Bahagian 1|Glikogen Synthase Kinase 3b Hiperaktif dalam Sel Pengelupasan Kencing Meramalkan Perkembangan Penyakit Buah Pinggang Diabetik

Xianhui Liang, et al

1Pusat Pemurnian Darah, Institut Nefrologi, Hospital Gabungan Pertama Universiti Zhengzhou, Zhengzhou, China; 2Jabatan Perubatan, Bahagian Penyakit Buah Pinggang dan Hipertensi, Hospital Rhode Island, Sekolah Perubatan Universiti Brown, Providence, RhodeIsland, Amerika Syarikat; dan 3Jabatan Perubatan, Bahagian Nefrologi, Kolej Perubatan Universiti Toledo, Toledo, Ohio, Amerika Syarikat

Untuk maklumat lanjut sila hubungi:emily.li@wecistanche.com

Cistanche tubulosa mencegah penyakit buah pinggang, klik di sini untuk mendapatkan sampel

Bukti yang semakin berkembang menunjukkan kepada glycogen synthase kinase(GSK)3b sebagai pemain utama dalam pelbagaipenyakit buah pinggang. Walau bagaimanapun, sebagai transduser penting bagi laluan isyarat insulin, peranan GSK3b dalam diabetesbuah pinggang penyakitmasih tidak pasti. Dalam tikus DB / DB, ekspresi renal GSK3b total dan diaktifkan semakin meningkat. Ini mendahului perkembangan diabetesbuah pinggang penyakitdan dikaitkan dengan perkembangan tanda-tandakencing manisbuah pinggangkecederaan, termasuk albuminuria dan pengumpulan matriks ekstraselular dalam glomeruli dan tubulointerstitial. Secara in vitro, pendedahan podosit glomerular, sel mesangial, dan sel tubular renal kepada persekitaran diabetik menyebabkan GSK3overexpression dan hiperaktif, yang kelihatan penting dan mencukupi untuk menimbulkankencing maniskerosakan selular dalam sel-sel buah pinggang, kerana kesan sitopatik persekitaran diabetes telah dikurangkan oleh GSK3b knockdown, tetapi telah ditiru oleh ekspresi ektopik GSK3b yang aktif secara konstitutif walaupun dalam persekitaran biasa. Ketidakkonsistenan, spesimen biopsi buah pinggang yang diperoleh daripada pesakit dengan pelbagai peringkat nefropati diabetik mendedahkan ekspresi yang diperkuatkan jumlah dan diaktifkan GSK3b dalam glomeruli dan tubul renal, yang dikaitkan dengan keterukan nefropati diabetik. Lebih-lebih lagi, dalam kohort retrospektif pesakit diabetes jenis 2 yang diikuti selama lebih lima tahun, aktiviti relatif GSK3b dalam sel-sel terkelupas air kencing yang tersimpan mewakili faktor risiko bebas untuk perkembangan atau perkembangan kerosakan buah pinggang. Tambahan pula, analisis lengkung ciri operasi penerima menunjukkan bahawa aktiviti GSK3b dalam sel terkelupas air kencing memberikan kuasa yang jauh lebih baik daripada albuminuria dalam mendiskriminasi pesakit diabetes dengan kerosakan buah pinggang yang progresif daripada mereka yang mempunyai fungsi buah pinggang yang stabil. Oleh itu, ekspresi dan aktiviti buah pinggang GSK3b dikuatkan dalam nefropati diabetik eksperimen dan klinikal. Oleh itu, GSK3b dalam sel terkelupas kencing boleh berfungsi sebagai biomarker baru untuk meramalkan diabetesbuah pinggangpenyakitperkembangan.

