Konstituen Monoterpene Daripada Cistanche Tubulosa—Struktur Kimia Kankanosides A—E Dan Kankanol—

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Haihui XIE, Toshio MORIKAWA, Hisashi MATSUDA, Seikou NAKAMURA, Osamu MURAOKA, dan Masayuki YOSHIKAWA

Abstrak

Empat glikosida iridoid baharu, kankanosides A (1), B (2), C (3), dan D (4), iridoid berklorin, kankanol (5), dan glikosida monoterpena acyclic, kankanoside E (6), telah diasingkan daripada ekstrak metanol batang kering Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) bersama-sama dengan 16 sebatian yang diketahui. Struktur sebatian baharu ini (1—6) ditentukan berdasarkan bukti kimia dan fizikokimia.

Kata kunci:Cistanche tubulosa; kankanoside; kakanol; iridoid; monoterpena; Orobanchaceae

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)ialah tumbuhan parasit saka yang tumbuh pada akar spesies Salvadora atau Calotropis, dan diedarkan di Afrika Utara, Arab, dan negara-negara Asia.1) Batang tumbuhan ini (Kanka-nikujuyou dalam bahasa Jepun) telah digunakan secara tradisional untuk merawat mati pucuk, kemandulan. , lumbago, dan kelemahan badan.2) Sebelum ini, beberapa iridoid, monoterpenoid, feniletanoid, dan lignan telah diasingkan daripada Cina dan Pakistan C. tubulosa. 1,3–7) Dalam perjalanan kajian bersiri kami tentang juzuk bioaktif daripada ubat semulajadi Cina, 8–18) empat glikosida iridoid baharu, kankanosides A (1), B (2), C (3), dan D (4). ), iridoid berklorin, kankanol (5), dan glikosida monoterpena acyclic, kankanoside E (6), telah diasingkan daripada ekstrak metanol ubat herba ini bersama-sama dengan 16 sebatian yang diketahui termasuk 12 monoterpena (7-18). Kertas kerja ini membincangkan pengasingan dan penjelasan struktur bagi juzuk monoterpena baharu (1—6).

Cistanche tubulosa

Ekstrak metanol daripada batang keringCistanche tubulosa(26.8 peratus daripada ubat herba ini) telah tertakluk kepada kromatografi lajur silika gel fasa biasa dan fasa terbalik dan HPLC berulang untuk memberikan kankanosides A (1, 0.0{{10 }}54 peratus ), B(2, 0.030 peratus ), C (3, 0.00 27 peratus ), dan D (4, {{40}}.0015 peratus ), kankanol (5, 0.0{ {66}}34 peratus ), dan kankanoside E (6, 0.027 peratus ) bersama asid mussaenosidic19) (7, 0.020 peratus ) , asid geniposidic19) (8, 0.030 peratus ), 8-asid epilognik7) (9, 0.033 peratus ), gluroside19) (10, 0.14 peratus ), antirrhide20) (11, 0.0079 peratus ), ajugol19) (12, 19) peratus ), bartsioside19) (13, 0.21 peratus ), 6-deoxycatalpol19) (14, 0.11 peratus ), argyol21) (15, 0.0030 peratus ), cistanin22,23) (16, 0.0040 peratus ), cis tachlorin22 17, 0.0035 peratus ), (2E,6Z)-8-bD-glucopyranosyloxy-2,6-dimetil-2,6-asid oktadienoik24) (18, 0.0028 peratus ), D manitol25) (4.19 p ercent ), uridine25) (0.0069 peratus ), (3R)-3-hidroksi-2- pyrrolidinone26,27) (0.0020 peratus) dan (3R)-3-hidroksi-1-metil{ {97}}pyrrolidinone27) (0.0059 peratus ).

