Vaksin Berasaskan MRNA Untuk COVID-19: Ia Baharu Tetapi Tidak Diketahui!

Abstrak:

Vaksin mRNA mengambil kesempatan daripada mekanisme yang digunakan oleh sel kita untuk menghasilkan protein. Sel kita menghasilkan protein berdasarkan pengetahuan yang terkandung dalam DNA kita; setiap gen menyandikan protein yang unik. Maklumat genetik adalah penting, tetapi sel tidak boleh menggunakannya sehingga molekul mRNA menukarnya menjadi arahan untuk menghasilkan protein tertentu. Vaksinasi mRNA menyediakan arahan mRNA sedia untuk digunakan untuk membina protein tertentu. BNT162b2 (Pfizer-BioNTech) dan mRNA-1273 (Moderna) kedua-duanya adalah vaksin COVID-19 berasaskan mRNA yang baru diluluskan yang telah menunjukkan perlindungan dan keberkesanan yang sangat baik. Secara keseluruhan, terdapat lima lagi calon vaksin berasaskan mRNA untuk COVID-19 di bawah fasa pembangunan klinikal yang berbeza. Semakan ini tertumpu secara khusus pada vaksin berasaskan mRNA untuk COVID{11}} meliputi pembangunan, mekanisme dan aspek klinikalnya.

manfaat cistanche untuk lelaki-menguatkan sistem imun

Kata kunci:

Vaksin COVID{0}}; vaksin mRNA; pembangunan vaksin; vaksin berasaskan vektor

1. Pengenalan

Pandemik penyakit Coronavirus{{0}} (COVID-19) yang disebabkan oleh coronavirus sindrom pernafasan akut teruk-2 (SARS-CoV-2) telah merebak ke seluruh dunia. Sehingga kini, di seluruh dunia, terdapat 662 juta kes COVID yang disahkan-19, termasuk 6.6 juta kematian dilaporkan kepada Pertubuhan Kesihatan Sedunia (WHO) [1]. Virus ini menjejaskan lebih daripada 200 negara di seluruh dunia, dengan sebahagian besar kes dilaporkan di Brazil, Rusia, dan Amerika Syarikat [2]. Laporan pertama wabak COVID-19 adalah dari Bandar Wuhan, Wilayah Hubei China pada 30 Disember 2019. Kelompok kes radang paru-paru direkodkan di Wuhan. Kemudian pada 7 Januari 2020, novel coronavirus (2019-nCoV) didapati sebagai agen penyebabnya. WHO akhirnya menamakan penyakit itu sebagai COVID-19 [3,4]. Anggaran kadar kematian kes berkisar antara 0.5–1.5%. SARS-CoV-2 tergolong dalam keluargaCoronaviridaedan perintah ituNidovirales. SARS-CoV-2 tergolong dalam Betacoronavirus yang mempunyai hubungan genomik rapat dengan dua virus, SARS-CoV dan coronavirus sindrom pernafasan Timur Tengah (MERS CoV). Berbanding dengan SARS dan MERS, SARS-CoV-2 sangat menular. COVID-19 ialah penyakit serius yang mempunyai kepentingan global. Penyakit ini tidak boleh dirawat dengan ubat antivirus tertentu, kunci untuk mencegah penyebaran penyakit adalah dengan memutuskan rantaian penularan [5]. Untuk mengurangkan prevalens dan kadar kematian, imunisasi besar-besaran terhadap pandemik digunakan [6,7]. Memandangkan jujukan genom SARS-CoV{10}} dikeluarkan pada 11 Januari 2020, lebih daripada 150 projek imunisasi berkuasa telah dikaji. Matlamat utama vaksinasi adalah untuk mendorong tindak balas imun yang memberikan perlindungan jangka panjang terhadap keterukan penyakit [8]. Seperti yang dinilai oleh Paddy Ssentongo dan rakan sekerja [9], keberkesanan vaksin (VE) terhadap semua jangkitan SARS-CoV-2 turun daripada 83% pada bulan pertama selepas selesai siri imunisasi pertama kepada 22% selepas 5 bulan atau lebih . Begitu juga, VE terhadap COVID bergejala-19 menurun daripada 94% pada bulan pertama kepada 64% pada bulan keempat selepas imunisasi. Secara keseluruhan, VE terhadap COVID yang teruk-19 adalah kuat pada semua peringkat umur, dengan tahap 90% (95% CI, 87–92%) lima bulan atau lebih selepas divaksin sepenuhnya.

Coronavirus telah memancarkan protein (S) pada permukaannya; protein S ini akan berinteraksi dengan domain pengikat reseptor reseptor enzim penukar angiotensin (ACE) [10,11]. Kebanyakan calon vaksin menyasarkan protein S virus ini [12]. Vaksin Pfizer BioNTech COVID-19-BNT162b2 ialah imunisasi pertama yang diluluskan oleh Pentadbiran Makanan dan Dadah (FDA). Ia berdasarkan RNA messenger (mRNA) yang dibuat oleh Pfizer yang menerima kebenaran penggunaan kecemasan untuk umur 12–15 tahun atau lebih untuk pencegahan penyakit-19 COVID. Pentadbiran Makanan dan ubat AS (USFDA) meluluskan vaksin Pfizer pada 23 Ogos 2021 [13]. Pelbagai kajian telah melaporkan bahawa imunisasi mempunyai kecekapan 89.1% dalam mencegah jangkitan SARS-CoV-2; selain itu, vaksin juga telah mengurangkan{19}penghospitalan yang berkaitan dengan COVID, kematian dan pencegahan kemasukan ke ICU. Penyebaran terkawal SARS-CoV-2 boleh dicapai lebih awal apabila sebahagian besar populasi diimunisasi (cth, 70–80%). Imunisasi mengurangkan dengan ketara kejadian COVID-19. Vaksin memberikan tindak balas imun yang teguh dan berkesan untuk membasmi jangkitan SARS-CoV-2 daripada tubuh manusia. Orang yang dijangkiti mempunyai tindak balas sel T yang kuat terhadap virus, yang mungkin membantu dalam keupayaan mereka untuk pulih daripada jangkitan [14,15]. Peneutralan kekal kuat berkorelasi dengan perlindungan daripada jangkitan simptomatik dengan varian SARS-CoV{31}} yang membimbangkan [16]. Oleh itu, vaksinasi adalah strategi untuk mengawal wabak tersebut.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

Vaksin COVID-19 sedang dibangunkan pada pelbagai platform. Virus hidup yang dilemahkan, vaksin yang tidak aktif, vektor virus yang tidak mereplikasi, RNA dan DNA adalah contoh-contoh ini. Jenis vaksin yang berbeza dengan contoh disenaraikan dalam Rajah 1. Strategi untuk pembangunan vaksin ialah menggunakan virus SARS-CoV-2 yang telah dibunuh, ia tidak dapat mereplikasi tetapi ia boleh kekal utuh di dalam badan. Sistem imun akan mencetuskan tindak balasnya terhadap virus dengan membuat antibodi terhadapnya. COVAXIN® (BBV152) yang dikeluarkan oleh Bharat Biotech, Hyderabad, India, dan CoronaVac juga dikenali sebagai sinovac® yang dibangunkan oleh Sinovac Biotech, Beijing, China telah menggunakan pendekatan virus yang tidak diaktifkan untuk membangunkan vaksin [17]. Vektor virus yang tidak mereplikasi juga merupakan teknik yang digunakan oleh syarikat untuk pengeluaran vaksin. Adenovirus (Iklan) ialah vektor virus yang digunakan secara meluas yang mempunyai genom rantai dua yang bertindak sebagai agen penyebab selesema biasa. CanSino Biologics Tianjin, China telah membangunkan Ad5-nCoV (Convidecia®) yang mengekodkan panjang penuh S-protein virus SARS-CoV-2. Vektor virus tidak mempunyai sifat replikasi dan oleh itu tidak menyebabkan penyakit sebenar. Sebaik sahaja dimasukkan ke dalam badan, DNA virus dibentangkan pada sel pembentang antigen dan tindak balas imun dihasilkan terhadapnya. Oxford/Astrazeneca telah menggunakan adenovirus daripada cimpanzi (ChAdOx1) yang mempunyai potensi untuk meminimumkan interaksi dengan antibodi lazim terhadap adenovirus. Vaksin itu dinamakan AZD122 (Vaxzevria™). Institut Penyelidikan Gamaleya, Moscow, Rusia membangunkan vaksin Sputnik V™ juga merupakan vektor virus yang mempunyai serotaip Ad26 manusia rekombinan. Vaksin Janssen telah dihasilkan oleh Johnson dan Johnson, New Jersey, Amerika Syarikat menggunakan pendekatan yang sama [18].

mRNA juga dianggap sebagai pendekatan baru untuk merumuskan vaksin. Vaksin mRNA adalah baru kepada orang ramai, tetapi saintis telah menelitinya untuk masa yang lama. Vaksin mRNA ini disintesis daripada templat DNA yang mengekod protein spike dan dibungkus ke dalam pembawa berasaskan lipoprotein untuk mempercepatkan kemasukan mRNA ke dalam badan dan mencegah degradasi [19]. Apabila vaksin diberikan melalui laluan intramuskular, ia disuntik ke dalam tisu yang lebih dalam dan molekul mRNA akan masuk ke dalam sel, memudahkan proses terjemahan [20]. Apabila memasuki badan, mRNA akan dikenali sebagai antigen dan tindak balas imun humoral akan diaktifkan yang akan merangsang sel B untuk berkembang menjadi sel B memori. Oleh itu pada pendedahan sekunder kepada antigen; sel B memori akan meneutralkan dan menyekat antigen [21]. FDA telah meluluskan vaksin berasaskan mRNA, salah satunya ialah Pfizer-BioNTech's, New York, NY, USA BNT162b2 (Comirnaty®) dan satu lagi ialah mRNA Moderna™, Cambridge, MA, USA-1273 juga dikenali sebagai Spikevax. FDA meluluskan mRNA-1273 untuk kebenaran penggunaan kecemasan (EUA) untuk kegunaan orang yang berumur 18 tahun ke atas. Semakan semasa akan memberikan maklumat terperinci tentang vaksinologi dan fakta tentang COVID{11}}, pembangunan vaksin berasaskan mRNA, cara vaksin mRNA berfungsi, perumusan dan ramuan yang digunakan, keselamatan dan keberkesanan serta cabaran pengawalseliaan untuk vaksin.