Penyakit buah pinggang kencing manis(DKD) terus menjadi punca utama kegagalan buah pinggang peringkat akhir di Amerika Syarikat dan negara maju yang lain.1,2 Walau bagaimanapun, tidak setiap pesakit diabetes mellitus menghidap nefropati diabetik (DN), seperti yang dibuktikan oleh sebilangan kajian susulan epidemiologi jangka.3 Sebab hasil heterogen ini tidak difahami sepenuhnya, tetapi nampaknya berbilang faktor, melibatkan pelbagai faktor penyebab, termasuk genetik, persekitaran, yang sedia ada.buah pinggangpenyakit, dan keterukan diabetes.4,5 Kawalan glisemik yang lemah telah menjadi faktor risiko yang terkenal untuk albuminuria dan DN. Namun begitu, sebahagian besar pesakit masih mengalami DN walaupun kawalan glisemik yang ketat.6 Dalam amalan klinikal, adalah perlu untuk mengguna pakai biomarker yang sensitif dan tepat untuk menstratkan pesakit diabetes yang berisiko mengalami kerosakan buah pinggang. Selama bertahun-tahun, albuminuria telah dianggap sebagai penanda pengganti komplikasi buah pinggang diabetik.7,8 Namun begitu, bukti yang semakin meningkat menunjukkan bahawa albuminuria mungkin tidak tepat.9,10 Percanggahan yang ketara antara albuminuria dan kerosakan buah pinggang dalam DN telah diperhatikan. 11,12 Menurut data Kajian Prospektif Diabetes United Kingdom, 13 daripada pesakit yang mengalami gangguan buah pinggang, 61 peratus tidak mempunyai albuminuria terlebih dahulu dan 39 peratus tidak pernah mengalami albuminuria semasa kajian. Begitu juga, pesakit yang mengalami albuminuria, hanya 24 peratus kemudiannya mengalami gangguan buah pinggang semasa kajian. Dalam erti kata lain, bagi pesakit dengan mikroalbuminuria atau makroalbuminuria, majoriti yang lazim mungkin tidak mengalami kerosakan buah pinggang. Data-data ini mencabar paradigma klasik albuminuria yang sentiasa mendahului kerosakan buah pinggang semasa perkembangan DKD. Oleh itu, adalah penting untuk mengenal pasti biomarker novel.

untuk meramal DN atau untuk diagnosis awal DN. Dalam dekad yang lalu, beberapa molekul baru telah diuji.14–16 Antaranya, glikogen sintase kinase 3 (GSK3) telah muncul sebagai calon yang menarik. GSK3 ialah kinase serine/treonine-protein yang sangat terpelihara dan diekspresikan di mana-mana yang pada asalnya dicirikan sebagai transduser utama bagi lata isyarat insulin dan mengawal glikogenesis. Minat terhadap GSK3 meningkat dengan ketara dengan kesedaran bahawa ia juga bertindak sebagai titik penumpuan untuk laluan isyarat sel berbilang yang terlibat dalamkeradangan, imunomodulasi, embriogenesis, kecederaan tisu, pembaikan dan penjanaan semula.17–19 GSK3 wujud sebagai 2 isoform: GSK3a dan GSK3b. Dalam tisu organ yang berbeza, 2 isoform dinyatakan secara berbeza. Dalam korteks buah pinggang, isoform b kebanyakannya dinyatakan dan terletak pada glomeruli dan sel tubular proksimal.20,21 Keterlaluan GSK3b Renal telah dikaitkan dengan pelbagai penyakit buah pinggang, termasuk Glo-neuropathies proteinurik dan penyakit buah pinggang kronik yang progresif.22 Namun begitu , sebagai transduser utama laluan isyarat insulin, peranan GSK3b dalam patogenesis DN masih belum diketahui. Ia masih perlu digariskan sama ada disregulasi GSK3b dalam buah pinggang terlibat dalam DN. Untuk menangani isu ini, kajian ini mengkaji profil ekspresi jumlah dan diaktifkan GSK3b dalam spesimen buah pinggang yang diperoleh daripada model murine dB / dB DN yang tidak bergantung kepada insulin dan dalam tisu biopsi buah pinggang daripada pesakit dengan pelbagai peringkat jenis 2 DN. Di samping itu, dalam kohort retrospektif pesakit diabetes jenis 2, tahap ekspresi jumlah dan diaktifkan GSK3b diukur dalam sel terkelupas kencing, yang telah diambil sampel sebagai biopsi buah pinggang cecair berasaskan air kencing. Kami mengkaji hubungan antara tahap ekspresi GSK3b atau bentuknya yang diaktifkan dalam sel-sel pengelupasan kencing asas dan perkembangan atau perkembangan kerosakan buah pinggang pada pesakit diabetes.