Struktur Kankanoside A (1) Kankanoside A (1) diperolehi sebagai serbuk amorfus dan menunjukkan putaran optik negatif ([a]D 25 107.4 darjah dalam MeOH). Spektrum IR 1 menunjukkan jalur serapan pada 1647 cm 1 yang boleh diagihkan kepada fungsi olefin di samping jalur serapan kuat pada 3410 dan 1076 cm 1 menunjukkan bahagian glikosida. Dalam pengeboman atom cepat ion positif dan negatif (FAB) -MS 1, puncak ion kuasimolekul diperhatikan pada m/z 369 (M Na) dan 345 (MH) , dan analisis FAB-MS resolusi tinggi mendedahkan molekul formula 1 menjadi C16H26O8. Hidrolisis asid 1 dengan 1.0 M asid hidroklorik (HCl) terbebas D-glukosa, yang dikenal pasti melalui analisis HPLC menggunakan pengesan putaran optik.8,10—12,15—18) 1 H- (CD3OD, Jadual 1) dan Spektrum 13C-NMR (Jadual 2) 1, yang telah diberikan oleh pelbagai eksperimen NMR,28) menunjukkan isyarat yang boleh diserahkan kepada dua metil [d 1.31 (s, 10-H3), 1.51 (br s, {{47} }H3)], dua metilena [d 1.49, 2.02 (kedua-dua m, 6a- dan 6b-H), 1.64, 1.67 (kedua-dua m, 7b- dan 7a-H)], dua metin [d 2.21 (dd, J 2.7 , 9.5 Hz, 9-H), 2.71 (m, 5-H)] dan kumpulan asetal a,b-tak tepu [d 5.33 (d, J 2.7 Hz, 1-H) ), 5.95 (br s, 3-H)] bersama-sama dengan bahagian b-glucopyranosyl [d 4.62 (d, J 7.9 Hz, 1 -H)]. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1, eksperimen spektroskopi korelasi 1 H–1H (1 H–1 H COSY) pada 1 menunjukkan kehadiran struktur separa yang ditulis dalam garis tebal. Dalam eksperimen korelasi berbilang ikatan heteronuklear (HMBC) pada 1, korelasi jarak jauh telah diperhatikan antara proton dan karbon berikut (3-H, 1 -H dan 1-C; 11- H3 dan 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 dan 4- C ; 11-H3 dan 5-C; 10-H3 dan 7-C; 1-H, 7-H2, 9-H, 10-H3 dan 8-C; 10-H3 dan 9-C; 7-H2 dan 10-C) seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1. Hidrolisis enzimatik 1 dengan b-glukosidase memberikan aglikon, kankagenin a (1a) seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3. Perbandingan spektrum 13C NMR untuk 1 dengan spektrum untuk 1a mendedahkan anjakan glikosilasi di sekitar 1-kedudukan dalam 1 [1: dC 94.1 (1-C), 134.6 (3-C), 53.3 (9-C); 1a: dC 92.9 (1-C), 135.3 (3-C), 54.7 (9-C)]. Oleh itu, ketersambungan bahagian bD-glucopyranosyl dalam 1 juga dijelaskan berada pada 1-kedudukan 1a. Seterusnya, stereostruktur relatif 1 dicirikan oleh eksperimen spektroskopi peningkatan Overhauser nuklear (NOESY), yang menunjukkan korelasi NOE antara pasangan proton berikut (1-H dan 10-H3; 3-H dan 11-H3; 5-H dan 6b-H, 9-H; 6b-H dan 7b-H; 7a-H dan 10-H3; 7b-H dan {{ 190}}H) seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2. Akhir sekali, konfigurasi mutlak 1-kedudukan dalam 1 ditentukan dengan menggunakan peraturan anjakan glikosilasi 13C NMR 1,1 -disakarida,29) yang ditemui untuk digunakan pada sebatian hemiacetal.30,31) Stereostruktur 1-kedudukan dalam 1 telah disahkan dikekalkan dalam 1a dengan perbandingan 1 analisis H- NMR termasuk eksperimen NOESY. Nilai anjakan glikosilasi [Dd 1.2 ppm (1 -C) dan 0.9 ppm (1-} C), dalam piridin-d5] didapati sebagai ciri gabungan R, Rhemiacetal, yang sepadan dengan stereostruktur mutlak 1 seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3. Akibatnya, konfigurasi mutlak pada 1-kedudukan 1 ditentukan sebagai konfigurasi S dan stereostruktur mutlak 1 telah dijelaskan seperti yang ditunjukkan.

Struktur Kankanosides B (2) dan C (3) Kankanoside B (2) juga diasingkan sebagai serbuk amorf dengan putaran optik negatif ([a]D 26 118.7 darjah dalam MeOH). Spektrum IR 2 menunjukkan jalur serapan pada 3410, 1647 dan 1{{5{{80}}}}85 cm 1 boleh dikaitkan dengan fungsi hidroksil, olefin dan eter. Formula molekul C15H24O10 daripada 2 ditentukan oleh puncak ion kuasimolekul dalam FAB-MS ion positif dan FAB-MS resolusi tinggi. Hidrolisis asid 2 dengan D-glukosa terbebas 1.0 M HCl, yang dikenal pasti melalui analisis HPLC menggunakan pengesan putaran optik.8,10—12,15—18) 1 H- (CD3OD, Jadual 1) dan 13C-NMR ( Jadual 2) spectra28) daripada 2 menunjukkan isyarat yang boleh diserahkan kepada dua metilena [d 1.40 (DDD, J 5.2, 7.3, 13.5 Hz, 6a-H), 2.52 (DDD, J 7.0, 9.2, 13.5 Hz, 6b-H), 3.8 , 3.99 (kedua-dua d, J 11.9 Hz, 10-H2)], empat metin [d 2.21 (dd, J 6.4, 8.6 Hz, 9-H), 2.83 (m, 5- H), 4.02 (dd, J 5.2, 7.0 Hz, 7-H), 5.49 (d, J 6.4 Hz, 1-H)] dan pasangan cisolefifin [d 4.95 (dd, J 4.0 , 6.1 Hz, 4-H), 6.22 (dd, J 1.8, 6.1 Hz, 3-H)], bersama-sama dengan bahagian b-glucopyranosyl [d 4.72 (d, J 7.9 Hz, 1 - H)]. Isyarat proton dan karbon dalam data 1 H- dan 13C-NMR 2 adalah serupa dengan 6-deoxycatalpol (14), kecuali isyarat yang disebabkan oleh 7- dan 8- jawatan. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1, eksperimen 1 H–1 H COZY pada 2 menunjukkan kehadiran struktur separa yang ditulis dalam garis tebal dan, dalam eksperimen HMBC, korelasi jarak jauh diperhatikan antara pasangan proton dan karbon berikut ({{ 122}}H, 1 -H dan 1-C; 1-H dan 3-C; 10-H2 dan 7- C; 1-H , 7-H, 9-H, 10-H2 dan 8-C; 7-H, 10-H2 dan 9-C ; 7-H dan 10-C). Stereostruktur relatif 2 dicirikan oleh eksperimen NOESY, yang menunjukkan korelasi NOE antara pasangan proton berikut (1-H dan 10-H2; 3- H dan 4-H; 5-H dan 6b-H, 9-H; 6b-H dan 7-H; 7-H dan 9-H) seperti ditunjukkan dalam Rajah 2. Akhir sekali, rawatan alkali 14 dengan 5 peratus kalium hidroksida (KOH) berair menghasilkan 2 dan 19, 32) supaya stereostruktur 2 dijelaskan.

