Banyak Kajian Telah Mengesahkan bahawa Penyakit Alahan Adalah Akibat Bukan Sahaja Pengaktifan Imun Semula Jadi 2

Sila hubungioscar.xiao@wecistanche.comuntuk maklumat lanjut

3. Perbincangan

Patogenesis dermatitis atopik (AD) tidak difahami sepenuhnya, tetapi penyakit ini dimediasi oleh tindak balas imun imun globulin E (IgE) yang tidak normal dalam disfungsi penghalang kulit. Antaranya, sel mast(MC) boleh menyebabkan penyakit alahan pengantara IgE, termasuk AD. Apabila sel mast diaktifkan, mereka melepaskan zarah sitoplasma yang terikat membran, yang membawa kepada pembebasan pelbagai molekul. Molekul ini memainkan peranan penting dalam patogenesis AD dan pertahanan tuan rumah [27]. Oleh kerana menghalang pengaktifan atau degranulasi sel mast membantu mengawal pelbagai tindak balas hipersensitiviti pengantara IgE, sel mast adalah salah satu sasaran yang ideal untuk meneroka ubat anti-alergi. Dalam kajian kami, sel mast didegranulasi sebagai tindak balas kepada sebatian 48/80 dan kalsium ionofor A23187, dan anti-DNP/IgE ditambah DNP/HSA. Kami mendapati bahawa rujukan berkesan menghalang kesan degranulasi sel mast, menunjukkan tindak balas anti-alerginya. Selain itu, peningkatan kalsium intraselular dan pengaktifan MAPK telah dihalang oleh rujukan. Tambahan pula, penyusupan sel mast kulit yang disebabkan oleh DNCB dan tingkah laku menggaru yang disebabkan oleh kompaun 48/80 juga dikurangkan. Oleh itu, mekanisme dermatitis anti-atopik neferine mempunyai kesan berganda pada keratinosit dan sel mast.

La patogenia de la dermatitis atópica (DA) tiada sekomprentasi por completo, tetapi la enfermedad está mediada por una respuesta inmunitaria anormal de la inmunoglobulin E (IgE) en la disfunción de la barrera cutánea. Entre ellos, los mastocitos (MC) pueden causar enfermedades alérgicas mediadas por IgE, incluida la EA. Cuando los mastocitos se activan, liberan sus particulas citoplásmicas unidas a la membrana, lo que lleva a la liberación de una variedad de moléculas. Estas moléculas juegan un papel importante en la patogénesis de la EA y la defensa del huésped [27]. Debido que la inhibición de la activación o desgranulación de los mastocitos ayuda a regular varias reacciones de hipersensibilidad mediadas por IgE, los mastocitos son uno de los objetivos ideales for explorar fármacos antialérgicos. En nuestro estudio, los mastocitos se desgranulan en respuesta al compuesto 48/80 y al ionóforo de calcio A23187, y anti-DNP/IgE ditambah DNP/HSA. Encontramos que la referencia inhibió efectivamente el efecto de desgranulación de los mastocitos, mostrando su reacción antialérgica. Además, el aumento de calcio intraselular y la activación de MAPK fueron inhibidos por referencia. Además, tambien se redujeron la infiltración de mastocitos en la piel causada por DNCB y el comportamiento de rascado causado por el compuesto 48/80. Oleh itu, el mecanismo de la dermatitis antiatópica de la neferina tiene un efecto multiplicador sobre los queratinocitos y los mastocitos.

Sila klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut

Sitoplasma sel mast yang terdapat dalam tisu dipenuhi dengan zarah-zarah yang besar dan padat daripada mediator keradangan yang telah terbentuk sebelumnya[28]. Proses melepaskan mediator ini daripada butiran rembesan dalam sel mast dipanggil degranulasi. Oleh kerana menghalang degranulasi sel mast boleh mengawal pelbagai tindak balas hipersensitiviti pengantara IgE, sel mast adalah salah satu sasaran yang ideal untuk meneroka ubat anti-alergi [29,30]. Keputusan kami menunjukkan bahawa rujukan mempunyai kesan yang sangat baik terhadap degranulasi sel mast tanpa mengira penggunaan antigen, perangsang reseptor atau ionofor. Ini menunjukkan bahawa rujukan adalah agen anti-alergi yang berpotensi (Rajah 2).

