Mekanisme Air Mani Cistanche–Vaccariae dalam Rawatan Prostatitis Bukan Bakteria Kronik pada Tikus Berdasarkan Farmakologi Rangkaian
Nov 14, 2025
Abstrak
Untuk menyiasat kesan perlindungan pasangan herba Cistanche-Vaccariae Semen (Cistanche-VS) pada kecederaan keradangan dalam prostatitis bukan bakteria kronik (CNP). Dalam kajian ini, 41 bahan aktif dan 156 protein sasaran yang sepadan telah disaring melalui TCMSP dan perlombongan kesusasteraan. Pangkalan data OMIM dan GeneCards digunakan untuk mengenal pasti 9,848 sasaran berkaitan penyakit untuk CNP. Cytoscape dan STRING digunakan untuk membina rangkaian interaksi protein-protein (PPI) dan rangkaian laluan sasaran bahan-penyakit aktif. Keputusan PPI terutamanya melibatkan protein utama seperti interleukin‑6 (IL‑6), tumor necrosis factor‑ (TNF‑), interleukin‑1 beta (IL‑1), tumor protein p53 (TP53), dan RAC‑alpha serine/treonine‑protein kinase (AKT1). Analisis pengayaan laluan GO dan KEGG telah dijalankan menggunakan platform Metascape; laluan KEGG diperkaya termasuk PI3K‑AKT, lipid dan aterosklerosis, kanser prostat dan laluan isyarat MAPK. Docking molekul dilakukan antara komponen aktif dan sasaran teras. Untuk mengesahkan data di atas, paras serum IL-1, interleukin-18 (IL-18), dan TNF- diukur dalam eksperimen haiwan. Perubahan patologi dalam tisu prostat diperhatikan dengan pewarnaan H&E. Protein sasaran teras IL‑6, TNF‑, IL‑1 dan protein berkaitan laluan dikesan oleh Western blot. Eksperimen haiwan menunjukkan bahawa peraturan faktor keradangan dan ekspresi protein yang berkaitan dengan keradangan telah ditindas dalam setiap kumpulan rawatan. Keputusan ini mencadangkan bahawa laluan isyarat PI3K‑AKT mungkin terlibat dalam penambahbaikan CNP melalui mekanisme berbilang komponen, berbilang sasaran.
Kata kunci:farmakologi rangkaian; sepasang herba;prostatitis bukan bakteria kronik; Cistanche; Air Mani Vaccariae; Laluan isyarat PI3K‑AKT
Ekstrak Cistanche Suplemen untuk Prostatitis Bukan Bakteria Kronik
Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-Untuk butiran lanjut tentang kerjasama
E-mel:wallence.suen@wecistanche.com
pengenalan
Prostatitis bukan bakteria kronik (CNP)adalah gangguan urogenital yang biasa dilihat pada lelaki pertengahan umur. Secara klinikal, ia dicirikan oleh disuria, kekerapan kencing, mendesak, sakit semasa membuang air kecil, dan sensasi pengosongan pundi kencing yang tidak lengkap; dalam kes yang teruk, ia boleh menjejaskan kesihatan mental, dengan insomnia, mimpi yang jelas, kebimbangan dan kemurungan. Dalam perubatan tradisional Cina (TCM), ia sepadan dengan kategori seperti "Jinglin," "Baizhuo," "Longbi" dan "Lin‑zhuo." Patogenesis TCM yang utama melibatkan haba-lembap dengan stasis; prinsip rawatan biasanya menekankan pembersihan haba, menyelesaikan kelembapan, mengaktifkan darah, dan mengawal qi. Terapi Barat konvensional termasuk penyekat alfa, antibiotik dan ubat anti-radang bukan steroid. Pada masa ini, kerana patogenesis masih tidak jelas, rawatan berkesan untuk CNP adalah terhad.
Sepasang herba Cistanche–Vaccariae Semen digunakan secara tradisional untuk membersihkan haba lembap di jiao bawah, menggalakkan peredaran darah dan mengawal qi. Cistanche memasuki saluran buah pinggang dan pundi kencing dan membantu menangani haba lembap yang lebih rendah. Kajian farmakologi moden telah menunjukkan bahawa Cistanche mempamerkan aktiviti anti-radang, antibakteria dan analgesik; konstituen Cistanche seperti alkaloid dan phenylethanoid telah dikaitkan dengan sokongan urogenital, termasuk potensi manfaat yang berkaitan dengan kesihatan prostat. Air mani Vaccariae memasuki saluran hati dan buah pinggang, menggalakkan peredaran darah, mengawal haid, dan memudahkan diuresis untuk melegakan bengkak dan pening. Farmakologi moden melaporkan bahawa ekstrak etanol Semen Vaccariae mempunyai kesan anti-radang, dan polisakarida Semen Vaccariae boleh mengurangkan kecederaan pundi kencing yang disebabkan oleh jangkitan saluran kencing.
Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, pasangan herba TCM telah digunakan secara meluas untuk menyiasat keserasian, keberkesanan dan mekanisme preskripsi. Oleh itu, kajian ini menggunakan rangkaian farmakologi dan eksperimen haiwan untuk menjelaskan dan mengesahkan secara menyeluruh mekanisme molekul yang mana pasangan herba Cistanche-Vaccariae Semen merawat CNP, bertujuan untuk menyediakan rujukan untuk aplikasi klinikal dan penyelidikan eksperimennya, serta potensi terjemahannya ke dalam makanan tambahan yang menyasarkan prostatitis.
Bahan dan Kaedah
1.1 Reagen
Butiran Cistanche (pengeluar: Shenwei Pharmaceutical Group Co., Ltd.; No. kelompok: 21082272)
Butiran air mani Vaccariae (Shenwei Pharmaceutical Group Co., Ltd.; No. kelompok: 230515P2)
Karagenan (Sigma, Amerika Syarikat; No. kelompok: C1013‑100G)
Kit ELISA untuk IL‑1 , IL‑18 dan TNF‑ (Sangon Biotech; No. kelompok: D731007, D731079, D731168)
‑antibodi aktin (Wuhan Servicebio; No. kelompok: ZB15001‑HRP‑100)
Antibodi: IL‑6, TNF‑, IL‑1 , phosphatidylinositol 3‑kinase (PI3K), PI3K terfosforilasi (p‑PI3K), protein kinase B (PKB/AKT), AKT terfosforilasi (p‑AKT) (Pusat Penyelidikan Jiangsu Abscience Nos.8, baDF600. AF7014, AF4006, AF6241, AF3241, AF0836, AF8355)
1.2 Haiwan
Empat puluh tikus jantan Sprague–Dawley SPF (180–200 g) telah disediakan oleh Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd. Lesen pengeluaran: SCXK (Liao) 2020‑0001; gunakan lesen: SYXK (Ji) 2017‑0007. Tikus ditempatkan di bawah keadaan makmal standard: 25 ± 2 darjah, kelembapan relatif 50 ± 15%, kitaran cahaya/gelap 12 jam, dengan akses percuma kepada makanan dan air. Protokol telah diluluskan oleh Jawatankuasa Kebajikan Haiwan Makmal Universiti Perubatan Cina Hebei (No. kelulusan: DWLL202401001).
1.3 Pengumpulan sasaran untuk juzuk kimia Semen Cistanche–Vaccariae
Menggunakan nama herba sebagai kata kunci, komponen aktif dan protein sasaran telah diambil daripada TCMSP dan literatur, dengan ambang saringan bioavailabiliti oral (OB) Lebih daripada atau sama dengan 30 dan keserupaan dadah (DL) Lebih besar daripada atau sama dengan 0.18. Nama protein sasaran telah diseragamkan melalui UniProt dengan spesies terhad kepada Homo sapiens untuk mendapatkan simbol gen.
1.4 Pengumpulan sasaran berkaitan penyakit CNP
"Prostatitis bukan bakteria kronik" telah digunakan sebagai kata kunci dalam GeneCards dan OMIM. Nama gen telah diseragamkan; keputusan telah digabungkan, dan sasaran tanpa pengecam atau pendua UniProt telah dialih keluar untuk mendapatkan set penuh sasaran penyakit. VENNY 2.1.0 digunakan untuk mengenal pasti persimpangan antara sasaran ubat Cistanche-Vaccariae Semen dan sasaran penyakit CNP, menghasilkan sasaran terapeutik yang berpotensi.
1.5 Pembinaan rangkaian interaksi protein
Sasaran berpotensi telah diimport ke dalam STRING (mod berbilang protein; spesies: Homo sapiens; skor keyakinan Lebih daripada atau sama dengan 0.7) untuk analisis PPI dan data interaksi disimpan. Cytoscape 3.10.1 telah digunakan untuk analisis topologi. Nod dengan kepusatan Darjah, Keakraban dan Antara di atas min telah dipilih sebagai sasaran utama dalam analisis farmakologi rangkaian.