Kankanoside C (3) telah diasingkan sebagai serbuk amorf dengan putaran optik negatif ([a]D 26 34.0 darjah dalam MeOH). Dalam FAB-MS ion negatif 3, sepasang puncak ion kuasimolekul isotop diperhatikan pada m/z 399 dan 401 (MH) . Formula molekul 3 ditentukan sebagai C15H25ClO10 oleh pengukuran FAB-MS resolusi tinggi. Hidrolisis asid 3 dengan 1.0 M HCl terbebas D-glukosa, yang dikenal pasti melalui analisis HPLC menggunakan pengesan putaran optik.8,10—12,15—18) 1 H- (CD3OD, Jadual 1) dan 13C-NMR ( Jadual 2) spektra28) daripada 3 menunjukkan isyarat boleh diserahkan kepada tiga metilena [d 1.70 (br dd, J ca. 3, 13 Hz, 4a-H), 2.70 (br dd, J ca. 6, 13 Hz, 4b-H) , 1.68 (br d, J kira-kira 13 Hz, 6a H), 2.44 (m, 6b-H), 4.01, 4.04 (kedua-duanya d, J 11.3 Hz, 10-H2)], lima metin [d 2.47 (dd, J 2.5, 7.9 Hz, 9-H), 2.61 (m, 5- H), 3.94 (br s, 7-H), 5.10 (br d, J ca. 3 Hz, 3-H), 5.48 (d, J 2.5 Hz, 1-H)] dan bahagian b-glucopyranosyl [d 4.60 (d, J 8.0 Hz, 1 -H)]. Isyarat proton dan karbon dalam spektrum 1 H- dan 13C-NMR 3 boleh ditindih pada isyarat 2, kecuali isyarat disebabkan oleh kedudukan 3- dan 4-. Kedudukan bD-glucopyranosyl dan fungsi klorin dalam 3 telah dijelaskan daripada eksperimen H–H COZY dan HMBC seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1. Akibatnya, struktur satah 3 telah dibina seperti yang ditunjukkan. Stereostruktur relatif 3 ditentukan oleh eksperimen NOESY, di mana korelasi NOE diperhatikan antara pasangan proton berikut (1-H dan 3-H, 10-H2; 3- H dan 4a-H; 4b-H dan 5- H; 5-H dan 6b-H, 9-H; 6b-H dan 7-H; {{121} }H dan 9-H) seperti ditunjukkan dalam Rajah 2.

Struktur Kankanoside D (4) dan Kankanol (5) Kankanoside D (4) diasingkan sebagai serbuk amorfus dengan putaran optik negatif ([a]D 25 30.6 darjah dalam MeOH). Spektrum IR 4 menunjukkan jalur penyerapan pada 1655 cm 1 boleh dikaitkan dengan fungsi olefin dan jalur penyerapan kuat pada 3410 dan 1078 cm 1 menunjukkan struktur glikosidiknya. Dalam FAB-MS ion positif 4, puncak ion kuasimolekul diperhatikan pada m/z 341 (M Na) . Formula molekul C15H26O7 daripada 4 ditentukan oleh pengukuran FAB-MS resolusi tinggi. Hidrolisis asid 4 dengan 1.0 M HCl terbebas D-glukosa,8,10—12,15—18) manakala (R)-rotunditi (4a) 33,34) diperoleh melalui hidrolisis enzimatik 4 dengan b-glukosidase. 1 H-NMR (Jadual 3, CD3OD) dan 13C-NMR (Jadual 4) spektrum28) daripada 4 menunjukkan isyarat boleh diserahkan kepada metil [d 1.69 (s, 10-H3)], tiga metilena [d 1.41, 2.06 (kedua-dua m, 4-H2), 1.51, 2.01 (kedua-dua m, 6a- dan 6b-H), 2.23 (br dd, J ca. 8, 15 Hz, 7a-H), 2.37 (br dd , J kira-kira 8, 15 Hz, 7b-H)], metin [d 2.90 (m, 5-H)] dan dua metilena yang mengandungi fungsi oksigen {d [3.56 (DDD, J 2.8, 7.4) , 13.2 Hz), 3.97 (DDD, J 4.9, 8.0, 13.2 Hz), 3-H2], 4.04, 4.18 (kedua-duanya d, J 12.2 Hz, 1-H2)} bersama-sama dengan b- bahagian glucopyranosyl [d 4.25 (d, J 7.7 Hz, 1 -H)]. Kedudukan bahagian bD-glucopyranosyl dalam 4 telah dijelaskan oleh eksperimen HMBC sebagai 3-kedudukan (Rajah 1). Berdasarkan bukti ini, stereostruktur mutlak 4 ditentukan sebagai seperti yang ditunjukkan.