Semua butiran pra-simpan, mediator yang baru disintesis, dan juga butiran dan komponennya boleh digunakan sebagai penunjuk pengaktifan MC [31]. Di samping itu, kaedah standard ialah pengukuran kepekatan Ca4t intraselular. Kebanyakan MC secretagogues (cth, antigen, sebatian 48/80) yang telah digunakan secara amnya di makmal menyebabkan peningkatan kepekatan Ca2 tambah intrasel. Malah, peningkatan kepekatan Ca2 plus intraselular juga boleh mencetuskan degranulasi MC. Biasanya, peningkatan Ca4t intraselular disebabkan oleh mengaktifkan MC dengan sebatian, seperti thapsigargin (khusus menyekat Sarco/endoplasmic Ca2 ditambah ATPase, SERCA) pam dan ionofor (iaitu, ionomisin dan A23187) [32,33]. Oleh itu, dalam pengaktifan MC yang bergantung kepada Ca2t, pengukuran kemasukan Ca2t juga dianggap sebagai kaedah untuk menentukan keadaan pengaktifan MC. Dalam penyelidikan MC, Fura-2 digunakan secara meluas untuk penentuan perubahan Ca2 campur intrasel. Dalam eksperimen kami, kami mendapati bahawa keamatan pendarfluor sel mast yang diaktifkan telah ditindas dengan ketara selepas dirawat dengan rujukan (Rajah 3). Laporan terdahulu menunjukkan bahawa peningkatan kepekatan Ca4t intraselular adalah selaras dengan pembebasan histamin [34]. Oleh itu, kami membuat kesimpulan bahawa pembebasan histamin juga akan dihalang oleh rawatan rujukan. Eksperimen lanjut adalah wajar untuk mengesahkan hipotesis ini.

Sel mast mempunyai output fungsi yang berbeza dengan ketara.dos cistanche redditIni termasuk degranulasi, pembentukan prekursor asid arakidonik, kemotaksis, dan pengeluaran sitokin, dan semuanya bergantung pada isyarat kalsium sedikit sebanyak, tanpa mengira perangsang [32]MC yang diaktifkan mengeluarkan sitokin, yang merupakan mediator utama alahan dan penyakit radang [32]. 35]. Penghasilan sitokin oleh sel mast yang diaktifkan adalah hasil daripada induksi transkripsi gen sitokin dalam sel-sel ini. Rangsangan sel mast membawa kepada pengaktifan NF-kB dan AP-1 dan penghasilan banyak sitokin [36]. Laluan isyarat lata MAPK memainkan peranan penting dalam pengawalseliaan ekspresi sitokin. Pengaktifan laluan ini melalui pengaktifan PKC oleh PI menghasilkan pengaktifan pelbagai gen, termasuk gen sitokin radang seperti IL-1 , IL-6, dan TNF [37]. Kajian terbaru kami telah menunjukkan bahawa rujukan boleh menghalang sitokin yang dikeluarkan oleh pengaktifan keratinosit. Pada masa yang sama, kami juga mendapati bahawa pengaktifan laluan MAPK juga akan dihalang oleh rawatan rujukan [18]. Dalam kajian semasa kami, kami menunjukkan bahawa rujukan juga boleh mengurangkan ekspresi sitokin melalui perencatan pengaktifan MAPK dalam sel mast (Rajah 4 dan 5). Pengaktifan NFkB juga dikurangkan kerana perencatan pengaktifan MAPK (Rajah 6).

