Kajian Mekanistik Minuman Xian Fang Huo Ming Berasaskan Cistanche dalam Rawatan Prostatitis Kronik: Farmakologi Rangkaian Bersepadu Dan Pengesahan Eksperimen Menyasarkan Laluan PI3K/Akt/NF-κB
Oct 27, 2025
2. Kaedah
2.1 Farmakologi Rangkaian dan Analisis Docking Molekul
2.1.1 Pengenalpastian Komponen Aktif dan Sasaran Penyakit
Menggunakan pangkalan data TCMSP, sebatian aktif dalam Minuman Xian Fang Huo Ming (XFHY) berasaskan Cistanche telah disaring dengan kriteria ADME: bioavailabiliti oral (OB) Lebih daripada atau sama dengan 30% dan keserupaan dadah (DL) Lebih besar daripada atau sama dengan 0.18. Sasaran berpotensi bagi sebatian ini dikenal pasti menggunakan SwissTargetPrediction (kebarangkalian Lebih besar daripada atau sama dengan 0.1). Rangkaian "herb-compound-target" telah dibina menggunakan Cytoscape 3.9.1, dan lima sebatian teratas telah dikenal pasti berdasarkan kepusatan darjah. Pada masa yang sama, sasaran penyakit berkaitan CP/CPPS dikumpul daripada GeneCards, OMIM dan DisGeNET menggunakan kata kunci seperti "prostatitis kronik" dan "prostatitis."
Suplemen Ekstrak Cistanche untuk Kesihatan Prostat dan Buah Pinggang PhGs75% Ech 30% Akta 12%
2.1.2 Pengenalpastian Sasaran Persimpangan
Persimpangan antara sasaran kompaun XFHY dan sasaran penyakit CP/CPPS ditentukan menggunakan perisian Venny 2.1 untuk menghasilkan gambar rajah Venn, mengenal pasti sasaran terapeutik berpotensi utama.
2.1.3 Pembinaan Rangkaian PPI
Sasaran persimpangan telah diimport ke dalam pangkalan data STRING (spesies: Homo sapiens; skor interaksi > 0.9). Rangkaian interaksi protein-protein (PPI) yang terhasil telah diimport ke Cytoscape, dan sasaran teras telah dikenal pasti menggunakan CytoHubba berdasarkan parameter topologi rangkaian seperti tahap, antara dan kedekatan.
2.1.4 Pembinaan Rangkaian "Herb–Compound–Target–Pathway".
Menggunakan Cytoscape 3.9.1, model rangkaian dibina untuk menggambarkan hubungan antara XFHY, sebatian aktif, sasaran dan laluan isyaratnya. Parameter rangkaian dianalisis untuk menentukan nod utama.
2.1.5 Analisis Pengayaan GO dan KEGG
Sasaran persimpangan telah dimuat naik ke pangkalan data DAVID untuk analisis pengayaan laluan Gene Ontology (GO) dan Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) Kyoto (P <0.05). Keputusan telah divisualisasikan melalui alat bioinformatik.
2.1.6 Pelabuhan Molekul
Lima sebatian teratas (cth, kuersetin, kaempferol) digunakan sebagai ligan, dan sepuluh sasaran teras teratas daripada rangkaian PPI sebagai reseptor. Struktur protein diperoleh daripada Bank Data Protein (PDB), diproses terlebih dahulu menggunakan AutoDockTools 1.5.6 (termasuk penyahhidratan, penghidrogenan dan penambahan cas), dan ditukar kepada format PDBQT. Struktur ligan dalam format MOL2 diperolehi daripada TCMSP dan juga ditukar. Docking molekul telah dijalankan menggunakan AutoDock, dan pertalian pengikatan divisualisasikan menggunakan GraphPad Prism 8.
2.2 Eksperimen Haiwan
2.2.1 Penubuhan Model
Kaedah aruhan kimia digunakan untuk memodelkan CP/CPPS. Tikus telah dibius dengan 3% natrium pentobarbital (50 mg/kg). Insisi garis tengah dibuat di bahagian bawah abdomen, dan 80 μL 3% λ-carrageenan disuntik ke dalam setiap lobus sisi prostat (jumlah 160 μL). Tikus yang dikendalikan syampu menerima suntikan garam. Penjagaan selepas pembedahan termasuk penggunaan antibiotik topikal. Pada hari ke-7, kejayaan pemodelan telah disahkan melalui pemeriksaan kasar dan histologi prostat (edema, kesesakan, degenerasi epitelium, dan penyusupan keradangan).
2.2.2 Pengelompokan dan Rawatan
Tujuh puluh tikus SD jantan dibahagikan secara rawak kepada tujuh kumpulan (n=10):
Kawalan biasa
Operasi Syam
Kawalan model
Kumpulan XFHY dos rendah, sederhana dan tinggi
Kumpulan Tamsulosin
Dos dikira berdasarkan dos setara manusia (7.29 g/kg/hari). XFHY ditadbir melalui gavage oral pada 0.3645 g/mL (rendah) dan 1.458 g/mL (tinggi). Tamsulosin diberikan pada 0.0018 mg/kg. Semua rawatan berlangsung selama 28 hari, bermula 8 hari selepas pemodelan.
2.2.3 Penilaian Histopatologi
Lobus prostat kiri telah ditetapkan dalam 4% paraformaldehid, tertanam dalam parafin, dipotong, dan diwarnai dengan hematoxylin-eosin. Perubahan histologi dinilai di bawah mikroskop cahaya.
2.2.4 ELISA untuk Penanda Radang
Darah yang dikumpul melalui aorta perut telah disentrifugasi, dan paras serum TNF- , IL-1 , dan COX-2 diukur menggunakan kit ELISA mengikut arahan pengilang.