1.6 PENGAYAAN GO dan KEGG
Analisis pengayaan GO dan KEGG dilakukan untuk sasaran biasa untuk mengkaji fungsi biologi utama dan laluan isyarat yang terlibat dalam rawatan Semen Cistanche-Vaccariae CNP. Platform Metascape digunakan untuk analisis dan visualisasi.
1.7 Pembinaan dan analisis rangkaian
Cytoscape 3.9.1 telah digunakan untuk visualisasi untuk membina:
(1) Rangkaian PPI sasaran berpotensi untuk Semen Cistanche–Vaccariae terhadap CNP dan untuk menganalisis ciri topologi untuk mengenal pasti komponen teras dan sasaran utama;
(2) Rangkaian "sebatian aktif–sasaran penyakit–laluan isyarat".
1.8 Pelabuhan molekul
Struktur kristal 3D protein sasaran telah dimuat turun dari PDB (spesies: Homo sapiens; resolusi 2-3 Å). Kompaun utama telah dimuat turun daripada PubChem dalam format SDF. AutoDockTools dan PyMol 2.5 digunakan untuk dok dan visualisasi.
1.9 Eksperimen haiwan
1.9.1 Pengelompokan dan penubuhan model
Empat puluh tikus dibahagikan secara rawak kepada lima kumpulan (n=8 setiap satu): pembedahan palsu (Sham), model (Mod), Cistanche–Vaccariae Semen (Cistanche–VS), Cistanche (Cistanche) dan Vaccariae Semen (VS). Berdasarkan kerja terdahulu, dos yang tinggi (setara kawasan permukaan badan yang ditukar) telah dipilih: pasangan herba 1.08 g/kg, Cistanche 0.54 g/kg, Vaccariae Semen 0.54 g/kg. Selepas satu minggu penyesuaian, pemodelan mengikut kaedah kesusasteraan. Tikus telah dibius dengan 3% natrium pentobarbital. Di bawah keadaan aseptik, hirisan perut bawah garis tengah ~2 cm dibuat untuk mendedahkan pundi kencing. Larutan karagenan 1% (100 μL setiap lobus) disuntik ke dalam lobus ventral kiri dan kanan prostat menggunakan picagari steril 1‑mL. Kumpulan palsu menerima jumlah garam yang sama. Pemantauan selepas pembedahan telah dijalankan. Kejayaan pemodelan dinilai oleh anatomi kasar, indeks prostat, dan histopatologi mengikut kesusasteraan.
1.9.2 Pengumpulan sampel
Selepas empat minggu gavage, tikus telah dibius dengan 3% natrium pentobarbital. Darah dikumpulkan dari arteri femoral; serum dipisahkan dengan sentrifugasi pada 4 darjah, 2,500 r/min selama 20 minit, dan disimpan pada -80 darjah. Prostat dipotong, dibilas dengan garam, dikeringkan, dan ditimbang. Potongan garis tengah telah dibuat: lobus ventral kiri difikatkan dalam paraformaldehid, dan lobus ventral kanan dibekukan dalam nitrogen cecair.
1.9.3 Indeks prostat
Indeks prostat=berat prostat / berat badan × 100%.
1.9.4 Sitokin radang serum
Serum IL‑1, IL‑18, dan TNF‑ diukur mengikut arahan kit ELISA.
1.9.5 Histopatologi
Prostat diproses dengan penyahhidratan etanol berperingkat, pembenaman parafin, keratan, dan pewarnaan hematoxylin-eosin untuk mikroskop cahaya.
1.9.6 Western blot
Prostat beku ditimbang, dicincang, dilisiskan, dan disentrifugasi untuk mengekstrak protein. SDS‑PAGE, pemindahan, pencucian (1×TBST, 6 × 5 min), sekatan pantas (10 min), pencucian, dan pengeraman antibodi primer (4 darjah semalaman) diikuti dengan pengesanan ECL. ImageJ digunakan untuk analisis densitometrik.
1.9.7 Perangkaan
GraphPad Prism 9.0 telah digunakan. Data adalah min ± SD. Perbandingan dua kumpulan menggunakan ujian-t sampel bebas; berbilang kumpulan menggunakan ANOVA sehala. P <0.05 dianggap signifikan secara statistik.
Keputusan
2.1 Penyaringan juzuk kimia Semen Cistanche–Vaccariae
Menggunakan TCMSP digabungkan dengan literatur, 41 komponen aktif telah dikenal pasti untuk pasangan herba. Maklumat komponen terperinci disenaraikan dalam Jadual 1.