Rajah 1. Pelbagai jenis vaksin untuk jangkitan COVID-19. (Dicipta dengan BioRender.com diakses pada 31 Disember 2022)

2. Vaksinologi dan Fakta tentang COVID-19

Pada Disember 2019, sekumpulan individu yang mengalami gangguan paru-paru atas sebab yang tidak diketahui telah dilaporkan di China. Pusat Kawalan dan Pencegahan Penyakit China (CDC) kemudiannya menyiasat ketidakpastian dalam kes berkaitan radang paru-paru dan asal usulnya dengan mengumpul spesimen daripada badan pesakit yang dikesan menggunakan tindak balas rantai polimerase masa nyata [22]. Kemudian, punca gangguan paru-paru diketahui dan ia didapati disebabkan oleh coronavirus, yang kemudiannya dinamakan SARS-CoV-2 (sindrom pernafasan akut teruk) atau COVID-19. Sejak itu, ia telah bertukar menjadi pandemik global. Ia tergolong dalam kumpulan -coronavirus. Dari segi struktur, ia adalah bersampul, tidak bersegmen, kepunyaan subgenus Sarbecovirus, dan subfamili Orthocoronavirinae. Bahan genomik yang terdapat dalam strukturnya ialah urutan RNA deria positif untaian tunggal [23]. Mereka ditemui terutamanya dalam perumah burung dan mamalia. Struktur genom coronavirus telah digambarkan dalam Rajah 2, yang mewakili bahawa struktur virus mempunyai protein spike, mempunyai subunit, S1 dan S2, pada membran luar. Genom virus RNA dikapsulkan di dalam membran bersama-sama dengan nukleokapsid. Oleh itu, kita boleh mengatakan bahawa terdapat empat protein struktur, iaitu, protein spike (S), protein nukleokapsid (N), protein membran (M), dan protein sampul (E) [24]. Di samping itu, protein bukan struktur (Nsp) juga terdapat iaitu enam belas jumlahnya. Protein spike adalah tapak pengikat reseptor yang menonjol, di mana protein boleh berinteraksi dengan reseptor yang terdapat dalam badan [25]. Subunit S1 termasuk domain pengikat reseptor (RBD), di mana enzim penukar angiotensin II mengikat protein spike. Ia juga terdiri daripada domain N-terminal (NDT). Subunit S2 mempunyai protein gabungan (FP) dan protein transmembran (TM) [26]. Apabila virus masuk ke dalam sel perumah, ia membawa kepada gabungan dan penyalutan membran virus, diikuti dengan transkripsi dan terjemahan mRNA, yang penting untuk pembentukan himpunan virus, yang kemudiannya keluar dari perumah melalui eksositosis untuk menjangkiti. sel lain. Kemasukan zarah virus ke dalam sel lain badan membawa kepada rangsangan tindak balas imun dan penjanaan antibodi [27].

Rajah 2. Struktur genom coronavirus. (Dicipta dengan BioRender.com diakses pada 31 Disember 2022).

Di peringkat global, imunisasi telah digunakan secara meluas dan cekap dalam mengurangkan kadar kematian. Berdasarkan sains dan pengetahuan yang mantap, penilaian keselamatan dan keberkesanan vaksin serta penilaian pengambilannya boleh dipertingkatkan [28]. Vaksin telah berkembang daripada vaksin tradisional seperti vaksin hidup yang dilemahkan atau dibunuh kepada vaksin subunit dan akhir sekali, strategi imunisasi rangsangan perdana homolog atau heterolog [29]. Strategi vaksin yang berbeza telah digambarkan dalam Rajah 3. Pada zaman dahulu, vaksin yang dilemahkan hidup telah terbukti menjadi penyelamat terhadap pelbagai virus patogen dan dianggap selamat terhadap berjuta-juta populasi, tetapi ia sering diabaikan. Banyak vaksin termasuk MMR (measles, mumps, rubella) dan vaksin cacar air adalah vaksin yang dilemahkan secara langsung [25,30]. Bentuk virus yang lemah boleh dicapai dengan pendedahan kepada keadaan buruk atau dengan pengubahsuaian genetik. Vaksin jenis ini, khususnya vaksin polio oral (OPV) boleh diberikan melalui laluan bukan invasif. Sebaliknya, vaksin yang telah dibunuh, yang merupakan versi virus yang tidak aktif, mempunyai aplikasi yang terhad dari segi tindak balas imunologi tetapi vaksin India yang digunakan pada masa ini, COVAXIN®, yang dikeluarkan oleh Bharat Biotech International Limited, Hyderabad, Telangana, India menggunakan versi yang tidak diaktifkan. virus dalam formulasi vaksinnya [31]. Virus yang tidak aktif cukup mampu untuk mengekalkan kesesuaian epitomenya yang membantu dalam memodulasi tindak balas imun humoral [32].

Rajah 3. Interaksi vaksin dengan sel perumah dan zarah virus. (Dicipta dengan BioRender.com diakses pada 31 Disember 2022)

Teknologi terkini seperti vaksin berasaskan mRNA atau vaksin berasaskan vektor memanfaatkannya sepenuhnya untuk keselamatan dan keberkesanan vaksin COVID-19 [33]. Vaksin berasaskan vektor juga dikenali sebagai vaksinasi pendorong utama heterologus, yang membantu dalam mendorong kedua-dua tindak balas imun selular dan humoral, manakala vaksin sub-unit hidup mencetuskan tindak balas humoral sahaja [34-39]. Menurut kajian, peningkatan 5-10 kali ganda dalam tindak balas imun pengantara sel T dalam kes vaksin berasaskan vektor heterolog berbanding dengan formulasi yang sama, disediakan menggunakan pendekatan homolog [40]. Oleh itu, vaksin berasaskan vektor, iaitu berasaskan DNA dan RNA lebih diutamakan berbanding berasaskan sub-unit, sering dianggap lebih teguh berbanding vaksin RNA, dan berkesan kerana ia mengekod protein spike struktur virus. Dalam kes virus Chikungunya, strategi imunisasi menggunakan DNA dan zarah seperti virus menghasilkan tindak balas imun yang lebih baik dalam kajian haiwan [41]. Kadangkala, vaksin DNA memerlukan sistem penghantaran khusus seperti elektroforesis, tatasusunan jarum mikro dan sistem berasaskan pembawa seperti liposom untuk meningkatkan kebolehtelapan. Mikrosfera berasaskan asid polylactic-co-glycolic telah dirumuskan untuk penghantaran vaksin DNA HIV{24}} melalui laluan intramuskular [42]. Walau bagaimanapun, vaksin berasaskan DNA menjana tindak balas imun yang sedikit dan selalunya memerlukan dos lain. Ini boleh diatasi dengan penggunaan vaksin berasaskan mRNA [25,43].

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

3. Pembangunan Vaksin Berasaskan mRNA

Dahulu, bentuk RNA yang berbeza digunakan untuk perumusan vaksin, termasuk mRNA yang ditranskripsikan secara in vitro, siRNA (RNA gangguan kecil), aptamer berasaskan RNA, riboswitch, molekul antisense dan kemudiannya, mRNA. Kesedaran tentang asid ribonukleik messenger, iaitu, mRNA berasal dari penciptaan asasnya, tambahan pula, ekonomi, pergerakan sementara dan pecahan perlahan dalam sel sasaran, dan faedah keselamatannya berbeza dengan terapeutik DNA kerana ia tidak menyelaraskan genom manusia, menghalang sisipan. mutagenesis, dan boleh diakses dengan segera untuk tafsiran ke dalam protein dalam sitoplasma sel [44]. Pada awal 1990-an, penyelidik bekerja dengan banyak untuk berjaya dalam pembangunan vaksin berasaskan mRNA. Pelbagai eksperimen telah dilakukan secara in vitro dan hasilnya menunjukkan pengeluaran protein yang diingini seterusnya; Oleh itu, telah disimpulkan bahawa oleh kerana mRNA cukup mampu untuk menghasilkan protein, maka ia boleh menjadi rejimen terapeutik yang berkemungkinan untuk merawat penyakit tersebut [45]. Menurut Martinon et al., vaksin mRNA berasaskan nukleoprotein untuk rawatan influenza telah disintesis oleh transkripsi in vitro dan telah dimasukkan ke dalam vesikel liposomal. Hasilnya menunjukkan induksi sel T dan antibodi sitotoksik, dalam vivo [46]. Sejak itu, terdapat perkembangan progresif dalam penggunaan mRNA sebagai alat terapeutik kerana keberkesanannya yang ketara, peningkatan mudah, dan keberkesanan kos, yang merupakan keperluan utama untuk rawatan penyakit yang sangat berjangkit dan terapi kanser. Kajian penyelidikan terkini mendedahkan bahawa terapi berasaskan mRNA secara signifikan melindungi tikus daripada gejala Chikungunya dan mengekalkan tahap antibodi yang diingini selepas dua dos [47]. Vaksin berasaskan RNA menyasarkan sel-sel imun badan dengan mengubah fungsinya, menyasarkan ribosom untuk terjemahan, dengan itu menjana tindak balas imun [19].

Imunisasi berasaskan mRNA terdiri daripada mRNA untai tunggal, yang mengekod antigen yang dikehendaki. Ia boleh dihantar sebagai mRNA telanjang atau dikapsulkan ke dalam sistem pembawa yang sesuai untuk memudahkan penghantaran ke dalam sel. Sebaik sahaja mRNA memasuki sel, ia diterjemahkan ke dalam struktur berasaskan protein oleh mekanisme semula jadi sel. Ia selanjutnya tertakluk kepada pengubahsuaian selepas terjemahan untuk mendapatkan protein yang menarik dan menjana tindak balas imun seperti yang ditentukan oleh peptida isyarat [44,48]. Vaksin berasaskan mRNA menghadapi sekurang-kurangnya dua halangan: kemerosotan nuklear apabila disuntik ke dalam haiwan dan imunogenisiti semula jadi yang serupa dengan antigen [49]. Untuk mengatasi masalah ini, pseudo-uridine (Ψ) ialah pengubahsuaian RNA yang terkenal. Ψ menggantikan uridin dengan mRNA transkripsi in vitro (IVT), yang merupakan nukleotida yang sangat lazim dan semulajadi dalam semua sel dengan RNA. Vaksinasi terhadap COVID-19, yang dihasilkan oleh kedua-duanya, Moderna dan Pfizer-BioNTech terdiri daripada Ψ diubah suai yang mempunyai keberkesanan sehingga 90% terhadap gejala [50]. Di mana, vaksin yang dibangunkan oleh CureVac NV tidak mempunyai mRNA yang diubah suai Ψ dan ujian klinikal mengesahkan keberkesanan 48% sahaja [51].

Semasa proses terjemahan, terutamanya, dua kategori vaksin mRNA yang berbeza wujud, iaitu, mRNA tidak menguatkan (NMR) dan mRNA menguatkan diri (SMR). Mekanisme kerja mRNA tidak menguatkan dan mRNA menguatkan diri dijelaskan dalam Rajah 4. Secara struktur, seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 5, kedua-dua struktur mempunyai CAP, 50 dan 30 kawasan tidak diterjemahkan (UTR), bingkai pembukaan (ORF), dan ekor kuda yang sama [52,53].

