Sistem Laccase-Mediator Menggunakan Pengantara Semulajadi Sebagai Ejen Pemutih Untuk Penyahwarnaan Melanin Bahagian 1

Abstrak: Dalam kajian ini, sistem laccase-mediator (LMS) menggunakan mediator semulajadi telah dibangunkan sebagai agen pemutihan untuk penyahwarnaan melanin. Tujuh mediator semulajadi digunakan untuk menggantikan mediator sintetik dan berjaya mengatasi potensi redoks rendah laccase dan akses terhad melanin ke tapak aktif laccase. Aktiviti penyahwarnaan melanin laccase daripada Trametes versicolor (lacT) dan Myceliophthora thermophila (lacM) telah dipertingkatkan dengan ketara menggunakan mediator semulajadi termasuk acetosyringone, syringaldehyde, dan acetovanillone, yang menunjukkan sitotoksisiti yang rendah. Kumpulan metoksi dan keton pengantara semulajadi memainkan peranan penting dalam penyahwarnaan melanin. Pemalar kekhususan lakT dan lacM untuk penyahwarnaan melanin telah dipertingkatkan masing-masing sebanyak 247 dan 334, apabila acetosyringone digunakan sebagai mediator. LMS menggunakan renda dan acetosyringone juga boleh menyahwarnakan melanin yang terdapat dalam filem hidrogel selulosa, yang meniru keadaan kulit. Tambahan pula, LMS boleh menyahwarna bukan sahaja analog eumelanin sintetik yang disediakan oleh pengoksidaan tirosin tetapi juga melanin semulajadi yang dihasilkan oleh sel melanoma.

Menurut kajian yang berkaitan,cistancheadalah herba biasa yang dikenali sebagai "herba ajaib yang memanjangkan hayat". Komponen utamanya ialahcistanoside, yang mempunyai pelbagai kesan sepertiantioksidan, anti-radang, danpromosi fungsi imun. Mekanisme antara cistanche danpemutihan kulitterletak pada kesan antioksidan cistancheglikosida. Melanindalam kulit manusia dihasilkan oleh pengoksidaan tirosin yang dimangkin olehtyrosinase, dan tindak balas pengoksidaan memerlukan penyertaan oksigen, jadi radikal bebas oksigen dalam badan menjadi faktor penting yang mempengaruhi pengeluaran melanin. Cistanche mengandungicistanoside, yang merupakan antioksidan dan boleh mengurangkan penjanaan radikal bebas dalam badan, dengan itumenghalang pengeluaran melanin.

Klik Pada Manfaat Rou Cong Rong Untuk Pemutihan

Untuk maklumat lanjut:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

1. Pengenalan

Laccases (EC 1.10.3.2, benzenediol: dioxygen oxidoreductases) ialah protein multicopper yang memangkinkan pengoksidaan pelbagai sebatian fenolik dan bukan fenolik melalui mekanisme tindak balas bermangkin radikal dengan pengurangan oksigen molekul [1,2]. Laccases telah digunakan sebagai biomangkin untuk proses biodegradasi, seperti bioremediasi pewarna [3,4], farmaseutikal [5,6], herbisida [7], dan delignifikasi [8-10]. Laccases juga telah digunakan untuk memangkinkan pempolimeran prekursor pewarna dan sebatian organik [11]. Khususnya, sifat menariknya, seperti kekhususan substrat yang rendah, penggunaan oksigen sebagai penerima elektron terakhir, penjanaan air sebagai hasil sampingan, dan tiada permintaan (atau tiada pengeluaran) peroksida, menjadikannya menarik dalam bioteknologi dan bidang alam sekitar [1,11,12].

Empat ion kuprum di tapak aktif terlibat dalam aktiviti pemangkin laccase. Kuprum "biru" (tapak T1) mengoksidakan substrat, dan kelompok kuprum trinuklear (T2/T3) menerima elektron dari tapak T1 untuk mengurangkan oksigen molekul [1,12,13]. Khususnya, potensi redoks tapak T1 Cu dianggap sebagai faktor utama dalam menentukan keupayaan pemangkin laccases [14]. Laccases mempunyai potensi redoks yang agak rendah (0.4–0.8 V) berbanding peroksidase ligninolitik (melebihi 1 V) seperti peroksidase mangan dan peroksidase lignin. Laccases tidak boleh secara langsung mengoksidakan substrat bukan fenolik dengan potensi redoks melebihi 1.3 V [13,14]. Oleh itu, untuk mengatasi had laccase, sistem laccase-mediator (LMS) menggunakan sebatian molekul kecil, seperti 2,20 -azinobis(3- ethylbenzthiazoline-6-sulfonat) (ABTS), { {24}}hydroxy benzotriazole (HOBt), asid violurik (VLA), N-hydroxy phthalimide (HPI), N-hydroxy acetanilide (NHA) dan TEMPO, yang bertindak sebagai mediator redoks, telah dicadangkan [15–17].