2.2.5 qRT-PCR untuk Ekspresi Gen
Jumlah RNA telah diekstrak daripada tisu prostat dan ditranskripsi terbalik ke dalam cDNA. PCR masa nyata telah dijalankan menggunakan primer khusus untuk PI3K, Akt, dan NF-κB p65. GAPDH digunakan sebagai kawalan dalaman. Ungkapan relatif dikira menggunakan kaedah 2^-ΔΔCt.
2.2.6 Western Blot untuk Ekspresi Protein
Protein diekstrak daripada tisu prostat beku menggunakan penimbal RIPA. Selepas kuantifikasi, protein dipisahkan oleh SDS-PAGE, dipindahkan ke membran PVDF, dan disiasat dengan antibodi utama terhadap PI3K, p-PI3K, Akt, p-Akt (Ser473/Thr308), NF-κB p65, dan p-NF-κB p65. Antibodi sekunder konjugasi HRP dan pengesanan ECL digunakan. Keamatan jalur dikira menggunakan ImageJ.
2.2.7 Analisis Statistik
Semua eksperimen dilakukan dalam tiga kali ganda. Data dianalisis menggunakan GraphPad Prism 8 dan dinyatakan sebagai min ± sisihan piawai. ANOVA sehala diikuti dengan ujian LSD atau Dunnett digunakan untuk perbandingan berbilang kumpulan. P <0.05 dianggap signifikan secara statistik.
3. Keputusan
3.1 Rangkaian Farmakologi dan Docking Molekul
Persimpangan Kompaun–Sasaran:912 sasaran kompaun dan 2,197 sasaran penyakit menghasilkan 374 sasaran bertindih.
Sebatian Teratas Dikenalpasti:Quercetin, kaempferol, pelargonidin, naringenin, dan byakangelicol-semua dengan kesan anti-radang dan antioksidan yang diketahui.
Analisis PPI:Sasaran utama termasuk TP53, AKT1, EGFR, TNF, IL6, STAT3, BCL2, CASP3, CCND1 dan NFKB1.
Pengayaan GO dan KEGG:Laluan diperkaya termasuk PI3K/Akt, MAPK, RAS, dan proses biologi yang berkaitan dengan keradangan.
Pelabuhan Molekul:Perkaitan pengikatan yang kuat diperhatikan antara sasaran teras dan sebatian utama (tenaga pengikat Kurang daripada atau sama dengan -5.0 kcal/mol), mencadangkan bioaktiviti yang tinggi.
3.2 Pengesahan Eksperimen
3.2.1 Pewarnaan HE
Tikus kumpulan model menunjukkan degenerasi epitelium kelenjar, edema stroma, dan penyusupan keradangan yang meluas. Kumpulan yang dirawat XFHY mempamerkan keradangan yang berkurangan, terutamanya dalam kumpulan dos sederhana dan tinggi.
3.2.2 Tahap Penanda Radang
Berbanding dengan kumpulan model, XFHY mengurangkan tahap TNF-, IL-1 dan COX-2 serum dengan ketara (P <0.01), menunjukkan keberkesanan anti-radang.
3.2.3 Ungkapan Gen (qPCR)
XFHY dengan ketara mengurangkan tahap mRNA PI3K, Akt, dan NF-κB p65 dalam cara yang bergantung kepada dos. Akt dikurangkan dos rendah dan p65 sahaja; kumpulan dos sederhana dan tinggi menunjukkan penindasan yang lebih luas.
3.2.4 Ekspresi Protein (Western Blot)
Tahap fosforilasi PI3K, Akt (Ser473, Thr308), dan NF-κB p65 telah meningkat dengan ketara dalam kumpulan model dan berkurangan dalam tikus yang dirawat XFHY, terutamanya pada dos sederhana dan tinggi.
4. Perbincangan
Berdasarkan pengalaman klinikal, kajian ini mengesahkan bahawaXFHY berasaskan Cistanchemempunyai kesan anti-radang yang ketara pada CP/CPPS. Farmakologi rangkaian mengenal pasti sebatian aktif utama, terutamanyaquercetin, dengan sifat anti-radang dan antioksidan yang terbukti. Analisis PPI mengetengahkan sasaran sepertiTNF, IL6, danAKT1, yang merupakan pusat kepada keradangan dalam prostatitis.
Analisis KEGG mencadangkan penglibatanPI3K/Akt/NF-κBlaluan isyarat yang diiktiraf secara meluas dalam keradangan dan peraturan imun. XFHY mungkin memberikan kesan terapeutik dengan menghalang laluan ini, sekali gus mengurangkan ekspresi sitokin pro-radang.
Tambahan pula, fosforilasi dwi Akt (Ser473 dan Thr308) nampaknya kritikal untuk pengaktifan NF-κB. XFHY menghalang fosforilasi di kedua-dua tapak, mencadangkan perencatan isyarat NF-κB melalui penindasan Akt hulu.
Kesimpulan
XFHY boleh mengurangkan CP/CPPS dengan menyekat laluan PI3K/Akt/NF-κB, mengurangkan ekspresiIL-1 , TNF-, danCOX-2, dan mengurangkan tindak balas keradangan dalam tisu prostat. Penglibatan laluan, terutamanya fosforilasi Akt pada Ser473 dan Thr308, memberikan penjelasan mekanistik yang berpotensi untuk keberkesanan XFHY. Penyelidikan lanjut adalah wajar untuk mengesahkan sama ada PI3K/Akt/NF-κB ialah laluan muktamad di mana XFHY melaksanakan tindakan terapeutiknya.
Konflik Kepentingan:
Penulis mengisytiharkan tiada konflik kepentingan.
Beritahu saya jika anda ingin aabstrak grafik, jadual ringkasan, ataupersembahan PowerPointberdasarkan kajian ini!
