, pengambilan harian 200 mg ekstrak sepadan dengan kira-kira 100 mg echinacoside; jika produk itu juga mengandungi PhG lain, 100 mg echinacoside tidak boleh disamakan dengan 200 mg jumlah glikosida.

7. Kajian Klinikal dan Perkembangan Translasi

Bukti manusia berkualiti tinggi yang ada pada masa ini ialah percubaan rawak, dua buta, terkawal plasebo bagi gabungan ekstrak Cistanche tubulosa dan Ginkgo biloba (CG). Percubaan itu mendaftarkan 100 peserta pertengahan umur dan warga tua Cina selama sembilan puluh hari, dengan dua tablet setiap hari, setiap pasangan mengandungi 72 mg echinacoside dan 27 mg flavonol glikosida. Dalam kumpulan CG, markah Peperiksaan Negeri Mini-Mental meningkat daripada 26.5 pada garis dasar kepada 27.1 pada hari kesembilan puluh, markah Penilaian Kognitif Montreal daripada 23.4 kepada 25.3, dan skor Kualiti Hidup Pertubuhan Kesihatan Sedunia daripada 81.6 kepada 84.2, semuanya dengan p kurang daripada 0.001 dan semua lebih tinggi daripada 0.001. Ujian matriks Cognitrax dan Wechsler Memory Scale-Revised menunjukkan fungsi ingatan yang lebih baik, termasuk ingatan jangka panjang dan tertunda. Antara biomarker darah, jumlah tau, pT181, pS199, pT231, pS396, dan hormon perangsang tiroid menurun dengan ketara, manakala triiodothyronine dan triiodothyronine bebas meningkat dengan ketara. Tiada kejadian buruk yang berkaitan dengan rawatan dilaporkan, dan ujian darah dan air kencing rutin kekal stabil.

Kepentingan percubaan ini ialah ia merupakan kajian rawak, dua buta pertama yang mencadangkan manfaat kognitif ekstrak C. tubulosa pada manusia. Hadnya adalah sama jelas: campur tangan adalah gabungan yang mengandungi Ginkgo biloba, jadi kesannya tidak boleh dikaitkan semata-mata kepada C. tubulosa PhGs; saiz sampel dan tempoh sembilan puluh hari tidak mencukupi untuk menilai pengubahsuaian penyakit jangka panjang; dan peningkatan pada skala kognitif masih jauh dari titik akhir klinikal seperti penyakit Alzheimer. Di samping itu, pada tarikh carian, tiada percubaan rawak dua buta yang boleh disahkan bagi ekstrak C. tubulosa sahaja untuk ingatan atau keletihan telah dikenal pasti.

Ekstrak cistanche tubulosa

Jadual 7. Status semasa bukti dan data manusia masih diperlukan

Barang bukti	Kesimpulan semasa	Data masih diperlukan
RCT C. tubulosa sahaja untuk ingatan	Tiada percubaan rawak dua buta yang boleh disahkan dikenal pasti	Pendaftaran percubaan, pengiraan saiz sampel, pelan analisis statistik
RCT C. tubulosa sahaja untuk keletihan	Tiada percubaan rawak dua buta yang boleh disahkan dikenal pasti	Protokol senaman; titik akhir objektif seperti laktat dan glikogen
Percubaan kognisi gabungan CG	100 peserta, 90 hari; peningkatan ketara MoCA dan MMSE	Tempoh yang lebih panjang, replikasi bebas, perbandingan ejen tunggal
Ingatlah ujian manusia	Tiada laporan klinikal lengkap diperolehi	Protokol, gambar rajah aliran CONSORT, data kejadian buruk
Pembangunan dadah baru	Kapsul Congrong Zonggan dipasarkan; echinacoside menyelesaikan fasa I	Data keberkesanan dan keselamatan Fasa II dan III

Dari segi produk dan pembangunan ubat baharu, kapsul Congrong Zonggan, yang pecahan aktif utamanya ialah Cistanche PhGs, telah diluluskan pada tahun 2005 untuk demensia vaskular ringan hingga sederhana; echinacoside sebagai ubat baharu kelas 1 menerima kelulusan percubaan klinikal pada 2017 dan telah menyelesaikan kajian fasa I; dan produk makanan tambahan seperti Memoregain dipasarkan di luar tanah besar China. Perlu ditekankan bahawa makanan kesihatan, ubat-ubatan dan makanan tambahan termasuk di bawah rangka kerja pengawalseliaan yang berbeza, dan tuntutan fungsi yang tidak mempunyai rekod yang boleh disahkan daripada pihak berkuasa ubat atau kesihatan negara atau daripada pendaftaran percubaan klinikal tidak boleh dianggap sebagai petunjuk yang diluluskan.