Mediator ini membenarkan pengoksidaan sebatian besar melalui laluan pengoksidaan yang berbeza. Sistem laccase-ABTS mengoksidakan substrat dengan menghasilkan radikal ABTS kationik melalui mekanisme pemindahan elektron (ET). LMS dengan HOBt, VLA, HPI, atau NHA menghasilkan radikal nitroksil melalui mekanisme pemindahan atom hidrogen (HAT) [1,12,17]. Tambahan pula, mediator seperti TEMPO dan analognya bertindak balas melalui laluan ionik untuk menghasilkan ion oksoammonium [1,12,18]. Penggunaan mediator ini boleh mengoksidakan pelbagai sebatian dalam pelbagai aplikasi, seperti degradasi pewarna [3,4], degradasi dadah [5,6], dan degradasi lignin [8-10]. Namun begitu, aplikasi mediator sintetik dalam bidang perindustrian telah terhad kerana potensi ketoksikannya, kos tinggi, dan kesan penyahaktifan enzim. Baru-baru ini, molekul fenolik yang berasal dari lignin sebagai mediator semulajadi (cth, syringaldehyde, acetosyringone, vanillin, acetovanillone, metil vanillate, asid ferulik, asid sinapic, asid p-coumaric, dll.) telah dikaji untuk menggantikan mediator sintetik [1,12] . Kelebihan mediator semulajadi adalah kos rendah dan ketoksikan rendah kerana ia diperoleh daripada sumber semula jadi dan boleh diperbaharui [19].

Melanin ialah sekumpulan pigmen semulajadi yang dihasilkan oleh melanogenesis melalui pempolimeran oksidatif tirosin oleh melanosit. Melanin semulajadi boleh dikelaskan kepada lima kategori eumelanin, pheomelanin, semua melanin, pheomelanin, dan neuromelanin [20]. Baru-baru ini, pelbagai aplikasi perubatan dan elektrokimia menggunakan melanin atau prekursor melanin telah dikaji [20,21]. Warna kulit manusia kebanyakannya ditentukan oleh kehadiran melanin. Dalam industri kosmetik, depigmentasi langsung melanin menggunakan enzim telah dicadangkan untuk pembangunan agen pemutihan kulit. Beberapa peroksidase telah dikaji untuk menyahwarnakan melanin. Woo et al. menunjukkan bahawa melanin sintetik boleh dinyahwarna secara langsung oleh lignin peroksidase daripada P. chrysosporium [22]. Kumpulan Keneko dan Mohorˇciˇc juga melaporkan penyahwarnaan enzimatik melanin oleh peroksidase mangan yang diasingkan daripada kulat (Sporotrichum pruinose dan Phlebia radiata) [23,24]. Kim et al. melaporkan bahawa campuran enzim mentah yang mengandungi peroksidase mangan, lignin peroksidase, dan laccase menunjukkan aktiviti depigmentasi melanin [25]. Apabila peroksidase menyahwarnakan melanin, ia memerlukan hidrogen peroksida (H2O2) sebagai kofaktor yang boleh merengsakan kulit. Oleh itu, untuk mengurangkan penggunaan H2O2, glukosa oksidase atau laccase telah diperkenalkan ke dalam sistem gabungan enzim [26,27]. Laccases boleh menyahwarnakan melanin tanpa menggunakan hidrogen peroksida. Khammuang dan Sarnthima melaporkan bahawa laccase dari Lentinus polycarpous Lév menunjukkan aktiviti penyahwarnaan melanin menggunakan ABTS, vanillin, dan asid vanillik sebagai mediator [28].