Kankanol (5) diperoleh sebagai serbuk amorfus dengan putaran optik positif ([a]D 25 11.1 darjah ). Pengionan kimia (CI)-MS 5 menunjukkan sepasang puncak ion isotop pada m/z 221 dan 223 disebabkan oleh ion kuasimolekul (MH) . Pengukuran CI-MS resolusi tinggi 5 mendedahkan formula molekul ialah C9H13ClO4. 1 H-NMR (Jadual 1, CD3OD) dan 13C-NMR (Jadual 2) spektrum28) daripada 5 menunjukkan kehadiran fungsi berikut: tiga metilena [d 1.60 (DDD, J 2.5, 5.5, 13.1 Hz, 4a-H), 1.80 (br dd, J kira-kira 3, 13 Hz, 4b H), 1.83 (br d, J kira-kira 12 Hz, 6a-H), 2.57 (m, 6b-H), 3.75 , 3.88 (kedua-dua d, J 9.2 Hz, 10-H2)], lima metin [d 2.76 (dd, J 4.3, 8.0 Hz, 9-H), 2.50 (m, 5- H), 3.80 (br s, 7-H), 5.17 (br d, J kira-kira 3 Hz, 3-H), 5.26 (d, J 4.3 Hz, 1-H) ]. Struktur planar 5 telah disahkan oleh 1 H–1 H COZY dan eksperimen HMBC. Iaitu, eksperimen 1 H–1 H COZY pada 5 menunjukkan kehadiran struktur separa yang ditulis dalam garis tebal, dan dalam eksperimen HMBC, korelasi jarak jauh diperhatikan seperti ditunjukkan dalam Rajah 1. Stereostruktur relatif 5 ialah ditentukan oleh eksperimen NOESY, di mana korelasi NOE diperhatikan antara pasangan proton berikut (1-H dan 9-H; 3-H dan 4a-H; 4b-H dan {{ 93}} H; 5-H dan 6b-H, 9-H; 6b-H dan 7-H; 7-H dan 9-H) seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2. Dengan perbandingan data 1 H- dan 13C-NMR untuk 5 dengan data untuk 14a, yang diperoleh dengan rawatan 14 dengan 5 peratus HCl akueus seperti ditunjukkan dalam Carta 1,35) kedudukan klorin kumpulan dalam 5 telah disokong untuk menjadi 3-kedudukan. Tambahan pula, asetilasi 5 dengan anhidrida asetik (Ac2O) dan piridin menghasilkan 3,{119}}oksida (5a), manakala 14a memberikan diasetat (14b) di bawah keadaan asetilasi yang sama. Bukti ini juga membawa kami untuk mengesahkan kedudukan fungsi klorin menjadi kedudukan 3b (Carta 3). Akibatnya, stereostruktur 5 ditentukan untuk menjadi seperti yang ditunjukkan.

Struktur Kankanoside E (6) Kankanoside E (6) telah diasingkan sebagai serbuk amorfus dengan putaran optik negatif ([a]D 25 20.0 darjah dalam MeOH). Spektrum IR 6 menunjukkan jalur penyerapan pada 3410, 1647, 1085 cm 1 boleh dikaitkan dengan fungsi glikosidik dan karbonil, manakala spektrum UVnya menunjukkan penyerapan maksimum pada 211 nm (log e 4.63), menunjukkan kehadiran asid karboksilik b-tak tepu. Formula molekul C16H28O8 daripada 6 dicirikan oleh FAB-MS ion positif dan negatif dan oleh ukuran MS resolusi tinggi. Hidrolisis asid bagi 6 D-glukosa terbebas,8,10—12,15—18) manakala (2E,6R)-8-hidroksi-2,6-dimetil- 2-asid oktanoik (6a) 36) diperoleh melalui hidrolisis enzimatik 6 dengan b-glukosidase. 1 H-NMR (Jadual 3, CD3OD) dan 13C-NMR (Jadual 4) spektrum28) daripada 6 menunjukkan kehadiran (2E,6R)-8-hidroksi-2,6- dimetil-2-bahagian asid oktanoik [d 0.95 (d, J 6.4 Hz, 10-H3), 1.30, 1.48 (kedua-dua m, 5-H2), 1.45, 1.70 (kedua-dua m, { {70}}H2), 1.65 (m, 6-H), 1.81 (s, 9-H3), 2.22 (2H, m, 4-H2), 3.61, 3.94 (kedua-duanya m, 8-H2), 6.78 (dd, J 1.2, 7.3 Hz, 3-H)] bersama-sama dengan bahagian bD-glucopyranosyl [d 4.26 (d, J 7.6 Hz, 1 -H)] . Dengan perbandingan isyarat karbon dalam spektrum 13C-NMR 6 dengan isyarat 6a, anjakan glikosilasi diperhatikan di sekitar 8-kedudukan 6. Kedudukan pautan glukosida juga disahkan oleh eksperimen HMBC seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1. Akibatnya, stereostruktur mutlak 6 telah dijelaskan sebagai (2E,6R)-8-b- D-glucopyranosyloxy-2,6-dimetil-2-asid oktanoik.

faedah ekstrak cistanche

Percubaan

Instrumen berikut digunakan untuk mendapatkan data fizikal: putaran khusus, polarimeter digital Horiba SEPA-300 (l 5 cm); Spektrum UV, spektrometer UV Shimadzu-1600; Spektrum IR, spektrometer FTIR-8100 Shimadzu; EI-MS, CI-MS dan CI-MS resolusi tinggi, JEOL JMS-GCMATE spektrometer jisim; FAB-MS dan MS resolusi tinggi, JEOL JMS-SX 102A spektrometer jisim; 1 spektrum H-NMR, JEOL EX-270 (270 MHz) dan spektrometer JNM-LA500 (500 MHz); Spektrometer 13C-NMR, JEOL EX-270 (68 MHz) dan JNM-LA500 (125 MHz) dengan tetrametilsilane sebagai standard dalaman; dan pengesan HPLC, Shimadzu RID-6Indeks biasan dan pengesan Avp UV-VIS SPD- 10SPD. Lajur HPLC, lajur YMC-Pack ODS-A (250 4.6 mm id), dan (250 20 mm id) masing-masing digunakan untuk tujuan analisis dan persediaan.

Keadaan percubaan berikut digunakan untuk kromatografi: kromatografi lajur silika gel fasa biasa, Silika gel BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Jepun, 15{{10}}}—35 0 mesh); kromatografi lajur silika gel fasa terbalik, Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Jepun, 100—200 mesh); TLC, plat TLC prasalut dengan Silika gel 60F254 (Merck, 0.25 mm) (fasa biasa) dan Silika gel RP- 18 F254S (Merck, 0.25 mm) (fasa terbalik); HPTLC fasa terbalik, plat TLC prasalut dengan Silica gel RP-18 WF254S (Merck, 0.25 mm); dan pengesanan dicapai dengan menyembur dengan 1 peratus Ce(SO4)2–10 peratus akueus H2SO4 diikuti dengan pemanasan.