KEPUTUSAN

GSK3b terlalu tertekan dan hiperaktif dalam sel parenkim buah pinggang dalam tikus db/db, dikaitkan dengan perkembangan albuminuria dan kecederaan buah pinggang diabetes

Tikus db/db dengan kekurangan reseptor leptin adalah model yang mantap untuk diabetes mellitus jenis 2 dan DN. Bermula seawal usia 10 minggu, tikus db/db secara spontan mengalami tanda-tanda awalkecederaan buah pinggang, dicirikan oleh albuminuria progresif dan pengumpulan matriks dalam glomeruli.23 Sebaliknya, tikus kawalan padanan umur (db/m) mempunyai glikemia normal dan tiada bukti ketarapenyakit buah pinggang. Dalam eksperimen bermula pada usia 10 minggu, ekspresi buah pinggang jumlah (Rajah 1) dan diaktifkan (Rajah 2) GSK3b (fosforilasi pada Y216 [p-GSK3B]) dalam tikus db/db berbanding tikus kawalan db/m meningkat secara beransur-ansur ( Rajah 1b dan 2b). Ini terutamanya disetempatkan kepada podosit dan sel mesangial dalam glomeruli (Rajah 1a) dan kepada sel epitelium tiub dalam tubulointerstitial (Rajah 2a), seperti yang ditunjukkan oleh pewarnaan imunohistokimia. Penemuan morfologi telah disokong oleh analisis imunoblot keseluruhan homogenat buah pinggang (Rajah 1c dan 2c). Analisis regresi menunjukkan bahawa intensiti pewarnaan jumlah (Rajah 1d) dan diaktifkan (Rajah 2d) GSK3b dalam glomeruli berkorelasi positif dengan perkumuhan albuminuria dalam kencing dalam tikus db / db pada umur yang berbeza. Walaupun pada peringkat awal diabetes dalam tikus db / db, seperti pada usia 10 atau 14 minggu, aktiviti GSK3b telah meningkat dengan ketara dalam buah pinggang, seperti yang ditunjukkan oleh induksi p-GSK3b yang ketara (Rajah 2). Nampaknya hiperaktiviti GSK3b dalam buah pinggang tikus db / db pada peringkat awal sebahagian besarnya disebabkan oleh pengubahsuaian pasca terjemahan, seperti fosforilasi pada Y216, tetapi pada peringkat kemudian, ia disebabkan terutamanya oleh peningkatan ekspresi jumlah GSK3b.

Perkembangan DN mempunyai peningkatan pengumpulan matriks ekstraselular dalam kedua-dua glomeruli dan interstisial. Sesungguhnya, seperti yang ditunjukkan oleh pewarnaan imunohistokimia pendarfluor FL, buah pinggang tetikus db / db menunjukkan ekspresi fibronektin yang semakin meningkat dalam kedua-dua glomeruli dan interstisial (Rajah 3a). Ini disokong lagi oleh analisis imunoblot homogenat buah pinggang untuk fibronektin dan kolagen IV (Rajah 3b dan c). Selain itu, ekspresi GSK3b total dan diaktifkan berkorelasi positif dengan fibronektin dalamtisu buah pinggang(Rajah 3d).