2. Bahan-bahan dan cara-cara

2.1. Bahan

2.2. Penyahwarnaan Melanin oleh LMS

Larutan melanin tepu (1.4 mg/mL) telah disediakan melalui pelarutan 3 mg melanin sintetik dalam 1.3 mL 10 mM NaOH. Penyelesaian telah disentrifugasi pada 8500 rpm selama 5 minit untuk mengeluarkan melanin yang tidak larut, dan supernatan dicairkan dengan 0.1 M penimbal fosfat asid sitrik (pH 3, 4, 5, 5.5, 6, atau 7) dan digunakan sebagai penyelesaian substrat untuk LMS. Kepekatan melanin dalam larutan substrat ialah 63 µg/mL dan disahkan secara spektrofotometri pada 475 nm. 0.8 mL larutan substrat melanin dicampur dengan 0.1 mL larutan mediator (0–1 mM) dalam tiub Eppendorf 1.5 mL. Tindak balas penyahwarnaan melanin dimulakan dengan menambahkan 0.1 mL larutan laccase (15.8 µg (0.6 U) lakT atau 19.2 µg (1.8 U) lacM) kepada campuran melanin dan mediator pada suhu 25 ◦C dalam mandi air goncang pada 120 rpm. . Selepas tindak balas, campuran tindak balas telah disentrifugasi, dan penyerapan supernatan diukur pada 475 nm. Hasil penyahwarnaan ( peratus ) dikira menggunakan persamaan berikut:

Penyahwarnaan ( peratus ) {{0}} (A0 − At)/A0 × 100, (1)

2.3. Kajian Kinetik Penyahwarnaan Melanin oleh LMS

2.4. Sitotoksisiti Pengantara Semulajadi

Talian sel melanoma B16F10 (Korea Cell Line Bank, Seoul, Korea) digunakan untuk menentukan sitotoksisiti mediator semulajadi untuk LMS. Ujian merah neutral (NR) dilakukan untuk mengukur sitotoksisiti mediator [29]. NR mengukur daya maju lisosom sel hidup. Sel melanoma dengan kepekatan 3 × 104 sel telah disalurkan ke dalam setiap telaga 96-plat perigi. Selepas 24 jam penanaman, sel-sel telah dirawat dengan mediator semulajadi (1, 2, 5, 10, 22, dan 46 mM). Selepas penanaman tambahan selama 2 hari, sel-sel telah dirawat dengan larutan NR 50 µg/mL yang dilarutkan dalam DMEM dan diinkubasi selama 3 jam. Selepas mengeluarkan supernatan melalui sedutan, larutan desorb NR (1 peratus asid asetik glasier, 49 peratus etanol, dan 50 peratus air suling) digunakan untuk pengekstrakan warna. Selepas proses pengekstrakan, perubahan penyerapan diukur pada 540 nm.

2.5. Penyediaan dan Penyahwarnaan Filem Hidrogel Melanin/Selulosa

Untuk mengukur aktiviti penyahwarnaan LMS bagi filem melanin/selulosa, filem hidrogel yang disediakan telah dipotong menjadi kepingan 1 × 2 cm. Filem hidrogel telah direndam dalam 4 mL 0.1 M penampan asid sitrik fosfat (pH 5.5); kemudiannya, 0.5 mL 1 mM acetosyringone dan 0.5 mL larutan renda (2.5 U) telah ditambah pada penimbal. Tindak balas penyahwarnaan dijalankan dalam tab mandi air dengan goncangan pada 120 malam dan 25 ◦C selama 3 jam. Selepas tindak balas, filem itu dibasuh dengan air suling dan dilekatkan pada bahagian dalam kuvet untuk mengukur perubahan dalam spektrum dalam julat 400-800 nm menggunakan spektrofotometer UV/Vis. Tindak balas kawalan tanpa lacM atau mediator juga dijalankan di bawah keadaan yang sama. Pembebasan melanin daripada filem atau perubahan warna filem melanin/selulosa tidak dikesan di bawah keadaan tindak balas. Tambahan pula, perubahan dalam parameter warna (nilai L*, a*, dan b*) filem melanin/selulosa selepas tindak balas penyahwarnaan oleh LMS turut direkodkan menggunakan colorimeter (KONICA MI NOLTA, Tokyo, Jepun). Nilai ∆L (perbezaan kecerahan metrik), ∆E (jumlah perbezaan warna), YI (indeks kekuningan), dan WI (indeks keputihan) diperoleh menggunakan persamaan berikut [30–32]:

2.6. Penyediaan Melanin Asli

Melanin semulajadi diperolehi daripada sel melanoma B16F10. Sel-sel telah dirawat dengan hormon perangsang alpha-melanocyte untuk menghasilkan melanin. Selepas 4 hari pengeraman, sel-sel telah ditangkap menggunakan trypsin-EDTA dan disonikasi selama 10 minit. Supernatan diperoleh melalui sentrifugasi pada 8000 rpm selama 10 minit dan kemudian dilaraskan kepada pH 1.5 menggunakan 6 M HCl. Larutan itu direbus pada suhu 100 ◦C selama 4 jam untuk menghidrolisis pecahan protein sisa. Larutan yang mengandungi melanin semulajadi telah dibasuh dengan aseton, diikuti oleh kloroform dan etanol, dan kemudian dibasuh dengan air ternyahion untuk menghapuskan sisa, seperti sel, komponen media, dan pecahan protein [33,34]. Semua proses mencuci dilakukan lebih daripada dua kali. Akhirnya, melanin semulajadi diperolehi dengan pengeringan beku dan digunakan sebagai substrat untuk LMS.

3. Keputusan dan perbincangan

3.1. Kesan Mediator pada Penyahwarnaan Melanin oleh LMS

Kesan pelbagai mediator terhadap tindak balas penyahwarnaan melanin oleh LMS telah disiasat menggunakan dua laccase daripada T. versicolor (lakT) dan M. thermophila (lacM) (Rajah 1).Apabila lakT digunakan tanpa pengantara untuk penyahwarnaan melanin, hasil penyahwarnaan hanya 1 peratus selepas 5 jam tindak balas. Apabila HOBt digunakan sebagai pengantara untuk lakT, hasil penyahwarnaan dipertingkatkan sedikit kepada 2 peratus selepas 5 jam tindak balas. Penggunaan pelbagai mediator sintetik, seperti HOBt, ABTS, VLA, dan TEMPO, dalam pengoksidaan laccase-catalyzed sebatian fenolik atau bukan fenolik dengan ketara meningkatkan kadar tindak balas [10,15]. Apabila akses sebatian sasaran ke dalam tapak aktif laccase dihadkan oleh halangan steriknya, radikal mediator yang terbentuk oleh laccase boleh secara cekap mengoksidakan sebatian sasaran melalui pemindahan elektron atau mekanisme pemindahan atom hidrogen [12]. HOBt adalah salah satu mediator sintetik yang paling biasa digunakan dalam LMS kerana potensi redoksnya yang tinggi (1.1 V) [6]. Walau bagaimanapun, HOBt bukanlah bahan kosmetik yang baik kerana potensi ketoksikan sel dan keupayaannya untuk menyahaktifkan laccase. Oleh itu, kami memilih tujuh mediator semula jadi, acetosyringone, syringaldehyde, asid p-kuumarik, vanillin, asid vanillik, alkohol vanili, dan acetovanillone, untuk tindak balas penyahwarnaan melanin oleh LMS. Menariknya, semua pengantara semula jadi bertindak sebagai pengantara yang lebih cekap daripada HOBt untuk penyahwarnaan melanin kerana kekurangan. Apabila acetosyringone, syringaldehyde, dan asid p-kuumarik digunakan, hasil penyahwarnaan masing-masing adalah 28 peratus, 22 peratus, dan 18 peratus, selepas 5 jam tindak balas. Keputusan ini menunjukkan kegunaan mediator semula jadi untuk tindak balas penyahwarnaan melanin oleh LMS. Mediator dalam LMS dioksidakan kepada radikal mediator oleh laccase, dan radikal mediator mendorong pengoksidaan dan penyahwarnaan melanin. Apabila kekurangan digunakan tanpa pengantara untuk penyahwarnaan melanin semasa masa tindak balas yang mencukupi, yang boleh mencapai keadaan keseimbangan, hasil penyahwarnaan ialah 7 peratus selepas 24 jam tindak balas. Mediator semulajadi, kecuali asid vanillik, bertindak sebagai mediator yang lebih cekap daripada HOBt untuk penyahwarnaan melanin oleh lakT selepas 24 jam tindak balas. Hasil penyahwarnaan selepas 24 jam tindak balas menggunakan asid vanillik sebagai pengantara adalah lebih rendah daripada selepas 5 jam tindak balas. Ini mungkin disebabkan oleh kestabilan rendah bentuk radikal teroksida asid vanillik. Apabila acetosyringone, syringaldehyde, dan acetovanillone digunakan, hasil penyahwarnaan masing-masing adalah 34 peratus, 30 peratus, dan 31 peratus, selepas tindak balas selama 24 jam. Asid p-Coumaric adalah lebih cekap dalam meningkatkan kadar tindak balas awal daripada acetovanillone, manakala acetovanillone mendorong hasil penyahwarnaan yang lebih tinggi pada keadaan keseimbangan daripada asid p-coumaric.