Rajah 4. Kategori mRNA. (Dicipta dengan BioRender.com diakses pada 31 Disember 2022)

Di samping itu, SMR mempunyai replika sebagai segmen yang membantu dalam penguatan mRNA secara intrasel. Selanjutnya, segmen diterjemahkan oleh ribosom untuk menghasilkan protein yang menarik. Protein yang dirembeskan membawa kepada penjanaan tindak balas imun [54]. SMR secara perbandingan lebih besar daripada NMR dan molekul anionik. Kajian terbaru RNA mereplikasi diri menunjukkan ekspresi sub-genom in vitro yang lebih baik bagi protein bukan struktur replika Venezuelan equine encephalitis (VEE) apabila mutasi berbeza diperhatikan. Kajian percubaan klinikal yang serupa telah dijalankan untuk menyasarkan glikoprotein Rabies menggunakan RNA penguat diri virus VEE-Sindbis yang dirumuskan ke dalam emulsi nano sedang berjalan [55]. Atribut kualiti kritikal utama (CQA) yang mentakrifkan keberkesanan terapi mRNA diringkaskan dalam Jadual 1 [54].

Rajah 5. Pengoptimuman jujukan mRNA. (Diadaptasi daripada [56] dengan hak dan kebenaran).

Jadual 1. CQA untuk vaksin mRNA.

Pengilangan mRNA adalah proses dua langkah, yang merangkumi pengeluaran dan penulenan. Tiada kekotoran hadir dalam sistem pembuatan mRNA kerana ia tidak mengandungi sebarang bahan mentah yang berasal dari haiwan atau sel, pengeluarannya secara relatif lebih selamat [65]. Penghasilan jujukan mRNA mungkin merupakan proses enzimatik satu langkah atau proses enzimatik dua langkah. Analog capping digunakan dalam kes proses pengeluaran satu langkah, yang biasanya digunakan pada skala makmal. Proses itu kemudiannya dicapai dengan penulenan, yang melibatkan pemisahan menggunakan teknik kromatografi seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 6. Tindak balas enzimatik dua langkah untuk penghasilan mRNA merangkumi transkripsi in vitro templat DNA untuk membentuk jujukan polimerase RNA [66]. Templat mRNA yang terbentuk boleh dihadkan menggunakan enzim pembatas vaccinia dan penderma metil. Pengeluaran mRNA agak tinggi dan pada skala industri, sukar untuk mencapai kebolehulangan [67].

Rajah 6. Proses pembuatan jujukan mRNA. (Dicipta dengan BioRender.com diakses pada 1 Januari 2023)

4. Bagaimanakah Vaksin mRNA Berfungsi?

mRNA ialah molekul bercas negatif yang tidak stabil yang terkandung dalam nanopartikel lipid. Melalui endositosis, nanopartikel lipid ini memasuki sel. Sebaik sahaja memasuki sitoplasma endosom ini segera diarahkan ke lisosom untuk degradasi. Kajian mendedahkan bahawa lipid boleh terion memainkan peranan penting dalam pelepasan dan pembebasan mRNA endosom. Kumpulan kepala lipid terprotonasi dalam persekitaran berasid endosom, dan keadaan kationik ini kemudiannya dilekatkan pada kepala anionik fosfolipid dalam membran endosom. Ekor hidrofobik lipid kationik dan fosfolipid kemudian memanjang, mengganggu struktur fosfolipid dwilapisan dan membenarkan mRNA melarikan diri ke dalam petak sitoplasma. Ribosom mengubah mRNA menjadi protein apabila ia dibebaskan. Protein ini boleh mengaktifkan tindak balas imun dalam dua cara: (1) Proteasome merendahkan protein ini menjadi peptida, yang kemudiannya dibentangkan sebagai antigen pada permukaan sel oleh MHC (major histocompatibility complex) molekul kelas I, yang mengikat TCR (T). reseptor sel) untuk mengaktifkan CD8+ sel T, yang membunuh sel yang dijangkiti; protein itu sendiri boleh mengaktifkan tindak balas imun dalam dua cara. (2) Protein yang dirembeskan secara ekstraselular diserap oleh APC (sel pembentang antigen) dan terdegradasi kepada peptida yang dibentangkan pada permukaan sel oleh MHC kelas II dan dikenali oleh sel CD4+ T, yang merembeskan sitokin untuk menghasilkan selular. tindak balas dan bersama-sama mengaktifkan sel B untuk menghasilkan tindak balas imun humoral, seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 7. Tambahan pula, vaksin mRNA menyampaikan RNA untai dua dan untai tunggal yang mengikat TLR (reseptor seperti Tol) dalam endosom, mengakibatkan rangsangan pelbagai gen yang dirangsang IFN-1 (jenis I interferon), oleh itu mengaktifkan tindak balas imun semula jadi antivirus.

Rajah 7. Mekanisme di mana Vaksin mRNA menimbulkan imuniti kepada perumah. (Dicipta dengan BioRender.com diakses pada 1 Januari 2023)

5. Aspek Penggubalan Vaksin Berasaskan mRNA

Sebaik sahaja mRNA yang ditranskripsi disuntik, ia akan mengekspresikan protein di dalam badan. Tindak balas imunologi diperhatikan disebabkan oleh protein yang dinyatakan daripada mRNA. Proses ini sebahagian besarnya merupakan asas pembangunan vaksin mRNA [68].

5.1. Templat DNA

Pengenalpastian antigen daripada patogen sasaran adalah langkah paling utama. Pembangunan imunisasi mRNA memerlukan penambahan antigen yang dikodkan dalam templat DNA, yang akan membantu dalam terjemahan mRNA secara in vitro. Antigen spesifik akan dihasilkan dalam vivo oleh transkripsi mRNA yang ditranskripsi, yang hanya akan mencapai sitoplasma; ini akan membantu dalam menimbulkan tindak balas imun. DNA plasmid (pDNA) mengandungi jujukan promoter dengan pertalian kuat kepada polimerase RNA yang bergantung kepada DNA, seperti T7, SP6, atau T3, serta jujukan yang sesuai untuk binaan mRNA. Enzim akan meneruskan templat, memanjangkan transkrip RNA sehingga ia mencapai penghujung templat [69].

5.2. Enzim Capping

Untuk penterjemahan mRNA yang cekap daripada templat DNA, penutupan pada 50 hujung mRNA adalah sangat penting. Tambahan pula, 50 capping dalam mRNA matang diperlukan untuk perlindungan mRNA daripada degradasi, ekspresi gen, dan pengambilan ribosom. Jambatan 5 0 -50 -trifosfat menyambungkan 50 penutup mRNA eukariotik kepada 7-metilguanosin (m7G) (m7GpppN). Teknik co-transkripsi baru yang menggunakan kit penutup bersih untuk menambah struktur 50 cap1 semula jadi dengan tepat pada tapak permulaan semasa tindak balas IVT telah menjadikan penjanaan 50 mRNA berhad oleh polimerase T7 sebagai kaedah penutup yang biasa digunakan dengan terjemahan yang baik dan kereaktifan minimum. Dalam vaksin mRNA COVID-19 BNT162b1, 5 0 penutup telah ditambahkan menggunakan kaedah penutup bersih [70]. MRNA transkripsi analog penutup mempunyai ekor poli 1 dan ekor 30 (poli-A) terdapat pada 30 hujung mRNA eukariotik. Ekor poli A ini menjalankan fungsi pengangkutan, terjemahan, dan kestabilan mRNA. Ekor 30 poli A dan penutup 50 akan mencipta struktur gelung tertutup yang stabil dengan kompleks eIF4F untuk permulaan proses terjemahan. Oleh kerana 120 nukleotida (nt) dalam ekor 30 poli(A), vaksin mRNA BioNTech mempunyai kestabilan dan kecekapan terjemahan yang unggul [71].

5.3. Substrat Nukleotida Trifosfat (NTP)

Apabila plasmid DNA disepadukan dengan T7 polimerase dan nukleotida trifosfat, mRNA diterjemahkan dengan lebih cekap dan lebih banyak hasil dihasilkan. Selepas pemberian vaksin, kebimbangan yang dibangkitkan ialah imunogenik. Pada pengaktifan isyarat hiliran, badan akan mengenali dan bertindak balas kepada RNA virus. Pengiktirafan RNA tunggal dan dua untai ini adalah oleh reseptor endosom seperti reseptor seperti Tol (TLR3), TLR7 dan TLR8. RNA beruntai dua dan 50 -trifosfat yang diubah suai dikenali oleh gen-I (RIG-1) dan pembezaan melanoma yang berkaitan dengan protein 5 (MDA-5) reseptor sitosol. Reaksi alahan dan kejutan anaphylactic dilaporkan apabila sistem imun badan diaktifkan dengan cara yang tidak terkawal. Rangsangan berlebihan sistem imun pada tahap molekul ini akan mengehadkan terjemahan protein, ekspresi antigen, dan keberkesanan vaksin. Had ini boleh diatasi dengan pengubahsuaian nukleobase. N{13}}metil pseudouridine, nukleobes yang diubah suai, akan meningkatkan pengeluaran protein dan mengurangkan pengaktifan TLR3. Nukleotida yang diubah suai melalui RIG{15}} bukan sahaja menjejaskan interaksi protein-RNA tetapi juga mengurangkan keupayaan mRNA untuk menyebarkan isyarat imunologi. Kecekapan terjemahan mRNA kepada protein dipertingkatkan kerana N{17}}methylpseudouridin. Permulaan terjemahan yang berlaku dengan cepat akan meningkatkan separuh hayat mRNA [50].

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Enhance Immunity

【Minta lebih lanjut】 E-mel:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

5.4. Komponen Nanozarah Lipid untuk Penghantaran mRNA

Berbanding dengan semua vaksin lain, vaksin mRNA dibangunkan agak cepat dan lebih berkesan. Walau bagaimanapun, cabaran terbesar dalam pembuatan vaksin mRNA adalah kestabilan yang lemah. Kestabilan dan kapasiti vaksin untuk merawat jangkitan COVID-19 berkurangan kerana vaksin dipecahkan dengan cepat oleh ribonuklease selepas bersalin, menghasilkan komponen rosak yang disingkirkan melalui buah pinggang. Untuk menangani cabaran ini, mRNA boleh dirumuskan dengan nanopartikel lipid (LNPs). Vaksin mRNA-LNP akan melindungi mRNA daripada kemerosotan pramatang dan akan memudahkan penghantaran sitoplasma kepada sel-sel pembentang antigen [72]. Lipid adalah agen yang sempurna untuk menghantar mRNA di tapak sitosol, kerana peleburannya serasi dengan membran sel lipid; membawa kepada pelepasan mRNA yang disasarkan dan berkesan. LNP ialah zarah bersaiz nano dengan diameter kurang daripada satu mikron yang mengandungi dua atau lebih lipid dalam perkadaran yang berbeza-beza. LNP berbeza daripada liposom kerana kehadiran komponen lipid dalam teras sebagai campuran tidak berterusan. LNP yang menjalani perumusan mempunyai struktur vesikular multilamellar, cangkang teras homogen, dan teras berstruktur nano [73]. Terdapat kehadiran air di dalam teras LNP, yang mendedahkan mRNA untuk interaksi dengan medium akueus. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 8, mRNA terletak di dalam LNP, yang melindunginya daripada persekitaran luaran. Komposisi yang paling biasa, yang membentuk sistem LNP mRNA ialah lipid kationik/boleh terion, fosfolipid ("lipid penolong"), kolesterol, dan polietilena-glikol (PEG). Ciri-ciri fizikokimia di dalam sistem penghantaran LNP, seperti keberkesanan enkapsulasi, cas permukaan luar, saiz zarah, dan bentuk boleh diubah suai dengan mudah dengan melaraskan komposisi lipid. Nisbah komponen diselaraskan bergantung pada tisu sasaran yang dikehendaki [74].