8. Kesimpulan dan Perspektif

Secara keseluruhan, penyelidikan farmakologi ke atas C. tubulosa PhGs telah membentuk gambaran yang cukup jelas. Dari segi kimia, penguasaan echinacoside dan magnitud variasi kandungan kini sudah mantap, tetapi rantaian penukaran daripada ubat mentah kepada ekstrak kepada dos kepada pendedahan masih belum diseragamkan. Dari segi farmakodinamik, bukti adalah agak besar untuk peningkatan kognitif, perlindungan terhadap kecederaan seperti Parkinson, iskemia anti-cerebral, anti-penuaan, anti-osteoporosis, pengawalan metabolik glukolipid, peningkatan pembiakan, hepatoproteksi dan aktiviti anti-radang, manakala aktiviti antitumor dan perlindungan terhadap foto penuaan kulit kekal pada tahap yang tidak diingini. Secara mekanikal, Nrf2/HO-1, TGF-beta1/Smad, NLRP3 inflammasome, CK2 alpha-prime/Wnt mitokondria gabungan, daf-16/FOXO, GHS-R1a, StAR/CYP11A1/3 beta-HSD dan usus mikrobiota-short-chain-chain paling banyak asid lemak dalam rantaian asid lemak.

Pada masa yang sama, tiga kesesakan terus mengehadkan terjemahan penemuan ini daripada aktiviti yang boleh ditunjukkan kepada ubat-ubatan yang boleh diluluskan dan tuntutan yang boleh dipertahankan. Yang pertama ialah bioavailabiliti dan atribusi metabolik yang tidak jelas: pendedahan kepada sebatian induk adalah sangat rendah dan transformasi mikrob usus adalah kompleks, jadi bukti tindak balas pendedahan langsung adalah kurang sama ada keberkesanan dimediasi oleh sebatian induk, oleh metabolit, atau dengan pembentukan semula metabolisme perumah. Yang kedua ialah rantaian kesan pendedahan kimia yang rosak: kuantiti juzuk, pensampelan farmakokinetik, pengedaran tisu, dan titik akhir keberkesanan sering tersebar merentas kajian berasingan, dan pelaporan dos yang tidak konsisten menjadikan perbandingan dan pengumpulan sukar. Yang ketiga ialah bukti manusia yang tidak mencukupi: hanya satu percubaan terkawal rawak bagi produk gabungan wujud, dan keselamatan dan risiko jangka panjang dalam populasi khas kekal tidak ditentukan.

Atas dasar ini, lima keutamaan disyorkan untuk peringkat penyelidikan seterusnya.

Wujudkan pangkalan data kimia dan pendedahan setanding makmal silang: meliputi sampel daripada perumah yang berbeza, kawasan pengeluaran, masa penuaian, kaedah pemprosesan dan kelompok, kuantiti echinacoside, verbascoside, isoacteoside dan tubuloside A dengan kaedah HPLC-DAD/LC-MS/MS yang diselaraskan, dan laporkan had pengesanan dan kuantifikasi, pemulihan berat dan kandungan piawai.

Harmonikan pelaporan dos: laporkan dos serentak sebagai mg jumlah glikosida setiap kg dan mg echinacoside setiap kg, dengan cap jari kimia kelompok dilampirkan, supaya spesifikasi ekstrak tidak pernah menggantikan pendedahan.

Uji hipotesis mikrobiota-metabolit-otak usus dengan eksperimen in vivo sebab akibat: kajian reka bentuk menggunakan penipisan antibiotik, monokolonisasi atau komuniti mikrob yang ditentukan, dos berpasangan bagi sebatian induk dan metabolit utama, dan pengesanan isotop, digabungkan dengan kebolehtelapan penghalang darah-otak dan kepekatan otak yang tidak terikat untuk membina model tindak balas pendedahan.