Untuk menentukan lagi sama ada pengaktifan GSK3b yang dipertingkatkan mendahului pembangunan DKD, tikus db/db dan db/m telah disusuli dalam eksperimen berasingan bermula pada usia 4 minggu semasa peringkat pradiabetes. Pada minggu ke-7, tikus db / db menunjukkan hiperglikemia yang jelas (Supplementary Figure S1A), menunjukkan diabetes, tetapi tiada tanda-tanda DKD, seperti yang ditunjukkan oleh albuminuria biasa (Supplementary Figure S1B). Nota, walaupun dalam peringkat awal diabetes, ekspresi buah pinggang GSK3b dan p-GSK3b serta aktiviti relatif GSK3b yang dinyatakan sebagai nisbah p-GSK3b/GSK3b, telah meningkat secara berbeza-beza, seperti yang diukur oleh analisis imunoblot tisu biopsi buah pinggang. diikuti dengan densitometri (Tambahan Rajah S1C dan D). Di samping itu, analisis regresi linear menunjukkan bahawa aktiviti GSK3b buah pinggang pada minggu ke-7 berkorelasi positif dengan perkembangan albuminuria dan DKD pada minggu ke-13 (Rajah Tambahan S1E). Selain itu, analisis lengkung ciri operasi penerima (ROC) menunjukkan bahawa aktiviti GSK3b buah pinggang dalam tikus db / db pada usia 7 minggu, apabila tiada tanda DKD, memberikan ketepatan dan kuasa yang sangat baik dalam meramalkan perkembangan albuminuria dan DKD (Rajah Tambahan). S1F).

Pendedahan sel buah pinggang kepada persekitaran diabetes menyebabkan ekspresi berlebihan dan hiperaktif GSK3b, mengakibatkan perubahan sitopatik diabetes

Untuk menentukan sama ada keadaan diabetes secara langsung meningkatkan pengaktifan GSK3b dalamsel buah pinggang, kultur in vitro pelbagai sel buah pinggang, termasuk podosit murine, sel mesangial dan sel epitelium tiub, telah digunakan dan terdedah kepada persekitaran diabetes yang terdiri daripada glukosa ambien tinggi dan faktor pertumbuhan berubah (TGF) b1. Pendedahan podosit kepada persekitaran diabetes mengakibatkan kecederaan podosit yang ketara, ditandai dengan kehilangan synaptopodin protein penanda podosit. Ini adalah sewa serentak dengan induksi yang menonjol dari jumlah dan diaktifkan GSK3b, seperti yang ditunjukkan oleh pewarnaan immunocytochemistry pendarfluor FL (Rajah 4a dan b) dan disahkan oleh analisis imunoblot

(Rajah 4c dan d). Dalam sel mesangial berbudaya, ekspresi jumlah (Rajah 5a) dan diaktifkan (Rajah 5b) GSK3b juga ditambah selepas pendedahan kepada persekitaran diabetes, selari dengan peningkatan ekspresi molekul matriks ekstraselular seperti fibronektin (Rajah 5). Begitu juga, sel epitelium tubular renal yang dikultur mengekspresikan jumlah dan mengaktifkan GSK3b secara berlebihan selepas rawatan lingkungan diabetik, dan ini disertai dengan disfungsi dan penyahbezaan sel tubular, yang ditandai dengan pengurangan dan gangguan ekspresi molekul simpang ketat epitelium seperti zonula occludens (Z-1 -1) (Rajah 6a–d). Sebaliknya, sebagai kawalan osmolaliti, rawatan manitol bagi semua sel buah pinggang menghasilkan kesan yang tidak berbeza daripada yang disampaikan oleh persekitaran biasa yang mengandungi glukosa ambien biasa. Diabetes manusia bukan sahaja melibatkan hiperglikemia tetapi juga rintangan insulin. Walaupun adalah mustahil untuk mengasingkan sepenuhnya hiperglikemia daripada rintangan insulin dalam model haiwan atau pada pesakit, model in vitro telah digunakan untuk mengkaji kesan terpencil glukosa tinggi berbanding rintangan insulin. Untuk meniru keadaan rintangan insulin, isoform b reseptor insulin telah dirobohkan dalam podosit berbudaya, sel mesangial, dan sel tubular renal (Rajah Tambahan S2A-C), dan ini menguatkan ekspresi dan aktiviti GSK3b walaupun dalam keadaan normal. lingkungan, seperti yang ditunjukkan oleh analisis imunoblot dan densitometri. Tindakan ini diperkukuh selepas terdedah kepada persekitaran diabetes, menandakan kesan sinergistik rintangan insulin dan glukosa tinggi pada mengaktifkan GSK3b.