Rajah 8. Struktur Lipid Nanopartikel yang digunakan untuk penghantaran mRNA yang cekap. (Dicipta dengan BioRender. com diakses pada 1 Januari 2023)

5.4.1. Lipid Kationik

Dengan kumpulan amina yang memberikan cas positif bersih, rantai hidrofobik, dan kumpulan kaitan yang membolehkan perlekatan bahagian hidrofilik pada rantai hidrofobik, lipid kationik mempamerkan sifat amfifilik. Mereka mempunyai cas positif kekal di kepala kutub mereka, yang membantu dalam interaksi dengan asid nukleik bercas negatif, meningkatkan kecekapan memerangkap. Melarikan diri endosomal sistem LNP dan pengambilan selular juga meningkat kerana caj positif bersih. Untuk pentadbiran mRNA, lipid kationik, lipid terion, dan jenis lipid lain telah disiasat. Berbanding dengan lipid kationik tidak terion, lipid terion, yang bercas positif pada pH rendah dan pH fisiologi kekal neutral, secara perbandingan kurang toksik disebabkan oleh variasi pH. Di dalam membran sel, ia dicas secara positif dan dalam aliran darah, ia mempunyai sifat tidak bercas. Vaksin BNT162b2 terdiri daripada ALC lipid kationik-0315 manakala mRNA-1273 terdiri daripada SM-102; pada pH rendah, kedua-dua lipid terprotonasi dengan mudah akan membentuk kompleks dengan mRNA. Satu aliran mRNA dalam air digabungkan dengan campuran lipid dalam etanol menggunakan peranti mikrobendalir. Untuk memerangkap mRNA bercas negatif, komponen kedua-dua aliran ini bergabung dengan cepat untuk menghasilkan nanozarah [75]. Untuk vaksin BNT162b2 nisbah molar lipid kationik: PEG-lipid: kolesterol: DSPC ialah (46.3:1.6:42.7:9.4) dan untuk mRNA-1273 ialah (50:1.5:38.5:10). Nanopartikel mempunyai diameter 80-100 nm dan kira-kira 100 molekul mRNA terdapat untuk satu nanopartikel lipid [73].

5.4.2. Lipid Polietilena Glikol (PEG).

Untuk kestabilan koloid dan pencegahan pengikatan protein kepada lipid polietilena glikol nanopartikel digunakan. Mereka memberikan peredaran sistemik yang lebih lama dengan meminimumkan pelepasan zarah nano. LNP boleh menyebabkan pengagregatan fizikal dalam larutan, yang boleh meningkatkan saiz zarah LNP, dan lipid PEG boleh mengatasi mungkin masalah pelepasan pramatang mRNA terkapsul. Selain itu, kestabilan penyimpanan LNP juga akan dipertingkatkan [76].

5.4.3. Kolestrol

Untuk pemindahan sel dan untuk menstabilkan LNPs kolesterol mempunyai peranan penting. Suhu peralihan yang lebih rendah dicapai apabila kandungan kolesterol meningkat dalam LNP, ini akan membantu dalam melepaskan mRNA daripada LNP dan translokasinya merentasi membran endosom [77]. Dalam kajian yang dijalankan oleh Zhang et al., liposom yang diubah suai telah dirumus menggunakan peptida kationik DP7 yang diubah suai kolesterol bersama-sama dengan Dioleoyl-3- trimethylammonium propana (DOTAP) sebagai pembawa untuk penghantaran mRNA. Liposom disediakan dengan teknik penghidratan filem dan kemudian, dinilai untuk kecekapan pemindahannya. In vitro, kajian transfeksi mendedahkan peningkatan kecekapan transfeksi dengan peningkatan kepekatan DP7 peptida. Di samping itu, dalam vivo, kajian anti-tumor menunjukkan bahawa kompleks mempunyai keberkesanan yang lebih baik terhadap tumor [78].

5.4.4. Eksipien Lain

Vaksin mRNA terdiri daripada penstabil cth. Tromethamine, yang menampan untuk mengekalkan pH 7–8, Garam: Membantu mengimbangi keasidan dalam badan anda, Gula yang membantu molekul mengekalkan bentuknya semasa pembekuan bertindak sebagai cryoprotectant dan mengekalkan kestabilan jangka panjang perumusan lipid nanopartikel-mRNA [73]. Ringkasan bahan utama yang digunakan dalam vaksin berasaskan mRNA disediakan dalam Jadual 2 dan 3.

Jadual 2. Bahan utama yang digunakan dalam vaksin berasaskan mRNA.

Jadual 3. Ramuan formulasi vaksin mRNA Pfizer dan Moderna.

5.5. Sistem Penghantaran Lain untuk mRNA

5.5.1. Nanopartikel Polimer

Nanopartikel polimer boleh disintesis daripada polimer sintetik atau semula jadi seperti PLGA [poli (asid laktik-ko-glikolik)], kitosan, PLA (asid polilaktik), polikaprolakton, gelatin, dan poli-alkil-sianoakrilat. Nanopartikel polimer ini boleh membungkus sebatian dan protein hidrofobik dan hidrofilik, jangka hayat yang panjang; dan boleh mengubah suai penghantaran sebatian terapeutik. RNA boleh dikapsulkan dalam polimer kationik yang dipasang sendiri dengan pengubahsuaian hidrofobik [80,81].

5.5.2. Emulsi Nano Kationik

Emulsi nano kationik telah terbukti sebagai kenderaan penghantaran yang berkesan untuk penghantaran asid nukleik. Lipid kationik yang terdapat dalam emulsi nano adalah penting untuk kompleks dengan asid nukleik melalui interaksi elektrostatik dan meningkatkan kecekapan pemindahan asid nukleik dan kestabilannya. Kajian mendedahkan bahawa sistem penyampaian nano-emulsi kationik mRNA meningkatkan tindak balas imun dengan merekrut sel imun dan mendorong tindak balas selular terhadap antibodi dan T-primat pada dos yang agak rendah [80,82].

5.5.3. Nanozarah Silika

Nanozarah silika mesopori terdiri daripada matriks silika amorfus dengan keliangan yang tersusun dengan baik dalam julat mesoporus. Nanopartikel ini mempunyai kawasan permukaan yang besar dengan isipadu liang yang besar dan permukaannya boleh diubah suai dengan mudah oleh gugusan bercas positif tertentu untuk mengangkut RNA bercas negatif dengan berkesan. Selain itu, penghantaran RNA yang disasarkan boleh dilakukan dengan melampirkan ligan tertentu pada permukaan [81]. Mengikut kajian yang dijalankan oleh Adam et al., vaksin hidung berasaskan mikrozarah silikon berliang (mPSM) yang diubah suai telah dirumus untuk COVID-19. Formulasi tersebut membawa kepada peningkatan dalam sel T penolong (Th1) dan tindak balas imun serta mPSM menyebabkan pengambilan antigen melalui laluan hidung. Muatan virus didapati berkurangan dengan ketara [83].

5.5.4. Bahan Nano Karbon dan Emas

Nanotube karbon, nanopartikel emas, nanographene oxide, dan titik kuantum, adalah struktur nano tersintesis yang juga berpotensi untuk menghantar RNA ke tapak yang disasarkan dan juga melindunginya daripada degradasi [81].

6. Cabaran untuk Penyimpanan Vaksin

Kestabilan dan keperluan penyimpanan adalah kebimbangan utama untuk vaksin mRNA. Kestabilan bergantung pada faktor seperti bahan bantu, pH dan suhu. Vaksin COVID-19 daripada BioNTech/Pfizer perlu disimpan pada suhu −80 ◦C dan mempunyai jangka hayat sehingga 6 bulan, manakala vaksin COVID-19 daripada Moderna perlu disimpan pada −20 ◦C dan mempunyai jangka hayat yang sama. Vaksin BioNTech/Pfizer memerlukan pembungkusan dengan ais kering semasa mengangkut. Pengedaran kedua-dua vaksin di negara miskin di dunia adalah mencabar, kerana vaksin mRNA perlu disimpan pada suhu ultra-sejuk. Keperluan ini mahal dan di rantau dunia yang mempunyai sumber terhad, pengaturan adalah sukar. Pembangunan vaksin mRNA termostabil yang berkhasiat secara klinikal dan boleh disimpan lebih lama tanpa menanggung kos penyimpanan yang besar adalah salah satu masalah. Menurut cadangan penyimpanan EMA, vaksin mRNA yang dibuat oleh Moderna dan BioNTech adalah stabil apabila dibekukan sehingga 6 bulan pada −25 ◦C, sehingga 30 hari pada suhu peti sejuk (4 ◦C), dan sehingga 6 jam pada suhu bilik [ 84].

7. Keselamatan dan Keberkesanan Vaksin mRNA

7.1. Keselamatan Vaksin Berasaskan mRNA

Penilaian hasil berkaitan keselamatan telah dijalankan untuk vaksin mRNA. Ujian percubaan percubaan label terbuka fasa 1 mRNA-1273 telah dijalankan ke atas peserta yang berumur antara 18 dan 70 tahun atau lebih tua [85]. Kajian ini dijalankan dalam dua kumpulan di mana peserta berumur 18-55 tahun menerima dos vaksin sebanyak 250 µg dan subjek yang lebih tua diberi 25 µg atau 100 µg daripada dos tersebut. Kejadian buruk tempatan dan sistemik yang diminta, kejadian buruk yang tidak diminta, kejadian buruk yang serius, dan perkembangan keadaan perubatan kronik yang baru diperhatikan selepas vaksinasi. Keputusan menunjukkan tiada perkembangan kejadian buruk yang serius. Reaksi buruk yang paling biasa dilaporkan ialah sakit kepala, keletihan, myalgia, menggigil, dan pedih di tapak suntikan. Meneutralkan tahap antibodi telah ditunjukkan untuk mengaitkan dengan pertahanan terhadap pelbagai virus pada manusia dan dengan pertahanan terhadap SARS-CoV-2 dalam cabaran haiwan. Vaksin mRNA{15}} pada orang dewasa yang lebih tua menghasilkan antibodi mengikat dan meneutralkan tahap tinggi, dan trend bergantung pada masa dan dos adalah serupa dengan tindak balas pada orang dewasa yang lebih muda. Tindak balas selepas vaksinasi kedua adalah setanding dengan yang dilihat pada pesakit yang telah pulih daripada COVID-19 dan telah menderma serum pemulihan, termasuk beberapa yang sakit kritikal. Pesakit yang lebih tua yang menerima dos 100 µg menunjukkan tindak balas antibodi dan sel T yang lebih tinggi berbanding mereka yang menerima 25 µg dan tindak balas adalah sama dengan tindak balas pada peserta berumur 18 hingga 55 tahun yang menerima dos 100 µg. Pesakit yang berumur lebih daripada 56 tahun perlu menerima dos kedua vaksin untuk mencapai antibodi peneutralan. Apabila menerima dos penggalak, titer antibodi meningkat dengan cepat. Keputusan utama keselamatan vaksin Moderna dan Pfizer yang diperhatikan semasa pelbagai ujian klinikal telah disenaraikan dalam Jadual 4.