Pautkan penyelidikan rumusan kepada titik akhir yang boleh diukur secara klinikal: bandingkan secara sistematik nanoemulsion, nanopartikel lipid pepejal, kompleks fosfolipid dan strategi lain dari segi kestabilan fizikokimia, resapan Caco-2, transformasi mikrob usus, farmakokinetik tikus, pendedahan otak, imunotoksisiti dan ketoksikan dos berulang jangka panjang.

Majukan kajian klinikal yang ketat dan penilaian keselamatan jangka panjang: utamakan ujian penerokaan pada orang yang mempunyai toleransi glukosa terjejas dan gangguan kognitif ringan, dengan titik akhir utama didorong oleh hasil kawal selia atau klinikal, dan secara selari menambah ketoksikan dos berulang sembilan puluh hari atau lebih lama, ketoksikan pembiakan dan perkembangan dan kajian kesan buruk interaksi dadah, endokrin dan interaksi ubat.

Ringkasnya, bukti yang paling boleh diterjemahkan untuk C. tubulosa PhGs berpusat pada jumlah glikosida yang diseragamkan, paksi usus-otak dalam patologi berkaitan Alzheimer, peraturan metabolik glukolipid, steroidogenesis pembiakan dan hepatoproteksi, dan naratif farmakologi telah jelas mendahului bukti manusia. Matlamat yang sesuai pada peringkat ini bukanlah untuk mendakwa konstituen ini boleh merawat penyakit Alzheimer, kencing manis, penyakit buah pinggang, osteoporosis atau disfungsi seksual, tetapi sebaliknya untuk mengubah tumbuhan ubatan tradisional menjadi calon produk yang boleh dihasilkan semula, boleh ditentukan dos dengan profil risiko faedah yang boleh dinilai, melalui kawalan botani yang ketat, cap jari kimia kuantitatif, cap jari farmakokinetik tertutup yang direka bentuk secara rawak dan metabolik yang sah. percubaan.

Rujukan

[1] Hou R, Song W, Nan Y, Gong Y, Liu J, Liu J. Cistanche tubulosa glycosides memperbaiki penurunan kognitif dalam APP/PS1 tikus melalui modulasi mikrobiota usus dan metabolisme asid lemak: cerapan daripada multi-omik dan pengesahan eksperimen. Frontiers in Pharmacology, 2025, 16: 1662336. DOI: 10.3389/fphar.2025.1662336.

[2] Zhao Q, Gao J, Li W, Cai D. Kesan neurotropik dan penyelamat echinacoside dalam model tetikus MPTP subakut penyakit Parkinson. Penyelidikan Otak, 2010. PMID: 20478277.

[3] Zeng K, Wang J, Wang L, et al. Molekul kecil mendorong gabungan mitokondria untuk perlindungan saraf melalui penyasaran CK2 tanpa menjejaskan aktiviti kinase konvensionalnya. Transduksi Isyarat dan Terapi Sasaran, 2021. DOI: 10.1038/s41392-020-00447-6.

[4] Zhu K, Meng Z, Tian Y, et al. Kesan hipoglisemik dan hipolipidemik jumlah glikosida Cistanche tubulosa dalam tikus diabetes yang disebabkan oleh diet/streptozotocin. Jurnal Etnofarmakologi, 2021.

[5] Wang Q, Dong J, Lu W, et al. Phenylethanol glycosides daripada Cistanche tubulosa meningkatkan disfungsi pembiakan dengan mengawal selia steroid testis melalui laluan CYP450-3beta-HSD. Jurnal Etnofarmakologi, 2020.

[6] Li F, et al. Aktiviti antiosteoporotik echinacoside dalam tikus ovariectomized. Phytomedicine, 2013. PMID: 23428402.

[7] Wu CJ, Chien MY, Lin NH, et al. Echinacoside yang diasingkan daripada Cistanche tubulosa diduga merangsang rembesan hormon pertumbuhan melalui pengaktifan reseptor ghrelin. Molekul, 2019, 24(4): 720. DOI: 10.3390/molekul24040720.