Hiperaktif GSK3b adalah penting dan mencukupi untuk kecederaan sel buah pinggang dan disfungsi yang ditimbulkan oleh persekitaran diabetes

Untuk meneroka sama ada hiperaktif GSK3b terlibat dalam perubahan sitopatik dalam sel buah pinggang, aktiviti GSK3b dalambuah pinggang kultursel telah dimanipulasi secara buatan oleh gangguan RNA

(RNAi) atau ekspresi berlebihan gen. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 7a, RNAi menggunakan scramble kecil, RNA yang mengganggu hampir tidak menjejaskan kesan sitopatik persekitaran diabetes dalam semua sel buah pinggang. Sebaliknya, pembungkaman GSK3b secara substansial membatalkan penindasan sinaptopodin yang disebabkan oleh lingkungan diabetes dalam podosit, induksi fibronektin dalam sel mesangial dan gangguan ZO-1 dalam sel tubular renal, menunjukkan bahawa GSK3b berkemungkinan penting untuk mencetuskan perubahan sitopatik yang berkaitan dengan diabetes. sel buah pinggang. Untuk membezakan sama ada ekspresi berlebihan dan hiperaktif GSK3b mencukupi untuk kesan sitopatik yang disebabkan oleh persekitaran diabetes, sel-sel telah ditransfeksi secara sementara dengan sama ada vektor kosong atau pengekodan vektor mutan aktif GSK3b (S9A). Walaupun pemindahan vektor kosong hampir tidak memberikan sebarang kesan, ekspresi berlebihan ektopik S9A mengakibatkan kehilangan ekspresi sinaptopodin dalam podosit, peningkatan pengeluaran fibronektin dalam sel mesangial dan pengurangan ZO-1 dalam sel tubular renal walaupun dalam persekitaran biasa (Rajah 7b), mengingatkan kesan sitopatik persekitaran diabetes.

Kemajuan DN manusia bertepatan dengan ekspresi berlebihan dan hiperaktif GSK3b dalam glomeruli dan tubul buah pinggang

Untuk mengesahkan lagi sama ada penemuan di atas dalam model kultur haiwan dan sel juga boleh digunakan untuk DN klinikal, tisu biopsi buah pinggang yang diarkibkan daripada subjek normal dan pesakit dengan pelbagai peringkat DN telah diproses untuk pewarnaan imunohistokimia peroksidase untuk GSK3b dan p-GSK3b. Ciri-ciri subjek kawalan dan pesakit diringkaskan dalam Jadual Tambahan S1. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 8a, buah pinggang

ungkapan jumlah dan diaktifkan GSK3b semakin bertambah bersama-sama dengan perkembangan DN sebagai digredkan mengikut klasifikasi patologi berdasarkan pewarnaan asid-Schiff berkala. Ini konsisten dengan data Nephroseq, yang juga menunjukkan ekspresi GSK3b yang meningkat dengan ketara dalam tisu biopsi buah pinggang daripada pesakit dengan DN (Supplementary Figure S3). Ekspresi peningkatan jumlah dan diaktifkan GSK3b kebanyakannya terletak pada podosit dan sel mesangial dalam glomeruli dan sel epitelium tubular renal dalam tubulointerstitial (Rajah 8a), sesuai dengan penemuan dalam tikus db / db. Keputusan morfologi telah disokong lagi oleh analisis morfometrik berkomputer, yang mendedahkan perkaitan positif antara tahap ekspresi jumlah (Rajah 8b) atau diaktifkan (Rajah 8c) GSK3b dan keterukan DN.