Jadual 4. Kajian keselamatan dan keberkesanan vaksin mRNA dalam ujian klinikal

Jadual 4. Samb.

Selepas dos kedua vaksin, kejadian reactogenicity tempatan dan sistemik meningkat dalam kekerapan dan terutamanya dalam keterukan sederhana. Insiden eritema ditemui dalam tiga peserta dan berlangsung selama 5 hingga 7 hari. Kejadian buruk sistemik yang diminta seperti demam dan keletihan berlaku dalam subkumpulan yang lebih tua dengan ketara. Kesemua penemuan ini menunjukkan bahawa kejadian buruk yang diminta atau tidak diminta adalah ringan hingga sederhana teruk. Oleh itu mRNA-1273 telah diuji selanjutnya untuk ujian fasa 2/3 untuk menilai keselamatan dan keberkesanan dalam populasi yang lebih besar [95]. Percubaan klinikal fasa 3 ialah kajian rawak, berstrata, buta pemerhati, dan terkawal plasebo, yang melibatkan 30,420 sukarelawan berumur 18 tahun ke atas, ditugaskan secara rawak untuk menerima vaksin (0.5 mL dengan 100 µg dos) atau plasebo. Reaksi tempatan selama 7 hari selepas imunisasi, kesan buruk sistemik, tindak balas buruk yang tidak dijangka selepas 28 hari pentadbiran dos, dan sebarang kesan buruk yang ketara telah dikesan untuk penilaian keselamatan. Kesan buruk yang diminta adalah dominan dalam mRNA- 1273 berbanding kumpulan plasebo (84.2%, lwn. 19.8%). Beberapa kejadian yang paling diperhatikan adalah sakit di tapak suntikan selepas vaksinasi, eritema, kelembutan, dan indurasi. Peristiwa ini telah diselesaikan dalam masa 4-5 hari selepas vaksinasi. Selepas dos kedua, kumpulan mRNA-1273 meminta kejadian sistemik yang menjadi lebih teruk. Kehadiran tindak balas hipersensitiviti terdapat dalam 1.5% dan 1.1% peserta dalam kumpulan vaksin dan plasebo, masing-masing. Selain daripada aduan ini, tiada kebimbangan keselamatan dibangkitkan selepas pentadbiran vaksin [106].

Dos vaksin ketiga diperlukan kerana perlindungan yang semakin berkurangan berikutan dua suntikan mRNA-2 SARS CoV dan pengenalan variasi. Selepas mentadbir dos ketiga vaksin mRNA kepada orang yang sebelum ini menerima siri utama mRNA-1273 dalam kajian Fasa 1, keselamatan awal dan imunogenisiti mereka telah dinilai. Kajian keratan rentas yang dilakukan di Naples (Itali) menilai kesediaan untuk mengambil -19 penggalak vaksin COVID. Dalam kumpulan ini, penerimaan dos penggalak adalah hampir 86%. Tambahan pula, orang tua dalam keadaan kesihatan yang lebih baik selepas siri vaksin utama, mereka yang tinggal bersama rakan atau ahli keluarga yang disahkan positif COVID-19 dan mereka yang telah menerima maklumat berkaitan penyakit daripada institusi awam rasmi bersedia untuk mendapatkan penggalak dos [107].

Vaksinasi bivalen mengandungi 25 mcg setiap mRNA-1273 dan mRNA-1273.351, manakala formulasi vaksin penggalak mengandungi 100 mcg mRNA-1273 dan 50 mcg mRNA-1273 .351, yang mengekod protein spike varian Beta. Dos ketiga vaksin mRNA menunjukkan reaktogenisiti dan keselamatan yang mencukupi. Jika dibandingkan dengan tindak balas puncak selepas dos kedua, peningkatan yang disebabkan oleh vaksinasi dalam mengikat dan meneutralkan titer antibodi kepada varian D614G, Beta dan Delta adalah serupa atau lebih besar. Telah diperhatikan bahawa antibodi peneutralan dan pengikatan dikurangkan secara berterusan. Walau bagaimanapun, pengesanan antibodi ada pada 10-11 bulan (sebelum dos ketiga) pada peserta tanpa mengira umur dan dos siri primer awal (cth, 25, 50, 100, dan 250 µg). Sakit tapak suntikan, keletihan, mialgia dan menggigil adalah kesan buruk yang paling kerap dilaporkan berikutan dos ketiga vaksin mRNA, dan kekerapan kejadian ini adalah setanding antara tiga rejimen vaksin penggalak (prototaip monovalen, varian monovalen dan kumpulan bivalen. ). Dengan penggunaan vaksin varian Beta monovalen atau bivalen, tiada kelebihan atau kelemahan khusus dilihat dalam tindak balas selular kepada epitop dalam peptida bermutasi Beta. Kesemua penemuan ini menyokong cadangan semasa bahawa rangsangan mRNA prototaip monovalen{18}} digunakan untuk menyediakan perlindungan silang imunologi yang meluas antara varian [95]. Mengikut kaji selidik, pentadbiran Heterologous BNT162b2 (BNT) dalam peserta prima ChAdOx1 (ChAd) (ChAd/BNT) menunjukkan imunogenisiti tidak rendah kepada pentadbiran BNT homolog (kedua-dua utama dan penggalak adalah vaksin BNT, BNT/BNT), dengan kereaktifan yang boleh diterima dan tindak balas sel T yang lebih besar. Berbanding dengan vaksinasi ChA dOX1 homolog (ChAd/ChAd), vaksinasi ChAd/BNT heterolog menimbulkan imunogenisiti yang lebih kuat (ChAd/BNT lwn ChAd/ChAd, nisbah titer antibodi: 9.2) [108].

Percubaan fasa 1 untuk BNT162b2 telah dijalankan ke atas 76 peserta; mereka secara rawak untuk menerima 10 µg, 30 µg dan 100 µg dos vaksin, dan kumpulan lain diberi plasebo. 58.3% daripada subjek yang menerima 10 µg dan 100% daripada 30 µg dan 100 µg mengalami kesakitan tindak balas tempatan yang diminta di tapak suntikan selepas dos pertama. Keterukan semua tindak balas tempatan adalah ringan hingga sederhana. Keletihan dan sakit kepala dalam BNT162b2 adalah kejadian sistemik yang biasa. Selain itu, menggigil, sakit otot, dan sakit sendi turut diperhatikan. Pada peningkatan dos, kejadian sistemik dilaporkan lebih banyak selepas dos kedua diberikan. Sebanyak 50.0 peratus peserta yang menerima sama ada 10 atau 30 g BNT162b1, 58.3 peratus orang yang menerima 100 g BNT162b1, dan 11.1 peratus penerima plasebo dilaporkan mengalami kejadian buruk. Tiada kejadian buruk yang serius dilaporkan [109].

Dalam percubaan klinikal vaksin Pfizer/BioNTech (BNT162b2) yang merupakan ujian keberkesanan multinasional, terkawal plasebo, buta pemerhati, rawak dan penting, 43,548 peserta berumur 16 tahun ke atas telah diperuntukkan secara rawak. Sejumlah 21,720 sukarelawan diberi 30 µg setiap dos BNT162b2 dan 21,728 dengan plasebo. Untuk menentukan profil keselamatan ciri-ciri BNT162b2 seperti sakit di tapak suntikan, yang jangka pendek, ringan hingga sederhana dalam kes keterukan, keletihan dan sakit kepala dinilai. Dua suntikan BNT162b2 atau plasebo diberikan kepada semua peserta, mengikut rawak selang 21 hari, dalam otot deltoid [98]. Reaksi tempatan pada mereka yang menerima vaksin BNT162b2 dilaporkan lebih banyak berbanding kumpulan plasebo. Kesakitan ringan hingga sederhana di tapak suntikan adalah aduan yang paling biasa didaftarkan di kalangan penerima BNT162b2 dalam tempoh satu minggu. Kesakitan yang teruk dilaporkan dalam kurang daripada 1% daripada populasi. Kesakitan diperhatikan kurang pada peserta yang lebih tua berbanding dengan yang lebih muda. Kemerahan atau bengkak kurang diperhatikan. Selepas pentadbiran dos kedua, tindak balas tempatan kurang dilaporkan [110].

Peserta yang lebih muda yang menerima vaksin mengalami lebih banyak peristiwa sistemik berbanding penerima yang lebih tua. Keletihan dan sakit kepala (59% dan 52%) adalah kejadian yang paling kerap dilaporkan, dan subjek yang sangat kurang diberi vaksin (<2%) experienced any severe systemic events. After the second dose of the vaccine, 16% of younger groups and 11% of older age reported fever (temperature ≥ 38 ◦C), which increased the use of antipyretic or painkillers. However, post-delivery of the first dose cases of fever were reported very less [110]. Lymphadenopathy was noticed as an adverse event in BNT162b2 receivers in comparison to the placebo group. A shoulder injury related to the vaccination, right axillary lymphadenopathy, paroxysmal ventricular arrhythmia, and right leg paresthesia were among the unfavorable events recorded among BNT162b2 recipients [98]. Rare adverse effects observed are Bell's palsy, acute myocardial infarction, cerebral venous sinus thrombosis, pulmonary embolism, Guillain–Barré syndrome, lymphadenopathy, herpes zoster reactivation, stroke, neurological complications, and thrombosis with thrombocytopenia syndrome, and autoimmunity (e.g., autoimmune peripheral neuropathies and autoimmune hepatitis). Among these certain adverse effects such as anaphylaxis, myocarditis, and appendicitis were common in younger people while Guillain–Barré syndrome and myocardial infarction increased with age. These vaccine-associated adverse effects are less frequent than the additional serious adverse effects that occur after severe COVID-19. A recent study reveals the risk of neurological complications in COVID-19 vaccine receivers. The molecular foundation of these adverse effects is unknown. We hypothesize that, since most of these are also apparent in severe COVID-19, it may be associated with acute inflammation produced by both the vaccine and the virus, as well as in the common SARS-CoV-2 S protein. In the BNT162b2 and mRNA-1273 vaccines encoded antigen (S protein) is stabilized it is therefore probable that, if entering the circulation and systemically distributed throughout the body, it can contribute to these adverse effects in susceptible individuals [111].