Cistanche boleh anti-penuaan

Beberapa kajian telah melaporkan bahawa pelbagai sitokin dalam pesakit AD dinaikkan, membawa kepada disfungsi penghalang kulit, termasuk sitokin yang dirembeskan oleh keratinosit dan sitokin terbitan Th2-[38,39]. Di samping itu, dilaporkan bahawa sitokin yang dirembeskan ini juga boleh mengawal selia ekspresi protein simpang ketat (T]) dan gen pembezaan terminal, termasuk filaggrin (FLG), loricrin (LOR), dan involucrin (IVL) [39,40]. ]Ekspresi filaggrin(Pro) dikurangkan dalam AD dan dikaitkan secara terbalik dengan MC tryptase dan IL-6[41]. IL-1 mengantara keradangan kronik pada tikus dengan halangan kulit yang terjejas [35]. Dalam kajian terdahulu, dilaporkan bahawa ekspresi FLG, IVL, dan LOR telah dikurangkan selepas penggunaan DNCB pada kulit dorsal tikus NC / Nga [42,43]. Dalam kajian ini, ekspresi FLG, IVL, dan LOR telah dikurangkan dengan ketara dalam kulit dorsal kumpulan kawalan, yang menunjukkan bahawa halangan epidermis telah terjejas. Pentadbiran rujukan pulih dengan ketara penurunan ekspresi FLG, IVL, dan LOR selepas rawatan DNCB, manakala pentadbiran rujukan sedikit meningkatkan ekspresi IVL dan LOR berbanding dengan kumpulan kawalan (Rajah 8). Adalah diketahui bahawa kompaun 48/80 adalah pengaktif sel mast kulit yang berkesan. Tindak balas kulit yang dirangsang oleh kompaun 48/80 boleh menyebabkan tingkah laku menggaru dengan melepaskan histamin daripada sel mast [44]. Histamin yang dikeluarkan daripada sel mast yang diaktifkan memainkan peranan penting dalam peningkatan kebolehtelapan vaskular yang disebabkan oleh kompaun 48/80. Semasa pruritus manusia, histamin dibebaskan daripada sel mast melalui pelbagai rangsangan juga dipertimbangkan. dijadikan pengantara yang penting. Oleh itu, menghalang degranulasi sel mast adalah langkah penting dalam mengawal pelepasan histamin semasa tingkah laku menggaru. Dalam kompaun kajian ini, 48/80 menyebabkan pengaktifan berkesan sel mast kulit. Walau bagaimanapun, prarawatan dengan rujukan telah mengurangkan tahap degranulasi sel mast (Rajah 2).faedah ekstrak cistancheKeputusan ini menunjukkan bahawa kesan tingkah laku anti-calar rujukan mungkin disebabkan oleh pengurangan kebolehtelapan vaskular dengan mengawal degranulasi sel mast (Rajah 9).

Secara amnya, pesakit AD mengalami disfungsi penghalang kulit, keradangan kulit, atau kedua-duanya, jadi sukar untuk mencari kaedah rawatan yang sesuai. Oleh itu, terapi gabungan biasanya disyorkan. Penyelidikan terbaru kami telah membuktikan bahawa tidak pernah mempunyai fungsi imunomodulator dan keupayaan pembaikan halangan. Oleh itu, ciri rujukan penting dalam rawatan AD pada masa hadapan ialah pengekalan fungsi kulit dan penambahbaikan penghidratan kulit dan pembaikan halangan. Rujukan juga boleh mengurangkan tingkah laku menggaru yang disebabkan oleh alergen dan perengsa. Selain itu, perarakan atopik adalah penyakit berkaitan fenomena yang berlaku dan berkembang selangkah demi selangkah. Dermatitis atopik sering dilihat pada masa bayi. Alahan makanan sering berlaku selepas 1-2tahun. Rinitis alahan selalunya boleh bermula sebelum dan selepas sekolah. Gejala asma muncul pada masa yang berbeza, tetapi kebanyakannya adalah selepas rinitis alergi. Selepas zaman kanak-kanak, dermatitis atopik dan alahan makanan tertentu mungkin bertambah baik atau hilang. Rinitis alahan dan asma tidak mudah disembuhkan[45,46]. Oleh itu, mereka adalah fenomena komorbid dalam penyakit. Produk semulajadi termasuk rujukan mempunyai potensi terapeutik komorbiditi, dan keberkesanannya dalam penyakit berkaitan patut dikaji pada masa hadapan.

4. Bahan dan Kaedah

4.1.Sel Leukemia Basofilik Tikus

Sel leukemia basofilik tikus (RBL-2H3) ialah hadiah daripada TLHwang, Universiti Chang Gung, Taoyuan, Taiwan. Sel RBL-2H3 ialah sel mast mukosa yang digunakan untuk mengkaji degranulasi akibat antigen atau kalsium ionofor, Ca4t intrasel dan transduksi isyarat [29]. Sel-sel telah dikultur dalam EMEM yang mengandungi 10 peratus FBS, dengan penisilin dan streptomisin pada 37 darjah, 5 peratus CO2. Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IM) dan fetal bovine serum (FBS) telah dibeli daripada Thermo Fisher Scientific (GIBCOTM, New York, NY, USA).

4.2.Ujian MTT

3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) assay digunakan untuk mengukur aktiviti metabolik sel. Sel RBL-2H3 telah disemai dalam 24-plat kultur telaga pada 5 × 10 tambah /telaga. Selepas 24 jam rawatan dadah, 30 μL MTI setiap perigi ditambah dan diletakkan pada inkubator sel 37 darjah selama2-4 jam, kemudian kristal formazan ungu dilarutkan dengan DMSO. Pembaca ELISA digunakan untuk mengukur keamatan penyerapan pada panjang gelombang 550 nm sebagai ujian daya maju sel.