GSK3b adalah hiperaktif dalam sel terkelupas kencing yang dikumpulkan daripada pesakit diabetes dan meramalkan perkembangan kerosakan buah pinggang Di bawah kedua-dua keadaan fisiologi dan penyakit, pusing ganti dan penumpahan sel epitelium buah pinggang, seperti podosit glomerular dan sel epitelium tiub, berlaku secara berterusan, yang membawa kepada perkumuhan berterusan sel parenkim buah pinggang ke dalam air kencing. Sel-sel pengelupasan kencing telah berjaya dimanfaatkan sebagai biopsi buah pinggang cecair bukan invasif berasaskan air kencing untuk tujuan penyelidikan dan diagnostik.24,25 Dengan syarat penemuan yang disebutkan di atas bahawa ekspresi GSK3b total dan diaktifkan meningkat dalam sel parenkim buah pinggang pada pesakit dengan DN dan dalam DB/DB tikus walaupun pada peringkat awal sebelum albuminuria nyata, kami tertanya-tanya sama ada mengukur GSK3b dalam sel terkelupas kencing boleh digunakan untuk meramalkan

perkembangan atau perkembangan DKD manusia. Untuk tujuan ini, kami menggunakan biobank diabetes dan menjalankan kajian kohort retrospektif. Secara keseluruhan, 127 pesakit dengan diabetes mellitus jenis 2, yang telah disusuli di Hospital Gabungan Pertama Universiti Zhengzhou sejak 2010 dengan sampel air kencing yang dipecahkan, telah disaring untuk dimasukkan dalam kajian ini. Daripada pesakit ini, 67 telah dikecualikan, dengan 10 hilang untuk susulan, 52 mengalami disfungsi buah pinggang atau proteinuria yang jelas pada permulaan penyakit, dan 5 kemudiannya didiagnosis sebagai penyakit buah pinggang lain melalui biopsi atau pengimejan buah pinggang. Akhirnya, 60 pesakit telah didaftarkan dalam kajian kohort retrospektif ini (Rajah 9). Ciri demografi dan klinikal pesakit ini pada peringkat awal diringkaskan dalam Jadual 1. Tiada pesakit yang mengalami disfungsi buah pinggang atau proteinuria yang terang-terangan pada peringkat awal, dan tiada seorang pun yang memulakan terapi dialisis semasa tempoh susulan. Mengikut magnitud albuminuria, pesakit dikategorikan kepada 2 subkumpulan: kumpulan normoalbuminuria dan mikroalbuminuria. Kecuali tahap perkumuhan albumin kencing (UAE), 2 subkumpulan pesakit tidak berbeza secara statistik pada peringkat awal dalam semua parameter klinikal, biokimia dan fisiologi yang lain, termasuk tempoh diabetes, tahap hemoglobin terglikasi, fungsi buah pinggang, tekanan darah dan rawatan yang ditetapkan. . Selepas 5 tahun susulan, 29 daripada 60 pesakit menunjukkan perkembangan kerosakan buah pinggang, yang ditakrifkan sebagai sama ada pengurangan $25 peratus dalam anggaran kadar penapisan glomerular (eGFR) atau perkembangan status albuminuria seperti yang ditunjukkan oleh peningkatan keterukan. albuminuria sepanjang pelbagai peringkat klinikal DN, iaitu, normoalbuminuria, mikroalbuminuria, mikroalbuminuria, atau proteinuria yang terang-terangan. Sebaliknya, baki 31 pesakit tidak menunjukkan tanda-tanda perkembangan penyakit buah pinggang (Rajah 9). Data asas pesakit telah berstrata mengikut status perkembangan kerosakan buah pinggang selepas susulan 5 tahun (Jadual 2). Pesakit dengan perkembangan kerosakan buah pinggang, berbanding dengan mereka yang tidak mengalami perkembangan, menunjukkan pengurangan ketara dalam eGFR dan peningkatan yang ketara di UAE. Untuk menentukan sama ada GSK3b terlalu tertekan atau terlalu aktif dalam sel buah pinggang dan