7.2. Keberkesanan Vaksin mRNA

Untuk penilaian keberkesanan mRNA-1273, titik akhir utama vaksin ialah keberkesanan untuk mencegah jangkitan COVID-19 gejala selepas 14 hari dos kedua vaksin. Sebagai titik akhir kedua, pencegahan jangkitan COVID{3}} yang teruk dengan gejala berterusan telah digunakan. Keputusan selepas vaksinasi menunjukkan bahawa 11 kes COVID-19 terdapat dalam kumpulan yang divaksin dan 185 kes dalam kumpulan plasebo, menunjukkan keberkesanan 94.1% vaksin mRNA-1273 untuk merawat COVID yang bergejala-19 . Untuk titik akhir keberkesanan sekunder, penilaian mencegah COVID yang teruk-19 telah dilakukan. Keputusan menunjukkan 100% keberkesanan vaksin kerana 30 peserta dengan jangkitan virus berada dalam kumpulan plasebo. Kajian yang dijalankan di Qatar menunjukkan keberkesanan vaksin (VE) mRNA-1273 95.7% terhadap jangkitan COVID-19 yang teruk, kritikal atau maut. Selepas Lebih daripada atau sama dengan 14 hari dos pertama, keberkesanan adalah 88.1% berbanding varian B.1.1.7 (alfa) dan 100% dos selepas kedua. 61.3% dan 96.4% daripada VE dilaporkan selepas dos pertama dan kedua imunisasi terhadap ketegangan B.1.351 (beta). Oleh itu, vaksin agak berjaya melawan kedua-dua strain, sama ada bergejala atau tanpa gejala, dan terhadap sebarang kemasukan-19 COVID dan kematian, walaupun selepas satu dos [112].

Keberkesanan vaksin (VE) BNT162b2 terhadap COVID yang disahkan-19 mempunyai permulaan sekurang-kurangnya 7 hari selepas dos kedua pada individu yang bebas daripada bukti virologi atau serologi jangkitan SARS-CoV-2 adalah yang pertama titik akhir. Titik akhir utama kedua mengukur keberkesanan dalam peserta dengan dan tanpa bukti jangkitan terdahulu dan pencegahan jangkitan COVID-19 yang teruk. Dalam penyelidikan dengan jumlah 36,523 orang, 8 kes COVID-19 bermula pada 7 hari selepas dos kedua berlaku dalam kumpulan vaksinasi, berbanding 162 kes dalam kumpulan plasebo. Ini menunjukkan 95% keberkesanan vaksin. Walau bagaimanapun, VE yang diperhatikan terhadap penyakit virus adalah 52% antara dos pertama dan kedua, dan ia adalah 91% dalam 7 hari pertama selepas dos 2, mencapai keberkesanan lengkap terhadap penyakit dengan permulaan sekurang-kurangnya 7 hari selepas dos 2. Hanya 1 daripada 10 kejadian COVID-19 yang teruk yang dilihat selepas dos pertama berlaku dalam kumpulan yang menerima vaksinasi. Pemerhatian ini adalah selaras dengan keberkesanan keseluruhan yang sangat baik terhadap semua pesakit-19 COVID. Dua kes jangkitan terdapat pada penerima vaksin dalam kalangan pesakit hipertensi dan 44 kes dalam kumpulan plasebo. Kes ini melaporkan 94.6% keberkesanan vaksin dalam pesakit hipertensi. Oleh itu, vaksin BNT162b2 memenuhi kedua-dua titik akhir keberkesanan primer dan sekunder dalam peserta yang divaksin [113]. Selain daripada jangkitan SARS-CoV-2, dengan satu dos vaksin BNT162b2, keberkesanan vaksinasi yang diramalkan terhadap penyakit bergejala dengan varian delta (B.1.617.2) adalah kira-kira 36%. Selepas dua dos, VE adalah kira-kira 88 peratus [114].

sistem imun yang meningkatkan tumbuhan cistanche

8. Cabaran Kawal Selia

Sains kawal selia adalah asas di mana keputusan kawal selia dibuat. Objektif utamanya adalah untuk membangunkan kaedah, alatan dan piawaian baharu untuk menilai keselamatan, keberkesanan, kualiti dan prestasi produk terkawal pada semua peringkat kitaran hayatnya [115]. Vaksin mRNA menghadapi jenis halangan kawal selia yang sama seperti mana-mana jenis vaksin lain, termasuk keperluan untuk menunjukkan bukti keselamatan dan keberkesanan dalam kajian pra-klinikal, ujian klinikal dan pengawasan pasca pemasaran, serta mengekalkan standard yang tinggi untuk bahan mentah yang digunakan dalam pengeluaran dan ketekalan pembuatan. Ujian vaksin sangat bergantung pada kebolehpercayaan dan kebolehulangan enzim, nukleotida, dan templat DNA linear [116]. Komponen mentah, seperti lipid, harus dikawal dengan ketat, dan ketulenannya harus dibuktikan. Amalan pengilangan yang baik semasa (cGMP) harus diikuti semasa mencipta templat DNA linear. Untuk memastikan bahan ubat adalah berkualiti tinggi, adalah penting untuk memerhatikan peratusan mRNA berhad dan poliadenilasi, bilangan transkrip pendek, dan kehadiran RNA beruntai dua. Poliadenilasi dan mengehadkan 50 hujung mRNA memastikan kestabilan dan terjemahan yang berkesan [21]. Kecekapan terjemahan berkait rapat dengan ekor poli (A) [114]. Mengukur jumlah mRNA yang terkandung dalam zarah dan menentukan taburan saiz zarah adalah penting untuk produk ubat kerana ia membolehkan pengilang memastikan keseragaman pembuatan. Pemantauan biasanya dilakukan pada beberapa ciri, termasuk yang berkaitan dengan kestabilan, identiti dan kemandulan. Salah satu isu untuk pembangun, pengawal selia dan pengguna vaksin ialah kestabilan terma vaksin mRNA [115]. Vaksinasi konvensional tertakluk kepada ujian tekanan, termasuk pendedahan berpanjangan kepada suhu tinggi, untuk menentukan kestabilannya di bawah pelbagai keadaan penyimpanan. Ini juga mesti dijalankan untuk vaksin mRNA, di mana perlu untuk menilai bukan sahaja kestabilan molekul mRNA tetapi juga pemeliharaan struktur zarah vaksin itu sendiri. Protokol ujian integriti untuk komponen mRNA individu dalam vaksin mRNA berbilang komponen masih memerlukan pembangunan. Pengenalpastian vaksin asid nukleik ditentukan oleh urutannya. Secara umum, urutan plasmid DNA pertama yang digunakan sebagai templat adalah mencukupi untuk vaksinasi mRNA. Ini kerana DNA segera diterjemahkan kepada RNA. Tidak diketahui bahawa penjujukan mRNA, sama ada secara langsung atau dengan menukarnya kepada cDNA dan kemudian menyusun DNA itu, memberikan sebarang maklumat tambahan. Walaupun kadar ralat polimerase RNA jauh lebih besar daripada polimerase DNA, kadar ralat yang dinyatakan bagi 1 ralat setiap 104-105 nukleotida akan sukar untuk dikesan dalam RNA kerana sifat ralat secara rawak. Berdasarkan penyelidikan semasa yang mencadangkan bahawa vaksin mRNA memberikan imuniti perlindungan dalam model haiwan, kadar ralat ini nampaknya tidak mengubah pembentukan antigen imunogenik. Kuantifikasi lipid boleh dijalankan oleh LC-MS/MS [116]. Jika protein diterjemahkan terlalu cepat, ia mungkin tidak dilipat dengan sewajarnya menjadi antigen berfungsi, yang boleh membawa akibat yang tidak diingini untuk menurunkan keberkesanan vaksin.

9. Perbincangan

Pada tahun 2021, vaksin mRNA mendapat perhatian kerana kedudukan kritikalnya dalam reaksi industri farmaseutikal terhadap COVID-19. Tidak seperti vaksin virus tradisional, yang menggunakan salinan virus yang lemah dan tidak mereplikasi untuk memaparkan antigen dan menimbulkan tindak balas imun, strategi mRNA menggunakan molekul mRNA untai tunggal yang dioptimumkan yang boleh memberikan induksi biologi. Sebaik sahaja anda mempunyai vaksin, sel akan mengambilnya, 'membaca' urutan mRNA dan menghasilkan protein spike. Oleh kerana badan anda kekurangan protein yang menyerupai spike itu, sistem imun anda mentafsirkannya sebagai berbahaya dan melancarkan serangan terhadapnya. Di samping itu, jika anda dijangkiti coronavirus kemudian, sistem imun mengingati protein spike dan juga mengenalinya. Kepantasan yang luar biasa di mana dua vaksin COVID-19 pertama dibangunkan dan tersedia secara terbuka di AS menyokong tanggapan bahawa vaksin mRNA daripada Pfizer dan Moderna menerima kebenaran penggunaan kecemasan daripada FDA pada bulan Disember 2020-kurang daripada setahun selepas saintis China mengumumkan susunan gen coronavirus. Faedah utama teknologi vaksin berasaskan mRNA ialah potensinya untuk diubah suai dengan cepat untuk pelbagai penyakit memandangkan pemprosesan antigen sasaran adalah 'disumber luar' kepada sel hos, yang bermaksud bahawa hanya kod genetik antigen digunakan untuk mereka bentuk vaksin. calon. Masa antara kerajaan China menukar struktur genetik SARS-CoV-2 mereka dan Moderna mengangkut calon vaksinnya ke Institut Kesihatan Nasional (NIH) di Amerika Syarikat untuk kajian fasa satu hanya 44 hari. Vaksin vaksin mRNA dari segi sejarah tidak mendapat kelulusan kawal selia untuk digunakan dalam kemanusiaan kerana kekurangan ujian klinikal yang dirasakan untuk kaedah ini, serta cabaran teknikal yang berkaitan dengan kestabilan dan pengedaran produk. Dengan peningkatan dalam vaksin mRNA di pasaran, nasihat yang lebih tepat untuk membantu dalam pembangunan dan penilaian vaksin mRNA baharu adalah mungkin. Kawalan adalah satu lagi bidang di mana sains vaksin mRNA masih di peringkat awal. Pada masa ini tiada garis panduan rasmi daripada Pentadbiran Makanan dan Dadah AS atau Agensi Ubat Eropah untuk vaksin mRNA, walaupun ubat tersebut cukup selamat untuk ujian klinikal utama.