4.3.Pengukuran Tahap Ca2 tambah Intraselular

[Ca2t] Saya diukur dengan fura-2 seperti yang diterangkan sebelum ini[47].RBL-2Sel H3 telah digantung semula dalam IMDM yang mengandungi 5 uM Fura 2-AM dan 1.2 mM CaClz pada 37 darjah untuk 30 min. Selepas Fura{11}} dimuatkan, keratinosit telah dipel dan digantung semula dalam DMEM baharu. Satu alikuot (2 mL) telah dipindahkan ke kuvet kacau yang mengandungi 1.2mM CaClz.Fura{15}}Pendarfluor Ca telah diuji pada panjang gelombang pengujaan 340 dan 380 nm (panjang gelombang pelepasan, 505 nm) dalam PerkinElmer LS{{19 }} spektrofluorometer (PerkinElmer Life and Analytical Sciences). Data direkodkan pada selang 5s[47].

4.4. Tindak balas Rantaian Polimer Kuantitatif (qPCR)

RBL{{0}}Sel H3 telah ditanam dalam hidangan kultur 3.5 cm. Selepas sel membesar hingga 90 peratus penuh, sel-sel telah tumbuh dalam keadaan statik selama 24 jam. Selepas sel diprarawat dengan rujukan selama 20 minit, mereka dirangsang dengan TNF-a/IFN-y untuk 1 atau 24 jam, masing-masing. Sel-sel telah dikikis, disentrifugasi (16,000×g,10 min,4 darjah), dan supernatan telah diekstrak. RNA telah disucikan menggunakan kit pengasingan RNA total (GeneDirex@, Vegas, NV, Amerika Syarikat). Mengikut prosedur pengendalian skrip cDNA Synthesis Kit (BIO-RAD), reagen telah ditambah mengikut susunan dan dikendalikan mengikut keadaan yang ditunjukkan untuk menukar RNA kepada cDNA. Tambahan pula, PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix (Applied BiosystemsTM) telah digunakan. Sebanyak 7.5 uL ddH20,2 uL cDNA, 0.25 μLof primer hadapan dan belakang, dan 10 uL SYBR GREEN telah ditambah dan dicampur secara seragam. Urutan primer ditunjukkan dalam Jadual 1 dan 2. Kemudian, RNA dikira menggunakan Sistem PCR Masa Nyata ABI StepOnePlusTM.

4.5. Western Blot Assay

Western blotting digunakan untuk menganalisis perubahan pelbagai protein dalam sel. RBL{{0}}Sel H3 telah disemai dalam hidangan kultur 3.5 cm. Selepas sel-sel berkembang kepada 90 peratus penuh dan kelaparan selama 24 jam, mereka telah dirawat dengan rujukan selama 20 minit, dan kemudian dirangsang dengan TNF-a atau IFN-y selama 30 minit atau 1 jam, masing-masing. Selepas mengikis, mereka dihancurkan dengan ultrasound dan disentrifugasi (13,200 rpm, 10 min, 4 darjah). Selepas sentrifugasi, supernatan diambil dan protein dikira dengan kit ujian protein Pierce (Pierce, Rockford, IL, Amerika Syarikat). Ia dielektroforesis pada 10 peratus gel SDS-polyacrylamide dan kemudian dielektroporasi dengan membran PVDF. Selepas pemindahan selesai, membran PVDF dimasukkan ke dalam larutan TBS-T (Tris-buffered saline/0.05 peratus tween 20) yang mengandungi 5 peratus susu tepung skim dan digoncang selama 1 jam untuk mengelakkan pengikatan tidak spesifik. Kemudian, TBS-T digunakan untuk mencuci 3 kali, 10 minit setiap kali. Kemudian, antibodi primer (1: 1000 pencairan) ditambah dan diletakkan pada 4 darjah semalaman dan kemudian dibasuh 3 kali dengan TBS-T setiap 10 minit. Selepas menambah antibodi sekunder (dicairkan 1:1000) selama 1 jam, membran PVDF dibasuh 3 kali dengan TBS-T selama 10 minit setiap kali. Akhirnya, pemaju telah ditambah, dan membran diletakkan dalam sistem pengekstrakan luminescence kimia (BIOSTEP Celvin") untuk penangkapan.