Bahan Tumbuhan

Batang kering Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT telah dibeli di Urumqi, Wilayah Xinjiang, China pada Januari 2005 melalui Eishin Trading Co., Ltd. Osaka, Jepun, dan pengenalan botani telah dijalankan oleh profesor Jia Xiaoguang di Institut Xinjiang Cina Tradisional dan Perubatan Etnologi. Satu spesimen baucar (2005.01. Xinjiang-01) tumbuhan ini ada dalam fail di makmal kami.

Pengekstrakan dan Pengasingan

Batang kering C. tubulosa (5.0 kg) diserbukkan dan diekstrak tiga kali dengan metanol di bawah refluks selama 3 jam. Penyejatan pelarut di bawah tekanan berkurangan menyediakan ekstrak metanol (1340} g, 26.8 peratus daripada ubat herba ini). Ekstrak metanol (160} g) tertakluk kepada kromatografi lajur silika gel fasa normal [3.2 kg, CHCl3–MeOH–H2O (10 : 3 : 1→7 : 3 : 1, lebih rendah lapisan→6 : 4 : 1)MeOH] untuk memberikan enam pecahan [Fr. 1 (5.04 g), Fr. 2 (9.84 g), Fr. 3 (7.80} g), Fr. 4 (13.28 g), Fr. 5 (113.6{{10}4}} g), dan Fr. 6 (7.61 g)]. Pecahan 1 (5.00 g) diasingkan dengan kromatografi lajur silika gel fasa terbalik [15{148}} g, MeOH–H2O (40 6: 60→ 5{{ 162}} : 50→60 : 40, v/v)→MeOH] untuk menghasilkan pecahan fifi [Fr. {{50}} (83{{20}1}} mg), Fr. 1-2 (590} mg), Fr. 1-3 (180} mg), Fr. 1-4 (124 mg), dan Fr. 1-5 (3200 mg)]. Fr. {{60}} (830} mg) dipisahkan lagi oleh HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] untuk memberikan kakanol (5, 20 mg, 0.0034 peratus ), argyol (15, 18 mg, 0.0030 peratus ), cistanin (16, 24 mg, 0.0040 peratus), dan Fr. 1-1-2 (62 mg), yang dipisahkan lagi oleh HPLC [MeOH–H2O (2 : 98, v/v)] untuk memberikan (3R)-3-hidroksi-2-pyrrolidinone (0.0020 peratus ) dan (3R)-3-hidroksi-1-metil-2-pirolidinone (0.0059 peratus ). Fr. 1-2 (590 mg) telah ditulenkan oleh HPLC [MeOH–H2O (35 : 65, v/v) dan CH3CN– H2O (20 : 80, v/v)] untuk memberikan cistanchlorin (17, 21 mg, 0.0035 peratus). Pecahan 2 (9.72 g) tertakluk kepada kromatografi lajur silika gel fasa terbalik [290 g, MeOH–H2O (20 : 80→30 : 70→40 : 60→60 : 40, v/v)→MeOH] kepada afford tujuh pecahan [Fr. 2-1 (1986 mg), Fr. 2-2 (1563 mg), Fr. 2-3 (3931 mg), Fr. 2-4 (375 mg), Fr. 2-5 (486 mg), Fr. 2-6 (460 mg), dan Fr. 2-7 (336 mg)]. Fr. 2-1 (466 mg) diasingkan oleh HPLC [MeOH–H2O (5 : 95, v/v)] untuk memberikan uridin (0.0069 peratus ). Fr. 2-2 (535 mg) dipisahkan oleh HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] untuk memberikan antirrhide (11, 15 mg, 0.0079 peratus ) dan 6-deoxycatalpol (14, 214 mg, 0.11 peratus). Fr. 2-3 (535 mg) diasingkan oleh HPLC [MeOH–H2O (20 : 80, v/v)] untuk memberikan gluroside (10, 110 mg, 0.14 peratus ) dan bartsioside (13, 164 mg, 0.21 peratus ) . Fr. 2-4 (375 mg) dipisahkan oleh HPLC [MeOH–H2O (30 : 70, v/v)] untuk memberikan kankanosides A (1, 32 mg, 0.0054 peratus ) dan D (4, 9 mg, 0.0015 peratus ). Fr. 2-6 (460 mg) dipisahkan lagi oleh HPLC [MeOH–H2O (45 : 55, v/v)] untuk menyediakan kankanoside E (6, 161 mg, 0.027 peratus ) dan (2E,6Z){{192 }}bD-glucopyranosyloxy-2,6-dimetil-2,6-asid oktadienoik (18, 17 mg, 0.0028 peratus ). Pecahan 3 (7.60 g) tertakluk kepada kromatografi col umn silika gel fasa terbalik [230 g, MeOH–H2O (20 : 80→40 : 60→50 : 50→ 60 : 40, v/v)→MeOH] untuk memberi pecahan fifive [Fr. 3-1 (2652 mg), Fr. 3-2 (593 mg), Fr. 3-3 (3610 mg), Fr. 3-4 (190 mg), dan Fr. 3-5 (336 mg)]. Fr. 3-1 (480 mg) telah ditulenkan oleh HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] untuk memberikan kankanoside B (2, 19 mg, 0.018 peratus ), asid geniposidic (8, 32 mg, 0.030 peratus ), dan ajugol (12, 12 mg, 0.011 peratus). Pecahan 4 (13.10 g) tertakluk kepada kromatografi lajur silika gel fasa terbalik [390 g, MeOH–H2O (10 : 90→20 : 80→30 : 70→40 : 60→50 : 50, v/v)→ MeOH] untuk memberikan tujuh pecahan [Fr. 4-1 (6114 mg), Fr. 4-2 (430 mg), Fr. 4-3 (1058 mg), Fr. 4-4 (170 mg), Fr. 4-5 (2595 mg), Fr. 4-6 (1635 mg), dan Fr. 4-7 (1064 mg)]. Fr. 4-2 (430 mg) dipisahkan lagi oleh HPLC [MeOH–H2O (5 : 95, v/v)] untuk menghasilkan 2 (70 mg, 0.012 peratus ) dan kankanoside C (3, 16 mg, 0.0027 peratus ) . Fr. 4-6 (1058 mg) juga diasingkan oleh HPLC [MeOH–H2O (15 : 85, v/v)] untuk memberi asid mussaenosidic (7, 116 mg, 0.020 peratus ) dan 8-asid epilognik (9, 193 mg, 0.033 peratus ). Pecahan 5 (15.15 g) tertakluk kepada kromatografi lajur silika gel fasa terbalik [455 g, MeOH–H2O (0 : 100→10 : 90→ 20 : 80→40 : 60→50 : 50, v/v)→MeOH ] untuk memberikan tujuh pecahan [Fr. 5-1 (9311 mg), Fr. 5-2 (1114 mg), Fr. 5-3 (306 mg), Fr. 5-4 (347 mg), Fr. 5-5 (1620 mg), Fr. 5-6 (1453 mg), dan Fr. 5-7 (1106 mg)]. Fr. 5-1 (9311 mg) telah dihablurkan daripada MeOH untuk memberikan D-manitol (3337 mg, 4.19 peratus ).