Kesan mediator pada tindak balas penyahwarnaan oleh LMS menggunakan lacM juga sangat serupa dengan yang diperoleh oleh LMS menggunakan lakT. Apabila renda digunakan tanpa pengantara untuk penyahwarnaan melanin, hasil penyahwarnaan hanya 2 peratus selepas 5 jam tindak balas. HOBt sebagai pengantara untuk lacM tidak meningkatkan hasil penyahwarnaan semasa tindak balas 5 jam. Semua pengantara semulajadi, kecuali asid p-kuumarik dan vanillin, bertindak sebagai pengantara yang cekap penyahwarnaan melanin oleh lacM. Apabila acetosyringone dan syringaldehyde digunakan, hasil penyahwarnaan masing-masing adalah 25 peratus dan 22 peratus, selepas 5 jam tindak balas. Asid p-Coumaric dan vanillin digunakan sebagai mediator yang cekap untuk setiap satu, tetapi mereka tidak dapat meningkatkan kadar penyahwarnaan dengan cekap dalam LMS menggunakan renda. Ini mungkin disebabkan oleh kekhususan substrat yang lebih rendah bagi lacM untuk asid p-kuumarik dan vanillin. Hasil penyahwarnaan selepas 24 jam tindak balas lacM dengan asid p-kuumarik dan vanillin adalah serupa dengan yang diperolehi oleh lakT. Ini menunjukkan bahawa bentuk teroksida asid p-kuumarik dan vanillin boleh menyahwarnakan melanin dengan cekap, walaupun kadar pengoksidaan mereka oleh lacM adalah jauh lebih rendah daripada itu oleh lakT. Apabila lacM tanpa mediator digunakan untuk penyahwarnaan melanin semasa masa tindak balas yang mencukupi, hasil penyahwarnaan adalah 5 peratus selepas 24 jam tindak balas. Mediator semulajadi, kecuali asid vanillik, juga bertindak sebagai mediator yang lebih cekap daripada HOBt untuk penyahwarnaan melanin oleh lacM selepas 24 jam tindak balas. Apabila acetosyringone, syringaldehyde, dan acetovanillone digunakan sebagai mediator untuk lacM, hasil penyahwarnaan ialah 34 peratus, 28 peratus, dan 31 peratus, masing-masing selepas 24 jam tindak balas. Apabila asid vanillik digunakan sebagai pengantara untuk kedua-dua lakT dan lakM, ia menunjukkan hasil penyahwarnaan yang paling rendah. Ini mungkin disebabkan oleh kestabilan rendah bentuk radikal teroksida asid vanillik. Khammuang dan Sarnthima melaporkan bahawa vanillin dan asid vanillik boleh digunakan sebagai mediator untuk penyahwarnaan melanin menggunakan laccase daripada Lentinus polycarpous [28]. Walau bagaimanapun, mereka menunjukkan aktiviti penyahwarnaan yang jauh lebih rendah untuk melanin daripada acetosyringone apabila ia digunakan sebagai mediator untuk lakT dan renda.

Keputusan ini menunjukkan bahawa mediator semulajadi lebih cekap untuk penyahwarnaan melanin oleh LMS daripada HOBt. HOBt telah dianggap sebagai pengantara sintetik yang cekap untuk laccase kerana potensi redoksnya yang tinggi dan peranan pemangkin kumpulan N OH HOBt [5]. Kecekapan mediator untuk mengoksidakan substrat sasaran sangat bergantung pada keupayaan untuk membentuk radikal yang stabil serta halangan sterik yang disebabkan oleh substituen alkil yang besar dan bukannya potensi redoks mediator [19,35]. Kestabilan rendah perantaraan teroksida HOBt telah ditentukan melalui voltammetri kitaran [6]. Oleh itu, hasil penyahwarnaan yang rendah oleh LMS menggunakan HOBt mungkin disebabkan oleh kestabilan HOBt yang rendah di bawah keadaan tindak balas laccase. Walaupun potensi redoks syringaldehyde adalah lebih rendah daripada HOBt, syringaldehyde menunjukkan kestabilan yang agak lebih tinggi daripada HOBt [6].