4.6.Dinitrochlorobenzene(2,4-Dinitrochloroben2ene, DNCB)Radang Kulit seperti Dermatitis Atopik Terinduksi pada Tikus

Pertama, tikus dibahagikan kepada empat kumpulan: kumpulan kawalan, kumpulan DNCB (kumpulan negatif), rujukan (3 mg/kg dan 10 mg/kg) dengan kumpulan DNCB, dan dexamethasone (0.2 mg/kg) dengan Kumpulan DNCB (kumpulan positif). Dexamethasone adalah hormon kortikosteroid yang boleh mengurangkan bengkak dan tindak balas alahan. Dalam eksperimen in vivo ini, kedua-dua rujukan dan deksametason telah dibubarkan dalam DMSO, manakala DNCB dibubarkan dalam 75 peratus etanol oleh kejutan ultrasonik. Yang pertama diberikan melalui suntikan intraperitoneal, dan untuk yang terakhir, 100 uL digunakan pada kulit belakang dan 20 μL digunakan pada telinga kanan. Tiga hari sebelum eksperimen, tikus telah dibius dan rambut belakang dibuang, dan magnet pengukur kecil (SCT-MAG-TF) dibenamkan di belakang kaki belakang tetikus.cistanche genghis khanSelepas berehat selama tiga hari, telah disahkan bahawa tikus berada dalam keadaan fizikal yang baik dan kulit di kawasan penyusutan dorsal adalah normal, dan eksperimen dimulakan. Semasa eksperimen, gambar diambil untuk merekodkan perubahan rupa kulit. Peringkat pertama ({{0}} hari) ialah tempoh dermatitis atopik alahan. Selepas mengukur nilai asas tikus dalam kumpulan DNCB, rujukan (3 dan 10 mg/kg) dan kumpulan eksperimen DNCB, dan kumpulan eksperimen deksametason 0.2mg/kg dan DNCB, 1 peratus DNCB digunakan secara sama rata pada kulit belakang dan telinga kanan. Pada hari kelima, rujukan ubat dan dexamethasone disuntik secara intraperitoneal. Peringkat kedua (hari ke-5 hingga hari ke-14) ialah induksi semula dermatitis atopik.lanjutan hayat cistancheDalam 3 kumpulan percubaan,0.5 peratus DNCB telah disapu rata pada kulit belakang dan telinga kanan tikus. Keesokan harinya, nilai fisiologi kulit dan gambar diambil dan direkodkan. Selepas tikus disingkirkan dengan karbon dioksida(CO2) yang berlebihan pada hari ke-15, tisu kulit dorsal dikeluarkan untuk analisis eksperimen seterusnya.

4.7.Kompaun 48/80-Gelagat Menggaru Teraruh dalam BALB/c Tikus

Rambut kulit di bahagian belakang tetikus dipotong, dan 20 μL larutan kompaun 48/80 disuntik secara intrakutan. Tikus kawalan menerima suntikan garam sebaliknya. Sejurus selepas suntikan, haiwan itu diletakkan di dalam sangkar pemerhatian (diameter 11 cm, MicroAct, Neuroscience, Tokyo, Jepun), dan tingkah laku menggaru tetikus dikesan dan dinilai secara automatik dan objektif. Tingkah laku calar diukur selama 60 min. MicroAct menggunakan parameter analisis berikut untuk mengesan gelombang yang sepadan dengan gelagat menggaru berterusan tikus: ambang,0.05 V; jurang acara, 0.05 s; tempoh minimum, 0.25 s; kekerapan maksimum, 30 Hz; kekerapan minimum, 5Hz. 4.8.Analisis Statistik

Perisian Sigma-Plot(Versi 10.0) telah digunakan untuk analisis statistik.cistanche nzData dinyatakan sebagai min ± SEM, dengan(*)dan(#) sebagai nota. Kepentingan statistik data telah dianalisis dengan nilai t-test.p Pelajar dua hujung yang tidak berpasangan, kurang daripada 0.05 dan 0.01 dianggap penting.

5. Kesimpulan

Dalam kajian ini, kami menentukan bahawa rujukan berkesan menghalang degranulasi sel mast dan mengurangkan ekspresi sitokin pro-radang, yang boleh mengurangkan gejala seperti dermatitis atopik, memulihkan penghalang kulit dan mengurangkan calar kulit. Kami telah membuktikan lagi bahawa rujukan bukan sahaja boleh bertindak pada keratinosit kulit tetapi juga mempengaruhi pengaktifan sel mast. Ia mempunyai lebih banyak potensi untuk digunakan dalam penyakit kulit alahan dan radang.

Artikel ini dipetik daripada Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 10994. https://doi.org/10.3390/ijms222010994 https://www.mdpi.com/journal/ijms