Sebatian yang diketahui (7—18) telah dikenal pasti melalui perbandingan data fizikalnya ([a]D, IR, 1 H-NMR, 13C-NMR, MS) dengan nilai yang dilaporkan1,7,19—24,26,27) atau sampel komersial.25) Kankanoside A (1): Serbuk amorfus, [a]D 25 107.4 darjah (c 1.50, MeOH). FAB-MS ion positif resolusi tinggi: Calcd untuk C16H26O8Na (M Na) 369.1525; Dijumpai 369.1522. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1076 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD dan piridin-d5) d: diberikan dalam Jadual 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD dan piridin-d5) d C: diberikan dalam Jadual 2. Positif-ion FAB-MS: m /z 369 (M Na) . FAB-MS ion negatif: m/z 345 (MH) .

Kankanoside B (2): Serbuk amorf, [a]D 26 118.7 darjah (c 0.10, MeOH). FAB-MS ion positif resolusi tinggi: Calcd untuk C15H24O10Na (M Na) 387.1267; Dijumpai 387.1261. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: diberikan dalam Jadual 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: diberikan dalam Jadual 2. FAB-MS ion positif: m/z 387 (M Na) . FAB-MS ion negatif: m/z 363 (MH) .

Kankanoside C (3): Serbuk amorf, [a]D 26 34.0 darjah (c 1.00, MeOH). FAB-MS ion negatif resolusi tinggi: Calcd untuk C15H24ClO10 (MH) 399.1058; Dijumpai 399.1077. IR (KBr): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: diberikan dalam Jadual 1. 13C NMR (125 MHz, CD3OD) d C: diberikan dalam Jadual 2. FAB-MS ion negatif: m/z 399, 401 (MH) .

Kankanoside D (4): Serbuk amorf, [a]D 25 30.6 darjah (c 0.50, MeOH). FAB-MS ion positif resolusi tinggi: Calcd untuk C15H26O7Na (M Na) 341.1204; Dijumpai 341.1210. IR (KBr): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: diberikan dalam Jadual 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: diberikan dalam Jadual 4. FAB-MS ion positif: m/z 341 (M Na) . FAB-MS ion negatif: m/z 317 (MH) .

Kankanol (5): Serbuk amorf, [a]D 25 11.1 darjah (c 1.40, MeOH). CI-MS resolusi tinggi: Calcd untuk C9H14ClO4 (MH) 221.0580; Dijumpai 221.0582. IR (KBr): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955 cm 1 . 1 H- NMR (500 MHz, CD3OD) d: diberikan dalam Jadual 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: diberikan dalam Jadual 2. CI-MS m/z ( peratus ): 221 (MH) (5 ), 223 (MH) (2), 185 (88), 167 (100), 149 (71), dan 57 (49).

Kankanoside E (6): Serbuk amorf, [a]D 25 20.0 darjah (c 2.00, MeOH). FAB-MS ion positif resolusi tinggi: Calcd untuk C16H28O8Na (M Na) 371.1682; Dijumpai 371.1690. UV [MeOH, nm (log e)]: 215 (4.16). IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: diberikan dalam Jadual 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: diberikan dalam Jadual 4. FAB-MS ion positif: m/z 371 (M Na) . FAB-MS ion negatif: m/z 347 (MH).

faedah ekstrak cistanche

Hidrolisis asid 1—4 dan 6 dengan 1 M HCl

Larutan 1—4 atau 6 (setiap 1.5 mg) dalam 1 M HCl (0.5 ml) dipanaskan di bawah refluks selama 3 jam. Selepas penyejukan, campuran tindak balas dituangkan ke dalam air ais dan dineutralkan dengan Amberlite IRA-400 (bentuk OH), dan resin dikeluarkan melalui penapisan. Kemudian, turasan diekstrak dengan EtOAc. Lapisan akueus tertakluk kepada analisis HPLC di bawah keadaan berikut: lajur HPLC, penderia Ka LC NH{{10}}, 4.6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Jepun); pengesanan, putaran optik [Shodex ATAU-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokyo, Jepun)]; fasa mudah alih, CH3CN–H2O (75: 25, v/v); kadar sesama 0.8 ml/min; suhu lajur, suhu bilik. Pengenalpastian D-glukosa yang terdapat dalam lapisan berair telah dijalankan dengan membandingkan masa pengekalan dan putaran optik dengan sampel tulen: tR 12.3 min (putaran optik positif)