10. Ucapan Penutup dan Prospek Masa Depan

Sebelum 2020, mRNA bukanlah istilah saintifik yang terkenal dalam dunia vaksin. Lebih daripada setahun sejak pandemik COVID-19 global yang melanda bermula, program klinikal berasaskan mRNA telah menyaksikan peningkatan yang ketara dalam sokongan, kedua-dua daripada orang awam dan daripada farmasi besar. Lebih 80 juta rakyat Amerika telah diberi vaksin terhadap SARS CoV-2-virus yang menyebabkan COVID-19, menggunakan kemungkinan mengubah permainan teknologi mRNA. "Bidang vaksin telah berubah selama-lamanya dan maju selama-lamanya kerana COVID-19," kata Dan Barouch, MD, Ph.D., pengarah Pusat Penyelidikan Virologi dan Vaksin di Harvard Medical School. Kebanyakannya dalam situasi vaksin COVID-19, untaian mRNA direka bentuk untuk menghasilkan "protein spike" coronavirus unik yang menghasilkan tindak balas imun yang boleh melindungi daripada jangkitan virus sebenar. Vaksin yang dibangunkan oleh Moderna dan Pfizer/BioNTech merupakan satu-satunya vaksin berasaskan mRNA yang mendapat kelulusan kecemasan daripada pengawal selia utama, dan bukti dunia sebenar daripada pelancaran COVID-19 global akan menjadi kritikal dalam membuktikan keberkesanan jangka panjangnya. dan ciri keselamatan terhadap coronavirus dan beberapa ejen virus lain. Penghantaran mRNA berasaskan exosome juga akan menjadi masa depan terapeutik berasaskan mRNA [117,118]. Kebanyakannya dengan implikasi teknologi berasaskan mRNA menjadi jelas apabila vaksin generasi pertama ini mula digunakan secara global, kini terdapat ledakan dalam penyelidikan klinikal mRNA untuk penyakit berjangkit, dan penyelidik industri menjangkakan peningkatan minat dalam platform mRNA untuk bidang terapeutik lain. , terutamanya onkologi, tetapi juga keadaan autoimun dan gen neurode yang jarang berlaku.

Rujukan

1. SIAPA. WHO Coronavirus (COVID-19) Dashboard 2023. Tersedia dalam talian: https://covid19.who.int/ (diakses pada 17 Januari 2023).

2. Pal, R.; Yadav, U. COVID-19 Pandemik di India: Senario Masa Kini dan Pendakian Curam Di Hadapan. J. Prim. Kesihatan Komuniti Jagaan 2020, 11, 2150132720939402. [CrossRef] [PubMed]

3. Keni, R.; Alexander, A.; Nayak, PG; Mudgal, J.; Nandakumar, K. COVID-19: Kemunculan, Penyebaran, Rawatan Kemungkinan dan Beban Global. Depan. Kesihatan Awam 2020, 8, 216. [CrossRef] [PubMed]

4. Chavda, VP; Ping, F.-F.; Chen, Z.-S. Kesan COVID-19 terhadap Penjagaan Kanser: Kemas Kini. Vaksin 2022, 10, 2072. [CrossRef] [PubMed]

5. Harapan, H.; Itoh, N.; Yufika, A.; Winardi, W.; Keam, S.; Te, H.; Megawati, D.; Hayati, Z.; Wagner, AL; Mudatsir, M. Penyakit Coronavirus 2019 (COVID-19): Kajian Literatur. J. Jangkitan. Kesihatan Awam 2020, 13, 667–673. [CrossRef] [PubMed]

6. Chavda, VP; Chhabria, MT; Apostolopoulos, V. Populasi Berusia dan Pesakit Imunokompromi: Kesan pada Varian SARS-CoV-2 dan Hasil Rawatan. Biologi 2022, 2, 165–170. [CrossRef]

7. Chavda, VP; Redwan, EM SARS-CoV-2: Imunopeptidomik dan Kajian Imunologi Lain. Vaksin 2022, 10, 1975. [CrossRef]

8. Kyriakidis, NC; López-Cortés, A.; González, EV; Grimaldos, AB; Prado, EO SARS-CoV-2 Strategi Vaksin: Kajian Komprehensif Calon Fasa 3. Vaksin Npj 2021, 6, 28. [CrossRef]

9. Ssentongo, P.; Ssentongo, AE; Voleti, N.; Groff, D.; Matahari, A.; Ba, DM; Nunez, J.; Ibu bapa, LJ; Chinchilli, VM; Paules, CI SARS CoV-2 Keberkesanan Vaksin terhadap Jangkitan, Simptom dan COVID Teruk-19: Kajian Sistematik dan Meta-Analisis. Jangkitan BMC. Dis. 2022, 22, 439. [CrossRef]

10. Chavda, VP; Vora, LK; Vaksin Vihol, DR COVAX-19®: Menyekat Sepenuhnya Penghantaran Virus kepada Individu Tidak Kebal. Clin. Melengkapkan Med. Pharmacol. 2021, 1, 100004. [CrossRef]

11. Chavda, VP; Vora, LK; Pandya, AK; Patravale, Vaksin Intranasal VB untuk SARS-CoV-2: Daripada Cabaran kepada Potensi dalam Pengurusan COVID-19. Discov dadah. Hari ini 2021, 26, 2619–2636. [CrossRef]

12. Kaur, SP; Gupta, V. COVID-19 Vaksin: Laporan Status Komprehensif. Virus Re. 2020, 288, 198114. [CrossRef]

13. Vasireddy, D.; Atluri, P.; Malayala, SV; Vanaparthy, R.; Mohan, G. Semakan Vaksin COVID-19 Diluluskan di Amerika Syarikat untuk Kegunaan Kecemasan. J. Clin. Med. Res. 2021, 13, 204. [CrossRef] [PubMed]

14. Zheng, C.; Shao, W.; Chen, X.; Zhang, B.; Wang, G.; Zhang, W. Keberkesanan Vaksin COVID-19 Sebenar Dunia: Kajian Literatur dan Meta-Analisis. Int. J. Jangkitan. Dis. 2022, 114, 252–260. [CrossRef]

15. Alagoz, O.; Sethi, AK; Patterson, BW; Churpek, M.; Alhanaee, G.; Scaria, E.; Safdar, N. Kesan Pemvaksinan untuk Mengawal Beban COVID-19 di Amerika Syarikat: Pendekatan Pemodelan Simulasi. PLoS ONE 2021, 16, e0254456. [CrossRef]

16. Cromer, D.; Stein, M.; Reynaldi, A.; Schlub, TE; Wheatley, AK; Juno, JA; Kent, SJ; Triccas, JA; Khoury, DS; Davenport, MP Meneutralkan Titer Antibodi sebagai Peramal Perlindungan terhadap Varian-2 SARS-CoV dan Kesan Peningkatan: Analisis meta. Mikrob Lancet 2022, 3, e52–e61. [CrossRef]

17. Zhao, J.; Zhao, S.; Ou, J.; Zhang, J.; Lan, W.; Guan, W.; Wu, X.; Yan, Y.; Zhao, W.; Wu, J.; et al. COVID-19: Kemas Kini Pembangunan Vaksin Coronavirus. Depan. Immunol. 2020, 11, 2256. [CrossRef] [PubMed]

18. Chung, YH; Beiss, V.; Fiering, SN; Steinmetz, Pendahulu Vaksin-19 NF COVID dan Reka Bentuk Nanoteknologi Mereka. ACS Nano 2020, 14, 12522–12537. [CrossRef] [PubMed]

19. Jain, S.; Venkataraman, A.; Wechsler, ME; Vaksin Berasaskan RNA Peppas, NA Messenger: Arah Dahulu, Kini dan Masa Depan dalam Konteks Pandemik-19 COVID. Adv. Dadah Deliv. Rev. 2021, 179, 114000. [CrossRef] [PubMed]

20. Arashkia, A.; Jalilvand, S.; Mohajel, N.; Afchangi, A.; Azadmanesh, K.; Salehi-Vaziri, M.; Fazlalipour, M.; Pouriayevali, MH; Jalali, T.; Mousavi Nasab, SD; et al. Sindrom Pernafasan Akut Teruk-Koronavirus-2 Calon Vaksin Berasaskan Protein Spike (S): Tercanggih dan Prospek Masa Depan. Rev. Med. Virol. 2021, 31, e2183. [CrossRef]

21. Park, JW; Lagniton, PNP; Liu, Y.; Xu, Vaksin MRNA RH untuk COVID-19: Apa, Mengapa dan Bagaimana. Int. J. Biol. Sci. 2021, 17, 1446. [CrossRef]

22. Zhu, N.; Zhang, D.; Wang, W.; Li, X.; Yang, B.; Lagu, J.; Zhao, X.; Huang, B.; Shi, W.; Lu, R.; et al. Novel Coronavirus daripada Pesakit dengan Pneumonia di China, 2019. N. Engl. J. Med. 2020, 382, ​​727–733. [CrossRef] [PubMed]

23. Wang, SAYA; Zhao, R.; Gao, LJ; Gao, XF; Wang, DP; Cao, JM SARS-CoV-2: Struktur, Biologi dan Pembangunan Terapeutik Berasaskan Struktur. Depan. sel. Jangkitan. mikrobiol. 2020, 10, 7269. [CrossRef] [PubMed]

24. Chavda, VP; Hossain, MK; Beladiya, J.; Apostolopoulos, V. Vaksin Asid Nukleik untuk COVID-19: Anjakan Paradigma dalam Arena Pembangunan Vaksin. Biologi 2021, 1, 337–356. [CrossRef]

25. Chavda, VP; Pandya, R.; Apostolopoulos, V. Vaksin DNA untuk SARS-CoV-2: Menuju Era Vaksinasi Generasi Ketiga. Vaksin Rev. Pakar 2021, 20, 1549–1560. [CrossRef] [PubMed]

26. Yang, H.; Rao, Z. Biologi struktur SARS-CoV-2 dan implikasi untuk pembangunan terapeutik. Nat. Mikrobiol Rev. 2021, 19, 685–700. [CrossRef]

27. Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK; Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, Tindak Balas Imun Hos SK dan Imunobiologi Jangkitan SARS-CoV-2 Manusia. Coronavirus Dis. 2019 (COVID-19) 2020, 43–53. [CrossRef]

28. Asturias, EJ; Duclos, P.; MacDonald, NE; Nohynek, H.; Lambert, Pendidikan Vaksinologi Lanjutan PH: Landskap Pertumbuhannya dan Jejak Global. Vaksin 2020, 38, 4664–4670. [CrossRef]

29. Kardani, K.; Bolhassani, A.; Shahbazi, S. Prime-Boost Vaccine Strategy against Viral Infections: Mekanisme dan Faedah. Vaksin 2016, 34, 413–423. [CrossRef]

30. Chen, JM Patutkah Dunia Bekerjasama Segera untuk Membangunkan Vaksin Dilemahkan Langsung yang Diabaikan untuk COVID-19? J. Med. Virol. 2022, 94, 82–87. [CrossRef]

31. Chavda, VP; Vihol, DR; Solanki, HK; Apostolopoulos, V. Dunia Vaksin COVID-19: Sumbangan India. Vaksin 2022, 10, 1943. [CrossRef]

32. Ashraf, MU; Kim, Y.; Kumar, S.; Seo, D.; Ashraf, M.; Vaksin Bae, YS COVID-19 (Dilawati Semula) dan Sistem Vektor Oral-Mukosa sebagai Platform Vaksin Berpotensi. Vaksin 2021, 9, 171. [CrossRef]

33. Lesser, K.; Whittaker, Vaksinasi GR untuk COVID-19: Penanda Aras dalam Kesihatan Awam dan Penghantaran Virus. Kesihatan Awam 2021, 197, e23. [CrossRef] [PubMed]