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2, mediator semulajadi yang digunakan dalam kerja ini mempunyai pelbagai substituen (cth, hidroksil, metoksi, karboksil, keton, atau aldehid) pada kedudukan yang berbeza pada gelang benzena [12,19]. Mediator dengan dua kumpulan metoksi (acetosyringone dan syringaldehyde) menunjukkan kadar penyahwarnaan yang lebih tinggi daripada yang mempunyai satu kumpulan metoksi. Kadar penyahwarnaan yang diperolehi oleh asid p-kuumarik tanpa kumpulan metoksi adalah bergantung kepada jenis laccase. Asid p-kuumarik dengan lakT menunjukkan kadar penyahwarnaan yang lebih tinggi daripada yang mempunyai satu kumpulan metoksi, manakala asid p-kuumarik dengan lacM menunjukkan kadar penyahwarnaan yang paling rendah dalam tindak balas 5 jam. Fillat et al. juga menunjukkan keputusan yang sama untuk penyahwarnaan dakwat fleksografik oleh laccases kulat dengan mediator semula jadi [36]. Pengantara semulajadi fenolik (acetosyringone, picagari metil, dan syringaldehyde) dengan dua substituen metoksi dalam gelang telah dioksidakan oleh laccase lebih cepat daripada asid p-kuumarik tanpa kumpulan metoksi. Ini menunjukkan bahawa kumpulan metoksi memainkan peranan yang lebih penting sebagai penderma elektron daripada ikatan berganda rantai sisi asid p-kuumarik. Apabila mediator dengan satu kumpulan metoksi dibandingkan, hasil penyahwarnaan meningkat dalam urutan berikut: acetovanillone > vanillin > vanillyl alcohol > vanillic acid. Acetovanillone, yang mempunyai kumpulan keton, menunjukkan kadar penyahwarnaan dan hasil yang lebih tinggi daripada mediator dengan kumpulan aldehid, hidroksil, dan karboksil. Acetosyringone dengan kumpulan keton juga menunjukkan kadar penyahwarnaan dan hasil yang lebih tinggi daripada syringaldehyde dengan kumpulan aldehid.

Dalam eksperimen berikut, acetosyringone, syringaldehyde, dan acetovanillone, yang menunjukkan keupayaan penyahwarnaan melanin yang tinggi, telah dipilih sebagai mediator untuk LMS menyahwarna melanin. Kesan mediator pada tindak balas penyahwarnaan oleh LMS telah disiasat dari semasa ke semasa (Rajah S1). Tindak balas penyahwarnaan menggunakan lakT dengan acetosyringone, syringaldehyde, dan acetovanillone masing-masing menghasilkan 21 peratus , 18 peratus dan 1 peratus hasil penyahwarnaan selepas 1 jam tindak balas. Tindak balas penyahwarnaan menggunakan lacM dengan acetosyringone dan syringaldehyde menghasilkan 19 peratus dan 18 peratus hasil penyahwarnaan selepas 1 jam tindak balas, masing-masing. Kedua-dua laccases menunjukkan profil tindak balas yang sama apabila pengantara yang sama digunakan. Acetosyringone dan syringaldehyde dengan ketara meningkatkan kadar penyahwarnaan semasa tindak balas awal. Keputusan ini menunjukkan bahawa acetosyringone dan syringaldehyde yang mengandungi kumpulan dimetoksi adalah lebih cekap dalam meningkatkan kadar awal penyahwarnaan oleh LMS daripada acetovanillone yang mengandungi satu kumpulan metoksi. Fillat et al. juga melaporkan bahawa kumpulan metoksi dalam struktur cincin mediator bertindak sebagai pemecut untuk pengoksidaan substrat [36]. Sebaliknya, hasil penyahwarnaan selepas 24 jam tindak balas oleh acetovanillone adalah serupa dengan syringaldehyde, walaupun acetovanillone secara sederhana meningkatkan kadar tindak balas.

Untuk maklumat lanjut: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501