Hidrolisis enzimatik 1, 4, dan 6 dengan b-Glucosidase

Larutan 1 (7.7 mg) dalam H2O (1.5 ml) telah dirawat dengan b-glucosidase (5.0 mg, daripada badam, Oriental Yeast Co., Tokyo, Jepun) dan larutan itu dikacau pada 37 darjah selama 3 d. Selepas EtOH ditambahkan ke dalam campuran tindak balas, pelarut dikeluarkan di bawah tekanan yang dikurangkan dan sisanya ditulenkan oleh HPLC [MeOH–H2O (55: 45, v/v)] untuk memberikan kankagenin a (1a, 2.3 mg, 56 peratus ) . Melalui prosedur yang serupa, (R)-rotundiol33,34) (4a, 1.2 mg, 69 peratus ) dan (2E,6R)-8-hidroksi-2,6-dimetil{{30} }asid oktanoik36) (6a, 6.8 mg, 62 peratus ) masing-masing diperoleh daripada 4 (3.5 mg) dan 6 (20.4 mg).

Kankagenin a (1a): Serbuk putih, [a]D 25 18.4 darjah (c 0.20, MeOH). EI-MS resolusi tinggi: Calcd untuk C10H16O3 (M ) 184.1099; Dijumpai 184.1106. IR (KBr): 3410, 2940, 1684 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: diberikan dalam Jadual 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: diberikan dalam Jadual 2. EI MS: m/z ( peratus ): 184 (M , 37) , 95 (100).

Rawatan Alkali 14 dengan 5 peratus KOH berair

Larutan 14 (23.0 mg) dalam 5 peratus KOH berair (1.0 ml) telah dikacau pada 80 darjah selama 2 jam. Campuran tindak balas telah dineutralkan dengan Amberlite HCR-W2 (bentuk H). Pengalihan semula pelarut daripada turasan di bawah tekanan yang dikurangkan memberikan sisa, yang telah ditulenkan oleh HPLC [MeOH–H2O (5: 95, v/v)] untuk memberikan 2 (4.0 mg, 16 peratus ) dan 1932) (10.5 mg). , 43 peratus).

Rawatan Asid 14 dengan HCl akueus 5 peratus

Larutan 14 (25.0 mg) dalam 5 peratus akueus HCl (2.0 ml) telah dikacau pada suhu bilik selama 3 jam. Campuran tindak balas dituangkan ke dalam air ais dan keseluruhan campuran tindak balas diekstrak dengan EtOAc. Ekstrak EtOAc dicuci berturut-turut dengan NaHCO3 berair tepu dan air garam, kemudian dikeringkan di atas serbuk MgSO4 kontang dan ditapis. Penyingkiran pelarut daripada turasan di bawah tekanan berkurangan memberikan sisa, yang diasingkan oleh HPLC [MeOH–H2O (20: 80, v/v)] untuk memberikan 14a (4.0 mg, 25 peratus ).

14a

Serbuk putih, [a]D 20 21.5 darjah (c 0.30, MeOH). CI-MS resolusi tinggi: Calcd untuk C9H14ClO4 (MH) 221.0580; Dijumpai 221.0587. IR (KBr): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: diberikan dalam Jadual 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: diberikan dalam Jadual 2. CI-MS: m/z ( peratus ): 221 (MH) ( 7), 223 (MH) (3), 203 (M H2O) (97), 205 (M H2O) (33), 185 (7), 167 (12), 159 (32), 121(27), 110 (48), 95 (64), 85 (100), 67 (56), dan 57 (65).

Asetilasi 5 dan 14a

Larutan 5 (2.5 mg) dalam piridin (0.5 ml) dirawat dengan anhidrida asetik (Ac2O, 0.4 ml) dan campuran dikacau pada suhu bilik selama 12 jam. Campuran tindak balas dituangkan ke dalam air ais dan keseluruhan campuran tindak balas diekstrak dengan EtOAc. Ekstrak EtOAc dicuci berturut-turut dengan 5 peratus HCl akueus, NaHCO3 akueus tepu, dan air garam kemudian dikeringkan di atas serbuk MgSO4 kontang dan ditapis. Penyingkiran pelarut daripada turasan di bawah tekanan yang dikurangkan memberikan sisa, yang telah ditulenkan oleh HPLC [MeOH–H2O (35: 65, v/v)] untuk memberikan 5a (2.3 mg, 77 peratus). Melalui prosedur yang sama, 14b (2.7 mg, 87 peratus ) juga disediakan dan disucikan oleh HPLC [MeOH–H2O (55: 45, v/v)] daripada 14a (2.1 mg).

5a

Serbuk putih, [a]D 20 1.8 darjah (c 0.18, MeOH). CI MS resolusi tinggi: Calcd untuk C11H15O5 (MH) 227.0919; Dijumpai 227.0925. IR (KBr): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: diberikan dalam Jadual 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: diberikan dalam Jadual 2. CI-MS m/z ( peratus ): 227 (MH) (28 ), 209 (M H2O) (4), 184 (3), 166 (45), 149 (22), 138 (38), 122 (44), 94 (31), 85 (100), dan 57 (34). ).