diukur untuk menilai sensitiviti dan kekhususan aktiviti GSK3b dalam sel terkelupas kencing berbanding albuminuria asas untuk meramalkan perkembangan kerosakan buah pinggang. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 11, aktiviti relatif GSK3b dalam sel terkelupas kencing, dinyatakan sebagai nisbah p-GSK3b/GSK3b, menunjukkan ketepatan dan kuasa yang sangat baik dalam mendiskriminasi pesakit yang mengalami kerosakan buah pinggang progresif daripada mereka yang mempunyai fungsi buah pinggang yang stabil, dengan kawasan di bawah ROC. lengkung ialah 0.844 (95 peratus selang keyakinan, 0.747–0.941; P ¼ 0.001 ), yang jauh lebih baik daripada kawasan di bawah lengkung ROC untuk garis dasar Ln(UAE) ({{20}}.750; selang keyakinan 95 peratus, 0.626–0.874). Potongan yang memaksimumkan indeks Youden ialah 1.24 untuk nisbah p-GSK3b/GSK3b dan 76 mg/24 jam untuk UAE. Pada pemotongan ini, sensitiviti dan kekhususan adalah 69 peratus dan 87.1 peratus untuk nisbah p-GSK3b/GSK3b dan 69 peratus dan 77.4 peratus untuk Ln(UAE). Selain itu, gabungan nisbah p-GSK3b/ GSK3b dengan jumlah paras GSK3b dalam sel pengelupasan kencing telah meningkatkan kuasa diskriminasi dengan ketara, dengan kawasan di bawah lengkung ROC ialah 0.971 (95 peratus selang keyakinan, 0.931–1.{{48} }). Keputusan ini menunjukkan bahawa pengukuran aktiviti GSK3b dalam sel terkelupas kencing mungkin memberikan ketepatan yang lebih baik daripada UAE dalam meramalkan perkembangan kerosakan buah pinggang dalam pesakit diabetes.

To further explore whether enhanced GSK3b activation also predicts the development of DKD, a separate cohort of patients with type 2 diabetes but no signs of kidney disease, who started follow-up between 2010 and 2013, were retrospectively screened and examined (Supplementary Table S2). The baseline characteristics of patients were stratified according to the presence or absence of renal impairment or DKD after 5 years' follow-up (Supplementary Table S3), which was defined as either a $25% reduction in eGFR or the persistent presence of albuminuria (>30 mg/24 jam). Sel-sel terkelupas kencing yang disimpan pada garis dasar telah diambil dan diperiksa oleh analisis imunoblot untuk GSK3b dan p-GSK3b (Rajah Tambahan S4A dan B). Aktiviti GSK3b dianggarkan oleh nisbah densitometri p-GSK3b kepada jumlah GSK3b untuk setiap sampel berbanding dengan nilai sampel kawalan (Rajah Tambahan S4C).

Di antara pembolehubah klinikal/biokimia yang pelbagai, aktiviti GSK3b (nisbah p-GSK3b/GSK3b) dalam sel-sel pengelupasan kencing asas telah dicatatkan lebih tinggi pada pesakit yang mengalami DKD berbanding mereka yang tidak (Jadual Tambahan S3). Selain itu, analisis lengkung ROC menunjukkan bahawa aktiviti relatif GSK3b (nisbah p-GSK3b / GSK3b) dalam sel terkelupas air kencing memberikan ketepatan dan kuasa yang sangat baik dalam meramalkan perkembangan DKD dalam pesakit diabetes peringkat awal (Supplementary Figure S4D).