[8] Wang X, Zhang J, Lu L, Zhou L. Kesan jangka hayat echinacoside dalam Caenorhabditis elegans dimediasi melalui daf-16. Biosains, Bioteknologi, dan Biokimia, 2015. DOI: 10.1080/09168451.2015.1046364.

[9] Liao PL, Li CH, Tse LS, Kang JJ, Cheng Y W. Penilaian keselamatan produk makanan kesihatan Cistanche tubulosa Memoregain: genotoksisiti dan ujian ketoksikan dos berulang 28 hari. Toksikologi Makanan dan Kimia, 2019.

[10] Liu J, Yang L, Dong Y, Zhang B, Ma X. Echinacoside, produk semulajadi yang tidak ternilai dalam rawatan gangguan neurologi dan lain-lain. Molekul, 2018, 23(5): 1213. DOI: 10.3390/molekul23051213.

[11] Wang W, Jiang S, Zhao Y, Zhu G. Echinacoside: produk semula jadi aktif dan agen farmakologi yang menjanjikan. Penyelidikan Farmakologi, 2023, 197: 106951. DOI: 10.1016/j.phrs.2023.106951.

[12] Liu X T. Strategi baharu untuk menyaring komponen aktif dalam Cistanche tubulosa berdasarkan analisis perhubungan kesan spektrum dan farmakologi rangkaian. 2023. DOI: 10.1155/2023/9030015.

[13] Wang D, Wang H, Gu L. Antidepresan dan aktiviti peningkatan kognitif herba Cina tradisional Cistanche. Perubatan Pelengkap dan Alternatif Berasaskan Bukti, 2017, 2017: 3925903. DOI: 10.1155/2017/3925903.

[14] Chen et al. Kajian rawak, dua buta, terkawal plasebo bagi ekstrak Cistanche tubulosa dan Ginkgo biloba untuk peningkatan fungsi kognitif pada orang pertengahan umur dan warga emas. Penyelidikan Fitoterapi, 2024. DOI: 10.1002/ptr.8275. PMID: 38972848.

[15] Kesan amelioratif echinacoside terhadap kecederaan saraf tunjang melalui menghalang laluan isyarat inflammasom NLRP3. Sains Hayat, 2019, 116978. DOI: 10.1016/j.lfs.2019.116978.

[16] Echinacoside melindungi neuron dopaminergik dengan menghalang laluan isyarat NLRP3/Caspase-1/IL-1beta dalam model penyakit Parkinson yang disebabkan oleh MPTP. Buletin Penyelidikan Otak, 2020, 164: 55-64. DOI: 10.1016/j.brainresbull.2020.08.015.

[17] Echinacoside melemahkan pembentukan semula jantung selepas infarksi dengan mengawal polarisasi makrofaj dan pemendapan kolagen. Phytomedicine, 2025.

[18] Suruhanjaya Farmakope Cina. Pharmacopoeia of the People's Republic of China, Jilid 1, edisi 2020. Beijing: Akhbar Sains Perubatan China, 2020.

[19] Jiang X, Feng C, Wang L, et al. Kemajuan dalam pengekstrakan, pengasingan, struktur kimia, dan aktiviti farmakologi glikosida phenylethanoid dalam Cistanche. Perubatan Cina Moden, 2026. DOI: 10.13313/j.issn.1673-4890.20260107001.

[20] Kajian tentang kandungan komponen perubatan dan berat kering tumbuhan tunggal plasma nutfah Cistanche tubulosa. Jurnal Universiti Pertanian China, 2017. (dalam bahasa Cina)

[21] Luo Z, et al. Kesan imunomodulator jumlah glikosida daripada Cistanche tubulosa pada sel RAW264.7 dan pada tikus biasa. Sains dan Teknologi Industri Makanan. DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019110203. (dalam bahasa Cina)

[22] Teknologi pengekstrakan dan aktiviti anti-keletihan teh formula Cistanche tubulosa. (dalam bahasa Cina)

[23] Peranan perubatan Cina dan mikrobiota usus dalam sembelit kronik. Perubatan Pelengkap dan Alternatif Berasaskan Bukti, 2019. PMCID: PMC6556327.