14b

Serbuk putih, [a]D 20 23.7 darjah (c 0.06, MeOH). CI-MS resolusi tinggi: Calcd untuk C13H18ClO6 (MH) 305.0792; Dijumpai 305.0790. IR (KBr): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: diberikan dalam Jadual 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: diberikan dalam Jadual 2. CI-MS: m/z ( peratus ): 305 (MH) ( 2), 307 (MH) (1), 263 (MH C2H3O) (6), 265 (MH C2H3O) (3), 245 (30), 203 (8), 185 (100), 167 (7), 149 (33), 121 (26), 95 (15), 85 (37), dan 57 (93).

Ucapan terima kasih

Penyelidikan ini disokong oleh Program COE ke-21, Projek Sempadan Akademik, dan Geran-in-Aid untuk Penyelidikan Saintifik daripada Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Sukan, Sains dan Teknologi Jepun. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Profesor Xiaoguang Jia di Institut Perubatan Cina Tradisional dan Etnologi Xinjiang di Urumqi, China, untuk mengenal pasti bahan tumbuhan.

manfaat cistanche

Rujukan dan Nota

1) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Lembu jantan., 35, 3309—3314 (1987).

2) Akhbar Sains dan Teknologi Xinjiang, "Teknik Budaya Tumbuhan Ubat Ruji Xinjiang," Institut Xinjiang Perubatan Tradisional Cina dan Etnologi Ed., 2004, ms 84—88.

3) Du N., Zhou P., Wang J., Liu C., Li W., Zhongguo Yaoke Daxue Xue bao, 24, 46—48 (1993).

4) Xue D., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 22, 170—171 (1997).

5) Song Z., Mo S., Chen Y., Tu P., Li W., Zhao Y., Zheng J., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 25, 728—730 (2000).

6) Song Z., Tu P., Zhao Y., Zheng J., Zhongcaoyao, 31, 808—810 (2000).

7) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Lembu jantan., 38, 1927—1930 (1990).

8) Matsuda H., Morikawa T., Tao J., Ueda K., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Lembu jantan., 50, 208—215 (2002).

9) Morikawa T., Matsuda H., Toguchida I., Ueda K., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 65, 1468—1474 (2002).

10) Tao J., Morikawa T., Toguchida I., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Bioorg. Med. Chem., 10, 4005—4012 (2002).

11) Morikawa T., Tao J., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 66, 638—645 (2003).

12) Tao J., Morikawa T., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Lembu jantan., 51, 654—662 (2003).

13) Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Yoshikawa M., Planta Med., 70, 847—855 (2004).

14) Sun B., Morikawa T., Matsuda H., Tewtrakul S., Harima S., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 67, 1464—1469 (2004).

15) Morikawa T., Sun B., Matsuda H., Wu LJ, Harima S., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Lembu jantan., 52, 1194—1199 (2004).

16) Xie H., Wang T., Matsuda H., Morikawa T., Yoshikawa M., Tani T., Chem. Pharm. Lembu jantan., 53, 1416—1422 (2005).

17) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 69 (2006) dalam akhbar.

18) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Wang T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Lembu jantan., 54, 506—513 (2006).

19) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Lembu jantan., 33, 3645—3650 (1985).

20) Otsuka H., Fitokimia, 33, 617—622 (1993).

21) Zhao W., Yang G., Xu R., Qin G., Phytochemistry, 41, 1553—1555 (1996).

22) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Lembu jantan., 32, 1729—1734 (1984).

23) Xu Z., Yang S., Yang J., Lu R., Zhongcaoyao, 30, 244—246 (1999).

24) Wang SJ, Pei YH, Hua HM, Chin. Kimia. Lett., 12, 343—344 (2001).

25) Sebatian yang diketahui telah dikenal pasti melalui perbandingan data fizikalnya dengan sampel yang diperoleh secara komersial.

26) Pires R., Burger K., Tetrahedron, 53, 9213—9218 (1997).

27) Kamal A., Ramana KV, Ramana AV, Babu AH, Tetrahedron: Asymmetry, 14, 2587—2594 (2003).

28) Spektrum 1 H- dan 13C-NMR bagi 1—6 dan sebatian yang berkaitan (19, 1a, 5a, 14a, 14b) telah diberikan dengan bantuan peningkatan tanpa herotan melalui pemindahan polarisasi (DEPT), spektroskopi korelasi penapis kuantum berganda ( DQF COSY), koheren kuantum berbilang heteronuklear (HMQC), dan eksperimen sambungan ikatan berbilang heteronuklear (HMBC).

29) Nishizawa M., Kodama S., Yamase Y., Kayano K., Hatakeyama S., Ya mada H., Chem. Pharm. Lembu jantan., 42, 982—984 (1994).

30) Yoshikawa M., Ueda T., Matsuda H., Yamahara J., Murakami N., Chem. Pharm. Lembu jantan., 42, 1691—1693 (1994).

31) Matsuda H., Shimoda H., Uemura T., Ueda T., Yamahara J., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Lembu jantan., 47, 1753—1758 (1999).

32) Damtoft S., Jensen SR, Nielsen BJ, Phytochemistry, 24, 2281— 2283 (1985).

33) Watanabe K., Takada Y., Matsuo N., Nishimura H., Biosci. Bioteknologi. Biochem., 59, 1979—1980 (1995).

34) Takikawa H., Yamazaki Y., Mori K., Eur. J. Org. Chem., 229—232 (1998).

35) Kitagawa I., Fukuda Y., Taniyama T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Lembu jantan., 39, 1171—1176 (1991).

36) Yamaguchi K., Shinohara C., Kojima S., Sodeoka M., Tsuji T., Biosci. Bioteknologi. Biochem., 63, 731-735 (1999).