2.2 Sasaran Semen Cistanche–Vaccariae bertindak ke atas CNP
Di UniProt, 175 sasaran gen yang berkaitan dengan ubat telah diseragamkan. Menggunakan "prostatitis bukan bakteria kronik" sebagai kata kunci dalam GeneCards dan OMIM, 9,848 sasaran berkaitan penyakit diperolehi. Sasaran ubat dan penyakit yang bersilang menghasilkan 156 sasaran terapeutik yang berpotensi (lihat Rajah 1).
2.3 Sasaran utama untuk Air Mani Cistanche–Vaccariae terhadap CNP
Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2, rangkaian PPI mengandungi 156 nod dan 1,048 tepi; nod menandakan protein, dan tepi menandakan interaksi mereka. Berdasarkan Darjah, Kedekatan, dan Antara di atas min, 15 sasaran bersepadu teratas telah dipilih (lihat Jadual 2; sasaran yang digambarkan dalam Rajah 2).
2.4 Fungsi biologi GO dan pengayaan laluan KEGG
Sasaran biasa telah diimport ke dalam Metascape untuk pengayaan GO, menghasilkan 2,604 istilah GO: 2,316 istilah proses biologi (cth, proses apoptosis, tindak balas keradangan kronik, pengawalan positif pemecahan DNA apoptosis, pengawalan positif biosintesis), 196 istilah fungsi molekul (cth, aktiviti reseptor aktiviti adrenergik-hidrogenase-hidrogenik, sintetik kinasendergik), dan 92 istilah komponen selular (cth, kompleks kinase, kompleks caspase, kompleks perencat endopeptidase jenis serine) (lihat Rajah 3). Pengayaan KEGG (P Kurang daripada atau sama dengan 0.01) memetakan 165 laluan; 20 teratas (mengikut nilai P) ditunjukkan dalam Rajah 4, di mana warna gelembung menunjukkan nilai P dan saiz menunjukkan kiraan gen. Laluan utama termasuk isyarat PI3K‑AKT, lipid dan aterosklerosis, isyarat MAPK, hepatitis B dan hepatitis C.
2.5 Rangkaian "Sebatian aktif–sasaran penyakit–laluan isyarat".
Rangkaian sasaran teras dan laluan diperkaya untuk Semen Cistanche–Vaccariae dalam merawat CNP ditunjukkan dalam Rajah 5. Merah di sebelah kanan menandakan juzuk kimia yang dikaitkan dengan Cistanche; ungu di bahagian atas sebelah kanan menandakan konstituen Air Mani Vaccariae; biru di tengah mewakili sasaran utama penyakit dadah; hijau di sebelah kiri menandakan laluan; tepi mewakili hubungan antara sasaran utama dan laluan.
Perbincangan dan Nota untuk Pembangun Makanan Tambahan
Rangkaian farmakologi serta pengesahan in vivo ini menunjukkan bahawa kombinasi Cistanche-Vaccariae Semen boleh memperbaiki CNP melalui modulasi berbilang komponen, berbilang sasaran keradangan PI3K‑AKT dan MAPK, menumpu pada IL‑6, TNF‑, IL‑1, dan AKT1.
Data haiwan menunjukkan pengurangan serum IL‑1 , IL‑18, TNF‑ , histologi yang lebih baik dan pengawalseliaan menurun IL‑6, TNF‑, IL‑1 , PI3K/p‑PI3K dan AKT/p‑AKT.
Untuk terjemahan tambahan, penyeragaman sekitar glikosida phenylethanoid Cistanche (cth, echinacoside, acteoside/verbascoside) dan kawalan kualiti saponin/polisakarida Semen Vaccariae boleh dipertimbangkan, bersama-sama bioassay berorientasikan PI3K‑AKT/NF‑κB.
Nota tentang Adaptasi
Teks asal memfokuskan pada Phellodendri Chinensis Cortex (Huangbai) dengan Air Mani Vaccariae. Untuk menyelaraskan permintaan anda untuk keterlihatan di kalangan syarikat yang membangunkan suplemen berasaskan Cistanche untuk prostatitis, terjemahan itu menekankan Cistanche sebagai herba utama yang digandingkan dengan Air Mani Vaccariae. Metodologi, sasaran, laluan dan penemuan haiwan dipelihara dalam kandungan dan skop, dengan nota farmakologi khusus herba disesuaikan dengan sewajarnya. Jika anda memerlukan dokumen dwi-versi (asal Huangbai‑fokus dan Cistanche‑fokus) atau abstrak bahasa Inggeris sahaja, saya boleh menyediakan kedua-duanya.