34. Chavda, VP; Apostolopoulos, V. Adakah Strategi Dos Penggalak Mencukupi untuk Varian Omicron SARS-CoV-2? Vaksin 2022, 10, 367. [CrossRef] [PubMed]

35. Chavda, VP; Bezbaruah, R.; Athalye, M.; Parikh, PK; Chhipa, AS; Patel, S.; Apostolopoulos, V. Mereplikasi Vaksin Berasaskan Vektor Viral untuk COVID-19: Potensi Avenue di Arena Vaksinasi. Virus 2022, 14, 759. [CrossRef]

36. Chavda, VP; Apostolopoulos, V. COVID{1}} Reka Bentuk Vaksin dan Strategi Vaksinasi untuk Varian Muncul. Vaksin Rev. Pakar 2022, 21, 1359–1361. [CrossRef] [PubMed]

37. Chavda, VP; Vuppu, S.; Mishra, T.; Kamarraj, S.; Patel, AB; Sharma, N.; Chen, Z.-S. Semakan Terbaharu Pengurusan COVID-19: Diagnosis, Rawatan dan Vaksinasi. Pharmacol. Rep. 2022, 74, 1120–1148. [CrossRef]

38. Chavda, VP; Chen, Y.; Dave, J.; Chen, Z.-S.; Chauhan, SC; Yallapu, MM; Uversky, VN; Bezbaruah, R.; Patel, S.; Apostolopoulos, V. COVID-19 dan Vaksinasi: Mitos lwn Sains. Vaksin Rev. Pakar 2022, 21, 1603–1620. [CrossRef]

39. Chavda, VP; Bezbaruah, R.; Deka, K.; Nongrang, L.; Kalita, T. Varian Delta dan Omicron SARS-CoV-2: Apa yang Kami Tahu Setakat ini. Vaksin 2022, 10, 1926. [CrossRef]

40. Fioretti, D.; Iurescia, S.; Fazio, VM; Rinaldi, M. Vaksin DNA: Membangunkan Strategi Baharu terhadap Kanser. J. Biomed. Bioteknol. 2010, 2010, 174378. [CrossRef]

41. Zhao, Z.; Deng, Y.; Niu, P.; Lagu, J.; Wang, W.; Du, Y.; Huang, B.; Wang, W.; Zhang, L.; Zhao, P.; et al. Imunisasi Bersama Dengan CHIKV VLP dan Vaksin DNA Mendorong Tindak Balas Humoral yang Menjanjikan pada Tikus. Depan. Immunol. 2021, 12, 925. [CrossRef]

42. Kalams, SA; Parker, SD; Elizaga, M.; Metch, B.; Edupuganti, S.; Hural, J.; De Rosa, S.; Carter, DK; Rybczyk, K.; Frank, I. Keselamatan dan Imunogenisiti Perbandingan Vaksin DNA-1 HIV dalam Gabungan dengan Plasmid Interleukin 12 dan Kesan Elektroporasi Intramuskular untuk Penghantaran. J. Jangkitan. Dis. 2013, 208, 818–829. [CrossRef]

43. Bezbaruah, R.; Chavda, VP; Nongrang, L.; Alom, S.; Deka, K.; Kalita, T.; Ali, F.; Bhattacharjee, B.; Vora, L. Sistem Penghantaran Berasaskan Nanopartikel untuk Vaksin. Vaksin 2022, 10, 1946. [CrossRef] [PubMed]

44. Karam, M.; Daoud, G. Vaksin MRNA: Dahulu, Kini, Masa Depan. Asia J. Pharm. Sci. 2022, 17, 491–522. [CrossRef] [PubMed]

45. Dolgin, E. Sejarah Kusut Vaksin MRNA. Alam 2021, 597, 318–324. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Hoerr, I.; Obst, R.; Rammensee, HG; Jung, G. undefined Penggunaan RNA Dalam Vivo Membawa kepada Induksi Limfosit T Sitotoksik Tertentu dan Antibodi. Eur. J. Immunol. 2000, 30, 1–7. [CrossRef]

47. Kose, N.; Fox, JM; Sapparapu, G.; Lombardi, R.; Tennekoon, RN; Dharshan De Silva, A.; Elbashir, SM; Theisen, MA; Humphris-Narayanan, E.; Ciaramella, G.; et al. MRNA Berkapsul Lipid Pengekodan Antibodi Monoklonal Manusia yang Berpotensi Meneutralkan Melindungi daripada Jangkitan Chikungunya. Sci. Immunol. 2019, 4, eaaw6647. [CrossRef]

48. Sahin, U.; Karikó, K.; Türeci, Ö. Terapeutik Berasaskan MRNA-Membangunkan Kelas Dadah Baharu. Nat. Rev. Drug Discov. 2014, 13, 759–780. [CrossRef]

49. Moss, P. Tindak balas imun sel T terhadap SARS-CoV-2. Nat. Immunol. 2022, 23, 186–193. [CrossRef] [PubMed]

50. Nance, KD; Meier, JL Pengubahsuaian dalam Kecemasan: Peranan N1-Methylpseudouridine dalam COVID-19 Vaksin. ACS Cent. Sci. 2021, 7, 748–756. [CrossRef]

51. Kremsner, PG; Ahuad Guerrero, RA; Arana-Arri, E.; Aroca Martinez, GJ; Bonten, M.; Chandler, R.; Corral, G.; De Block, EJL; Ecker, L.; Gabor, JJ; et al. Keberkesanan dan Keselamatan Calon Vaksin MRNA CVnCoV SARS-CoV-2 di Sepuluh Negara di Eropah dan Amerika Latin (HERALD): Percubaan Rawak, Buta Pemerhati, Terkawal Placebo, Fasa 2b/3. Jangkitan Lancet. Dis. 2022, 22, 329–340. [CrossRef]

52. Blakney, AK; Ip, S.; Geall, AJ Kemas Kini Mengenai Pembangunan Vaksin MRNA Menguatkan Sendiri. Vaksin 2021, 9, 97. [CrossRef] [PubMed]

53. Yılmaz, E. Harapan Baru dalam Teknologi Vaksin: Vaksin mRNA. mikrobiol. Bul. 2021, 55, 265–284. [CrossRef]

54. Jackson, NAC; Kester, KE; Casimiro, D.; Gurunathan, S.; DeRosa, F. Janji Vaksin MRNA: Perspektif Bioteknologi dan Perindustrian. Vaksin Npj 2020 51 2020, 5, 11. [CrossRef] [PubMed]

55. Bloom, K.; van den Berg, F.; Arbuthnot, P. Vaksin RNA menguatkan diri untuk penyakit berjangkit. gen. Di sana. 2021, 28, 117–129. [CrossRef]

56. Kon, E.; Elia, U.; Peer, D. Prinsip untuk Merekabentuk Vaksin Nanozarah Lipid MRNA Optimum. Curr. Pendapat. Bioteknol. 2022, 73, 329. [CrossRef] [PubMed]

57. Li, Y.; Teague, B.; Zhang, Y.; Su, Z.; Porter, E.; Dobosh, B.; Wagner, T.; Irvine, DJ; Weiss, R. In Vitro Evolution of Enhanced RNA Replicons for Immunotherapy. Sci. Rep. 2019, 9, 6932. [CrossRef] [PubMed]

58. Linares-Fernández, S.; Lacroix, C.; Exposito, JY; Verrier, B. Menyesuaikan Vaksin MRNA untuk Mengimbangi Tindak Balas Imun Semula Jadi/Adaptif. Trend Mol. Med. 2020, 26, 311–323. [CrossRef]

59. Sampel, PJ; Wang, B.; Reid, DW; Presnyak, V.; McFadyen, IJ; Morris, DR; Seelig, G. Human 50 UTR Design and Variant Effect Prediction from a Massively Parallel Translation Assay. Nat. Bioteknol. 2019, 37, 803–809. [CrossRef]

60. Kumar, P.; Sweeney, TR; Skabkin, MA; Skabkina, OV; Hellen, CU; Pestova, Perencatan TV Terjemahan oleh Ahli Keluarga IFIT Ditentukan oleh Keupayaan Mereka untuk Berinteraksi Secara Selektif dengan 50 -Wilayah Terminal Cap0-, Cap1-dan 50 Ppp-MRNA. Asid Nukleik Res. 2014, 42, 3228–3245. [CrossRef]

61. Strenkowska, M.; Grzela, R.; Majewski, M.; Wnek, K.; Kowalska, J.; Lukaszewicz, M.; Zuberek, J.; Darzynkiewicz, E.; Kuhn, AN; Sahin, U.; et al. Analog Cap Diubah Suai dengan 1,2-Dithiodiphosphate Moiety Melindungi MRNA daripada Menyahkap dan Meningkatkan Potensi Translasinya. Asid Nukleik Res. 2016, 44, 9578–9590. [CrossRef]

62. Rydzik, AM; Warminski, M.; Sikorski, PJ; Baranowski, MR; Walczak, S.; Kowalska, J.; Zuberek, J.; Lukaszewicz, M.; Nowak, E.; Claridge, TDW; et al. Analog Penutup MRNA Digantikan dalam Rantaian Tetrafosfat dengan CX2: Pengenalpastian O-ke-CCl2 sebagai Pengubahsuaian Merapatkan Pertama yang Memberi Ketahanan kepada Penyahkapan tanpa Menjejas Terjemahan. Asid Nukleik Res. 2017, 45, 8661–8675. [CrossRef] [PubMed]

63. Nicholson, AL; Pasquinelli, AE Tales of Detailed Poly (A) Tails. Biol Sel Trend. 2019, 29, 191–200. [CrossRef] [PubMed]

64. Pelletier, J.; Sonenberg, N. Prinsip Penganjuran Pengambilan Ribosom Eukariotik. Annu. Rev. Chem. 2019, 88, 307–335. [CrossRef]

65. Pascolo, S. Mesej Hebat Utusan untuk Vaksinasi. Vaksin Rev. Pakar 2014, 14, 153–156. [CrossRef]

66. Rosa, SS; Prazeres, DMF; Azevedo, AM; Marques, Pembuatan Vaksin MRNA MPC: Cabaran dan Kesesakan. Vaksin 2021, 39, 2190. [CrossRef] [PubMed]

67. Pascolo, S. Messenger RNA: The Inexpensive Biopharmaceutical. J. Pelbagai disiplin. En. Sci. Technol. JMEST 2017, 4, 2458–9403.

68. Thanh Le, T.; Andreadakis, Z.; Kumar, A.; Gómez Román, R.; Tollefsen, S.; Saville, M.; Mayhew, S. Landskap Pembangunan Vaksin-19 COVID. Nat. Rev. Drug Discov. 2020, 19, 305–306. [CrossRef]

69. Maruggi, G.; Zhang, C.; Li, J.; Ulmer, JB; Yu, D. MRNA sebagai Teknologi Transformatif untuk Pembangunan Vaksin untuk Mengawal Penyakit Berjangkit. Mol. Di sana. 2019, 27, 757–772. [CrossRef]